实验六、抗菌药物的体外药效试验
（药敏试验）
各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验
（Kirby-BaueerDiceDiffusion）；最低抑菌浓度试验（MinimumInhibitoryConcentration,MIC）和最低杀菌浓度试验（MinimumBactericidalConcentration,MBC）。
［目的要求］
1、熟悉体外抗菌试验操作技术。
2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。
［实验原理］
常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。
1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。
2、培养基：选MH(Muelkr-Hintop)培养基。链球菌、流感杆菌需接种到巧克力琼脂平板或加5％羊血。淋球菌接种到哥伦比亚培养基上。
3、药物配制：试验样品与阳性对照药品均应用称重法求出效价并按盐基比例折算出实际效价。所试药物用磷酸缓冲液或灭菌注射用水溶解，配制成溶液。少数难溶药物可加少许相应助溶剂，再用缓冲液或灭菌注射用水稀释至所需浓度。
4、试验方法：
①最小抑菌浓度(MIC)测定法，采用平皿或试管二倍稀释法测无细菌生长平
皿或试管中所含药物的最小浓度即为最小抑菌浓度。
②最小杀菌浓度（MBC）测定法，先测出MIC，再依次存未见细苗生长各管
培养物分别吸取，倾倒于平皿上，37再培养18小时，平皿上菌落数小于
5个的最小稀释度的药物浓度即为最低杀菌浓度。
③杀菌曲线（KCs）实验，将所试菌液约105菌落计数单位(CFU／ml)与抗菌
药物混合，定量取样于平皿培养基，孵育后计算其活菌数，并绘制出时间
杀菌曲线。实验应设空白对照管与已知药物对照试验。
5、培养条件对MIC的影响：
①pH值的影响，将培养基的pH调整，测定药物对所试细菌(临床常见致病
菌)1～2株MIC的影响。
②细菌接种量的影响,在其它条件不变时改变细菌接种量，比较不同菌量对
MIC的影响。
③血清蛋白结合的影响：如采用25％、50％、75％等不同的血清浓度与不含
血清的培养基观察血清含量对MIC的影响。
［试验内容］
（一）滤纸片法（圆纸片扩散试验）
［材料］无菌平皿1只,无菌1ml吸管1支,无菌小滤纸片,待检药（1个平板可做1种或多种药物实验）,琼脂培养基（瓶装或定量分装15～20ml于大试管，灭菌，备用）,实验菌肉汤培养基，镊子，95％酒精等。
［方法］
①琼脂培养基置于水浴中加热融化，冷却至50℃左右，用无菌操作法吸取
菌液（制备每只平板约需～）加入琼脂培养基中，迅速混匀，倾注于无菌
平皿内，素转动平皿使细菌均匀分布其中，水平放置待凝（也可预先在平皿中铺一层琼脂培养基作底层，冷却后再加一薄层含菌琼脂培养基，如此，可使抑菌圈更加清晰）。
② 镊子沾酒精后通过火焰，烧灼灭菌，反复3次，镊取无菌滤纸片，浸沾药
液，贴于平板表面，各纸片间的距离药大致相等。③37℃培养一昼夜后，观察此滤纸片周围有无抑菌圈，并量取其直径。抑菌圈即无菌生长区，药液在一定浓度范围内，抑菌圈的大小表示抑菌作用的强弱。
