一、胰岛素的信号转导途径
胰岛素(包括IGFI、IGFII) 信号所激发的信号传递途径主要有二,一为Ras-MAPK途径，一为PI3-激酶途径。
(一) Ras-MAPK途径当胰岛素或IGF 与胰岛素受体结合后，引起受体自
身磷酸化而活化（酪氨酸激酶的活性），活化的受体使胞质内的胰岛素受体底物(IRS) IRS-1和SHc等的酪氨酸残基磷酸化，磷酸化的酪氨酸残基结合Grb2的SH2结构域，Grb2的SH3结构域又可与Sos 结合并使之活化，激活的Sos即可与质膜上的Ras相结合。Sos具有鸟苷酸交换因子( GEF) 的作用，使Ras释放结合的GDP，结合GTP而活化。Ras 的下游信息传递是一系列蛋白激酶的级联
传递和放大过程。活化的Ras-GTP与Raf的N端结构域结合并使之活化，Raf 是丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶（MAPKKK），活化Raf结合并激活另一种蛋白激酶MAPKK，它可结合并磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶MAPK (mitogen－activated protein kinase，MAPK)的第185位酪氨酸残基及第183位苏氨酸残基，而使之激活。活化的MAPK进入细胞核，可使EIK-1、RNA 聚合酶II等许多转录因子活化，进而促进c-fos，c-jun的表达。
Ras-MAPK信号通路可概括如下：
配体→RPTK→adaptor（如Grb2）→GEF→Ras→Raf（MAPKKK）→MAPKK →MAPK→进入细胞核→转录因子→基因表达。
通过Ras-MAPK传递途径可促使靶细胞基因表达，导致细胞生长、增殖及
分化。
(二) 磷脂酰肌醇3-激酶( PI3-K) 途径PI3-K 的SH2 结构域能与含磷酸酪氨酸残基的信号分子如IRS-1 结合，SH3 结构域能与富含脯氨酸的各种信
号蛋白结合。当胰岛素或IGF作用于胰岛素受体后, PI3-K 与酪氨酸磷酸化的IRS-1 结合，激活催化活性，PI3-K的靶蛋白是蛋白激酶 B ( PKB) 。PKB 是Ser/ Thr 蛋白激酶家族的成员,。当胰岛素及IGF 作用于靶细胞时迅速引起PKB 的活化，并使PKB从细胞膜脱落，进入胞质，进而对胞质内的靶蛋白发挥作用。PKB的靶蛋白有：磷酸果糖激酶-2，与糖酵解的调控有关；糖原合成激酶
3(glycogen synthase k inase 3，GSK3)；受PKB磷酸化后GSK3活性降低，再使糖原合成酶因磷酸化减少而活性增加，从而导致糖原合成增加。此外, GSK3与mRNA 转录起动的活化也有关。参与细胞凋亡的Bad蛋白也是PKB 的底物，PKB使Bad磷酸化而转变成无活性形式，从而抑制细胞凋亡。此外, PKB 还与葡萄糖的转运、细胞增殖、分化及细胞周期的调节等有关。
二、JAK-STAT 信号转导途径
JAK（just another kinase 或janus kinase）是一类非受体酪氨酸激酶家族，
已发现四个成员，即JAK1 、JAK2 、JAK3 和TYK1，其结构不含SH2 、SH3，C 段具有两个相连的激酶区。
JAK 的底物为STAT，即信号转导子和转录激活子（signal transducer and activator of transcription，STAT），具有SH2 和SH3 两类结构域。STAT 被JAK 磷酸化后发生二聚化，然后穿过核膜进入核内调节相关基因的表达，这条信号
通路称为JAK-STAT 途径
JAK-STAT 途径
1、配体与受体结合导致受体二聚化；
2、二聚化受体激活JAK；
3、JAK 将STAT 磷酸化；
4、STAT 形成二聚体，暴露出入核信号；
5、STAT 进入核内，调节基因表达。
RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP）限制性片段长度多态性，当用限制性内切酶切割不同品种或个体的基因组DNA时，如果限制性内切酶的酶切位点的碱基发生突变，或者酶切位点之间DNA片段发生碱基的插入或缺失，导致酶切片断的大小、数量发生了变化，产生相当多的数目和大小不
等的DNA片段。这种变化可以通过特定的探针杂交进行检测，从而可以比较不同品种或个体之间的DNA水平的差异（或多态性）。广泛用于基因组遗传图谱
构建、基因定位以及生物的进化和分类关系研究。
RAPD（Random Amplified Polymorphism DNA, RAPD）随机扩增多态性DNA，利用随即引物扩增寻找多态性DNA片段的分子标记方法。是建立在PCR技术基础上，利用一系列（通常数百）不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链
（一般为10 bp）为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增，然后用凝胶电泳分开扩增片段，EB等染色剂染色后检测扩增产物DNA片段的多态性。与RAPD技术相类似的还有AP-PCR（Arbitrary Primed PCR）和DAF（DNA Amplified Fingerprints）2种标记技术。在AP-PCR分析中，所使用的引物较长（通常10～50 bp），扩增分为3个部分，每个部分要求的条件和组分的浓度存
在差异。DAF是一种改进的RAPD分析技术，与RAPD技术不同的是它使用引物浓度更高，长度更短（一般5～8 bp），只有2个温度循环，并常用聚丙烯酰
胺凝胶电泳，所提供谱带信息比RAPD大得多。
AFLP（Amplified fragment length polymorphism，AFLP）扩增片段长度多态性，AFLP是RFLP和PCR结合的产物，其基本原理是：将基因组DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增，使用双链人工"接头"与基因组DNA的酶切片段相连接作为扩增反应模板，"接头"与"接头"相邻的酶切片段的几个碱基序列作为引物的结合位点。这样就只有那些两端序列能与选
择碱基配对的限制性片段被扩增，再在高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物。
该技术的独特之处在于所用的专用引物可在不知道DNA信息的前提下就可对酶切片段进行PCR扩增。是目前一种十分理想有效的分子标记
STS（Sequence-Tagged Site, STS）序列标签位点是基因组上定位明确、作为
界标并能通过PCR扩增被唯一操作的短的、单拷贝DNA 序列，，用于产生作图位点，即测定一系列STS 的次序即可作出基因组区域的图谱。STS主要包括简单重复序列（Simple Sequence Repeat Polymorphisms, 简称SSR或SSRP）、锚定简单重复序列（Anchored Simple Sequence Repeats, ASSR）、序列特异扩增区域（Sequence-characterized a mplified regions）、酶切扩增多态性序列（Cleaved Amplified Polymorphism Sequences, C APS）、单引物扩增反应（Single Primer Amplification Reaction, SPAR）等标记技术。
SSR (Simple Sequence Repeats，SSR) 简单重复序列真核生物的基因组
