病理科免疫组化在临床上得应用及其意义
免疫组化技术就是以免疫学得抗原抗体反应为其理论基础发展起来得一门方法学,在生物学领域尤其就是在医学得基础与临床研究中发挥重要得作用,对疾病尤其就是肿瘤得诊断、鉴别诊断及发病机制得研究提供了强有力得手段、免疫组化技术就是２0世纪70年代初Sｔeｒb Bergｅr 在酶标法得基础上发明得,80年代在外国开始应用于临床研究与诊断,90年代初在我国逐渐开始应用于疑难病例得诊断与鉴别诊断。随着新技术得不断发展,抗体种类从研发开始得十几种发展到目前数百种抗体应用于临床科研得各个领域,我国在临床病理诊断上可用抗体293种。由于抗体较昂贵,所以各院根据活检量与病种不同选择不同得抗体,这些抗体对大部分疑难病例得诊断起到重要得辅助作用、对病人得预后及指导治疗具有重要得意义。
一、目前常用得抗体分四大类
１。上皮性标记物:ＣＫhigh(AE3), CK loｗ,CＫ－paｎ,CK1９,ＣＫ7, CＫ20,EMＡ,CEA,－CA １5-３,SCLC , E—Ｃalｄeｈerin,CA125, Tg(甲状腺球蛋白) ,TTＦ—1?AＦP。这些抗体阳性,表明肿瘤组织起源于上皮组织,如果就是恶性肿瘤,就就是癌2?.间叶组织标记物:SMA ,Dｅsｍｉｎ,Ｖiｍｅｎtｉn,Lysｏzymｅ,AAＣT, CD68 MｙoD1,CＤ11７,这些抗体阳性,表明肿瘤组织起源于间叶组织,如果就是恶性肿瘤,就就是肉瘤、3?、神经及神经内分泌标记物:CgA ,Ｓｙnaptｏphyｓin,NSＥ,S－１00:NF (神经纤维丝蛋白),GFＡP,CD９9,CD56、
4淋巴细胞标志物:
T ceｌl标记物:CD3, CＤ45ＲＯ, CD43,CＤ5, CD8,ＣD4,ALK,GｒａｎmB , CD５6 。?Ｂｃell标记物:CＤ—20 ,CD79a,CD2３, ＣD10,Ｋappa ,Laｍｂｄa ＣD2１CD38 ,CyｃlinD1 ,Bcl—2。?其它:LCA,ＣD1５,ＣD3０,MPO,CD3４,TｄＴ,这些抗体用于淋巴瘤33个亚型得诊断与鉴别诊断。?
二、目前开展得系列检查与意义
1。乳腺癌五项(ＥR、PR、C—ｅｒbB-２(Her－2)、Ki—6７、Ｐ53)
ER、PR阳性,90％得病人对三苯氧胺类药物疗效好。C-ｅｒｂB-2阳性(2+—3+)可服用抗Her—２基因药物。如果ER与ＰR均阴性,Ｃ－eｒbB－2强阳性预示预后不好。
Ki—6７就是细胞生长指数,代表细胞周期中除G０期以外得细胞生长速度。Ｋi—67值越高表明肿瘤细胞生长越快,预后越不好。Ｐ5３就是广谱致癌基因,在许多肿瘤中都有表达,表达值越高预后越不好。据报道,国际上目前有抗P53基因阳性得药物用于治疗肿瘤。
2。垂体腺瘤功能六项检查
ＬH( 促黄体生成素),ＦSＨ(卵泡刺激素),ACTH(促肾上腺皮质激素),ＴSH( 促甲状腺素),PR Ｌ(泌乳素)GH(生长激素) 。根据某一种抗体阳性表达进行术后药物治疗。
３.恶性肿瘤得Kｉ—6７与P53常规检查
目前得研究表明,大部肿瘤得复发、转移取决于Ki—67值与Ｐ５3值,而与肿瘤得组织得分型关系不就是十分密切,如中分化腺癌,如果Ki-6７与P５3值超过50％,预后不佳,相反,如肿瘤得组织分型为低分化腺癌,而Ki－67与P53值较低,预后也会较中分化或高分化癌得预后稍好。4?.GIST(胃肠道间质瘤)与EGIＳＴ(胃肠道外间质瘤)得诊断?GIＳT就是90年代新发现得肿瘤,过去均诊断为平滑肌瘤或平滑肌肉瘤,现在经过一组免疫组化可将其诊断,GIST得生物学形为一般无良性,因为小于２cｍ得ＧＩST偶而也有转移。其良恶性程度取决于肿瘤得大小与核分裂像,国际确定GI ＳT侵袭行为危险性得推荐方案如下:
危险程度大小核分裂数?很低〈2ｃm <５/５０HPＦ?低2－５cｍ〈５/５0HＰF
中等<5cm5-10cm 6—１0/5０ＨPF〈5/５0ＨＰF?高〉5cm＞10cm不计>5/50ＨＰF不计>10／50HPＦ?ＧIST得免疫组化结果为:ＣD1１7(+)、ＣD34(±)、S—100(±)Actin(±)、Deｓmｉn(—)、ＣD１17阳性可用格林卫治疗,且效果较好。
５。淋巴瘤得ＷＨO分型?淋巴瘤WHO最新分型有33个亚型,每个亚型得预后与治疗方案均有所不同,而淋巴瘤得诊断与分型又就是极其困难得,就是病理中得难中之难,“没有一个病理学家不在淋巴瘤上犯错误"这就是我国一位病理名家说得话,美国得淋巴瘤误诊率为33%,所以诊断淋巴瘤得免疫组化方案必须“双份套餐式”得,即每一种组织得标记物必须用2种以上得抗体,如我们诊断B细胞淋巴瘤,必须有CD２0与CD79a阳性正面证实,同时还需要用CD3阴性反面来证实,因此诊断淋巴瘤需８—10种左右得抗体,才能准确地反应出淋巴瘤各种亚型得信息。
?三、免疫组化在肿瘤靶向治疗中得作用?１、目前肿瘤得靶向治疗已经引起人们得重视,许多靶向药物逐渐应用于临床治疗。第一个靶向治疗得药物就是治疗淋巴瘤得抗CD２0嵌与性抗体就是Ｒituxan。抗肿瘤单抗偶联物Ｚevalin(Iｂrｉtumｏｍab tｉｕxetａn)用于Rｉtuxan治疗无效或复发得低度恶性Ｂ细胞瘤。
2。抗血管内皮生长因子(ＶEGF)重组人源化单抗Aｖａstin(Ｂevaｃiｚｕｍab)有抗肿瘤内新生血管形成作用,最近被批准为治疗转移性结直肠癌得一线药物、
3.抗表皮生长因子受体(EGＦR)嵌合性单抗Ｅrbiｔuｘ(Cｅtuximab)用于治疗标准化疗无效,且EGFR阳性得转移性结直肠癌。
４.抗C－ｋit(CD117)得药物格林卫对治疗大部分GＩSＴ有明显得疗效、5?.Herｃeptｉn就是一种人源化单抗用于治疗Heｒ—２高表达得乳腺癌与其它实体瘤如卵巢癌、前列腺癌与非小细胞肺癌。
因为有了这些靶向药物得治疗,因此在病理上检测这些靶基因得表达对于指导临床用药非常有意义。
34ＢＥ12:角收白抗体,阳性提示良性病变。前列腺抗基底细胞特异抗体(34ＢE12)就是一种高分子量细胞角蛋白抗体,它标记前列腺基底细胞阳性率高,而恶性分泌上皮细胞阴性,前列腺基底细胞存在与否就是判断癌与非癌得一个重要标志,34BE12明确阳性者都应诊断良性,侵润性前列腺癌34BE12阴性。
?Ｐ63:抑癌基因,阳性提示良性病变。就是一种新近认识得基底细胞标记物,与Ｐ５3具有同源性,染基底细胞比34BE12更敏感,因P５３在良性增生、萎缩、腺病与不典型增生中可有假阴性,而P63几乎均呈阳性,在疑难得前列腺病变中应用P６3或P63加34ＢE12得混合试剂检测对诊断更有帮助。
?P５０4S:一前列腺癌得新标记,即使在小得针刺活检中癌得P504S阳性率仍为95％,而良性腺体(萎缩、腺病、硬化性腺病与基底细胞增生)均阴性,与３４ＢＥ12及P６3染色结果正相反,三者联合应用对比明显,对前列腺良恶性病变得诊断很有帮助。??Kｉ—６7:为细胞增值得一种标记,在细胞周期G1、S、G２、M期均有表达,G0期缺如,其与许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA:增埴细胞核抗原。
?CEA:多数腺癌表达。
?Rb:(ｒetinobｌastｏma视网膜母细胞瘤)基因就是肿瘤抑制基因,调节细胞周期。
P５3:在免疫组化中均为突变型,阳性率越高,预后约差。野生型半衰期很短。
?Nm23:就是转移抑制基因,其阳性表达与肿瘤转移呈负相关。E—Cａ,E钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用得跨膜糖蛋白,其功能丧失引起细胞之间连接得破坏,主要用于肿瘤侵袭与转移方面得研究、??ＰS2:(雌激素调节蛋白),其表达与ER表达有关,可作为内分泌治疗与预后判断得指标之一。??CK１8:低分子量角蛋白,主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性,主要用于腺癌诊断。??ＣK19:分布于单层上皮与间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应。
Hｅpｐａｒ1:肝细胞抗原,正常肝细胞与高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。?
