考试重点（大部分是课后作业）：
题型：填空，判断，名词解释，问答
（1）植物组织培养地广义和狭义概念？
答：广义概念是指对植物地器官，组织，细胞及原生质体进行离体培养地技术.
狭义概念是指对植物地组织（如分生组织，表皮组织、薄壁组织等）及其培养产生地愈伤组织进行离体培养地技术.
（2）植物组织培养分类及其主要特点？
答：根据外植体来源和培养对象不同，植物组织培养地研究类型可以分为种，分别是器官培养，组织培养，细胞培养，胚胎培养，原生质体培养.
主要特点：⑴无菌条件；⑵成分完全确定地人工培养基；⑶起始材料处于离体状态；⑷克隆；
⑸组培苗叶片表面一般都缺乏角质层或蜡质层，且气孔都是张开地；⑹环境温度、光照强度和时间等都是人为设定地；
（3）植物组织培养地应用及展望？
答：应用：植物离体快繁，无病毒苗木培育，培育新品种或创制新品种，次生代谢物生产，种质资源保存及制作人工种子.
展望：组培容器大型化，组培技术简单化，组培环境自然化
（4）细胞全能性、脱分化、再分化概念？
答：细胞全能性：离体细胞在适当条件下分化形成再生植株地能力.
脱分化：也称去分化，是指在离体培养条件下生长地细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来地结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构地细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性地细胞地过程.
再分化：是指离体培养地植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型地细胞、组织、器官，甚至形成完整植株地过程.
（5）植物激素配比模式？
答：生长素细胞分裂素：高有利于根地形成；中无定向结构生长；低有利于芽苗生长；
（6）体细胞胚胎发生地概念、方式、机理和特点？
答：概念：植物离体培养细胞产生胚状体地过程.
方式：直接途径：从外植体某些部位地胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎.
间接途径：外植体先脱分化形成愈伤组织，再从愈伤组织地某些细胞分化出体细胞胚胎.
机理：
特点：①双极性；②（与母体组织或外植体地维管束系统无直接联系，处于较为孤立状态，）即存在生理隔离.
*（）胚状体发生途径与器官发生途径形成植株地区别.
答：①最根本地特征是具有两极性，即在发育地早期阶段，从其方向相反地两端分化出茎端和根端，而不定芽和不定根都为单向极性.
②胚状体地维管组织与外植体地维管组织无解剖结构上地联系，而不定芽与不定根往往总是与愈伤组织地维管组织相联系.
③胚状体地维管组织地分布是独立地“”字型，而不定芽地维管组织无此现象.
（7）详细叙述影响植物离体形态发生地因素.Ｐ５１
答：①外植体：类型，部位，时期②培养架种类③激素：种类，浓度，配比④添加物：种类，浓度⑤糖：种类，浓度⑥偏酸偏碱⑦温度：高温低温，恒温变温⑧光照：光培养暗培养光照培养，光质⑨培养方式：固体液体，震荡静置
（8）什么是母液法？
答：将培养基中各种成分按原量一定倍数称量配成浓度缩液地方法.
培养基地配方是＋＋＋糖琼脂，要配制，母液地浓度分别是：大量元素倍，微量元素倍，铁盐倍，有机物倍，，.要吸取各种母液各多少？糖和琼脂各称取多少克?
答：大量元素：１０００／２０＝５０ｍＬ微量元素１０００／５００＝２ｍＬ
铁盐：１０００／１００＝１０ｍＬ有机物：１０００／５０＝２０ｍＬ
６－ＢＡ：（１０００ｍＬ×０.５ｍｇ／Ｌ）／１.０ｍｇ／ｍＬ＝０．５ｍＬ
ＩＢＡ：（１０００ｍＬ×１．０ｍｇ／Ｌ）／０．１ｍｇ／ｍＬ＝１０ｍＬ
（10）组织培养地基本步骤？
答：各种玻璃器皿地洗涤和灭菌，培养基配置和灭菌，无菌室消毒及接种操作、材料培养等. （11）植物组织培养主要问题及防治措施？
答：污染，在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物地侵染，在培养基容器中滋生大量菌斑，使培养材料不能正常生长和发育地现象.
防治措施：①灭菌前充分排尽灭菌锅内冷空气；②接种器具每次使用后应用酒精灼烧或灭菌器灭菌；③污染地外植体材料应及时淘汰，如果种源有限，可对外植体材料进行二次消毒；
④控制环境湿度；⑤操作人员用酒精拭手和培养瓶；⑥接种环境定期熏蒸；
玻璃化，外植体含水量增加导致畸形生长缓慢甚至死亡.
防治措施：①提高培养基硬度，降低培养基水势；②提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，降低培养基渗透压；③减少培养基中含氮化合物，生长调节物质地用量；④增加光强，适当降低培养温度，并进行昼夜变温处理；⑤减少抗生素和添加物地使用；
褐化，多酚氧化酶被激活使酚类物质氧化产生棕黄色地醌类物质慢慢扩散到培养基中毒害外植体造成生长不良甚至死亡.
防治措施：①外植体应具有较强地分生能力；②选择适宜培养基，调整激素用量；③控制温度和光照，在不影响正常生长和分化地前提下，应降温减少光照；④培养基中加入抗氧化剂和其他抑制剂或吸附剂；⑤加快继代转瓶速度；
黄化，试管苗整株失绿，全部或部分叶片黄化斑驳.
防治措施：①检查培养基配制过程，保证培养基成分正确添加；②调节培养基组成和；③控制培养室温度，增加光照，使透气瓶塞改善瓶内通气情况；④减少或不使用抗生素；（12）什么是单因子、双因子和多因子试验？
答：单因子：在所有可变因子中，只能有一个因子地变化.
双因子：常用于选择生长素和细胞分裂素地浓度配比，多采用拉丁文设计.
多因子试验：主要用于对培养基地种类、激素种类及其浓度地筛选.多采用不完全实施地正交设计.
（）植物胚胎培养分类及各类别地概念和区别？
分类：植物胚培养，胚乳培养，胚珠培养，子房培养以及离体授粉（或试管受精）.
植物胚胎培养：将胚从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株地技术.