中散布大量的串联重复序列，其中2～4个bp的微卫星序列具有高度多态性，微卫星在结构上的最大特点是两端序列较保守，因此可设计与两端保守序列互
补的引物进行PCE扩增，来揭示微卫星的多态性。SSR 是检测多态性的一种有效方法。
SSCP（Single Strand Conformation Polymorphism, SSCP）单链构像多态性是指相同长度的单链DNA因核苷酸序列的差异，甚至单个碱基不同，而产生的构
像变异，在非变性聚丙烯酰胺中表现为电泳迁移率的差别。PCR产物变性处理，双链DNA分开成单链，再用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据条带位置变化来判断目的片段中是否存在突变。SSCP分析对DNA序列的改变非常敏感，常常一个碱基差别都能显示出来。SSCP结果判定是通过多个样品之间对比，观察条带之间位置改变，从而显示出不同生物个体的DNA特异性，达到指纹分析的目的。该技术已被广泛用于癌基因和抗癌基因变异的检测、遗传病的致病基
因分析以及基因诊断、基因制图等领域。
SNP（Single Nucleotide Polymorphism, SNP）单核苷酸多态性是指DNA序列上单个核苷酸的差异，是单个核苷酸置换产生的遗传标记。根据从STS中确定SNP位点的经验，每千个核苷酸会出现一个标记位点，因SNP的分布密集。检测SNP的最佳方法是DNA芯片技术，如果能将所有SNP全部信息载入DNA 芯片，就可制造基因组扫描仪，用来扫描各个个体并分析它们在基因组成上的
差异。
SCAR(Sequence-characterized amplified regions) SCAR标记是在RAPD技术
的基础上发展起来的。目标RAPD片段克隆和测序，根据原RAPD片段两末端的序列设计特定引物进行PCR特异扩增。
，EST）表达序列标签短的、单次（测序）阅读EST（expressed sequence tag
的cDNA 5’或3‘端序列。也包括来自于差异显示和RACE实验的cDNA序列。一般是来自不同组织来源的cDNA序列，长度在300-500bp左右。
Contig 重叠群或邻接片段基因组测序中将许多序列片段经过比对找到重叠
区，从而连接成长片段，这些片断称重叠连续群，简称重叠群。
UniGene —被整理成簇的EST和全长mRNA序列，每一个代表一种特定已知
的或假设的人类基因，有定位图和表达信息以及同其它资源的交叉参考。
SAGE（serial analysis of gene expression,
），基因表达系列分析是近几年来发展起来的一种快速分析基因表达水平信息的技术。它通过快速和详细分析成千
上万个EST来寻找出表达丰度不同的SAGE标签序列，从而接近完整地获得基
因组的表达信息。
基因组学（Genomics），指对所有基因进行基因组作图（包括遗传图谱、物理图谱、转录本图谱），核苷酸序列分析，基因定位和基因功能分析的一门科学。基
因组研究应该包括两方面的内容：以全基因组测序为目标的结构基因组学和以
基因功能鉴定为目标的功能基因组学，又被称为后基因组（postgenome）研究。
蛋白质组（proteome）指全部基因表达的全部蛋白质及其存在方式，是一个基
因、一个细胞或组织所表达的全部蛋白质成分，蛋白质组学是不同时间和空间
发挥功能的特定蛋白质群体的研究。
蛋白质组学（protemics）。蛋白质组学是不同时间和空间发挥功能的特定蛋白质
群体的研究。它从蛋白质水平上探索蛋白质作用模式，功能机理、调节控制、
药物开发、新陈代谢途径等提供理论依据和基础。
功能基因组学（Functuional genomics）又称为后基因组学（Postgenomics），它利用结构基因组所提供的信息和产物，发展和应用新的实验手段，通过在基
因组或系统水平上全面分析基因的功能，使得生物学研究从对单一基因或蛋白
质得研究转向多个基因或蛋白质同时进行系统的研究。
RNAi 和反义RNA
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)引发的转录后基因静默机制。RNAi的机制可能是双链RNA进入细胞后，在Dicer酶的作用下，被切割成21-23 bp大小的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs，siRNAs)，siRNAs结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA 诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活的RISC可以精确降解与siRNAs序列相同的mRNA，完全抑制了该基因在细胞内的翻译和
表达。生物体内的双链RNA可来自于RNA病毒感染，转座子的转录产物，外
源导入的基因。这些来源的双链RNA诱发了细胞内的RNAi机制，结果是病毒
被清除，转座子的表达被阻断，外源导入基因表达被阻断同时，与其同源的细
胞基因组中的基因表达也被阻断。
由于少量的双链RNA就能阻断基因的表达，并且这种效应可以传递到子代细胞中，研究者们推测细胞内存在RNAi效应的扩增系统。研究者们发现，在真核细胞中也存在能以RNA为模板指导RNA合成的聚合酶（RNA-directed RNA polymerase，RdRP）。在RdRP的作用下，进入细胞内的双链RNA通过类似于PCR的反应过程，呈指数级的数量扩增。
双链RNA进入细胞后，一方面在Dicer酶的作用下被裂解成siRNA，另一方面在RdRP的作用下自身扩增后，再被Dicer酶裂解成siRNA。SiRNA的双链解开变成单链，并和某些蛋白形成复合物，此复合物同与siRNA互补的mRNA 结合，一方面使mRNA被RNA酶裂解，另一方面以SiRNA作为引物，以mRNA 为模板，在RdRP作用下合成出mRNA的互补链。结果mRNA也变成了双链RNA，它在Dicer酶的作用下也被裂解成siRNA。这些新生成的siRNA也具有诱发RNAi的作用，通过这个聚合酶链式反应，细胞内的siRNA大大增加，显著增加了对基因表达的抑制。从21到23个核苷酸的siRNA到几百个核苷酸的双链RNA都能诱发RNAi，但长的双链RNA阻断基因表达的效果明显强于短的
双链RNA。
反义RNA (antisense RNA) 是一种本身缺乏编码能力,但能与特异靶RNA(主要是mRNA) 互补的RNA 分子,它可通过配对碱基间氢键作用与靶RNA 的特定互补区域结合形成双链复合物,抑制靶RNA 的功能,从而调控基因的正常表达。反义RNA 技术的基本原理是利用自然存在的或人工合成的反义RNA,通过基因重组技术反向插入到合适的表达载体形成重组DNA ,然后转染受体细胞,则这一反向
插入的序列就会随细胞周期产生大量反义RNA ,对基因的表达进行调控,从而抑制、封闭或破坏靶基因的表达。选择具有明显的生物学效应的靶序列后,反义RNA 即通过和相应的RNA 互补而达到阻断其功能的目的。
YAC（yeast artificial chromosome，YAC）
一种能够克隆长达400Kb的DNA片段的载体，含有酵母细胞中必需的端粒、着丝点和复制起始序列。
BAC (Bacterial Artifical Chromosome，BAC)
BAC系统是基于大肠杆菌中可大容量容纳基因且稳定性良好的F因子衍生而来的载体系统，可容纳超过100kb的插入片段，BAC克隆的插入片段的平均长