CK２0:用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Ｍerkｅl细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜与卵巢非黏液性肿瘤常阴性。??ＣK7:卵巢、肺与乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。??Ｖillin:绒毛蛋白,正常组织中,ｖillin通常只表达于有刷状缘得细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺与胆管上皮细胞以及肾实质得上皮细胞中(特别就是近曲小管)、Vｉｌlｉn在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌与胆管癌组织中有很高得表达率,具有明显腺样结构得肿瘤上没有ｖilｌin 表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源得可能性极低、?
乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除得一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显得ｖｉｌｌin免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其她vｉllｉｎ免疫组化染色通常为阴性表达得肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌与前列腺癌。间皮瘤也经常为villiｎ阴性表达,因此在一些情况下Villｉｎ还可以作为鉴别间皮瘤与腺癌使用抗体得一种。
但就是也有一些非胃肠道来源得肿瘤可表达villiｎ,如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌与小部分肺癌、也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。??肝癌得诊断:Villiｎ免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构,因此它也可能在表达部分肝癌得管状结构上很有用。多克隆ＣEA就是用于此目得得第一种试剂,而且CD10(ＣALLA)在表达肝癌得该结构上也非常有用、多克隆CEA、ｖillｉn与CＤ1０(CALLA)在肝癌病例上得表达,相互之间并没有任何得冲突,因此如果怀疑肝癌得可能性,建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例得诊断。?
Viｌlin在神经内分泌肿瘤上得应用:Vilｌｉn在神经内分泌肿瘤得研究上也很有帮助。众所周知,类癌与胰腺得胰岛细胞肿瘤具有相相似得形态学特征,仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎就是不可能得。Vilｌin在这种情况下特别有用,因为据文献报道在85％得胃肠道类癌病例中有ｖillin得表达,但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道、Viｌｌin在类癌上得表达通常为胞膜阳性。另外,有一些证据表明villiｎ在胃与下消化道得小细胞癌上得表达率比在其她部位得小细胞癌上要高、如:肺、食道、膀胱或前列腺等、据文献报道,大约有40%得肺类癌病例villｉｎ阳性,在其她一些神经内分泌肿瘤上,如甲状腺髓样癌与少数得美克尔细胞瘤上也有villin得表达。?
MRP1:多药耐药相关蛋白1,影响化疗敏感性,与预后相关。MDＲ多药耐药基因、??TS:胸苷合成酶,就是5－FU重要作用靶点,如果其高表达,阳性反映＋+以上,提示肿瘤细胞对5FU耐药。??Syn:突触素神经组织标志:S—１00神经组织标志,存在于神经组织,垂体、颈动脉体,肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织,常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断、??NＳE:主要用于神经内分泌肿瘤诊断、?
Ｃhr:嗜铬素,肾上腺髓质含量很高,鉴别肾上腺髓质与皮质,用于神经内分泌肿瘤诊断。??CKH:高分子角蛋白,主要标记鳞状细胞肿瘤。
?CＫL:低分之角蛋白,主要标记单层上皮、腺上皮、
?EMA:上皮膜抗原,糖蛋白,广泛分布各种上皮及其肿瘤。??Ｖiｍ(Vｉmｅnｔｉｎ):波形蛋白,间叶组织标志。?
P５０4:甲酰基辅酶Ａ消旋酶检测诊断前列腺癌得敏感性为９7％,特异性为1０0％。??AMACR:优点在于它就是癌症特异性,只存在于癌症组织、Rubin称,AMAＣR亦可用作其她癌症得诊断标志物。对各种癌症细胞进行检查后发现,结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤与黑素瘤都过度表达AMACR,以结肠直肠癌与前列腺癌表达最高、
?CD11７:胃肠间质瘤。
?ＣD１0:作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原,主要表达于未成熟淋巴细胞,在Burｋｉtt淋巴
癌,慢性髓性白血病等造血系统疾病得诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外得某些肿瘤中有表达,如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断与鉴别时有一定得参考价值。
?SMA:平滑肌肌动蛋白,标记平滑肌。
CD56:为神经细胞黏附分子,主要分布于大多数神经外胚层来源细胞,常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断,也就是NK细胞瘤得重要标志,也标记小细胞肺癌。
?Des(Desmin):结蛋白,广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞与肌上皮细胞,高分化高表达、低分化低表达。
MSＡ:肌特异性肌动蛋白,广泛分布于几乎所有肌型细胞中。?
CD68:存在于骨髓与各神经组织得巨噬细胞用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断(首选)、
?ＣD34:表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞与某些神经组织细胞,多用于标记血管内皮细胞,血管源性肿瘤得诊断,ＧＩSＴ80-90％、CD31也标记血管内皮。
?NESＴIN:神经干细胞中极为丰富。??Oｓｔ:成骨素,为骨化细胞分泌、
?ＡAＴ:抗胰蛋白酶纤维组织细胞来源肿瘤ACT抗糜蛋白酶。??GＦＡＰ:胶质纤维酸性蛋白神经组织标志,多用于星形胶质瘤诊断、?
Ｔg:甲状腺球蛋白,甲状腺癌TG阳性。
?ＣT:降钙素甲状腺髓样癌阳性。??ＰＨ:甲状旁腺素甲状旁腺肿瘤阳性。
TTF-I:甲状腺转录因子-1:TＴF－１表达于甲状腺腺上皮与肺得上皮细胞中。在肺肿瘤研究中发现,大多数肺得小细胞癌、原发性与转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTＦ－1阳性,而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTＦ—1阴性、在甲状腺乳头状腺癌中ＴTF－１亦阳性,而ＴTF在其它组织表达阴性。据此认为TTF-1可用来鉴别肺腺癌与鳞癌,并有助于与肺转移性腺癌得鉴别。
TTF—1:在甲状腺及其肿瘤中得表达:ＴTF-１主要表达在甲状腺滤泡细胞中与甲状旁腺得主细胞中,TTＦ－１为甲状腺分化与甲状腺球蛋白分泌调节得基础物质,可促进甲状腺过氧化物酶、碘／钠得转运,ＴＴF－1与血清ＴSH得活性有关,活性得ＴSH－R可增强TTＦ－1得表达。TTF－1在良恶性甲状腺组织中表达不同,正常甲状腺与良性腺瘤表达多,甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少,未分化癌中不表达,ＴTF-1在恶性甲状腺病变中得表达强度随年龄增加而增强,而且病变存瘤期长,复发机率高。
?TTF-1:在肺癌中得表达:７5％得肺非小细胞癌(NSCLCｓ)阳性表达,腺癌(ACｓ)明显高于鳞癌(SCC),９０%以上得原发性小细胞肺癌(SCＬC)表达阳性,TTF—1在非小细胞肺癌(NＳCＬCｓ)阳性表达强度与病人得预后成呈负相关,可作为一项独立得预后指标,肺得典型性类癌(TＣS)均为阴性,表明小细胞肺癌与非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS得共同起源得理论。
?Ｐ－Gp:多药耐药基因蛋白(P-Gp)－-药泵作用—－胞膜/胞浆--阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。?
谷光甘肽S转移酶(ＧSＴπ):解毒作用－—胞浆—－阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。
?拓扑异构酶Ⅱ(ＴＯPＯⅡ):靶点作用－—胞核－—阳性率越高,对下列药物越有效:蒽环类抗生素与鬼臼毒素类,如ＶP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VＭ2６。阳性率高者对VP16尤其有效。
雌激素受体(ER):性激素作用—-胞核－—阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。?
孕激素受体(PR):性激素作用－－胞核-－阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。?