［结果判定］根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小，来判断该菌对各种药物的敏感程度。依次可分为：高度敏感，中毒敏感，低度敏感，不敏感四种。细菌对磺胺类药物的敏感度的标准，按Hawking 所定，若磺胺药物浓度在每毫升10μg 即能抑制细菌生长者，则该细菌对磺胺药很敏感；如需每毫升50μg 才能抑制生长，为敏感；每毫升1000μg 才能抑制为中度敏感；每毫升超过1000μg 仍不能抑菌者，则为耐药菌株。
（二） 试管稀释法
［材料］菌种：金黄色葡萄球菌肉汤培养物；培养基：普通肉汤；抗菌药物：含青霉素64IU/ml ；其他材料：麦氏比浊管，灭菌1ml 刻度吸管，橡皮胶头，无菌试管。
［方法］以葡萄球菌对青霉素的敏感性为例。将1ml/管排成一列，编上19的管号，在第一个管内加入含64IU/ml 青霉素肉汤1ml 。混匀后吸取1ml 到第二管，混匀，再取1ml 至第3管，以此类推至第八管。第9管不含青霉素的肉汤做为对照管。然后每管加入含菌当量相当于麦氏比浊管第1管1/2的金黄色葡萄球菌（相当于亿/ml ），操作术式见表
（三）平板稀释法
试管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 药物浓度（μ
g ）
32 16 8 4 2 1 肉汤（ml ）
1 1 1
1 青霉（ml ）
1 1 1 1 细菌（ml ）
［材料］无菌平皿，5ml无菌吸管，1ml无菌吸管，10ml无菌吸管，无菌试
管，待检药液，灭菌蒸馏水，缓冲液（pH依药物稳定性而定），实验菌肉汤培养物，琼脂培养基（大试管定量分装成9ml/支）。
［方法］
1、细菌蒸馏水或缓冲液把待检药液配成一系列浓度梯度：1：1，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，1：128，1：256，（方法同试管稀释法中的二倍稀释）。
2、将每种浓度的待检药液1ML，加入9ML50～55℃琼脂培养基中，迅速混匀倾注于无菌平板中，制成一系列药物浓度递减的平板。
3、对照不加药液，即将培养基直接倾入无菌平皿，待冷凝即成。
4、将不同试验菌经适当稀释后，点种再含药平板及对照平板上，接种量约为10CFU/点(colony-formingunit,CFU菌落形成单位)。
5、37℃培养18～24小时后，观察药物对试验的最大稀释度，再乘以10，得出最大抑制稀释度（即MIC）。
［注意事项］
1、实验中所用试管、吸管。棉签、镊子、纸片及各种药液配制均应无菌，并按照生物实验常规进行操作。
2、滤纸片法：①到平板时，平板中琼脂培养基的厚薄需均匀一致，以免影响抑菌圈大小。琼脂板的厚度可影响抑菌圈的大小，一般为2～3mm。②制备含菌平板时，应特别注意混入菌液时的温度，不能太高，以免烧死细菌。菌液和培养基混合后应迅速摇匀，使均匀分布。③培养温度和时间以37℃、18小时最佳，要求温度均匀。培养石匠过场可能影响抑菌圈的清晰度。④滤纸片沾取药液时不要太多，以免再平板中流淌，影响抑菌圈形状和大小。
3、试管稀释法：①稀释的准确性每稀释一种浓度换一支吸管，较一支吸管稀释到底准确些。②加入菌液的浓度菌液浓度大时，则最小抑菌浓度药高，反之亦然。
③菌龄一般认为幼龄菌较敏感，所以多用细菌的6小时培养液。
［思考题］
1、怎样判断最后的结果时抑菌还是杀菌？抑菌浓度大还是杀菌浓度大？
2、用试管稀释法测定药物的最低抑菌浓度时，主要有哪些因素影响试验结果？
3、如药物是一种脂溶性或不太溶于水的物质，是否也可以测定其最定抑菌浓度？如可以，如何进行？
4、比较青霉素G 钠、庆大霉素、丁胺卡那霉素、头孢呋新、诺氟沙星在体外抑菌的强弱。
5、体外筛选具有抗菌作用的药物能否直接应用于临床?为什么?