度为120kb，最大可达到240kb左右。良好的稳定性和操作的简便性是BAC系统的主要优点。
PAC（P1 bacteriophage artificial cromosome，PAC）
PAC系统是以噬菌体P1为基础的克隆系统，它可容纳70～100kb的插入片段，并可选择性地区分重组子和非重组子，且同时有两套复制机制。单拷贝复制子
可用于稳定克隆增殖，而多拷贝复制子则可在Lac操纵子的控制下用于DNA的制备。
CAP分解代谢活化蛋白，是原核 E. coli细胞内作用最强的基因调节物之一，
是控制营养代谢有关的一套操纵子的激活蛋白。CAP通过结合cAMP而形成活化的CAP－cAMP复合物，能结合到操纵子的启动子上或附近的特异CAP结合位点，帮助RNA聚合酶有效的结合到启动子上，提高形成封闭起始复合物的速
度，从而提高了转录效率。CAP的作用位点在它调控的各种操纵子中都处于离
开转录起始位点不同的距离。
物理图谱是DNA片段上限制性内切酶酶切位点的图谱，表示各种限制性内切酶识别位点在DNA序列上的线性排列。DNA一级结构的差异往往反映出物理
图谱的不同。因此物理图谱是分子结构特征的反映，也是研究分子克隆不可缺
少的条件。
遗传图谱通过遗传重组所得到的基因线性排列图称为遗传连锁图。它是通过
计算连锁的遗传标志之间的重组频率，确定他们的相对距离，一般用厘摩（cM，即每次减数分裂的重组频率为1%）来表示。绘制遗传连锁图的方法有很多，早
期RFLP、RAPD、AFLP、；80年代后出现的有STR、和90、SNP、。
转录图谱利用EST作为标记所构建的分子遗传图谱被称为转录图谱
CG岛基因组DNA中大部分CG二核苷酸对是高度甲基化的，但在仍有一簇
簇稳定的非甲基化的CG小片段，称为CG岛，通常长度越1～2kbp，平均相距100kbp。特点是G＋C含量高，大多数CG岛缺乏甲基化。大约70％的CG岛与持家基因偶联，其他的出现在组织特异性基因内。CG岛还常常易于同转录机构的蛋白质因子相互作用。
阐述PCR的原理和方法P82
阐述cDNA文库的构建方法P54
阐述基因组文库的构建方法P58
阐述什么是基因突变？并说明产生基因突变有哪些途径？
阐述DNA修复系统
DNA修复(DNA repairing)是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能；但有时并非能完全消除DNA的损伤，只是使细胞能够耐受这种DNA的损伤而能继续生存。原核和真核生物对于DNA的损伤都有很多的修复系统，如SOS系统。对不同的DNA损伤，细胞可以有不同的修复反应。
(一)回复修复这是较简单的修复方式，一般都能将DNA修复到原样。
1.光修复这是最早发现的DNA修复方式。修复是由细菌中的DNA光解酶(photolyase)完成，此酶能特异性识别紫外线造成的核酸链上相邻嘧啶共价结
合的二聚体，并与其结合，这步反应不需要光；结合后如受300－600nm波长的光照射，则此酶就被激活，将二聚体分解为两个正常的嘧啶单体，然后酶从DNA 链上释放，DNA恢复正常结构。后来发现类似的修复酶广泛存在于动植物中，
人体细胞中也有发现。
2.单链断裂的重接DNA单链断裂是常见的损伤，其中一部分可仅由DNA 连接酶(ligase)参与而完全修复。此酶在各类生物各种细胞中都普遍存在，修复
反应容易进行。但双链断裂几乎不能修复。
3.碱基的直接插入DNA链上嘌呤的脱落造成无嘌呤位点，能被DNA嘌呤插入酶(insertase)识别结合，在K＋存在的条件下，催化游离嘌呤或脱氧嘌呤核
苷插入生成糖苷键，且催化插入的碱基有高度专一性、与另一条链上的碱基严
格配对，使DNA完全恢复。
4.烷基的转移在细胞中发现有一种O6甲基鸟嘌呤甲基转移酶，能直接将
甲基从DNA链鸟嘌呤O6位上的甲基移到蛋白质的半胱氨酸残基上而修复损伤
的DNA。这个酶的修复能力并不很强，但在低剂量烷化剂作用下能诱导出此酶
的修复活性。
(二)切除修复(excision repair)是修复DNA损伤最为普遍的方式，对多种DNA损伤包括碱基脱落形成的无碱基位点、嘧啶二聚体、碱基烷基化、单链断
裂等都能起修复作用。这种修复方式普遍存在于各种生物细胞中，也是人体细
胞主要的DNA修复机制。修复过程需要多种酶的一系列作用，基本步骤如图
16?1所示，①首先由核酸酶识别DNA的损伤位点，在损伤部位的5′侧切开磷酸
二酯键。不同的DNA损伤需要不同的特殊核酸内切酶来识别和切割。②由5′→3′核酸外切酶将有损伤的DNA片段切除。③在DNA聚合酶的催化下，以完整的
方向DNA链，填补已切除的空隙。④由DNA连接酶
互补链为模板，按5′→3′
将新合成的DNA片段与原来的DNA断链连接起来。这样完成的修复能使DNA
恢复原来的结构。
(三)重组修复(recombinational repair)
上述的切除修复在切除损伤段落后是以原来正确的互补链为模板来合成新
的段落而做到修复的。但在某些情况下没有互补链可以直接利用，例如在DNA
复制进行时发生DNA损伤，此时DNA两条链已经分开，其修复可用图16?2所
示的DNA重组方式：①受损伤的DNA链复制时，产生的子代DNA在损伤的
对应部位出现缺口。②另一条母链DNA与有缺口的子链DNA进行重组交换，
将母链DNA上相应的片段填补子链缺口处，而母链DNA出现缺口。③以另一
条子链DNA为模板，经DNA聚合酶催化合成一新DNA片段填补母链DNA的
缺口，最后由DNA连接酶连接，完成修补。
重组修复不能完全去除损伤，损伤的DNA段落仍然保留在亲代DNA链上，
只是重组修复后合成的DNA分子是不带有损伤的，但经多次复制后，损伤就被“冲淡”了，在子代细胞中只有一个细胞是带有损伤DNA的。
(四)SOS修复
“SOS”是国际上通用的紧急呼救信号。SOS修复是指DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式，修复结果只是能维持基因组的完整性，提高细胞的生成率，但留下的错误较多，故又称为错误倾向修复(error prone repair)，使细胞有较高的突变率。
当DNA两条链的损伤邻近时，损伤不能被切除修复或重组修复，这时在核
酸内切酶、外切酶的作用下造成损伤处的DNA链空缺，再由损伤诱导产生的一整套的特殊DNA聚合酶SOS修复酶类，催化空缺部位DNA的合成，这时补上去的核苷酸几乎是随机的，但仍然保持了DNA双链的完整性，使细胞得以生存。但这种修复带给细胞很高的突变率。
分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开