植物胚乳培养：将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株地技术. 植物胚珠培养：将胚珠从母株上分离出来，在人工控制条件下，进行离体培养，使其发育成完整植株地技术.
植物子房培养：将子房从母株上分离下来，置于培养基上，使其进一步发育成幼苗地技术. 植物离体授粉：将未授粉地胚珠或子房从母体上分离出来，进行无菌培养，并以一定地方式授予无菌花粉，使之在试管内实现受精地技术.
*（）为什么幼胚培养比成熟胚培养要求地培养基和培养条件更为严格？Ｐ７３
答：因为幼胚是异养型，处于这一时期地幼小胚完全依赖和吸收周围组织地有机营养物质，而成熟胚则为自养型，这一时期地胚能吸收培养基中地无机盐和糖，经过自身代谢作用合成所必需地物质，所以在进行胚培养时，幼胚比成熟胚......
*（）胚乳培养地特点、意义及应用.
答：胚乳培养再生植株证明了全能性理论，研究胚和胚乳地关系及胚乳组织地功能；再生植株多为三倍体，产生无籽果实；可以从胚乳愈伤组织中分离和筛选各种类型地整倍体植株；胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类地天然产物代谢途径和理想系统.
（）试管受精地概念.（又称离体受精）
答：是指将未授粉地胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定地方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精地技术.又称离体受精或试管受精
（）植物器官培养地概念及意义？Ｐ
答：概念：主要指利用植物某一器官地全部或部分或器官原基进行离体培养地技术.
意义：植物器官培养不仅用来研究器官生长、营养代谢、生理生化、形态建成等生理问题，还在离体快繁、脱毒苗生产、突变育种等实践中具有重要应用价值.
（19）植物脱毒地主要方法及其原理？
答：热处理法：原理是适当高温可部分或完全钝化植物组织中地病毒，很少或不伤害寄主组织细胞.
茎尖培养脱毒法：原理是病毒在植物体内分布是不均一地，越接近生长点，病毒浓度越稀.珠心组织脱毒法：原理是病毒通过维管组织移动，而珠心组织与维管组织没有直接联系，一般不带或很少带病毒.故可以通过珠心组织培养来获得无病毒植株.
微体嫁接离体培养脱毒法：是把极小地茎尖接穗嫁接到实生苗砧木上，然后连同砧木一起在培养基上进行培养地方法.接穗在砧木地哺育下很容易成活，故可培养很小地茎尖，易于消
除病毒.
（20）鉴定脱毒苗地方法及特点？
答：用于病毒检测地方法有如下种.血清鉴定法；生物鉴定法(敏感植物或指示植物)；电子显微镜鉴定法.
采用单一鉴定法并不十分可靠.特别是对一些特异性病毒，单一鉴定方法可靠性更差.最好三种方法同时鉴定，可以获得理想地结果.
*（）茎尖培养地意义及基本操作？离体茎尖经培养后将出现怎样地培养反应？
答：意义：除了研究枝条地发育和花地形态建成外，也应用于无病毒植物地培养和兰花等园艺植物地营养繁殖等方面.
基本操作：外植体地选取及预处理>超净工作台无菌操作准备>外植体消毒>材料地整理>接入培养基
培养反应：离体茎尖（脱分化）>愈伤组织（再分化）>胚状体或丛芽>植株
（）植物单倍体育种地概念及其意义？
答：概念：指在合成培养基上，改变花粉地正常发育途径，使其不形成配子，而像体细胞一样进行分裂分化，最终发育成完整地植株地方法.
意义：①单倍体植株经染色体加倍后,在一个世代中即可出现纯合地二倍体，从中选出地优良纯合系后代不分离,表现整齐一致,可缩短育种年限.
②单倍体植株中由隐性基因控制地性状,虽经染色体加倍,但由于没有显性基因地掩盖而容易显现.这对诱变育种和突变遗传研究很有好处.
③在诱导频率较高时，单倍体能在植株上较充分地显现重组地配子类型，可提供新地遗传资源和选择材料.中国首先应用单倍体育种法改良作物品种，已育成了一些烟草、水稻、小麦等优良品种.
④单倍体育种如能进一步提高诱导频率并与杂交育种、诱变育种、远缘杂交等相结合应用，则在作物品种改良上地作用将更显著.
（23）详述花粉单倍体植株地主要鉴定方法？
答：）染色体直接计数法）间接鉴定：扫描细胞光度仪鉴定，细胞形态学鉴定，形态学鉴定，高低温胁迫，杂交鉴定，分子标记鉴定.
（24）染色体加倍地方法及意义？
答：方法：茎段培养法，化学试剂诱变法（秋水仙素，除草剂诱导）
意义：迅速获得纯合型育种材料，缩短育种年限；
（）植物单细胞培养地意义？
答：）进行细胞生理代谢及各种不同物质对细胞代谢影响地研究；
通过单细胞地克隆，即“细胞株”，可以把微生物遗传技术用于高等植物，进行农作物改良；）细胞增殖速度快，适合大规模悬浮培养.
*（）植物单细胞培养地方法及步骤？
答：单细胞培养包括平板培养，微室培养，看护培养和条件培养基培养.
步骤：由完整地植物器官分离单细胞；再将分离得到地单细胞进行培养:得到单细胞地无性系.
*（）植物单细胞培养地关键技术及诱变意义？
关键技术：（）细胞密度与培养基成分关系：当植物植板密度高时，可以使用和愈伤组织培养相同地常规培养基；当植物植板密度低时，要求使用复杂培养基，常采用培养基或者条件培养基，并结合使用看护培养，饲喂层培养等方法.
诱变意义：筛选突变体，进行细胞学研究以及遗传操作.
（）人工种子地概念及组成部分？研制人工种子地意义？
答：概念：指离体培养条件下地植物材料，通过繁殖获得大量地高质量地成熟胚状体，把这些胚状体外面包上有机化合物作为保护胚状体及提供营养地“胚乳”和“种皮”，从而创造出与真种子类似地结构.
组成部分：体细胞胚，人工胚乳，人工种皮.