实验七、抗菌药物的体内药效观察
在体外实验中呈现抗菌作用的药物还可能由于毒性大或体内过程、代谢动力学等原因，在体内发挥不出抗菌效果，需进一步了解其对感染动物是否有效。体内实验不仅测定敏感性，还包括影响新药治疗的其他的变化因素，如宿主反应，药物到达感染部位的能力，药物的灭活等。如果在体内也有效，且毒性不大，才有可能过渡到临床，另外，还应注意许多体外无抗菌作用的中草药用于治疗感染性疾病可能会有较好疗效。
［实验目的］
1、了解细菌感染实验治疗方法的基本过程；
2、观察青霉素的体内抗菌作用及ED 50的测定。
［实验材料］
1、实验动物及选择原则：小白鼠30只（18～22g ）；选用有合格证动物提供的健康小鼠，体重18～22g ，雌雄各半，随机分组，每组动物至少10只。
2、实验器材及药品等：注射器(1ml)；小试管；试管架；MH 培养基；金黄色葡萄球菌液；5％胃膜素悬液；青霉案G 钠；％碘酊；70％乙醇；5％石炭酸溶液。
3、感染菌种：根据所试药物的抗菌作用特点选择不同菌株进行试验。常用致病菌如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肠杆菌、氏肺炎杆菌、杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌等。试验广谱抗生素时感染菌株应包括金葡菌与革兰氏阴性菌各l ～2种。创新与阴性菌均需作2种以上，每一种菌2株以上，并包括有临床分离的致病菌。
［方法］
1、菌液制备：将保存的金黄色葡萄球菌接种MH 培养基中，于37℃培养，16-18小时。用平皿表面计数法测定实验感染用的活菌数(如条件一致，则不必每次测定)。将上述菌液用生理盐水以10倍顺序稀释为10-1、10-
2、10-3…等不同浓度菌液；再取此不同浓度的菌液1ml 加5％胃膜素悬液9ml 。即做成浓度力10-2、10-
3、10-4...的菌悬液用。
药物名称
剂量 （mg/Kg ） 对数剂量X 动物数(只) 死亡动物数（只） ED 50和95％ 可信限
受试药物
对照药物
2、预试验：将不同浓度的菌悬液分别腹腔注射于3～5只小鼠，每只，观察其死亡情况。正式实验时选用最小致死量，即感染后引起小鼠80-100％死亡的菌液浓度进行感染。常用的病菌的参考用量见本实验附录。肺炎链球菌和链球菌的腹腔感染可不用胃膜素稀释，而是将在血清MH培养基中培养16-18小时的菌液腹腔注射～，观察24-48动物死亡情况。
①感染菌量：感染前需先测出所试菌株的最小致死量(MLD)，即能引起80-00％动物死亡的菌液浓度)作为感染菌量。
②感染途径：菌源液用5％胃膜素(或干酵母)稀释至所需浓度，经腹腔或尾静脉注射相当于100％致死量的菌液感染小鼠。
3、实验治疗：取18～22g的小鼠30只。雌雄均可，雌者须无孕。按性别体重随机分为6组，每组10只。用预试中选定并适当稀释的菌悬液，每鼠腹腔注射，以感染各组小鼠。第1-5组于感染的同时及感染后6小时肌内注射不同剂量青霉素，剂量分别为20万u、40万u、9．8万u、万u、万u／Kg体重(亦可实验前根据细菌敏感情况调整用量)。连续观察7天，记录各组小鼠死亡情况。计算半数有效量数(ED50)及95％可信限。实验必需设不给药组与已知同类药物阳性对照组。
［注意事项］
1、本实验须按照生物实驻中处理感染动物常规进行，严防菌液污染。
2、实验样结束后，应将全部接种过菌液的动物不沦死活进行焚化或丢入置有5％石炭酸溶液的缸内，用肥皂洗手后用碘酊及酒精擦手，以防传播疫病。
［报告要点］
实验结果按下表填写并计算该药的半数有效量(ED50)及95％可信限。并根据其半数致死量计算治疗指数。
治疗指数=LD50/ED50
［思考题］
1、抗菌药物的体内抗菌实验包括哪些基本步骤？应如何进行?