中国疾控中心2005年分子生物学（博士） 一、名词解释 1.EST 2.YAC 3.Sense DNA 4.RNAi 5.Race 二、问答题 1、乳糖操纵子的结构。IPTG如何诱导结构基因表达？ 2、正向突变、抑制突变及回复突变的定义及与突变的关系。 3、PUC18克隆载体的结构特征。 4、在做PCR过程中，常遇到的问题及解决方法。 5、已知蛋白A、B之间相互作用，C、D分别与A、B 相似，如何签定C、D之间的相互作用，两种方法说明之。 6、试用分子生物学相关知识建立动物模型的方法，如何建立病原生物学的动物模型。 军事医学科学院1995年分子生物学试题（博士） 1. Apoptosis的生物学意义及其调控基因。 2.基因转移的概念及基因转移载体应具备的条件。 3.原癌基因的功能及其转化为癌基因的机理。 4.人主要组织相容性抗原在细胞识别中的作用及原理。 5.染色体重排对生物体的影响及其主要类型。 6.噬菌体显示技术原理及其在生物学研究中的意义。 军事医学科学院1996年分子生物学试题（博士） 1.什么是原癌基因？它们怎样被反转录病毒激活？ 2.什么是tumor supperssor gene？举例说明它的调控功能。 3.细胞染色体的异常如何导致癌基因的激活？ 4 解释以下名词：(1) gene knock-out (2) molecular hybridization (3) restriction fragment length polymorphism (4) human genome project 5.G蛋白的结构特点信其功能. 6 .apoptosis的特征与其生理及病理意义,已知它的调控基因有哪些？ 2006 协和生物化学与分子生物学专业博士试题 一、填空（24空24分） 1.---------年，由-------和-------（英文姓）首次提出了DNA的双螺旋模型，其结果发表在----杂志，他们提出的实验依据是-------和--------。 2.蛋白质浓度测定在--------nm, 原因是---------但有时候也在220nm处测量，原因是--------。 3.表皮生长因子受体具有-------酶的活性。 4.嗅觉、视觉、味觉和细胞膜上的------蛋白结合，这种受体具有-------的结构特点，产生的第二信使是。 二、名词解释（4题16分） 1. CpG island 2.CTD of RNA Pol II 3. SiRNA 三、问答题（4题40分） 1. 基因组DNA有时会产生G:T错配，DNA复制时有时会发生A:C错配，他们产
生命科学系本科2010-2011学年第1学期试题分子生物学（A）答案及评分标准 一、选择题，选择一个最佳答案（每小题1分，共15分） 1、1953年Watson和Crick提出（A ） A、多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 B、DNA的复制是半保留的，常常形成亲本——子代双螺旋杂合链 C、三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 D、遗传物质通常是DNA而非RNA 2、基因组是（D ） A、一个生物体内所有基因的分子总量 B、一个二倍体细胞中的染色体数 C、遗传单位 D、生物体的一个特定细胞内所有基因的分子总量 3、下面关于DNA复制的说法正确的是（D ） A、按全保留机制进行 B、按3＇→5＇方向进行 C、需要4种NTP加入 D、需要DNA聚合酶的作用 4、当过量的RNA与限量的DNA杂交时（A ） A、所有的DNA均杂交 B、所有的RNA均杂交 C、50%的DNA杂交 D、50%的RNA杂交 5、以下有关大肠杆菌转录的叙述，哪一个是正确的？（B ） A、-35区和-10区序列间的间隔序列是保守的 B、-35区和-10区序列距离对转录效率非常重要 C、转录起始位点后的序列对于转录效率不重要 D、-10区序列通常正好位于转录起始位点上游10bp处 6、真核生物mRNA转录后加工不包括（A ） A、加CCA—OH B、5＇端“帽子”结构 C、3＇端poly（A）尾巴 D、内含子的剪接 7、翻译后的加工过程不包括（C ） A、N端fMet或Met的切除 B、二硫键的形成 C、3＇末端加poly（A）尾 D、特定氨基酸的修饰
8、有关肽链合成的终止，错误的是（C ） A、释放因子RF具有GTP酶活性 B、真核细胞中只有一个终止因子 C、只要有RF因子存在，蛋白质的合成就会自动终止 D、细菌细胞内存在3种不同的终止因子：RF1、RF2、RF3 9、酵母双杂交体系被用来研究（C ） A、哺乳动物功能基因的表型分析 B、酵母细胞的功能基因 C、蛋白质的相互作用 D、基因的表达调控 10、用于分子生物学和基因工程研究的载体必须具备两个条件（B ） A、含有复制原点，抗性选择基因 B、含有复制原点，合适的酶切位点 C、抗性基因，合适的酶切位点 11、原核生物基因表达调控的意义是（D ） A、调节生长与分化 B、调节发育与分化 C、调节生长、发育与分化 D、调节代谢，适应环境 E、维持细胞特性和调节生长 12、乳糖、色氨酸等小分子物质在基因表达调控中作用的共同特点是（E ） A、与DNA结合影响模板活性 B、与启动子结合 C、与操纵基因结合 D、与RNA聚合酶结合影响其活性 E、与蛋白质结合影响该蛋白质结合DNA 13、Lac阻遏蛋白由（D ）编码 A、Z基因 B、Y基因 C、A基因 D、I基因 14、紫外线照射引起DNA损伤时，细菌DNA修复酶基因表达反应性增强，这种现象称为（A ） A、诱导 B、阻遏 C、正反馈 D、负反馈 15、ppGpp在何种情况下被合成？（A ） A、细菌缺乏氮源时 B、细菌缺乏碳源时 C、细菌在环境温度太高时 D、细菌在环境温度太低时 E、细菌在环境中氨基酸含量过高时
分子生物学复习提纲 一．名词解释 （1）Ori ：原核生物基因质粒的复制起始位点，是四个高度保守的19bp组成的正向重复序列，只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制。 ARS：自主复制序列，是真核生物DNA复制的起点，包括数个复制起始必须的保守区。不同的ARS序列的共同特征是一个被称为A区的11bp的保守序列。（2）Promoter：启动子，与基因表达启动有关的顺式作用元件，是结构基因的重要成分，它是位于转录起始位点5’端上游区大约100~200bp以内的具有独立功能的DNA序列，能活化RNA 聚合酶，使之与模板ＤＮＡ准确地相结合并具有转录起始的特异性。 （3）r-independent termination不依赖r因子的终止，指在不依赖r因子的终止反应中，没有任何其他因子的参与，核心酶也能在某些位点终止转录。（强终止子） （4）SD sequence：ＳＤ序列（核糖体小亚基识别位点），存在于原核生物起始密码ＡＵＧ上游７～１２个核苷酸处的一种４～７个核苷酸的保守片段，它与１６ＳｒＲＮＡ３’端反向互补，所以可以将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。 Kozak sequence：存在于真核生物mRNA的一段序列，核糖体能够识别mRNA 上的这段序列，并把它作为翻译起始位点。 （5）Operator：操纵基因，与一个或者一组结构基因相邻近，并且能够与一些特异的阻遏蛋白相互作用，从而控制邻近的结构基因表达的基因。 Operon：操纵子，是指原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控元件组成的基因表达单元。包括操纵基因、结构基因、启动基因。 （6）Enhancer：增强子，能强化转录起始的序列的为增强子或强化子Silencer：沉默子，可降低基因启动子转录活性的一段DNA顺式元件。与增强子作用相反。 （7）cis-acting element ：顺式作用元件，存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列，包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件，本身不编码任何蛋白质，仅仅提供一个作用位点，与反式作用因子相互作用参与基因表达调控。 trans-acting factor：反式作用因子，是指直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。具有三个功能结构域，即DNA结合域、转录结合域、结合其他结合蛋白的结构域。 （8）Open reading frame (ORF)：开放式阅读框架，是指一组连续的含有三联密码子的能够被翻译成为多肽链的DNA序列。它由起始密码子开始，到终止密码子结束。 （9）Gene：基因，产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。（能转录且具有生物学功能的DNA/RNA的序列。）