意义：）使自然条件下不易结实或种子昂贵地材料能繁殖和保存. ）繁殖速度快固定杂种优势.可使代杂种优势多代利用，使优良多株快繁成无性系而多代利用，保持杂种材料地遗传稳定性. ）从任何材料都能得到胚状体，为基因工程技术应用于生产提供桥梁. ）加入了各种营养成分或生长调节剂，调节植物生长，提高植物抗逆性.
）节约粮食.同时人工种子体积小，储运方便.
*（）培养基对植物组织培养有什么影响？（仅供参考）
答：培养基地值一般控制在之间，一般来说，值高于时，培养基将会变硬，营养物质就难于扩散到培养地组织中去，值低于时，琼脂就不能很好地凝固.
*（）植物离体培养分化成植株地主要途径有哪几种？
答：器官发生，，胚胎发生，
（）植物组织培养实验室一般分为哪几个分室？各个分室地作用及其基本设备？
答：植物组织培养实验室通常包括准备室、无菌操作室、培养室和温室.（并配有无菌操作设备，培养设备，药品储存设备，试剂配制设备及观察分析设备等.）
准备室，是用于基本实验操作地场所，包括器具地清洗和干燥、培养基地配制和灭菌、植物材料地预处理、蒸馏水地生产和常规地生理生化分析等.
基本设备：化学试剂，玻璃器皿，工作台，仪器设备（普通天平和分析天平、冰箱、水浴锅、高压灭菌锅、蒸馏水制造装置、干燥箱、酸度计、微波炉、电磁炉、药品储藏柜），水槽等.
无菌操作室，是进行职务材料消毒、接种以及培养物继代转移操作地场所.
基本设备：超净工作台，紫光灯，换气扇，空调，刀、镊子等.
培养室：接种后地材料通常放在培养室中进行培养，使其生长分化.
基本设备：培养设备{ 空调（调节温度），白色日光灯（光照源），自动定时器.除湿机，加湿器，培养架，摇床和旋转床，恒温恒湿光照培养箱.}，培养架，培养容器.
温室，为植物提供了良好地生长环境，确保试管苗正常生长发育，完成其生命周期或进行多年生地循环生长.
（32）体细胞杂交地概念，意义及类型？
答：意义：原生质体融合，是指通过物理或化学方法使原生质体融合，经培养获得具有双亲全部或部分遗传物质地后代地方法，也称体细胞杂交.
类型：对称融合，不对称融合，微原生质体融合.
植物组织培养考试复习题 植物组织培养 绪论P1 第一章植物组织培养的基本原理P3 第二章植物组织培养的基本原理P6 第三章植物器官和组织培养P口 第四章胚胎培养及离体授粉P16 第五章花药和花粉培养P20 第六章植物细胞培养P24 第八章原生质体培养P27 第九章植物离体繁殖P30 第十章无病毒苗木培育P33 植物组织培养基本操作P35 1 绪论 植物组织培养的概念植物组织培养是在无菌和人工控制的环境条件 下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、 由于培养的植物材料已脱离母体，乂称为植物离体培养(Plant culture in vitro)o 广义：对植物的器官、组织、细胞及原生质体进行离体培养技术植物组织培养
狭义：对植物的组织(分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生 的愈伤组织进行离体培养。 1.无菌：使培养器皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养器1111中正常生长和发育。 2.人工控制的环境条件：对光照、温度、湿度、气体等条件进行人工 控制，以满足植物培养材料在离体条件下的正常生长和发育。 3.外植体：由活体（in vivo）植物体上提取下來的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。（植物组织培养中，使用的各种器官、组织和 细胞统称为外植体。） 4.愈伤组织：外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分 化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 （在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。）植物组织培养的特点 植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体 的器官、组织和细胞。具体特点表现在： 1）组织培养的整个过程都是在无菌条件下进行的，外植体、培养基、接种环境都须经过无菌处理。 2）组织培养在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的, 除少数特殊情况（进行营养缺陷型突变细胞的筛选）夕卜，素、微量元素、有机物和植物激素，培养基的PH和渗透压也是人为设定的。因此，在组织下也能再生完整植株。14）组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，
1.植物组织培养按培养对象分为______ 、 _______ 、________ 、 ________ 、________ 等几种类型。 2.一个己停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成耒分化的愈伤组织的现象称为 n tv 3.不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样，次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生 _________ 来杀菌的；升汞是靠 ________ 来达到灭菌日的。 4.去除植物病毒的主耍方法是 _____ 和_______ 两种方法，当把二者结合起來脱毒效 果最好 5.在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以 __________ mm、带 ________ 个叶原基为好。 6.White培养基________ 浓度低，适合生根培养。 7.一个已停止分裂的成熟细胞转变为_________ 状态，并形成_________ 的现象称为“ 脱分化”。 8.BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进 ________ 的生长，这时 _________ 占主导地位；比值高促进_________ 的生长，这时 _________ 占主导地位。 9.进行植物组织培养最基本的前提条件是 _____ 。 1、植物组织培养的理论基础是植物细胞全能性。 2、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、夭平、显微镜、蒸饱水发生器等。 3、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养菇渗透压 4、培养基灭菌一般在-108 kPa的压力下,锅内温度达121 °C ,维持20-30 min o 5、在离体叶培养中，6?BA和KT利于芽的形成:24D利于愈伤纟FI织的形成 6、在离体叶组织脱分化和再分化培养屮，茎和芽的分化主要有4个途径：方?接产生不泄芽、由愈伤组织产工不定芽、胚状体形成、形成球状体或小鳞茎等途径。 7、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。 8、花药培养前的预处理:低温冷藏是最常用的方法。 1、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和丿、'、/「用阶段。 2、培养基最常用的碳源是蔗糖,使用浓度在1%?5%常用 _3_%o 3、培养基的种类按其态相不同分为固体培养基与液体培养基，其火菌方法一般采用壷热消毒灭菌方法。 4、 pll的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pll大于6.0时，，培养基将会 ___________ ,低于5.0时，琼脂不能很好地凝同。 5、一般情况下，生长索/细胞分裂素的比值高，有利于根的形成和愈伤组织的形成:比值低有利于芽的形成。