C－erｂB—２:癌基因产物—－胞浆-－阳性率越高,肿瘤恶性程度越高。ER、PE阳性而Ｃ－erbB －2也阳性者,用三苯氧胺治疗效果不好。Ｋi—６７—-细胞增殖标志—－胞核--阳性率越高,肿瘤增殖越快,恶性程度越高。
?Ｋi－67:为细胞增值得一种标记,在细胞周期G1、S、G２、M期均有表达,G0期缺如,其与许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
ＥMA:在1９77年由Cerｉani等从乳球蛋白中提取,其分子量5１~100０KD,存在于上皮细胞中,研究表明EMＡ在乳腺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、恶性间皮瘤等上皮源性肿瘤中表达。
CK:起源于上皮细胞,就是上皮细胞与上皮来源得恶性肿瘤中间丝得组成成分,几乎占细胞总蛋白得85％,EMA与CK都就是上皮组织通用得标记物,可作为上皮源性肿瘤得诊断及鉴别诊断得依据之一及应用于检测上皮源性肿瘤得淋巴结微转移。?
MASSＯＮ染色:胶原纤维呈蓝色,肌纤维、胞质、红细胞呈红色,胞核呈蓝褐色?
p16:阳性提示恶性。基因定位于人类染色体9p21,通过与细胞周期蛋白Ｄ竞争性结合ＣDK4/6,阻止细胞从Ｇ１期至S期,从而对有丝分裂进行负反馈调节。p１６蛋白在正常、炎症性宫颈组织上皮中均为阴性表达,而在CIN与宫颈SCC病变中具有极高得阳性表达;在ＣＩＮ病变中伴随病变级别升高,其表达强度亦相应升高。借助p１６得阳性表达结果,有助于诊断CIN病变以及对ＣＩＮ病变进行客观分级、
１、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记,全套４项:P－ｇP,GSTπ,TＯＰOⅡ,Ki—6７。?
2、乳癌免疫组化耐药预后标记,全套7项:Ｐ-gp,GSＴπ,TOPOⅡ,Ki-６7,EＲ,PＲ,C-erbB—2。??
3、意义:标记物—-作用-—阳性部位－-临床意义?多药耐药基因蛋白(P-Ｇｐ)—－药泵作用－—胞膜／胞浆—-阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。
谷光甘肽S转移酶(GSＴπ)－-解毒作用-－胞浆——阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。
拓扑异构酶Ⅱ(ＴOＰＯⅡ)－—靶点作用——胞核-—阳性率越高,对下列药物越有效:蒽环类抗生素与鬼臼毒素类,如ＶP１６、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VＰ1６尤其有效、
雌激素受体(ＥR)-—性激素作用—-胞核—-阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。
孕激素受体(PR) －-性激素作用－—胞核—－阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。
Ｃ－erbB—2——癌基因产物－-胞浆-—阳性率越高,肿瘤恶性程度越高。ＥR、PE阳性而C-ｅｒbB-2也阳性者,用三苯氧胺治疗效果不好。??Ki－67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高,肿瘤增殖越快,恶性程度越高。
?Ｋi－67为细胞增值得一种标记,在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达,Ｇ０期缺如,其与许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关、PCNＡ(增埴细胞核抗原)。??ＣEA多数腺癌表达CEA
Rb (ｒetiｎoblastｏma视网膜母细胞瘤) 基因就是肿瘤抑制基因,调节细胞周期。??P５3在免疫组化中均为突变型,阳性率越高,预后约差。野生型半衰期很短
Nｍ23就是转移抑制基因,其阳性表达与肿瘤转移呈负相关。目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤得检测。几乎所有得研究都表明,ｎm23蛋白高表达患者淋巴结转移率相对较低,存活期相对较长。??E—Ca,Ｅ钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用得跨膜糖蛋白,其功能丧失引起细胞之间连接得破坏,主要用于肿瘤侵袭与转移方面得研究。
PS2(雌激素调节蛋白),其表达与ER表达有关,可作为内分泌治疗与预后判断得指标之一。
?CK18,低分子量角蛋白,主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性,主要用于腺癌诊断。
?CＫ１9,分布于单层上皮与间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应
Heｐpａｒ1,肝细胞抗原,正常肝细胞与高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性、
CK20,用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkｅl细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜与卵巢非黏液性肿瘤常阴性、??CK7卵巢、肺与乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。?
Ｖiｌlin 绒毛蛋白,正常组织中,viｌlin通常只表达于有刷状缘得细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺与胆管上皮细胞以及肾实质得上皮细胞中(特别就是近曲小管)。Ｖilliｎ在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌与胆管癌组织中有很高得表达率,具有明显腺样结构得肿瘤上没有vｉlｌin表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源得可能性极低、
?乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除得一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显得villiｎ免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其她villｉn免疫组化染色通常为阴性表达得肿瘤还有:如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌与前列腺癌、间皮瘤也经常为villin阴性表达,因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤与腺癌使用抗体得一种、??但就是也有一些非胃肠道来源得肿瘤可表达villin,如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌与小部分肺癌。也有一些专家报道Ｖillin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。
肝癌得诊断
Villｉn免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构,因此它也可能在表达部分肝癌得管状结构上很有用。多克隆CEA就是用于此目得得第一种试剂,而且ＣＤ１0 (CAＬＬA)在表达肝癌得该结构上也非常有用。多克隆CEＡ、vｉlｌiｎ与CD10(ＣＡLLA)在肝癌病例上得表达,相互之间并没有任何得冲突,因此如果怀疑肝癌得可能性,建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例得诊断、
Ｖiｌlin在神经内分泌肿瘤上得应用
Vilｌin在神经内分泌肿瘤得研究上也很有帮助。众所周知,类癌与胰腺得胰岛细胞肿瘤具有相相似得形态学特征,仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎就是不可能得。Villin在这种情况下特别有用,因为据文献报道在8５%得胃肠道类癌病例中有vilｌｉｎ得表达,但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道、Ｖilｌin在类癌上得表达通常为胞膜阳性。另外,有一些证据表明ｖｉllｉn在胃与下消
化道得小细胞癌上得表达率比在其她部位得小细胞癌上要高。如:肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道,大约有４0％得肺类癌病例vｉｌｌin阳性,在其她一些神经内分泌肿瘤上,如甲状腺髓样癌与少数得美克尔细胞瘤上也有vｉllｉｎ得表达。?MRP1多药耐药相关蛋白1,影响化疗敏感性,与预后相关。
MＤR多药耐药基因?TS胸苷合成酶,就是5-FＵ重要作用靶点,如果其高表达,阳性反映++以上,提示肿瘤细胞对5ＦU耐药。
Syn 突触素神经组织标志?S-100 神经组织标志,存在于神经组织,垂体、颈动脉体,肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织,常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断、
NSE 主要用于神经内分泌肿瘤诊断
Cｈr,嗜铬素,肾上腺髓质含量很高,鉴别肾上腺髓质与皮质,用于神经内分泌肿瘤诊断。?CKＨ高分子角蛋白,主要标记鳞状细胞肿瘤?CKL 低分之角蛋白,主要标记单层上皮、腺上皮
EMA 上皮膜抗原,糖蛋白,广泛分布各种上皮及其肿瘤?Ｖｉm 波形蛋白,间叶组织标志?P504 甲酰基辅酶A消旋酶检测诊断前列腺癌得敏感性为9７%,特异性为100％。?ＡMACR得优点在于它就是癌症特异性,只存在于癌症组织。Ruｂｉn称,ＡＭＡCR亦可用作其她癌症得诊断标志物、对各种癌症细胞进行检查后发现,结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤与黑素瘤都过度表达AMＡCＲ,以结肠直肠癌与前列腺癌表达最高、?CD11７胃肠间质瘤?CＤ１0作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原,主要表达于未成熟淋巴细胞,在Ｂurkｉtｔ淋巴癌,慢性髓性白血病等造血系统疾病得诊断中具有应用价值、近几年来发现该抗原在造血系统外得某些肿瘤中有表达,如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等、抗体在对肾细胞癌进行诊断与鉴别时有一定得参考价值。