1、分子生物学的定义。 从分子水平研究生物大分子的结构与功能从而阐明生命现象本质的科学，主要指遗传信息的传递（复制）、保持（损伤和修复）、基因的表达（转录和翻译）与调控。 2、简述分子生物学的主要研究内容。 a.DNA重组技术（基因工程） （1）可被用于大量生产某些在正常细胞代谢中产量很低的多肽 ; （2）可用于定向改造某些生物的基因组结构 ; （3）可被用来进行基础研究 b.基因的表达调控 在个体生长发育过程中生物遗传信息的表达按一定时序发生变化（时序调节），并随着内外环境的变化而不断加以修正（环境调控）。 c.生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学） 一个生物大分子，无论是核酸、蛋白质或多糖，在发挥生物学功能时，必须具备两个前提： (1)拥有特定的空间结构（三维结构）； (2)发挥生物学功能的过程中必定存在着结构和构象的变化。 结构分子生物学就是研究生物大分子特定的空间结构及结构的运动变化与其生物学功能关系的科学。它包括3个主要研究方向： (1) 结构的测定 (2) 结构运动变化规律的探索 (3) 结构与功能相互关系 d.基因组、功能基因组与生物信息学研究 3、谈谈你对分子生物学未来发展的看法？ (1)分子生物学的发展揭示了生命本质的高度有序性和一致性，是人类认识论上的重大飞跃。生命活动的一致性，决定了二十一世纪的生物学将是真正的系统生物学，是生物学范围内所有学科在分子水平上的统一。 (2)分子生物学是目前自然学科中进展最迅速、最具活力和生气的领域，也是新世纪的带头学科。
(3)分子生物学是由生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学、细胞学、以及信息科学等多学科相互渗透、综合融会而产生并发展起来的，同时也推动这些学科的发展。 (4)分子生物学涉及认识生命的本质，它也就自然广泛的渗透到医学、药学各学科领域中，成为现代医药学重要的基础。 1、DNA双螺旋模型是哪年、由谁提出的?简述其基本内容。 DNA双螺旋模型在1953年由Watson和Crick提出的。 基本内容： (1) 两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴相互缠绕，两条链均为右手双螺旋。 (2) 嘌呤与嘧啶碱位于双螺旋的内侧，3′,5′- 磷酸与核糖在外侧，彼此通过磷酸二酯键相连接，形成DNA分子的骨架。 (3) 双螺旋的平均直径为2nm,两个相邻碱基对之间相距的高度即碱基堆积距离 为0.34nm,两个核苷酸之间的夹角为36。。 (4) 两条核苷酸链依靠彼此碱基之间形成的氢键相连系而结合在一起，A与T相配对形成两个氢键，G与C相配对形成3个氢键。 (5) 碱基在一条链上的排列顺序不受任何限制，但根据碱基互补配对原则，当一条多核苷酸的序列被确定后，即可决定另一条互补链的序列。
2012浙江大学医学分子生物学（乙）回忆版： 一．名词解释（3分*5） 1.The Central Dogma 2.Telomere 3.nuclear localization signal, NLS 4.Protein Motif 5.Splicesome 二．简答题：（5分*9） 1.一个基因有哪些结构组成？ 2.基因、染色体、基因组的关系？ 3.表观遗传机制改变染色质结果的机制？ 4.内含子的生物学意义？ 5.什么是蛋白质泛素化？其生物学意义是什么？ 6.蛋白质纯化的方法？ 7.MicroRNA是什么？它如何发挥作用？ 8.什么是全基因组关联研究（Genome Wide Association Studies,GWAS）？其研究目的是什么？ 9.分子生物学研究为什么需要模式生物？ 三．问答题：（10分*4） 1.人体不同部位的细胞其基因组相同，为什么表达蛋白质的种类和数量不同？ 2.用分子生物学知识，谈谈疾病发生机制？ 3.有一块肿瘤组织及癌旁组织，设计一个实验证明细胞内蛋白质在肿瘤发生发展中的作用？ 4.目前，基因靶点研究已成为新药开发的用药部分，结合目前药物靶点在新药开发中的应用，谈谈你的建议和观点？
2011浙江大学博士入学考试医学分子生物学试题回忆 一、英文名解 1、冈崎片段： 2、反式作用因子： 3、多克隆位点： 4、micro RNA： 5、分子伴侣： 二、简答 1、蛋白质四级结构。 2、真核转录调控点。 3、表观遗传学调控染色质。 4、真核RNA聚合酶类型及作用。 5、基因突变。 6、组学概念及举例。 7、简述兔源多克隆抗体的制备。
分子生学(2)——专业基础 -------------------------------------------------------------------------------- 一、解释下列名词（每题5分，共40分） 1. 蛋白激酶(protein kinase) 2. 增强子(enhancer) 3. SH2结构域(SH2 domain) 4. 聚合酶链反应(PCR) 5. 基因治疗(gene therapy) 6. 变性蛋白质(denatrued protein) 7. 信号肽(signal peptide) 8. cDNA文库 二、问答题(选答四道题,共计60分) 1. 什么是蛋白质的一级、二级、三级、四级结构？它们依靠什么样的链和力建立起这些结构？它们之间的关系是 什么？(15分) 2. 简述重组DNA技术的定义、原理和主要过程，结合你的专业举出一个应用该技术的实例并说明其意义。(15分) 3. 简述癌基因与抑癌基因的定义,各举一例说明其在肿瘤发生中的作用。(15分) 4. 以乳糖操纵子(或称为乳糖操纵元)和色氨酸操纵子为例简述原核细胞基因表达调控原理。(15分) 5. 简述真核细胞基因表达调控的基本环节、主要的调控分子和调控方式。(15分) 注意：请选答四道题，多答者扣去得分最多的答题！！
一九九五年攻读博士研究生入学试题 分子生物学（2） 一、解释（30分） 1.单链构象多态性（SSCP） 2.Alu家庭（Alu family） 3.受体型酪氨酸激酶（RTK） 4.GTP酶激活蛋白（GAP） 5.亮氨酸拉链（Leucine zipper） 6.杂合性丢失（LOH） 二、简要说明怎样进行构建cDNA文库（10分） 三、举例说明细胞癌基因激活有哪几种方式（10分） 四、真核细胞内存在哪些第二信使？它们是怎样产生的？各有何作用？（10分） 五、已知抹香鲸和猪的胰岛素具有相同的氨基酸序列，然而某些抗血清却能将它们区别开来，这岂不与“蛋白质的一级结构决定其高级结构”的理论相矛盾吗？你如何解释？（10分） 六、小测验（30分） 1.圈出下列结构中处于同一肽键平面的原子（5分） 2.已知UMP在体内可循UMP-----dUMP------dTMP途径转变，那么为什么用氚标记的尿苷进行掺入实验时，只有RNA才被标记呢？（5分） 3.将完全用放射性同位素标记的双链DNA置于不含同位素的反应液中进行复制，那么经过两轮复制后DNA分子的放射分布状态如何？（5分） 4.将某种纯蛋白1mg进行氨基酸分析，得19.5ug的异亮氨酸（分子量=131.2），那么该蛋白质的最小分子量是多少？（5分） 5.设有一双链环状DNA，全部长度为100%（如下图），已知内切酶E1的切点在O，E2的切点