2、治疗指数有何意义？
附1：5％胃膜素悬液制备法
称取胃膜素5g放于研钵内，加少量生理盐水研磨，边研边加水，最后加至100ml，于10磅加压10分钟灭菌即可。临用时调整其pH至中性。
附2：活菌数测定法
将培养基的菌悬液依10倍顺序稀释使其浓度为10-1，10-2、10-3、.....10-（即以9ml无菌生理盐水加1ml菌悬液为10-1，依次累推）选求适当浓度的菌悬液放在MH琼脂培养基平板上，轻轻推开
菌液，注意不要碰到平板边缘，以免影响计数。共作作3个平皿，都放入37℃孵箱，培养18～20小时后计算菌落群数。平板玻璃盖可换为瓦盖(因瓦改能吸水，可免细菌在平板上繁殖成一片)。挑选平板上生长30-300个菌落的平板计数。一般取两个平板的平均数进行计算。根据细菌稀释浓度(一般为10-4、10-5、10-6、10-7)，算出每1ml菌的活菌数。例如10-6两个平板上生长菌落数为68～70个，平均为69/，即每毫升有活菌数690×106/ml即×108/ml。
附3：做小鼠体内实验时常用的细菌的接种量
菌株感染度胃膜素稀释后死亡时间
金黄色葡萄球菌10-210-324h内
大肠杆菌10-310-424h内
变形杆菌10-410-224-48h内
绿脓杆菌10-310-448-72h内
药效学研究 一、药效学研究的内容 新药的药效学研究主要指对其药理作用的观测和作用机理的探讨。内容包括： （一）观测生理机能的改变。如新药对中枢神经系统产生兴奋还是抑制；对心肌收缩力或胃肠道运动是加强还是减弱；对血管或支气管是扩张还是收缩等。 （二）测定生化指标的变化，如血糖、电解质；生理活性物质，如血管紧张素、前列腺素、环磷苷浓度的改变等。 （三）观测组织形态学变化，如血细胞大小、甲状腺大小、肾上腺皮质萎缩等。 二、药效学研究的目的 主要达到二个目的：一是确定药物的治疗作用，二是确定药物的一般药理作用，为新药临床试验提供可靠依据。 三、基础药效学研究方法 药效学研究方法很多，概括讲可分为综合法和分析法两种。所谓综合法是指在整体动物身上进行，是在若干其它因素综合参与下考察药物作用，根据实验动物情况不同，可分为正常动物法和实验治疗法。所谓分析法是指采用离体脏器，例如离体肠管、离体心脏、血管、子宫及离体神经肌肉制备等，单一地考察药物对某一部分的作用。深入研究还包括细胞水平、分子水平的分析研究。 （一）整体动物实验一般应用小鼠、大鼠、兔、猫、猴、狗，根据不同情况可用正常动物、麻醉动物、病理模型动物。 1．观察药物对动物行为的影响，是研究中枢神经系统药物作用的基本方法之一，最常用正常动物。如将动物的行为进行分级，对用药组和对照组动物进行细心观察，并按分级法打分，求出平均数，进行显著性测验，从而可判定新药是中枢抑制作用还是中枢兴奋作用。用转棒法观察动物的协调运动，是测定新药对中枢神经系统抑制作用和对骨骼肌松弛张作用的最简单而经典的方法。观察药物对记忆力的影响，以及测定药物的依赖性实验都是用正常动物。 2．观测药物对疾病的疗效，则常用病理模型动物。 （1）研究抗精神病药：常用去水吗啡造成大白鼠舔、嗅、咬等定向行为，从而观测新药的安定作用。
实验六抗菌药物的体外 药效试验 Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】
实验六、抗菌药物的体外药效试验 （药敏试验） 各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。 ［目的要求］ 1、熟悉体外抗菌试验操作技术。 2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。 ［实验原理］ 常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。 1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。 2、培养基：选MH(Muelkr-Hintop)培养基。链球菌、流感杆菌需接种到巧克力琼脂平板或加5％羊血。淋球菌接种到哥伦比亚培养基上。