ＣD15就是一种细胞粘附分子,因其对霍奇金淋巴瘤(HD)中得R-S细胞具有良好得标记作用,被认为就是HD得重要标志物。除ＨD得鉴别诊断外,对胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌等肿瘤CD１5得表达研究发现,CD15表达随癌细胞分化程度下降、淋巴结转移与临床分期增高而明显增高、认为CDl5得表达就是判断肿瘤得发展、预测淋巴结转移与预后得良好指标。免疫电镜观察显示,ＣＤ1５抗原主要分布于大肠癌细胞浆得界膜、内质网、高尔基体及近细胞核膜处,CD１５可能就是通过对所结合得铺基构型改变影响与参与肿瘤得形成与转移过程、?ＳＭA 平滑肌肌动蛋白,标记平滑肌
ＣD5６为神经细胞黏附分子,主要分布于大多数神经外胚层来源细胞,常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断,也就是ＮK细胞瘤得重要标志,也标记小细胞肺癌
Dｅs,结蛋白,广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞与肌上皮细胞,高分化高表达、低分化低表达。
MSA 肌特异性肌动蛋白,广泛分布于几乎所有肌型细胞中?ＣD68存在于骨髓与各神经组织得巨噬细胞用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断(首选)、CD3４表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞与某些神经组织细胞,多用于标记血管内皮细胞,血管源性肿瘤得诊断,GISＴ8０-90%。CD31也标记血管内皮。
CD４4就是一种分布广泛得跨膜糖蛋白分子,分ＣD44ｓ与CD４4ｖ两大类。CD4４s主要作为透明质酸受体,结合透明质酸后影响肿瘤得生长与转移。而ＣD44ｖ则主要表达于转
移得肿瘤细胞。李道明等用免疫组化ＬSAB法检测了４2例食管鳞癌CD４4ｖ4／5得表达,结果发现,淋巴结转移组得阳性表达率为76.1９％(16/２1),而非转移组得阳性率为42、8６％(9／12),两组间有显著性差异。癌巢周边得癌细胞、肌间浸润得癌细胞、有核分裂得癌细胞与癌栓中得癌细胞及浸润脉管壁得癌细胞均呈强阳性表达。张成武等检测了20例正常胃粘膜上皮、4３例异型增生与85例胃癌组织CD44v6得表达,结果正常胃粘膜无表达,而异型增生与胃癌组织阳性率分别为30、2％与74。1%,其表达强度与胃癌浸润深度、淋巴结转移、肿瘤生长方式、静脉与淋巴管侵袭及远处转移密切相关。以上结果均表明,CＤ４4v得高表达构成了肿瘤细胞得
侵袭性与易转移性。
NEＳTIN,神经干细胞中极为丰富
Osｔ成骨素,为骨化细胞分泌。?AＡＴ抗胰蛋白酶纤维组织细胞来源肿瘤AＣT抗糜蛋白酶ＧFＡP胶质纤维酸性蛋白神经组织标志,多用于星形胶质瘤诊断?Tg 甲状腺球蛋白,甲状腺癌TG阳性。
CＴ降钙素甲状腺髓样癌阳性。?PH 甲状旁腺素甲状旁腺肿瘤阳性?Ｎ—ｍyc表达增强得小细胞肺癌与神经母细胞瘤对化疗缺乏反应并进展快速;
bｃl－2:耐药机理为抗凋亡作用,高表达者对多数抗癌药物/放射治疗耐受。?肿瘤相关抗原7２(TGA7２) 多种恶性上皮性肿瘤表达TGA72,尤其就是乳腺癌、卵巢癌与结肠癌、正常上皮细胞、肉瘤、淋巴造血系统肿瘤通常TＧＡ72阴性、ＴGＡ7２抗体用于乳腺癌得研究较多,其高表达通常与肿瘤体积大、淋巴结转移瘤细胞分化差及高增殖活性有关。
肿瘤相关抗原(GＡ733) 编码上皮糖蛋白40,就是一种上皮细胞黏附分子(ＥP-CＡM),对上皮细胞得生长与分化起着重要作用。多种肿瘤可有GA73３表达,尤其就是乳腺癌、结肠癌及肺癌等。Kubuscｈoｋ等采用GA7３3对非小细胞肺癌手术切除淋巴结中隐匿性微转移灶进行检测,发现隐匿灶得检出就是判断总生存率得独立预后因子。结肠癌GＡ73３表达形式与肿瘤预后有关,细胞膜及细胞浆得表达预后较基膜侧得表达为差、?TTF-１甲状腺转录因子－１,TTF-１表达于甲状腺腺上皮与肺得上皮细胞中、在肺肿瘤研究中发现,大多数肺得小细胞癌、原发性与转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF-1阳性,而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTＦ－1阴性。在甲状腺乳头状腺癌中TTF－1亦阳性,而TTF在其它组织表达阴性。据此认为TTF－１可用来鉴别肺腺癌与鳞癌,并有助于与肺转移性腺癌得鉴别。
TTF-1在甲状腺及其肿瘤中得表达?TTＦ－1主要表达在甲状腺滤泡细胞中与甲状旁腺得主细胞中,
ＴTF-1为甲状腺分化与甲状腺球蛋白分泌调节得基础物质,可促进甲状腺过氧化物酶、碘／钠得转运,?TTF－1与血清TSH得活性有关,活性得TSH—R 可增强TTＦ—１得表达、
TTF—1在良恶性甲状腺组织中表达不同,正常甲状腺与良性腺瘤表达多,甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少,未分化癌中不表达,TTF—１在恶性甲状腺病变中得表达强度随年龄增加而增强,而且病变存瘤期长,复发机率高。??TTF—１在肺癌中得表达
75％得肺非小细胞癌(NSCLCs)阳性表达,腺癌(ACｓ)明显高于鳞癌(SCＣ),9０%以上得原发性小细胞肺癌(SCLC)表达阳性,ＴTＦ—1在非小细胞肺癌(NSCＬCs)阳性表达强度与病人得预后成呈负相关,可作为一项独立得预后指标,?肺得典型性类癌(TＣＳ)均为阴性,表明小细胞肺癌与非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS得共同起源得理论。
目录 免疫功能检测指标及临床意义 生化指标 1、免疫球蛋白G(IgG) 单位：克/升(g/L)。 单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血～克/升，新生儿～克/升，1～6个月～克/升，6个月～岁～克/升，6～12岁～克/升，12～16岁～克/升，成人～克/升。
增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2、免疫球蛋白A(IgA) 单位：毫克/升(mg/L)。 参考值:新生儿0～120毫克/升，1～6个月30～820毫克/升，6个月～2岁140～1 080毫克/2～6岁230～1900毫克/升，6～12岁290～2 700毫克/升，12～16岁500～3 000毫克/升，成人710～3 350毫克/升。 增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染。 降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3、免疫球蛋白M(IgM) 单位：毫克/升(mg/L)。 单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50～200毫克/升，1～6个月150～700毫克/升，6个月～2岁250～1 300毫克升，2～6岁350～1 500毫克/升，6～12岁400～1 800毫克/升，12～16岁500～1 800毫克/升，成人700～2 000毫克/升。 增高:常见于类风湿性关节炎、巨球蛋白血症、系统性红斑狼疮、黑热病、肝病及某些感染性疾病。 降低:常见于原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷等。 4、免疫球蛋白D(IgD) 单位：毫克/升(mg/L)。 参考值:成人血清免疫球蛋白D(IgD)为0～80毫克/升。 增高:见于免疫球蛋白D型骨髓瘤、慢性感染、结缔组织病、某些肝病和少数葡萄球菌感染者。 降低:见于各种遗传性和获得性免疫缺陷病。 5、免疫球蛋白E(IgE) 单位：毫克/升(mg/L)。 EIA法:成人为～毫克/升。
临床免疫学检验 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、 Fc 受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟 B 细胞： CD19、CD20、 CD21、 CD22 （成熟 B 细胞的 mIg 主要为 mIgM和 mIgD）同时检测 CD5分子，可分为 B1 细胞和 B2 细胞。 B 细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T 细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是 CD3（多链糖蛋白）；辅助 T 细胞的标志是 CD4；杀伤 T 细胞的标志是 CD8； T 细胞受体 =TCR。 T 细胞和 NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋ CD4＋CD8－ =辅助性T细胞（Th） CD3＋ CD4－CD8＋ =细胞毒性T 细胞（ Tc 或 CTL）（ T 细胞介导的细胞毒试验） CD4＋ CD25＋ =调节性T细胞（Tr或Treg） T 细胞功能检测：植物血凝素（ PHA）刀豆素（ CONA）刺激 T 细胞增殖。增殖试验有：形态 法、核素法。 T 细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E 花环试验是通过检测SRBC受体而对T 细胞进行计数的一种试验； 6、 NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志： CD16（ ADCC）、 CD56。 测定人 NK细胞活性的靶细胞多用K562 细胞株，而测定小鼠胞株。NK细胞活性则常采 用 YAC-1 细 7、吞噬细胞包括：单核 - 吞噬细胞系统（MPS，表面标志外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。CD14，包括骨髓内的前单核细胞、（表达 MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（ sIg ，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（ mIg，作为抗原受体表达于 B 细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL） 12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和 VL（高变区）是抗原结合部位。