分子生物学试题（一） 一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；
军事医学科学院攻读博士学位研究生入学考试试题分子生物学2003年 名词解释： 超二级结构变构调节与变构酶真核生物DNA组装泛素与蛋白酶体 电子传递链与酶复合体端粒与端粒酶带正电的R基氨基酸SAM 问答题 1 稳定蛋白质结构的作用力有那些？球状蛋白质三维结构的特点 2 TPK的两类型，其信号转导途径有何不同？ 3 真核生物基因组的结构特点，转录因子主要有哪些结构域，举到两例说明结构域的功能。 4 以核苷酸序列推测蛋白质氨基酸序列的步骤，并提出一种可以弥补该方法不足的方法。 5 指出SOD与谷胱甘肽过氧化物酶的类型及催化功能。. 军事医学科学院分子生物学试题（博士）2000年 1．如何发现/寻找新基因。 2．什么是蛋白质组？于基因组的区别？及其内容/策略？ 3．名词解释：①基因knock out与knock in、②差异显示、③酵母双杂交、④gene chip 4．DNA结合域/激活域的几种结构motif（画简图）。 5．真核基因在原核表达的难题及对策。 军事医学科学院分子生物学试题（博士）1999年 1．基因治疗的种类及其优缺点？ 2．基因组计划"四张图"进展，主要内容？后基因组计划主要内容？ 3．DNA复制主要方式及所需的酶？ 4．转录生成mRNA主要过程,涉及的调控序列及因子? 5．基因的分子生物学定义? 6．转座及其机理,作用(或后果)? 7．原癌基因是如何被激活的? 8．真核基因在原核表达有那些困难?外源基因在宿主表达需要哪些元件? 9．顺反子比例的基本机理? 10．转录的基本特征? 11．基因治疗外源基因导入方式 军事医学科学院博士入学考试试题生物化学1998年 一、名词解释（5*5分） 1 抗体酶2克隆动物3 PKC 4 线粒体ATP合成酶系5 G蛋白 二问答题（15*5分） 1 酶的竞争与非竞争抑制剂的区别？动力学上如何区别？
分子生物学备选考题 名词解释: 1.功能基因组学 2.分子生物学 3.epigenetics 4.C值矛盾 5.基因簇 6.间隔基因 7.基因芯片 8.基序（Motifs） 9.CpG岛 10.染色体重建 11.Telomerase 12.足迹分析实验 13.RNA editing 14.RNA干涉（RNA interference） 15.反义RNA 16.启动子（Promoter） 17.SD序列(SD sequence) 18.碳末端结构域（carboxyl terminal domain，CTD） 19.single nucleotide polymorphism，SNP 20.切口平移（Nick translation） 21.原位杂交 22.Expressing vector 23.Multiple cloning sites 24.同源重组 25.转座 26.密码的摆动性 27.热休克蛋白嵌套基因 28.基因家族增强子 29.终止子 30.前导肽RNAi 31.分子伴侣 32.魔斑核苷酸 33.同源域 34.引物酶 35.多顺反子mRNA 36.物理图谱、 37.载体（vector） 38.位点特异性重组 39.原癌基因（oncogene） 40.重叠基因、 41.母源影响基因、
42.抑癌基因（anti-oncogene）、 43.回文序列（palindrome sequence）、 44.熔解温度（melting temperature, Tm） 45.DNA的呼吸作用（DNA respiration） 46..增色效应（hyperchromicity）、 47.C0t曲线（C0t curve）、 48.DNA的C值（C value） 49.超螺旋(superhelix) 、 50.拓扑异构酶（topoisomerase）、 51.引发酶(primase) 、 52.引发体(primosome) 53.转录激活(transcriptional activation) 54.dna基因(dna gene)、 55.从头起始(de novo initiation) 、 56.端粒（telomere） 57.酵母人工染色体（yeast artificial chromosome, YAC）、 58.SSB蛋白（single strand binding protein）、 59.复制叉(replication fork)、 60.保留复制(semiconservative replication) 61.滚环式复制(rolling circle replication)、 62.复制原点(replication origin)、 63.切口(nick) 64.居民DNA (resident DNA) 65.有义链(sense strand) 66.反义链(antisense strand) 67.操纵子(operon) 、 68.操纵基因(operator) 69.内含子(内元intron) 70.外显子(外元exon) 、 71.突变子(muton) 、 72.密码子（codon）、、 73.同义密码（synonymous codons）、 74.GC盒(GC box) 75.增强子(enhancer) 76.沉默子(silencer) 77.终止子(terminator) 78.弱化子（衰减子）(attenuator) 79.同位酶(isoschizomers) 、 80.同尾酶(isocandamers) 81.阻抑蛋白（阻遏蛋白）(repressor) 82.诱导物（inducer）、 83.CTD尾（carboxyl-terminal domain ） 84.载体（vector）、 85.转化体(transformant)
绪论 思考题：（P9） 1.从广义和狭义上写出分子生物学的定义？ 广义上讲的分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究，以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。 狭义的概念，即将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。其中也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2、现代分子生物学研究的主要内容有哪几个方面？什么是反向生物学？什么是 后基因组时代？ 研究内容： DNA的复制、转录和翻译；基因表达调控的研究；DNA重组技术和结构分子生物学。 反向生物学：是指利用重组DNA技术和离体定向诱变的方法研究已知结构的基因相应的功能，在体外使基因突变，再导入体内，检测突变的遗传效应，即以表型来探索基因结构。 后基因组时代：研究细胞全部基因的表达图式和全部蛋白质图式，人类基因组研究由结构向功能转移。 3、写出三个分子生物写学展的主要大事件（年代、发明者、简要内容） 1953年Watson和Click发表了?脱氧核糖核苷酸的结构?的著名论文，提出了DNA的双螺旋结构模型。 1972~1973年，重组DNA时代的到来。H.Boyer和P.Berg等发展了重组DNA 技术，并完成了第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元。 1990~2003年美、日、英、法、俄、中六国完成人类基因组计划。解读人类遗传密码。 4、21世纪分子生物学的发展趋势是怎样的？ 随着基因组计划的完成，人类已经掌握了模式生物的所有遗传密码。又迎来了后基因组时代，人类基因组的研究重点由结构向功能转移。相关学说理论相应诞生，如功能基因组学、蛋白质组学和生物信息学。生命科学又进入了一个全新的时代。 第四章 思考题：（P130） 1、基因的概念如何？基因的研究分为几个发展阶段？ 概念：基因是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位以及控制形状的功能单位。 发展阶段：○120世纪50年代以前，主要从细胞的染色体水平上进行研究，属于基因的染色体遗传学阶段。 ○220世纪50年代以后，主要从DNA大分子水平上进行研究，属于分