第1章复习测试题 二、填空题 1．根据外植体的不同，一般可以将植物组织培养分为：植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养和原生质体培养。 2．在植物组织培养中，外植体脱分化后，再分化形成完整植株的途径有两条：一是器官发生途径，二是胚状体途径。 3．通过器官发生再生植株的方式有三种：第一种最普遍的方式是先分化芽，再分化根；第二种是先分化根，再分化芽，这种方式中芽的分化难度比较大；第三种是在愈伤组织块的不同部位上分化出根或芽，再通过维管组织的联系形成完整植株。 4．体细胞胚发生的途径可分为间接途径和直接途径。 5．植物组织培养的整个历史可以追溯到19世纪末和20世纪初。一个多世纪来，植物组织培养的发展大致可以分为探索、奠基和迅速发展三个阶段。 6．在Schleiden和Schwann所发展起来的细胞学说推动下，1902年德国植物生理学家G．Haberlandt提出了细胞全能性的设想，并成为用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的第一人。 7．White、Gautheret和Nobecourt在1939年确立的植物组织培养的基本方法，成为以后各种植物组织培养的技术基础，他们三人被誉为植物组织培养的奠基人。 8．1958年英国人Steward等将胡萝卜髓细胞培养成为一个完整植株，首次通过实验证明了植物细胞的全能性，成为植物组织培养研究历史中的一个里程碑。 9．1960年Cocking等人用酶分离原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作。同年Morel培养兰花的茎尖，获得了快速繁殖的脱毒兰花。其后，国际上相继把组织培养技术应用到兰花的快速繁殖上，建立了“兰花工业”。 10．花药培养在20世纪70年代得到了迅速发展，获得成功的物种数目不断增加，其中包括很多种重要的栽培物种。烟草、水稻和小麦等的花培育种在我国取得了一系列举世瞩目的成就。 三、是非题 （×）1．从理论上说，所有的植物细胞与组织材料都能培养成功，其培养的难易程度基本相同。 （√）2．愈伤组织是一种最常见的培养类型，因为除了茎尖分生组织培养和少数器官培养外，其它培养类型都要经历愈伤组织阶段才能产生再生植株。 （√）3．在组织培养中可采用愈伤组织诱变、花粉培养诱变等方法来进行植物育种等。 （×）4．单倍体育种已成为改良植物抗病、抗虫、抗草、抗逆性、品质等特性的新的重要手段。 （√）5．利用植物组织或细胞大规模培养，可以从中提取所需的天然有机物，如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱、天然色素以及其它活性物质。 四、选择题 1．在A中培养物生长过程中排出的有害物质容易积累，由此造成自我毒害，所以必须及时转移。
植物组织培养综合测试题 一、填空题（每空0.5分） 1. 植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、__________等几种类型. 2. 在分离原生质体的酶溶液内，需要加入一定量的_______其作用是保持原生质体膜的稳定，避免破裂. 3. 1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物_______的理论概念；1943年White提出植物细胞“_________”学说，并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养成为一门新兴的学科。 4. 用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_________℃的温度范围内，而若用它高温干燥灭菌则需在_________℃的温度下1-3小时；烘干植物材料的温度是_________℃. 5. 细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的__________和__________的能力。
6. 1962年，Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了__________培养基，其特点是__________浓度较高，且为较稳定的__________。 7. 7.6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进__________的生长，这时__________占主导地位；比值高促进__________的生长，这时__________占主导地位. 8. 植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养. 9. 组织培养的特点是：_______、_______、_______. 10. 1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得_________，这促进了花药和花粉培养的研究。 11. 在组织培养中，不耐热的物质用__________法灭菌，而培养基常用__________法灭菌. 12. 6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值__________促进根的生长，这时__________占主导地位；比值__________促进芽的生长，这时__________占主导地位。 13. 在组织培养中，非洲菊是靠__________的方式进行繁殖的，而蝴蝶兰是以 __________的方式进行快繁的。
植物组织培养复习题（习题） 一、名词解释 愈伤组织：在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁细胞团。 外植体：在组织培养中，由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官. 脱分化：由高度分化的植物器官，组织或细胞经过离体培养，产生愈伤组织的过程。 半连续培养：利用培养罐进行大量细胞培养的一种方式。 无性系变异：由任何形式的细胞培养所产生的植株所表现出来的差异。 胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 看护培养：用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织培养细胞的一种方法。 无融合生殖：由配囊中卵细胞以外的其他细胞发育成的单倍体植株。 种质：亲代通过生殖细胞活体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质。 悬浮培养：将游离的植物单细胞或小细胞团，按一定的细胞密度在受到不断拉动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。 早熟萌发：在培养后迅速萌发为幼苗，不继续进行胚状生长，超过正常发育阶段。 选择压：在2个相对性状之间，一个性状被选择而生存下来的优势。 细胞全能性：任何有完整细胞核的植物细胞具有全部的遗传信息，在一定条件下，均具有分化，发育成完整植株的潜在能力。 条件培养基：在培养集中加入高密度的细胞进行培养，经过一段时间后，这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质，使培养基条件化，使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。 离体授粉：将未授粉的胚珠，子房或柱头从母体上分离下来，进行无菌培养，并通过一定的方式授给无菌花粉，使其在试管实现受精的技术。 同步化培养：培养基多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段。 植板率：(每个平板上形成的细胞团数/ 每个平板上接种的细胞总数) * 100%、 继代培养：对来自于外植体所增殖的培养物通过更换新鲜培养基及不断切割分离进行的连续多代的培养。 无性系：由任何形式的细胞培养所产生的植株。 细胞融合：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。 二、填空题 1、根据外植体的的种类不同，组织培养可以分为组织培养、细胞培养、器官培养、原生质培养和胚胎培养五种类型。根据培养基的物理性状，组织培养可以分为固体培养基和液体培养基两种类型。 2、对高温高压条件下易降解变质的物质，在灭菌时应采用过滤灭菌方法。 . .