2019 第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术 一、A1 1、CD8抗原存在于 A、辅助性T淋巴细胞表面 B、细胞毒性T淋巴细胞表面 C、吞噬细胞表面 D、所有成熟的T淋巴细胞表面 E、B淋巴细胞表面 2、同时表达CD3和CD4分子的细胞有 A、细胞毒性T淋巴细胞 B、辅助性T淋巴细胞 C、B淋巴细胞 D、树突状细胞 E、自然杀伤细胞 3、B淋巴细胞能识别特异性抗原是因其表面有 A、CD2 B、CD3 C、CD4 D、mIg E、TCR 4、关于淋巴细胞及其亚群的分析错误的是 A、外周成熟的T细胞特有的标志TCR和CD3是重要的表面抗原 B、按CD分子表达不同将T细胞分为CD4+和CD8+两大亚群 C、T细胞分为辅助性T细胞、细胞毒性T细胞（Tc）和调节性T细胞 D、外周血中成熟的B细胞特有的重要标志为BCR，即膜表面免疫球蛋白（Smlg） E、目前临床上常用三色荧光抗体标记将CD4-CD16+CD56+淋巴细胞确定为NK细胞 5、将T、B细胞进行分离时所采用的尼龙毛柱分离法利用B细胞和单核细胞的如下特点 A、体积不同 B、具有黏附于尼龙纤维表面的功能 C、形态不同 D、贴壁生长 E、具有吞噬性 6、何种细胞表面具有羊红细胞受体 A、中性粒细胞 B、巨噬细胞 C、T淋巴细胞 D、淋巴细胞 E、单核细胞 7、利用E花环沉降法可分离 A、单核细胞和B细胞
B、浆细胞和粒细胞 C、B细胞和T细胞 D、B细胞和粒细胞 E、B细胞和吞噬细胞 8、下列哪种白细胞介素可刺激T细胞生长，被称为T细胞生长因子 A、IL-1 B、IL-2 C、IL-3 D、IL-4 E、IL-5 9、检测T细胞数量的试验是 A、溶血空斑试验 B、SmIg荧光抗体染色试验 C、巨噬细胞或白细胞移动抑制试验 D、E玫瑰花环试验 E、计算盘直接计数 10、Ficoll分离法分离PBMC时，理想的PBMC层位于 A、血浆层顶部 B、局限在血浆层 C、血浆与分离液交界处 D、分离液中部 E、分离液底部 11、外周血单个核细胞是 A、单核细胞 B、淋巴细胞 C、单核细胞和淋巴细胞 D、吞噬细胞 E、中性粒细胞 12、将PBMC悬液倾于玻璃培养瓶中，37℃静置1小时，未贴壁的细胞主要是 A、淋巴细胞 B、单核细胞 C、T细胞 D、PBMC中混入的杂质细胞 E、中性粒细胞 13、膜免疫球蛋白为哪种细胞所特有 A、T细胞 B、单核细胞 C、B细胞 D、NK细胞 E、巨噬细胞
化学发光全套检查项目及临床意义（附参考数值） IVD第一资讯平台IVD资讯2月13日 整理、来源：体外诊断网 本文整理化学发光临床常见的检测项目、临床意义及参考范围，不足之处敬请指正。 ◆◆一、甲状腺功能◆◆ 1、总三碘甲状腺原氨酸（Tot T3）临床意义： Tot T3是判断甲状腺功能亢进首选指标之一，对甲状腺功能紊乱进行确诊。 增高：Grave 病，大多数是由于甲状腺机能亢进引起（特发性T3型甲亢、新生儿一过性甲亢、亚急性甲状腺炎、TBG、白蛋白增高时、地方性缺碘甲状腺肿、服用外源性T3等）。 降低：原发性甲状腺机能减低（如呆小症、Hashimoto 甲状腺炎、先天性甲状腺形成异常、新生儿甲状腺机能减退症、特发性粘液性水肿等）；继
发性甲状腺机能减低（如垂体功能低下、TSH单独缺乏症等）；下丘脑功能障碍、重症消耗性疾病；先天性TBG减少症；65岁以上。 参考范围～nmol/L （– ng/mL） 2、总甲状腺素（Tot T4 ）临床意义： 增高：甲亢；妊娠、新生儿；服用雌激素和避孕药；高TBG血症；急性肝炎；服用碘时；亚急性甲状腺炎；TSH分泌性肿瘤；甲状腺激素过度使用。 降低：甲减；TSH不应症；甲状腺形成异常；母体抗甲状腺制剂的应用；TBG低下症；某些严重肝病、禁食、高热病、肾病综合症。 参考范围～nmol/L （～ug/dL） 3、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）临床意义： 甲亢增高，甲减降低，与病理生理相一致，不受TBG等的影响，故可诊断妊娠性甲亢，并是诊断甲亢的最佳指标。 参考范围～pmol/L （～pg/mL） 4、游离甲状腺素（FRT4）临床意义： 甲亢、T4中毒症、恶性肿瘤等增高，甲减降低，与病理生理相一致，不受TBG等影响，是诊断甲减的最佳指标。 参考范围～pmol/L （～pg/mL） 5、促甲状腺素（超敏）（hTSH）临床意义：
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。 亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。 抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。 带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。 免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。 载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。 单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。 多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~ 基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。 杂交瘤技术 【原理】以聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫后能产生抗体的小鼠脾细胞与能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）选择性培养基的作用，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得机能产生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细胞系。将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，可从小鼠腹水中得到高效价的单克隆抗体。（一）小鼠骨髓瘤细胞 理想骨髓瘤细胞的条件：①细胞株稳定，易于传代培养；②细胞株本身不产生免疫球蛋白或细胞因子；③该细胞是HGPRT或TK的缺陷株；④能与B细胞融合成稳定的杂交瘤细胞； ⑤融合率高。 目前最常用的是NS-1和SP2/O细胞株 （二）免疫脾细胞
临床免疫学和免疫检验综合试卷 5 一、名词解释（每题3分，共18分） 1．单克隆抗体 2．沉淀反应 3．超敏反应 4．TAA 5．GVHR 6．包被 二、填空题（每空1分，共22分） 1．抗原与抗体的特异性结合是基于（）与（）的结构互补性与亲 和性。 2．当体内抗原量（）抗体量时，形成（）的免疫复合物，可引起（）型超敏反应。 3．酶免疫技术中最常用的酶有（）和（）。 4．分离人外周血淋巴细胞的Ficoll分离液，常用密度为 1.077±0.001，其成分为2份6%
（）蒸馏水溶液和一份34%的（）生理盐水溶液组成。 5．急性排斥反应发生过程中，移植物细胞同种异型HLA分子可以通过（）和 （）途径分别提供给受者CD4+T细胞和CD8+T细胞识别。 6．流式细胞仪的数据参数中反映细胞体积大小的是（）。 7．补体不参与（）和（）型超敏反应。 8．参与机体抗肿瘤免疫的细胞主要包括（）、（）和（）等。 9．本周蛋白是尿中游离的Ig轻链，此蛋白在PH5.0条件下，加热至40~60℃可发生（），继续加热至90~100℃又可发生（），故又称为（）。 10．免疫电泳技术是将（）与（）相结合的一种常用的免疫学实验 方法。 三、选择题（在每小题5个备选答案中，只有1个是正确的，将正确答案填入答题卡 内，选错或多选不给分。每题1分，共30分。注意：没有将答案写入答题卡者 ．．．．．．．．．．．．．． 不得分 ．．．。） 选择题答题卡 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1．评价机体B细胞功能，需作下列哪项检查： A．E花环试验 B．淋巴细胞转化试验 C. T细胞亚群 D. 血清Ig测定
生化全套43项检测项目临床意义 为方便广大医护工作者和患者查阅，现将“生化全项”共43个检测项目临床意义整理如下： 1、总蛋白 2、白蛋白 3、球蛋白 4、总胆红素 5、直接胆红素 6、间接胆红素 7、丙氨酸氨基转移酶8、天冬氨酰基转移酶9、AST：ALT 10、γ-谷氨酰基转移酶11、乳酸脱氢酶12、羟基丁酸脱氢酶 13、钾14、钠16、氯 17、磷18、镁19、二氧化碳结合力 20、阴离子间隙21、渗透压22、尿素 23、肌酐24、尿素25、总胆固醇 26、甘油三酯27、高密度脂蛋白28、低密度脂蛋白 29、极低密度脂蛋白30、载脂蛋白A1 31、载脂蛋白B 32、碱性磷酸酶33、肌酸激酶34、CK-MB 35、空腹血糖36、胆碱酯酶37、腺苷脱氨酶 38、胆汁酸39、肌红蛋白40、岩藻糖苷酶 41、脂蛋白42、前白蛋白43、肾小球滤过率