2004年川大攻读博士学位研究生分子生物学入学考试试题 一名词解释，每题3分，共30分 1.Motif基序：相邻的几个二级结构相互作用形成有规则的组合体称 为二级结构，是特殊的序列或结构的基本组成单元，又称为基序或摸体。 2.同源蛋白质：这些执行同一功能的蛋白质在进化过程中可能来自 同一祖先，称为同源蛋白质。 3.LCAT： 4.PKC:由1977年日本学者首次发现的一种依赖于磷脂和ca的蛋白 激酶，又称为C激酶，是丝氨酸、苏氨酸激酶，广泛分布于人和动物组织中，与肿瘤的形成有关。还参与了细胞信息传递如激素分泌，神经递质传导、细胞分泌和细胞增殖等。 5.ALU家族:是短的重复DNA序列，能被内切酶ALU识别和切割。人 单倍体基因组ALU家族超过106个拷贝，约占10%的基因组DNA。 各成员结构和长度大体相近，长约300bp,富含CG，有两个串联重复单体，在第170个碱基附近均有ALU位点（AGCT），各单体3端由polyA尾；串联重复两侧翼有7-10个bp短重复片段；左半130bp含两个RNAP3启动子；右半130bp单体结构相同或类似，但无启动子。ALU元件的复制可能对灵长类种属的形成有关。 6.PIC： 7.SSCP：单链构象多态性分析，单个或多个碱基突变可能影响单链 核酸分子的构象，在非变性聚丙烯酰胺电泳时，不同构象的核酸
分子常表现出不同的迁移率，电泳新生条带的出现反映了突变分子的存在。 8.腺病毒载体：该病毒在体外稳定，易于制备与纯化；也属大容量 载体；可插入6-8KB的外源基因；宿主细胞广泛，可感染分裂与非分裂细胞，此载体尤其适用于神经退行性疾病基因治疗；重组病毒在辅助细胞中可获高滴度的增值，外源基因表达高于RV载体10-100倍；该病毒不整合至宿主细胞染色质，无诱发癌变之嫌。 9.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳：变性的page主要用于分离和纯化单链 DNA片段，这种凝胶在核苷酸碱基配对抑制剂，如尿素、甲酰胺和SDS存在的情况下聚合而成。PAGE既有分子筛效应，又有电荷效应，因此可根据电泳样品的分子大小，电荷多少及形状的差别分离核算片段。它特别适用于寡聚核苷酸分离和DNA序列测定。 聚丙烯胺酰胺凝胶是有单体丙烯酰胺在催化剂四甲基乙二胺和过硫酸铵的作用下，发生聚合反应。形成含有亲水性酰胺基侧链的脂肪簇长链，凝胶网孔的大小取决于聚合链的长度及交联度。10.mRNA差异显示:DD是目前筛选差异表达基因的最有效方法之一， 已成为研究肿瘤和疾病相关基因的重要手段。抽提细胞内mRNA，反转录成cDNA，然后经过随机PCR扩增，通过测序凝胶上电泳条带的比较筛选出不同表达的基因。回收这些DNA片段，经过增后作为探针，在cDNA或基因组DNA库中扫筛选到相关基因。 二简单题每题10分，共40分 1.简述胆固醇逆向转运途径及其生理意义
分子生物学试题 一、名词解释 1、基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。 2、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。 3、端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。 4、操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA 为多顺反子。 5、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。 6、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子。 7、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。 8、增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列。它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。 9、基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。 10、信息分子：调节细胞生命活动的化学物质。其中由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质称为细胞间信息分子；而在细胞内传递信息调控信号的化学物质称为细胞内信息分子。11、受体：是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而发生生物学效应的的特殊蛋白质。 12、分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 13、蛋白激酶：是指能够将磷酸集团从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的一大类酶。 14、蛋白磷酸酶：是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分子，与蛋白激酶相对应存在，共同构成了磷酸化和去磷酸化这一重要的蛋白质活性的开关系统。 15、基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。 16、载体：能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA 分子。 17、转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。 18、感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。 19、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。 20、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。 21、 DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键则不受影响。 22、 DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形成DNA 双螺旋结构。 23、退火：指将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA摸板互补区域结合形成杂交