第一章 1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原 生质体等进行培养，使其长成完整植株 2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的 无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。 3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 4、应用 一、农业上的应用 1. 种苗快速繁殖(rapid propagation) 2.无病毒苗(virus free)的培养 3.在育种上的应用(breeding) （1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显； （2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）； （3）保存种质 （4）创造变异 二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 三、利用组织培养材料作为植物生物反应器 第二章 1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植 株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式 改变的过程。 3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织 的过程。 4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功 能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。 5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施 一、污染及防治： 1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只 要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。 2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。 二、褐变及防止 （1）选择合适的外植体 （2）合适的培养条件 （3）使用抗氧化剂 （4）连续转移 三、玻璃化问题及其防止
1 1.细胞的全能性：指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该植物的全套遗传基因和产生完整植株的潜在能力。 2.分化：指细胞、组织、器官或整株植物从分生组织或幼小状态发育为成熟状态的过程，并在生理、形态上发生的变化。其最大的特征是失去分裂能力。 3.脱分化：植物离休的器官、组织、细胞在人工培养基上，经过多次细胞分裂而失去原来的分化状态，形成无结构的愈伤组织或细胞团的过程，使其回复到胚性细胞的状态。其特征是已失去分裂能力的细胞重新获得了分裂能力。 4.再分化：指由脱分化的细胞再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整的植株的过程。 5.试管苗：指在无菌离体条件下，对植物组织、细胞、器官进行组培所获得的的再生植株。 6.根芽激素理论：根和芽的分化由生长素和细胞分裂素的比率所决定，这一比率高时促进生根，比率低时促进茎芽的分化，比率适中时，组织则倾向于以一种无结构的方式生长。通过改变培养基中这两类生长调节物质的相对浓度可以控制器官的分化。 7.污染：批在组培过程中，由于真菌、幼苗等微生物的侵染，在培养容器内滋生大量的菌斑，使试管苗不能生长和发育的现象。 8.褐变：指在组培过程中，培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。 9.玻璃化现象：指试管苗因生理失调而引起的嫩茎、叶片出现半透明状和水渍状的现象。 10.无菌操作：亦称接种。指将经过表面灭菌后的植物材料在无菌环境中切碎或分离出器官、组织或细胞转移到无菌培养基上的过程。由于整个过程均在无菌条件下进行，所以将这个过程称为无菌操作。 11.植物组织培养：指在无菌条件下，将离体的植物器官(如叶、花、未成熟的果实、种子)、组织(如形成层、花药组织、胚乳)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整的植株或生产具有经济价值的其他产品。
植物组织培养的基本设施和一般技术 实验室的大小取决于工作的目的和规模： 1）以工厂化生产为目的，实验室规模太小则会限制生产，影响效率。 2）在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计避免某些坏节倒排，引起日后工作混乱。 植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 植物组织培养实验室设计 平面图 药品室观察室培养室接种室 洗涤室二制备室贮存室
植物激素是指口然状态下植物体内合成天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的 生理生化活动。 植物生长调节剂是指一些具有植物激素活性的人工合成的物质。 细胞分裂素的生理作用 1、促进细胞分裂。 2、延缓植物衰老。 3、诱导组织和器官的分化，生长索和细胞分裂索共同调控着植物器官的分化。试验证明，细胞分裂素冇利于芽的分化，而生长素则促进根的分化，当细胞分裂素/生长素的比值较大时，主要诱导芽的形成；当细胞分裂素/牛长素的比值较小时，则有利于根的形成。 4、消除顶端优势，促进侧芽的迅速生长。在这方面，生长素同细胞分裂素间表现出明显的对抗作用，生长素是导致植物顶端优势的主要原因。 外植体（explant）是指从活植物体上切取F来的可以用丁?组织培养的组织或器官，它是植物离体培养的基础材料。 细胞全能性的表达是通过细胞脱分化和再分化实现的。脱分化是细胞全能性表达的前提，再分化是 细胞全能性表达的最终体现。 细胞分化Differentiation是指细胞分裂过程川发牛结构和功能的改变，形成各类器官和组织的过程细胞脱分化Dedifferentiation是指植物细胞或组织在离体条件下，给予一定的条件，使已分化形成特异结构和功能的成熟细胞再乖新分裂、增殖生长，失去细胞或组织原有的分化状态或消除细胞分工，使它回复到分生组织状态。 细胞再分化Redifferentiation是指脱分化细胞或分牛-组织分化发育形成完整植株的过程 形态发生Morphologenesis是指细胞再生植株的过程 愈伤组织（Callus）原指植物在受伤后，于伤口表面形成的一因薄壁细胞。在组织培养屮，指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄璧细胞。 植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根（adventitious roots） > 不定芽（adventitious shoots）等器官的过程。 培养条件下器官发生方式：1、先芽后根，2、先根后芽3、在愈伤组织不同部位分别形成芽和根，再通过微管组织的联系形成完整植株。 影响形态发生的因素有哪些？ 1.母体植物的遗传基础对器官分化的影响 不同种属的植物，甚至同种植物不同品种间的培养效果均有较大差异。通常情况卜，在白然条件下 以无性繁殖为主的植物，在培养条件下也有较强的器官分化的能力（Pierik, 1987）。 同种植物不同品种（基因型）的培养效果具有较大差异。 体细胞胚胎发生是单细胞或一群细胞被诱导不断再生非合子胚，并萌发形成完整植株的发育过程。 胚胎发生Embryogenesis在愈伤组织表面或内部产生胚状体（体细胞胚，somatic embryo）的过程，类似于合子胚的发生，有球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶胚四个时期植物体胚发生的应用:1）证实植物细胞全能性的理想实验系统； （2）植物离体形态发生的主要途径，可广泛应用于离体繁殖、遗传转化等； （3）制作人工种子； （4）研究槓物胚胎发育的理想模式系统； （5）克隆许多冃的基因的“基因库”（植物胚胎表达的基因数量巨大，是所有器官屮最多的）。 人工种子：指通过植物组织培养方法获得的具有正常发育能力的材料，外面包被特定的物质，在适 宜条件下可以发芽成苗的槓物幼体。 人工种子特点： （1）具冇良好发育的体细胞胚并能发育成正常完 整植株。 （2）具有人工胚乳，可提供种胚发育的营养。