一、总蛋白 升高：各种原因失水所致的血液浓缩；多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、冷沉淀球蛋白血症等单克隆性免疫球蛋白病；系统性红斑狼疮、多发性硬化和某些慢性感染造成球蛋白（多克隆）升高的一些慢性病。 降低：体水份过多；各种渠道的血清蛋白丢失，如肾病综合征、严重烧伤、蛋白丢失性肠病、营养不良及消耗增加，如结核、甲亢、肿瘤；蛋白合成障碍，如肝细胞病变，肝功能受损等。 二、白蛋白 升高：偶见于脱水所致的血液浓缩。 降低：与总蛋白原因大致相同。急性降低见于大量出血与严重烧伤。慢性降低见于肾病蛋白尿、肝功能受损、腹水形成、肠道肿瘤与结核慢性失血、营养不良和消耗性疾病等。白蛋白如低于20g/L,临床可出现水肿。 三、球蛋白 升高： 1、感染引起机体免疫反应增强：慢性病毒性肝炎、活动性结核病、黑热病、血吸虫病、疟疾、马蜂、亚急性细菌性心膜炎等。 2、自身免疫性疾病时的机体免疫功能亢进：系统性红斑狼疮(SLE)、硬皮病、风湿热、类风湿性关节炎、肝硬化等。 3、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、部分恶性肿瘤等。 4、肾病综合征、过敏反应、肺炎、丝虫病。 5、生理性：血清水分减少、血液浓缩。 降低： 1、合成减少：肾上腺皮质功能亢进如库欣综合征、使用肾上腺皮质激素或其他免疫抑制剂等。
临床医学检验技术（中级)-临床免疫学和免疫学检验 (B1型题) 1、既具有抗原吞噬能力又有抗原提呈能力的细胞是 A.纯化的T细胞 B.纯化的B细胞 C.纯化的红细胞 D.外周血单个核细胞 E.单核细胞 2、既不表达HLA-Ⅰ类抗原又不表达HLA-Ⅱ类抗原的细胞是 A.纯化的T细胞 B.纯化的B细胞 C.纯化的红细胞 D.外周血单个核细胞 E.单核细胞 3、应用CDC方法检测HLA-DR抗原所使用的待测细胞为 A.纯化的T细胞 B.纯化的B细胞 C.纯化的红细胞 D.外周血单个核细胞
E.单核细胞 4、PHA刺激法可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验 5、免疫比浊法可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验 6、流式细胞仪可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验
7、细胞毒试验可用于 A.测定Tc细胞的效应功能 B.IgG测定 C.可溶性细胞因子测定 D.T细胞亚群测定 E.淋巴细胞转化试验 8、测定抗体生成细胞数 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验 9、测定T细胞数量 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验
10、测定NK细胞的杀伤活性 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验 11、测定非特异性细胞免疫功能 A.免疫印迹法 B.细胞毒试验 C.反向溶血空斑试验 D.E花结试验 E.PHA淋巴细胞转化试验 12、白血病儿童从骨髓库中得到别人捐献的骨髓，属 A.自体移植 B.同种移植 C.异种移植 D.同系移植 E.胚胎组织移植 13、试验性将猪心移植给猴，属
第二十三章超敏反应性疾病及其免疫检测 一、A1 1、关于挑刺试验以下说法不正确的是 A、将试验抗原与对照液分别滴于试验部位皮肤上 B、用针夹透过液滴在皮肤上轻轻挑刺一下，以刺破皮肤但以不出血为度 C、1分钟后吸去抗原溶液 D、同时试验多种抗原，不要将不同的抗原液交叉混合 E、主要用于Ⅰ型超敏反应，比皮内试验法敏感度高 2、使肥大细胞脱颗粒 A、膜辅助蛋白 B、促衰变因子 C、同源限制因子 D、C3b、C4b E、C3a、C5a 3、接触性皮炎属于 A、Ⅰ型超敏反应 B、Ⅱ型超敏反应 C、Ⅲ型超敏反应 D、Ⅳ型超敏反应 E、非超敏反应 4、发生Ⅲ型超敏反应性疾病的始动环节是 A、大分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜 B、中等大小免疫复合物沉积在毛细血管基底膜 C、小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜 D、补体激活 E、中性粒细胞浸润 5、新生儿溶血症是因母子间Rh血型不符引起的何种超敏反应 A、Ⅰ型超敏反应 B、Ⅱ型超敏反应 C、Ⅲ型超敏反应 D、Ⅳ型超敏反应 E、血管炎型超敏反应 6、无抗体参与的超敏反应是 A、重症肌无力 B、溶血性贫血 C、皮肤荨麻疹 D、类Athus反应 E、接触性皮炎 7、系统性红斑狼疮（SLE）致病机制属于 A、Ⅰ、Ⅳ型超敏反应 B、Ⅱ型超敏反应 C、Ⅲ型超敏反应
D、Ⅳ型超敏反应 E、免疫缺陷病 8、嗜碱性粒细胞在速发型超敏反应致敏阶段的作用是 A、清除杀伤变应原 B、合成组胺 C、吸附IgE D、释放IL-4 E、以上都不是 9、溶细胞型超敏反应属于 A、Ⅰ型超敏反应 B、Ⅱ型超敏反应 C、Ⅲ型超敏反应 D、Ⅳ型超敏反应 E、速发型超敏反应 10、属于Ⅱ型超敏反应的疾病是 A、新生儿溶血症 B、血清病 C、SLE D、过敏性鼻炎 E、溃疡性结肠炎 11、Ⅰ型超敏反应的非特异诊断试验是 A、皮肤试验 B、人嗜碱性粒细胞脱颗粒试验 C、嗜碱性粒细胞计数 D、人白细胞组胺释放试验 E、以上都对 12、免疫复合物沉积引起组织损伤最重要的因素是 A、可溶性的免疫复合物 B、CIC与组织结合的能力 C、补体的激活 D、局部血管的动力学 E、Ag在体内长期存在 13、挑刺试验主要用于检测 A、Ⅰ型超敏反应 B、Ⅱ型超敏反应 C、Ⅲ型超敏反应 D、Ⅳ型超敏反应 E、以上都不是 14、能够感染机体激发免疫应答导致急性肾小球肾炎的是 A、EB病毒 B、柯萨奇病毒 C、军团菌 D、A型溶血性链球菌
12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上 VH 和VL （高变区）是抗原结合部位。 临床免疫学检验 免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 中枢免疫器官：骨髓、胸腺； 外周 免疫器官：淋巴结、 脾脏（最大 ）、黏膜相关淋巴组 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导 体液免疫;B 细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（Smig ）、Fc 受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟B 细胞：CD19 CD20 CD21 CD22 （成熟B 细胞的 mig 主要为mIgM 和mIgD ）同时检 测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。 B 细胞功能检测方法： 溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T 细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T 细胞的标志是CD4; 杀伤T 细胞的标志是 CD8 T 细胞受体=TCR T 细胞和NK 细胞的共同表面标志是 CD2（绵羊红细胞受体）； CD 外CD4+ CD8-=辅助性T 细胞（Th ） CD 外CD4 CD8+ =细胞毒性T 细胞（Tc 或CTL ）（ T 细胞介导的细胞毒试验） CD 知CD25^ =调节性T 细胞（Tr 或Treg ） T 细胞功能检测：植物血凝素（PHA ）刀豆素（CONA 刺激T 细胞增殖。增殖试验有：形态 法、核素法。 T 细胞亚群的分离： 亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E 花环试验是通过检测SRBC 受体而对T 细胞进行计数的一种试验; 6、NK 细胞：具有细胞介导的 细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志： CD16（ ADCC ）、 CD56。 测定人NK 细胞活性 的靶细胞多用 K562细胞株，而测定小鼠 NK 细胞活性则常采用 YAC-1细 胞株。 7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统 （MPS 表面标志CD14包括骨髓内的前单核细胞、 外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。 （表达MH ffi 类分子） 8、人成熟树突状细胞 （DC （专职抗原呈递功能）： 表面标志为CD1a CD11C 和CD83 9、免疫球蛋白可分为分泌型（sig ，主要存在于体液中，具有 抗体功能）及膜型（mIg ，作 为抗原受体 表达于 B 细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按 含量多少排序：lgG > IgA > IgM > IgD > IgE 五类（按重链恒定区抗原性（CH 排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于 恒定区（ CH 、 CL ） 1、 免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、 3、 4、
免疫功能检查参考值及临床意义 2010-09-24 15:32:56 作者：佚名来源：网络转载 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12～16岁7.5～15.5克/升，成人7.6～16.6克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2.免疫球蛋白A(IgA) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿0～120毫克/升，1～6个月30～820毫克/升，6个月～2岁140～1 080毫克/升，2～6岁230～1 900毫克/升，6～12岁290～2 700毫克/升，12～16岁500～3 000毫克/升，成人710～3 350毫克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3.免疫球蛋白M(IgM) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50～200毫克/升，1～6个月150～700毫克/升，6个月～2岁250～1 300毫克/升，2～6岁350～1 500毫克/升，6～12岁400～1 800毫克/升，12～16岁500～1 800毫克/升，成人700～2 000毫克/升。 【临床意义】