抗菌药物敏感性试验的技术要求 1 范围 本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求，包括常规药敏试验的药物选择和报告、药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。 本标准适用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 抗微生物药物敏感性试验Antimicrobial susceptibility testing 检测微生物（本文件特指细菌）对抗微生物药物（本文件特指抗菌药物）的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。 2.2 最低抑菌浓度Minimal inhibitory concentration；MIC 在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。2.3 折点Breakpoint 能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度（MIC）或者抑菌圈直径（mm）的数值。 2.3.1 敏感Susceptible；S 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。 2.3.2 中介Intermediate；I 当菌株的MIC值或抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或在药物生理浓集的部位，临床治疗可能
有效。该分类同样可作为“缓冲域”，以防止由微小、不可控的技术因素导致的重大偏差，尤其是毒性范围较窄的药物。 2.3.3 剂量依赖型敏感Susceptible-dose dependent；SDD 细菌菌株对抗菌药物的敏感性依赖于抗菌药物的剂量。当某种药物对菌株的MIC或抑菌圈直径在SDD 范围时，临床可通过提高剂量和（或）增加给药频率等修正给药方案以达到临床疗效。 2.3.4 耐药Resistant；R 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于该分类范围时，使用常规治疗方案，该药在感染部位所达到的药物浓度不能抑制细菌的生长，和（或）被测菌株获得特殊耐药机制，且治疗性研究显示该药临床疗效不确切。 2.3.5 非敏感Nonsusceptible；NS 对于那些因未现或罕现耐药，而仅具有敏感折点的抗菌药物，当该药对某分离株的MIC值高于或抑菌圈直径低于敏感折点时，此分类为非敏感。 2.4 流行病学界值Epidemiological cutoff value；ECV 将微生物群体区分为有或无获得性耐药的MIC值或抑菌圈直径，是群体敏感性的上限。根据ECV，可将菌株分为野生型和非野生型。 2.4.1 野生型 Wild-type；WT 根据ECV值，将抗菌药物（包括抗真菌药物）评估中未获得耐药机制或无敏感性下降的菌株定义为野生型。 2.4.2 非野生型Non-wild-type；NWT 根据ECV值，将抗菌药物（包括抗真菌药物）评估中获得了耐药机制或存在敏感性下降的菌株，定义为非野生型。 2.5 效价Potency 抗菌药物中具有抗菌活性的成分，通过同类标准物质测定得出。单位mg/g、IU/g或用百分比表示。
宠物用抗蠕虫药物药效评价试验指导原则 一、概述 （一）定义与目的 宠物（犬、猫等）用抗蠕虫药物是指用于预防和治疗宠物蠕虫感染的各种化学药品及制剂。宠物用抗蠕虫药物药效评价试验是评价宠物用抗蠕虫药物的剂量确定试验，也称Ⅱ期临床试验，目的是了解不同剂量的受试药物对靶动物的抗蠕虫效果，确定受试药物的治疗作用及剂量。 （二）适用范围 本指导原则适用于申报防治宠物蠕虫感染的所有抗蠕虫药物，包括我国未批准在宠物用的抗蠕虫药物及各种制剂，或者改变已批准药物在其他宠物使用，均应进行药效评价试验。按每种适应症进行试验，一般采用人工诱发感染，条件不允许时也可选择自然感染病例。人工诱发感染可以选择少量最新野外分离的蠕虫株进行诱导感染；对于稀有蠕虫种类可以使用实验室保存的蠕虫株进行诱导感染。对于幼虫阶段的蠕虫应当使用诱导感染；选择自然感染病例，研究受试药物对蠕虫成虫的药效；对于定居阶段的蠕虫只能使用自然感染病例。不能选用对药物有耐药性的蠕虫种进行本试验。 二、试验设计 （一）试验动物 1.品种：应与药物申报应用的动物相同，品种不限，注明动物品种、体型、体重、性别和年龄。避免使用可能过敏或中毒的动物。以成年动物为主，若药物拟用于幼年动物，则需要选择幼年动物。 2.来源：选用人工诱发感染，动物应健康，从有试验动物资质证明的饲养单位购买。如果