一、名词解释 1、广义分子生物学：在分子水平上研究生命本质的科学，其研究对象是生物大分子的结构和功能。2 2、狭义分子生物学：即核酸（基因）的分子生物学，研究基因的结构和功能、复制、转录、翻译、表达调控、重组、修复等过程，以及其中涉及到与过程相关的蛋白质和酶的结构与功能 3、基因：遗传信息的基本单位。编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息的基本单位，是染色体或基因组的一段DNA序列(对以RNA作为遗传信息载体的RNA病毒而言则是RNA序列)。 4、基因：基因是含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，包含产生一条多肽链或功能RNA 所必需的全部核苷酸序列。 5、功能基因组学：是依附于对DNA序列的了解，应用基因组学的知识和工具去了解影响发育和整个生物体的特定序列表达谱。 6、蛋白质组学：是以蛋白质组为研究对象，研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。 7、生物信息学：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和转输 8、蛋白质组：指的是由一个基因组表达的全部蛋白质 9、功能蛋白质组学：是指研究在特定时间、特定环境和实验条件下细胞内表达的全部蛋白质。 10、单细胞蛋白：也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。 11、基因组：指生物体或细胞一套完整单倍体的遗传物质总和。 12、C值：指生物单倍体基因组的全部DNA的含量，单位以pg或Mb表示。 13、C值矛盾：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 14、重叠基因：共有同一段DNA序列的两个或多个基因。 15、基因重叠：同一段核酸序列参与了不同基因编码的现象。 16、单拷贝序列：单拷贝顺序在单倍体基因组中只出现一次，因而复性速度很慢。单拷贝顺序中储存了巨大的遗传信息，编码各种不同功能的蛋白质。 17、低度重复序列：低度重复序列是指在基因组中含有2～10个拷贝的序列 18、中度重复序列：中度重复序列大致指在真核基因组中重复数十至数万（<105）次的重复顺序。其复性速度快于单拷贝顺序，但慢于高度重复顺序。 19、高度重复序列：基因组中有数千个到几百万个拷贝的DNA序列。这些重复序列的长度为6~200碱基对。 20、基因家族：真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组基因，可能由某一共同祖先基因经重复和突变产生。 21、基因簇：基因家族的各成员紧密成簇排列成大段的串联重复单位，定位于染色体的特殊区域。 22、超基因家族：由基因家族和单基因组成的大基因家族，各成员序列同源性低，但编码的产物功能相似。如免疫球蛋白家族。 23、假基因：一种类似于基因序列，其核苷酸序列同其相应的正常功能基因基本相同、但却不能合成功能蛋白的失活基因。 24、复制：是指以原来DNA（母链）为模板合成新DNA（子链）的过程。或生物体以DNA/RNA
2009年山东大学考博–分子生物学试题 by admin on 2010年01月25日· 2 comments in 专业真题 一、名词解释： 1、顺式作用元件； 2、模序与结构域； 3、岗崎片段； 4、Southern Blotting； 5、遗传密码的简并性和摇摆性 二、简答： 1、基因治疗中常用病毒载体类型及特点？ 2、IP3-PKB介导的受体信号转导途径？ 3、蛋白质（酶）活性的快速调节方法有哪些？举三例说明磷酸/脱磷酸化是酶活性快速调节的重要方式。 4、细胞死亡受体蛋白的分类，组成成员的作用？ 5、细胞周期Cdk的调控作用。 6、原核生物DNA复制后随链合成中参与的酶和蛋白质及作用？ 7、举出5种类型RNA并简述其作用。 三、论述： 1、原核生物和真核生物表达调控的层次有哪些？调控机制。 2、原核生物和真核生物DNA复制的起始、延长和终止有哪些不同点？复制过程参与的因子及功能？ 08中科院分子生物学试题 1、表观遗传，及调控方式，还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功能？ 2、蛋白质与DNA结合的方法和比较，EMSA和DNase1足迹法？ 3、密码子改造研究新蛋白药物，原理，关键和方法 4、设计研究未知基因（预测两个跨膜区域）功能的实验方案（不低于4个） 5、质粒改造原则 6、诱导全能干细胞的方法，实验方案等。（去年的nature上发表的） 个人认为除了第二和五题之外，其它的题目都属于一骑绝尘的，要么会，要么不会，想蒙是绝对没门的。 这门专业课能及格，我想都不错了，特别是1，3，6题。 不知道大家做的如何，反正第一题，我是意思都没看懂，不知道连续的3问是不是指1个东西。还是最后1问是单独的，与前面的2问无关
华中科技大学同济医学院考博分子生物学（专业基础）简答题历年试题汇总 1.顺式作用元件有哪些，并加以解释。2015，2012考 2.人类基因组计划的4张图，各自的意义是什么？ 3.癌基因激活的主要途径？ 问答：1.什么是基因治疗，基因治疗的主要策略是什么？基因治疗的技术及主要内容，2015，2014，2013考 问答2.蛋白质组学的主要技术有哪些并解释？2015，2012考 2014简问答题 1.PCR原理，步骤，写出6种PCR衍生技术 2013，2014，2009考 2.何谓基因克隆？简述其基本过程。09年 3.重组DNA技术，问答题20分，14年考 4.举例说明基因表达的调控机制。题目太大，原核调控，真核调控？13年 问答5.人类基因定位的常用方法及原理。12年，09年考 简问6.简述反式作用因子的结构特点及作用方式 09年 简问7.简述逆转录病毒的结构特点 09年考 问答：真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？根据他们的结构特征可以分为哪些类型？它们和DNA相互识别的原理是什么？2013年考 问答：试述大肠杆菌中表达蛋白质产物的步骤。 2013年考 试比较克隆载体、原核载体和真核载体的特点 2012年考 2016年真题 英译中名词解释（20分） 反义RNA；操纵子；限制性核酸内切酶；选择性剪切；抑癌基因；基因诊断； RNA干扰；质粒； gene maping；管家基因 简答题。 真核基因组的结构和功能特点20分 分15人类基因组的结构特征． 原癌基因的特点15分 蛋白质组研究常用技术有那些，简介其作用。15分 当前基因治疗技术面临的技术问题有哪些？15分 以下为2001-2004年试题及网上答案 一、若要获得IL-2的基因工程产品，你应该怎么做？ 基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作，又叫分子克隆，DNA重组技术。 1. 在GENBANK中检索IL-2的mRNA序列；在genecard里检索IL-2高表达的组织；同时检索一下有关文献； 2. 如果考虑使用原核表达系统（通常是大肠杆菌表达系统），将IL-2的成熟肽的基因序列找出（呵呵，我没有检索，不清楚是否有信号肽）进行分析；