第一章概论 一、A1 1、不能激活补体替代途径的物质是 A、细菌内毒素 B、酵母多糖 C、葡聚糖 D、凝聚的IgA E、甘露聚糖 2、免疫应答过程不包括 A、B细胞在骨髓内的分化成熟 B、效应细胞和效应分子的产生和作用 C、T、B细胞的活化、增殖、分化 D、巨噬细胞的抗原的处理和递呈 E、B细胞对抗原的特异性识别 3、IgE主要的抗体效应是 A、阻断中和作用 B、调理作用 C、裂解细胞作用 D、ADCC E、参与超敏反应 4、在抗体产生的一般规律中，初次应答产生最早，具有早期诊断价值的Ig是 A、IgG B、IgM C、sIgA D、IgE E、IgD 5、存在于人和脊椎动物血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白是 A、补体 B、抗体 C、免疫球蛋白 D、细胞因子 E、白细胞介素 6、补体的特点不包括 A、补体的性质不稳定 B、不受各种理化因素的影响 C、在0～10℃活性保持3～4天 D、加热56℃30min灭活 E、标本保存冷冻干燥 7、机体免疫监视功能低下时易患 A、移植物排斥反应 B、免疫缺陷病 C、超敏反应性疾病
D、自身免疫病 E、恶性肿瘤 8、产生IFN-γ的细胞是 A、成纤维细胞 B、B细胞 C、自然杀伤细胞 D、血管内皮细胞 E、单核-巨噬细胞 9、免疫对机体是 A、有利的 B、有害的 C、有利也有害 D、有利无害 E、正常条件下有利，异常条件下有害 10、关于免疫的概念，正确的是 A、机体对病原微生物的防御过程 B、机体抗感染的过程 C、机体识别和排除抗原性异物的过程 D、机体清除自身衰老死亡的细胞的过程 E、机体清除自身突变细胞的过程 11、较其他Ig更易透过胎盘的是 A、IgM B、IgG C、IgA D、IgE E、IgD 12、关于外周免疫器官，不正确的是 A、包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织 B、发生发育的时间晚于中枢免疫器官 C、是免疫应答发生的场所 D、是免疫细胞发生和成熟的场所 E、是所有淋巴细胞定居的场所 13、T淋巴细胞区定位在 A、脾红髓 B、胸腺皮质 C、淋巴结副皮质区 D、淋巴小结 E、脾小结 14、T细胞的绵羊红细胞（SRBC）受体是 A、CD4 B、CD3 C、CD2 D、CD8
免疫全项检测各项的临床意义 1、DNP抗体： 对人血清中与SLE相关的抗脱氧核糖核蛋白（anti-DNP）抗体进行定性。几乎所有活动期的SLE均可检出此种ANA，多种自身免疫病时此种抗体检出率也达20~30%。 [局限性] ①硬皮病、类风湿性关节炎、皮肌炎患者及各种结缔组织病患者血清在 SLE玻片上也可能产生凝集反应。 ②象肼苯达嗪、异烟肼、普鲁卡因胺以及抗惊厥药物所引起系统性红斑 狼疮综合症。 ③污染的、血脂高的或明显溶血的血清可能产生非特异性反应。 ④极高水平的抗体会影响凝集反应程度。 2、ANA抗体： ANA抗体是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。对SLE等自身免疫疾病有重要的诊断价值，SLE初诊阳性率为91.4%，活动期可达100%（内科学讲SLE中约80~95%病例ANA呈阳性），多次检测ANA抗体阴性可排除SLE。 ANA抗体阳性的其它疾病：肝脏疾患、溃疡性结肠炎、巨球蛋白血症、高球蛋白血症性紫癜、淋巴瘤、特发性自身免疫性贫血、恶性贫血、淋巴细胞性甲状腺炎、恶性肿瘤、重症肌无力、血管炎、结核等。 ANA抗体阳性与激素的关系：SLE病人用激素治疗后，ANA变化37.5%转为阴性，而62.5%的病人虽然阳性但效价大大降低。 ANA抗体滴度：SLE 92.5% ANA在1∶40以上，活动期在1∶160以上（1∶60 ~ 1∶2560之间）。SLE以外疾病78%在1∶10左右，其它结缔组织病的ANA滴度都在1∶80以下。 3、as-DNA： 抗DNA抗体检测是诊断SLE的特异性较强的试验，高滴度的DNA 抗体几乎仅见于SLE病人。as-DNA抗体的特异性较差，除系统性红斑狼疮外，其它结缔组织病、药物诱导的狼疮、慢性活动性肝炎也可检出。DLE等未见阳性。 抗DNA抗体同SLE患者病情变化有关：首都医院测得活动期SLE 病人阳性率为93%，非活动期阳性率则为7%。狼疮肾炎恶化时，抗DNA
简述抗原抗体反应的原理。 答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合简述抗原抗体反应的类型。 答：抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等。 影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素? 答：环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；②酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行；③温度：一般以15，40℃为宜，最佳反应温度为37℃。 简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。 单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。 试述免疫血清应如何进行纯化。 免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG并去除无关的杂抗体。提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse 4B制成层析柱。另外，还可通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse 4B上，通过亲和层析去除杂抗体。 叙述杂交瘤技术的基本原理。 杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。 简述间接血凝试验的基本原理。 间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验 简述抗人球蛋白试验的原理(又称Coombs试验)、类型及其在临床上的应用。 Coombs试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。 Coombs试验有二种类型：(1)直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。(2)间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。 抗球蛋白试验主要应用于那些方面？ ①输血：对于“危险”受体（指曾经输血、肌肉注射过血液制品或母子间血型不合的妊娠而可能产生免疫性血型抗体的人）的配血试验必须包括各种不完全抗体的检查，以抗球蛋白法最为可靠。②血型抗原抗体的检查：主要检查Rh—者，其体内是否有抗-D抗体，应用抗球蛋白试验对外表为D 阴性的供体血液作常规检查。最可靠和灵敏的方法是将待检D 阴性的红细胞与高效价的不完全抗-D 血清混合，然后加抗球蛋白血清检查细胞上有无致敏抗体。③对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断：母体产生的最常见的免疫性抗体为Rh 抗体和ABO 抗体，一般为7S 的IgG，可通过胎盘屏障，作用于胎儿红细胞，引起新生儿溶血性疾病，可借抗球蛋白试验检出而采取预防性措施。④对溶血性贫血的研究：获得性溶血性贫血患者大多数可借助该方法证实有自身红细胞的抗体存在。⑤对细菌或立克次体的不完全抗体的检查。Coombs 试验还可采用专一性特异性的抗球蛋白的血清，如抗IgG 血清、抗IgM、抗IgA以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体免疫球蛋白的亚类。 什么是协同凝集试验？主要用于何种检测？ 协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似，但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌的细胞壁中含
临床免疫学和免疫检验-3 (总分：50.00，做题时间：90分钟) 一、 以下每一道考题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。请从中选择一个最佳答案。(总题数：50，分数：50.00) 1.与Ⅱ型超敏反应无关的成分是( ) ?A．IgM/IgG ?B．补体 ?C．NK细胞 ?D．吞噬细胞 ?E．T细胞 （分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析： 2.E玫瑰花结形成试验的原理是因为SRBC可与( ) ?A．B细胞的BCR结合 ?B．Th细胞结合 ?C．TC细胞结合 ?D．与所有T细胞结合 ?E．与人外周血表达CD2的T细胞非特异性结合 （分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析： 3.皮肤迟发型超敏反应病人的皮损部位活体组织学检查，其特点为( ) ?A．动脉壁有Ig和补体沉积 ?B．表皮坏死
?C．水肿 ?D．中性粒细胞浸润 ?E．小血管周围有单个核细胞浸润 （分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析：[解析] 迟发型超敏反应是由效应T细胞与相应的致敏原作用引起的以单个核细胞(淋巴细胞、巨噬细胞)浸润和组织细胞变性坏死为主的炎症反应。 4.可用于检测外周T细胞总数的CD分子是( ) ?A．CD1 ?B．CD2 ?C．CD3 ?D．CD4 ?E．CD8 （分数：1.00） A. B. C. √ D. E. 解析： 5.属于TCRγ链可变区的编码基因是( ) ?A．D基因 ?B．Cμ基因 ?C．J基因 ?D．Cγ基因 ?E．Cδ基因 （分数：1.00） A. B. C. √ D.