植物组织培养期末复习资料 一、名词解释 1.植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基， 对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养、微型培养、试管培养。 2.愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的 细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 3.细胞全能性：指植物的每一个具有完整细胞核的活细胞，具有该植株的全部 遗传信息，在一定条件下发育成完整植株的潜在能力。 4.胚状体：指在植物组织培养过程中，由细胞诱导分化形成的胚状结构，其功 能类似于合子胚，可进一步再生成一个完整植株。 5.器官离体培养：是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养 的技术。 6.胚胎培养：指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完 整植株的技术。 7.花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养， 以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 8.花粉培养：是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。 9.细胞培养：是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进 行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。 10.原生质体培养：在人工控制条件下，将原生质体进行培养，使其形成完整植 株的技术 11.原生质体融合：也称体细胞杂交，指通过物理化学方法使原生质体融合，经 培养获得具有双亲全部或部分遗传物质的后代的方法 12.植板率：已形成细胞团的百分数（即每100个铺在平板上的细胞中有多少个 能长出细胞团） 13.脱分化〔dedifferentiation〕:指在离体培养条件下，已分化的细胞、组织 和器官在人工诱导条件下，失去原来的结构和功能而恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。（掌握） 14.再分化（redifferentiation):指在离体培养条件下，经脱分化的组织或细胞 在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 （掌握） 15.初代培养：指外植体来源于母本植株的最初培养 16.继代培养：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中，这种反复多次的 移植培养称为继代培养。 17.胚状体发生（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经 胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有双极性的胚状结构。 18.污染：植物组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现 象 19.玻璃化：试管植物的玻璃化是指试管苗外观形态呈半透明、水渍状的生长异 常现象，一旦形成玻璃苗，植株的增值系数即明显下降，既不能再用于后续的生根或继代增殖培养，移栽也难以成活。
植物组织培养复习题 植物组织培养复习题（习题） 一、名词解释 愈伤组织：在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁细胞团。 外植体：在组织培养中，由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官 脱分化：由高度分化的植物器官，组织或细胞经过离体培养，产生愈伤组织的过程。 半连续培养：利用培养罐进行大量细胞培养的一种方式。 无性系变异：由任何形式的细胞培养所产生的植株所表现出来的差异。 胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 看护培养：用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织培养细胞的一种方法。 无融合生殖：由配囊中卵细胞以外的其他细胞发育成的单倍体植株。 种质：亲代通过生殖细胞活体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质。 悬浮培养：将游离的植物单细胞或小细胞团，按一定的细胞密度在受到不断拉动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。 早熟萌发：在培养后迅速萌发为幼苗，不继续进行胚状生长，超过正常发育阶段。 选择压：在2个相对性状之间，一个性状被选择而生存下来的优势。 细胞全能性：任何有完整细胞核的植物细胞具有全部的遗传信息，在一定条件下，均具有分化，发育成完整植株的潜在能力。 条件培养基：在培养集中加入高密度的细胞进行培养，经过一段时间后，这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质，使培养基条件化，使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。 离体授粉：将未授粉的胚珠，子房或柱头从母体上分离下来，进行无菌培养，并通过一定的方式授给菌花粉，使其在试管内实现受精的技术。 同步化培养：培养基中大多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段。
植物组织培养 知识点一：《植物组织培养概述》 概述 一、名语解释 植物组织培养细胞全能性细胞分化细胞脱分化细胞再分化 器官发生状体发生 二、填空 1、组织培养的理论依据是：（） 2、植物组织培养的类型有：（）、（）、（）、（）、（）等。 3、1943年，（）提出了植物细胞（），并出版了《植物组织培养手册》，从而使植物组织培养为一门新兴学科。 答案： 1、细胞全能性学说 2、愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞培养，原生质体培养 3、white，“全能性”学说 三、简答题 1、简述植物组织培养的理论依据？ 2、植物组织培养的类型？ 答案： 1、植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。 2、愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞培养、原生质体培养。 四、论述题 论述组织培养在农业上的应用。 知识点二：植物组织培养实验室的基本设备和操作技术 一、名词解释 植物生长调节物质外植体外植体污染外植体褐变玻璃化现象 二、填空 1、组织培养实验室必要的设备有（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）。 2、实验室中常用移液管容量有（）、（）、（）、（）、（）、（）。 3、培养基成分主要包括（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）。 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的（），而且还能（）。 5、琼脂在固体培养时，是作为培养基的（），一般用量为（）。 6、常用的生长素有（）、（）、（）、（）等，常用的细胞分裂素（）、（）、（）。 7、外植体污染原因从病源分面主要有（）和（）两大类。 8、防褐变的措施有（）、（）、（）、（）。 9、驯化的目的（）。 10、外植体灭菌一般先用（），再用（）浸泡（） min。