E. 解析： 6.BI-B细胞抗体应答的特点是( ) ?A．可针对TD-Ag产生体液免疫应答 ?B．针对TI-Ag产生体液免疫应答 ?C．诱导产生抗体为IgG ?D．具有免疫记忆 ?E．作用时间长 （分数：1.00） A. B. √ C. D. E. 解析： 7.间接免疫荧光和ELISA检测用已知抗原检测未知抗体，有关抗体正确的是( ) ?A．第1抗体为羊抗人Ig ?B．第2抗体为人Ig ?C．第1抗体兔抗人Ig ?D．第1抗体为人Ig，第2抗体为羊抗人Ig ?E．第1抗体为人Ig，第2抗体为荧光或酶标记的羊/兔抗人Ig （分数：1.00） A. B. C. D. E. √ 解析： 8.乳糜泻病人与下列哪种HLA抗原呈关联( ) ?A．HLA-B17 ?B．HLA-B8 ?C．HLA-DR2 ?D．HLA-DR3 ?E．HLA-B35
第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术 一、A1 1、已知细胞中的黏附能力最大的为 A、树突状细胞 B、单核细胞 C、B细胞 D、T细胞 E、红细胞 2、免疫细胞检测技术中外周血单个核细胞指的是 A、有核细胞 B、淋巴细胞 C、单核细胞 D、淋巴细胞和单核细胞 E、幼稚细胞 3、下列关于T细胞亚群的分离，说法错误的是 A、原理是根据相应细胞的不同标志加以选择性纯化 B、凡根据细胞的表面标志进行纯化得到所需要的细胞群是阳性选择法 C、选择去除不需要的细胞群，仅留下所需要的细胞为阴性选择法 D、E花环沉降法是最先进的细胞分选技术 E、尼龙毛柱分离法是常用的分离方法 4、下列有关转化的淋巴细胞的形态描述中，错误的是 A、细胞变大 B、出现空泡 C、核仁消失 D、染色质疏松 E、胞质扩大 5、检测T细胞数量的试验是 A、溶血空斑试验 B、SmIg荧光抗体染色试验 C、巨噬细胞或白细胞移动抑制试验 D、E玫瑰花环试验 E、计算盘直接计数 6、溶血空斑形成试验中，空斑的大小表示 A、抗体生成细胞的多少 B、抗体生成细胞的种类 C、细胞的大小 D、抗体生成细胞产生抗体的多少 E、吞噬细胞的活性 7、做自然杀伤细胞毒试验，敏感而常用的是哪种细胞株 A、小鼠T细胞肿瘤细胞株 B、人肺癌细胞 C、K562细胞系 D、小鼠细胞毒T细胞系
E、L929细胞株 8、具有抗肿瘤效应的第一道防线是 A、TC细胞 B、中性粒细胞 C、TH细胞 D、B细胞 E、NK细胞 9、下列不属于自然杀伤（NK）细胞检测方法的是 A、酶释法和放射性核素法 B、酶释法和荧光分析法 C、放射性核素法和荧光分析法 D、放射性核素法和荧光分析法和酶释法 E、反向溶血空斑实验和酶释法 10、可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物是 A、PWM B、PHA C、ConA D、MHC E、BCG 11、用于临床评价病人免疫状况的试验中，评价T细胞功能的试验是 A、血清免疫球蛋白检测 B、溶血空斑试验 C、淋巴细胞转化试验 D、膜表面Ig测定 E、EA花环试验 12、关于单个核细胞说法错误的是 A、单个核细胞包括淋巴细胞、单核细胞 B、单个核细胞的体积、形态、比重与其他细胞不同 C、可利用单个核细胞的体积不同，按照密度梯度来分离 D、在进行密度梯度分离时，单个核细胞比重比溶液的比重大 E、多核粒细胞比重比单个核细胞比重大 13、采用密度梯度分离法分离得到的细胞主要为 A、单核细胞和粒细胞 B、单核细胞 C、淋巴细胞 D、淋巴细胞和单核细胞 E、淋巴细胞和粒细胞 14、利用E花环沉降法可分离 A、单核细胞和B细胞 B、浆细胞和粒细胞 C、B细胞和T细胞 D、B细胞和粒细胞 E、B细胞和吞噬细胞 15、对分离细胞的保存说法错误的是
《临床免疫学和免疫检验》理论教学大纲 （供五年制本科医学检验专业使用） Ⅰ前言 免疫学是医学科学的一个分支。临床免疫学研究的对象是某些特定疾病过程中检验理论、临床应用、方法评价及实际应用的科学。临床免疫学以基础免疫学、分子生物学、生物化学、细胞生物学、病理生理学等医学课程为基础，通过检验理论及实验方法的学习，培养学生扎实的理论基础，科学的工作作风和理论联系实际分析解决问题的能力。 本大纲适用于五年制本科医学检验专业学生使用。现将大纲使用中有关问题说明如下： 一为了使教师和学生更好地掌握教材，大纲每一章节均由教学目的、教学要求和教学内容三部分组成。教学目的注明教学目标，教学要求分掌握、熟悉和了解三个级别，教学内容与教学要求级别对应，并统一标示（核心内容即知识点以下划实线，重点内容以下划虚线，一般内容不标示）便于学生重点学习。 二教师在保证大纲核心内容的前提下，可根据不同教学手段，讲授重点内容和介绍一般内容。三总教学参考学时为90学时，其中理论46学时，实验44学时；理论与实验之比1.05：1。四教材：《临床免疫学和免疫学检验》，人民卫生出版社，王兰兰，3版，2003年。 Ⅱ正文 第一章绪论 一教学目的 介绍免疫学发展简史。了解临床免疫学发展历程。熟悉临床免疫学的临床应用和现代免疫学的发展趋势。 二教学要求 （一）掌握基本概念：临床免疫学、免疫应答、免疫组织与器官、免疫细胞、免疫分子。（二）熟悉免疫学基础理论的临床应用，现代免疫学检测的发展趋势，免疫学检测技术在参与免疫性病理损伤的免疫细胞、免疫分子检测中的作用。 （三）了解免疫学检测与方法在免疫相关疾病的发病机制研究和临床诊断中的地位。 三教学内容 （一）临床免疫学的概念及临床应用范畴，免疫调节与信号传导。 （二）免疫相关疾病的诊断、发病机制研究、免疫及基因治疗。 第二章抗原抗体反应 一教学目的 抗原抗体反应的基础是抗原决定簇与相应抗体高变区分子结构的互补性。学习免疫反应的相关基本概念和特点，是进一步学习临床免疫学的基础。 二教学要求
名词解释第1 章概论 1. 免疫学： 2. 免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学：第2 章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9. 抗原抗体反应的等价带( zoneofequivalence ) 10.最适比( optimalratio ) 11.带现象( zonephenomenon) 第3 章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 13.半抗原 14.免疫佐剂 15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb) 第5 章凝集反应 16.凝集反应 17. 直接凝集反应 18. 间接凝集反应 19. 明胶凝集试验第6 章沉淀反应 20.沉淀反应 21. 絮状沉淀试验 22. 免疫浊度测定 23. 凝胶内沉淀试验
24. 单项扩散试验 25. 双向扩散试验 26. 免疫电泳技术 27. 对流免疫电泳 28. 火箭免疫电泳 29.免疫电泳 30. 免疫固定电泳第19 章补体检测及应用 31. 补体 32. 免疫溶血法 33. 补体结合试验第22 章感染性疾病与感染免疫检测 34. 感染 第23 章超敏反应性疾病及其免疫检测 35.超敏反应 36.I型超敏反应 37.U型超敏反应 38.川型超敏反应 39.W型超敏反应 第24 章自身免疫性疾病及其免疫检测 40.自身耐受 41.自身免疫 42. 自身免疫病 43.自身抗体 44.抗核抗体 第25 章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45. 免疫增殖性疾病 46. 免疫球蛋白增殖病 47. 本周蛋白
48. 血清区带电泳 49. 免疫电泳 50. 免疫固定电泳第26 章免疫缺陷性疾病及其免疫检验 51. 免疫缺陷病 52. 获得性免疫缺陷综合征第27 章肿瘤免疫与免疫学检验 53. 肿瘤免疫学 54. 肿瘤抗原 55. 肿瘤标志物第28 章移植免疫及其免疫检测 56. 移植 57. 主要组织相容性复合体 58. 移植排斥反应 59. 移植物抗宿主反应(GVHR) 60. 血清学分型法 、填空题。 第1 章概论 1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学 2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现 代免疫学时期 3.为保持机体内环境稳定，免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫 自稳、免疫监视。 4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段 5.免疫系统的组成包括三部分，分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子。 6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途 径。 第2 章抗原抗体反应 7.在抗原抗体反应中，主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作