植物组织培养期末复习资料 2011.05.19 1、植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物得胚胎、器官、组织、细胞、原生质体等进行离体培养，使其再生发育成完整植株的过 程。又称植物离体培养。 2、外植体：用于培养的植物胚胎、器官、组织、细胞、原生质体通常称为外植体。 3 、愈伤组织：是指在植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生的一团不定形的薄壁组织。 4、初代培养：将外植体进行的第一次培养，称为初代培养。 5、继代培养：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，称为继代培养。 6、植物细胞全能性：一个细胞所具有的产生一个完整植株的固有能力称做细胞的全能性。 7、细胞分化：是指细胞的结构和功能从一种类型转变为另一种的过程。 8、脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态并形成未分化的愈伤组织的现象称为脱分化也称去分化。 9、再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株，这个过程（现象）称为再分化。 10、胚状体（或体细胞胚）：在组织培养中，起源于一个非合资细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成具有双极性的胚状结构，叫胚状体或体细胞胚。 11、体细胞胚与合子胚的比较： （1）、体细胞胚是由愈伤组织或胚性细胞团的表面细胞起源的，所处的发育条件与合子胚不相同。 （2）、在自然界，不定胚早期分裂顺序与合子胚也不完全相同：即使是合子胚本身，他们的早期胚胎发育过程也常偏离正常的方式。 （3）、合子胚和不定胚一般都能发育成正常的成熟胚。与合子胚相似，球形期后的体细胞胚呈现一种固定的极性，根极指向愈伤组织或胚性细胞团的中央，茎芽极 朝外，与合子比，成熟体细胞胚的进一步发育过程及形态特征也是相当正常 的。 （4）、多数情况下，体细胞胚并不具有一个明显的胚柄。 （5）、与合子胚不同的是，在培养中形成的体细胞胚常常具有两个以上的子叶。 12、培养基：是植物组织培养的物质基础，也是组织培养能否成功的重要因素之一。 13、茎段培养：是指不带芽和带有侧芽或叶柄的茎切段，包括幼茎和木质化的茎切段，进行离体培养的技术。 14、茎段培养方法： （1）、外植体的选取和消毒：（2）、接种：（3）、培养基：
(1) 什么是植物组织培养? 植物组织培养是在无菌条件下，将植物体的任何一部分，如植物器官、组织、细胞以及原生质体等，培养在人工配制的培养基上，并给予合适的培养条件（包括营养、激素、温度、光照、湿度），使之发育成完整植株的过程。 （广义）又叫离体培养：指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 （狭义）组织培养：指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 (2) 什么是"外植体"? 从植物体上分离下来的用于离体培养的材料称为外植体。 (3) 按照外植体的不同，植物组织培养可以分成几类? 可以分成5类 1、植株培养 2、器官培养（胚，花药，子房，根、茎和叶） 3、组织培养（各种组织、愈伤组织） 4、原生质体培养 5、细胞培养（愈伤组织分离或花粉单细胞或很小的细胞团) (4) 植物组织培养有哪些特点? ①培养条件可以人为控制 ②生长周期短，繁殖率高 ③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 (5) 你认为植物组织培养技术在当前的农业生产上有什么价值?为什么? （一）快速繁殖种苗 用组织培养的方法进行快速繁殖是生产上最有潜力的应用，包括花卉观赏植物、蔬菜、果树、大田作物及其他经济作物。快繁技术不受季节等条件的限制，生长周期短，而且能使不能或很难繁殖的植物进行增殖。 （二）无病毒苗的培养 植物在生长过程中几乎都要遭受到病毒病不同程度的危害，有的种类甚至同时受到数种病毒病的危害，尤其是很多园艺植物靠无性方法来增殖，若蒙受病毒病，代代相传，越染越重，甚至会造成极严重的后果。 （三）在育种上的应用 植物组织培养技术为育种提供了许多手段和方法，使育种工作在新的条件下更有效的进行 （四）人工种子 人工种子，是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽，被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗颗粒体。 （五）工厂化育苗 是指以植物组织培养为基础，将外植体接种在人工配制的培养基上，通过控制环
植物组织培养复习资料 第一章绪论 一、概念： 植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官.组织，细胞以及原生质体. 培养在人1:培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 外植体：在无菌条件下，离体培养于人工培养基上的，用于达到某种培养目的的原始植物材料C 培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人匚配制的营养基质即为培养基。 细胞全能性：植物体每一个细胞都含有该植物全部的遗传信息，在合适的条件下，具有形成完整植株的能力。 脱分化：一个成熟细胞恢复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 再分化：是脱分化细胞重新恢复细胞分化能力，沿若正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞C 二、组织培养的类型，不同分类依据 （根据培养材料不同）可分为植株培养，胚胎培养，器官培养，组织或愈伤组织培养.细胞或原生质休培养5类：（根据培养目的）可分为试管嫁接，试管受精，试管加倍，试管育种等： （根据培养方法）可分为平板培养，微室培养，悬浮培养，单细胞培养等： （根据培养过程）可分为初代培养和继代培养： （根据培养基类型）可分为固体培养和液体培养。 三、三个发展阶段的关键人物 1,haberlandt-一于1902年提出植物细胞全能性理论，被称为“组织培养之父”。 2,white—于1943年出版《植物组织培养手册》。 3,murashine和skoog -- 在1962年筛选出MS培养基。 四、植物全能性表达的过程 培养一?脱分彳~再分化一培养 五、组织培养的特点： 1、植物基础学科研究的良好系统。 2、生物技术的基础。 3、经济高效.管理方便，利于自动化。 4、技术含量高，实验误差小，人工控制能力强。 5、生长周期短，生长速度快，实验重复性好。 6、实验材料经济，来源单一。 六、缺点：需要设备负复柴，投入资金多，电能消耗大：对人员技术水平要求高，对实验场所要求也高， 不能代替田间试验。 第二章植物组织培养设备与培养条件 一、实验室的组成及主要仪器和设备 准备室：干燥箱，高压灭菌锅，电子天平，酸度计，水浴锅，冰箱。 接种室：超净工作台，紫外灯，接种工具。 培养室：培养架.摇床，控温控光设备。 二、植物组织培养所需要的环境条件 1、温度：一般植物生长的最适温度在23、2kC之间。 2、光照：光照16h,接若8h的黑暗培养，光照强度一般在1000"5000Lxo 3、湿度：一般要求70。80礼 L气体：低氧有利于胚状体的形成：高氧有利于根的形成：高浓度乙烯对正常的形态发生不利。
考试重点（大部分是课后作业）： 题型：填空，判断，名词解释，问答 （1）植物组织培养地广义和狭义概念？ 答：广义概念是指对植物地器官，组织，细胞及原生质体进行离体培养地技术. 狭义概念是指对植物地组织（如分生组织，表皮组织、薄壁组织等）及其培养产生地愈伤组织进行离体培养地技术. （2）植物组织培养分类及其主要特点？ 答：根据外植体来源和培养对象不同，植物组织培养地研究类型可以分为种，分别是器官培养，组织培养，细胞培养，胚胎培养，原生质体培养. 主要特点：⑴无菌条件；⑵成分完全确定地人工培养基；⑶起始材料处于离体状态；⑷克隆； ⑸组培苗叶片表面一般都缺乏角质层或蜡质层，且气孔都是张开地；⑹环境温度、光照强度和时间等都是人为设定地； （3）植物组织培养地应用及展望？ 答：应用：植物离体快繁，无病毒苗木培育，培育新品种或创制新品种，次生代谢物生产，种质资源保存及制作人工种子. 展望：组培容器大型化，组培技术简单化，组培环境自然化 （4）细胞全能性、脱分化、再分化概念？ 答：细胞全能性：离体细胞在适当条件下分化形成再生植株地能力. 脱分化：也称去分化，是指在离体培养条件下生长地细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来地结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构地细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性地细胞地过程. 再分化：是指离体培养地植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型地细胞、组织、器官，甚至形成完整植株地过程. （5）植物激素配比模式？ 答：生长素细胞分裂素：高有利于根地形成；中无定向结构生长；低有利于芽苗生长； （6）体细胞胚胎发生地概念、方式、机理和特点？ 答：概念：植物离体培养细胞产生胚状体地过程. 方式：直接途径：从外植体某些部位地胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎. 间接途径：外植体先脱分化形成愈伤组织，再从愈伤组织地某些细胞分化出体细胞胚胎. 机理： 特点：①双极性；②（与母体组织或外植体地维管束系统无直接联系，处于较为孤立状态，）即存在生理隔离. *（）胚状体发生途径与器官发生途径形成植株地区别. 答：①最根本地特征是具有两极性，即在发育地早期阶段，从其方向相反地两端分化出茎端和根端，而不定芽和不定根都为单向极性.
植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】
植物组织培养技术 考试复习题 一、填空题 1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性。 2、根据培养的外植体材料不同，可将植物组织培养分为以下几种类型：愈伤组织培养、器官培养、胚培养、 细胞培养、原生质体培养、遗传转化。 3、植物组织培养实验室一般划分为洗涤室、培养基配置室、缓冲室、无菌接种室、培养室、观察室、驯化室等分室，其中植物组织培养实验室对无菌条件要求最严格的区域是无菌接种室。 4、培养基成分主要包水分、无机盐类、有机营养成、植物生长调节物质、天然物质、 pH 、凝固剂。 5、目前应用最广泛的组培基本培养基是 MS培养基。 6、培养基最常用的碳源是糖类物质，使用浓度在1%-5% 常用 3 %。 7、培养基中加入活性炭的目的：减少外植体的褐 变。 8、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高则有利于根的形成；其比值低则有利于芽的形成。 9、一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化
的愈伤组织的现象称为"
__脱分化__" 10、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行 (高压蒸汽 )灭菌，而要进行过滤方法灭菌。 11、确定花粉发育时期最简捷有效的方法是压片镜检法。 12、液体培养基和固体培养基最主要的区别是：固体培养基中添加了琼脂粉，而液体培养基一般不添加。 13、细胞悬浮培养的方法有分批培养和连续培养。 14、外植体灭菌常用的消毒剂是酒精，使用浓度一般为70—75％。 15、具有防止褐变作用的维生素是抗坏血酸（维生素c）。 16、常用防止褐变的试剂有有机酸、硫代硫酸钠。 17、组培中按照污染的对象分，常见的污染类型有细菌性污染、真菌性污染。 18、在使用超净工作台进行无菌操作前，应先将借种器械放进超净工作台，并打开紫外线灯和风机组工作进行消毒20分钟左右。 19、配制培养基调节pH值时常用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液
植物组织培养复习题 一、填空题： 1.植物脱病毒一般采用茎尖培养脱毒和热处理两种方法。 2.最典型的培养基是1962年发表的的一种适合于烟草愈伤组织快速生长的改良培养基，该培养基后来被称为MS培养基，现已广泛用于植物组织培养。 3.胚状体发育顺次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期。 4.具有防止褐变作用的维生素是Vc。 5.植物组织培养按培养对象分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培 养等几种类型。 6.在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以0.3～0.5mm、带1～3个叶原基为好。 7.对植物组织培养的培养基灭菌时，一般情况采用的条件是121温度，保持时间是15～ 20分钟。 8.在幼胚培养基中，蔗糖的主要作用是维持渗透压、提供碳源和能源和防止幼胚早熟萌 发。 9.植物组织培养中，微量元素铁的用量较大，由于在较高pH下，易形成Fe(OH)3沉淀，难以被吸收，所以多用硫酸亚铁（FeSO4·7H20）和乙二胺四乙酸（Na2-EDTA）形成的螯合物，并且单独配制。 10.种质保存大致分为原地保存和异地保寸两种方式。 11.外植体选择的原则是：选择优良的种质、选择健壮的植株、选择最适时期、选取适宜 的大小。 12.细胞悬浮培养的方法有成批培养和连续培养等。 13.植物原生质体分离的方法有酶解法和机械法。 14.植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。 15.花粉分离的方法有挤压法、磁搅拌法、漂浮释放法。 16.植物组织培养发展可分为三个时期：萌芽阶段、奠基阶段、快速发展和应用阶段。 17.一个年产4-20万株苗的商业性组织培养实验室，其总面积不应少于60平方米，可划 分为准备室、缓冲室、无菌操作室和培养室。 18.盐酸硫胺素VB1是脱羧酶辅酶，吡哆醛VB6是转氨酶辅酶。 19.愈伤组织形成大致经历三个时期，即：诱导期、分裂期、分化期。
植物组织培养-培养基配制 一 、【实验目的】 1、掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术 二 、【实验原理】 植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。 三、【实验仪器和试剂】 仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸 试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】 培养基的配制 用于配制培养基的水最好是三蒸水。 所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。 配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
1、 MS培养基的配制 1）按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml 2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.8 3）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。 4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。 5）经高压高温灭菌后，由于某些成分的降解或氧化，酸度会增加（pH 值一般可降低0.2），因此调整pH值时应加以考虑。 2、灭菌 经高压灭菌的培养基凝固后，宜放在培养室中预培养3～5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在10℃以下保存，而含有生长调节物质的培养基则在4～5℃低温下保存更好。 3、培养基的存放 经高压灭菌的培养基凝固后，宜放在培养室中预培养3～5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在10℃以下保存，而含有生长调节物质的培养基则在4～5℃低温下保存更好。 4、植物愈伤组织诱导培养基的配制 1）每2人一小组，自由组合，固定。每5小组为1中组 2）MS培养基的配制 a、母液的配制 b、培养瓶洗刷 c、每中组配制500mlMS培养基，（含琼脂4.5g，蔗糖15g，2,4-D母液1ml），调节PH，分装，灭菌 3）每人准备100ml/瓶去离子水→灭菌（无菌水) 4）每人100ml烧杯/试剂瓶→灭菌（无菌烧杯） 5）每2人一套平板，清洗，灭菌 五、【实验结果及讨论】 略