没有资质证明，动物应来源清楚，并经检疫合格后才能用于试验；选用符合受试药物目标适应症的自然感染病例，每组试验动物的年龄、体型大小、体重范围、性别等应尽量一致，应来源清楚，饲养规范，动物主人能较好执行临床兽医医嘱。 3.数量：选用人工诱发感染，每组不少于（含）6只；选用自然感染病例，每组不少于（含）10只。 4.自然感染病例动物选择标准：试验前制定试验动物的选择标准，注明其品种、体型、体重、性别和年龄。试验前用过药物的动物、患过传染病或患过敏症的动物，均不应入选。动物一般需要7天左右的时间适应实验环境和驯服。 自然感染病例的选择是根据粪便中蠕虫虫卵的排出或者节片的排出。对于犬恶丝虫而言，应根据寄生虫学或者免疫学方法进行选择。每个试验组的动物应当加以标记，用适当的方法进行重复，并在最终的报告中标明。 5.人工诱发感染病例 （1）人工诱发感染推荐使用的寄生虫种类与数量 ①可以人工诱发感染犬的寄生虫种群数量应根据分离的种群数量而定，最终报告中应记录犬感染的幼虫或虫卵数量。 犬常用蠕虫感染种类及其推荐数量范围 感染部位寄生虫数量范围 小肠犬弓首蛔虫100～500* 狮弓首蛔虫200～300 犬钩虫100～300 巴西钩口线虫100～300 窄头钩虫1000～5000 粪类圆线虫1000～5000 细粒棘球绦虫20000～40000 绦虫属5～15
实验六、抗菌药物的体外药效试验 （药敏试验） 各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。 ［目的要求］ 1、熟悉体外抗菌试验操作技术。 2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。 ［实验原理］ 常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。 1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。 2、培养基：选MH(Muelkr-Hintop)培养基。链球菌、流感杆菌需接种到巧克力琼脂平板或加5％羊血。淋球菌接种到哥伦比亚培养基上。
中药新药药效学研究指南 1、中药新药一般药理学研究 (2) 2、中药新药药效学研究基本要求 (2) 3、治疗胸痹心痛证中药的药效学研究 (4) 4、治疗高血压中药的药效学研究 (5) 5、治疗外感热证中药的药效学研究 (6) 6、治疗慢性咽炎中药的药效学研究 (7) 7、治疗慢性支气管炎中药的药效学研究 (8) 8、治疗慢性肺源性心脏病中药的药效学研究 (9) 9、治疗寒湿困脾、湿热蕴脾证中药的药效学研究 (10) 10、治疗泄泻中药的药效学研究 (10) 11、治疗胃脘痛中药的药效学研究 (11) 12、治疗消化性溃疡中药的药效学研究 (12) 13、治疗吐血、黑便中药的药效学研究 (13) 14、治疗胆囊炎、胆石症中药的药效学研究 (14) 15、补肾壮阳中药的药效学研究 (15) 16、治疗痛经中药的药效学研究 (15) 17、治疗女性生殖系统炎症中药的药效学研究 (16) 18、治疗水肿证（急性肾炎）中药的药效学研究 (17) 19、治疗急性肾功能衰竭中药的药效学研究 (17) 20、治疗外科疮疡中药的药效学研究 (18) 21、治疗腰腿痛中药的药效学研究 (19) 22、治疗痹证中药的药效学研究 (20) 23、治疗血虚证中药的药效学研究 (21) 24、抗疟中药的药效学研究 (22) 25、治疗恶性肿瘤中药的药效学研究 (22) 26、治疗视网膜静脉阻塞中药的药效学研究 (24) 27、治疗厥脱证中药的药效学研究 (25) 28、治疗中风中药的药效学研究 (26) 29、治疗风温肺热证中药的药效学研究 (28) 30、治疗支气管哮喘中药的药效学研究 (29) 31、治疗脾虚证中药的药效学研究 (29) 32、治疗肝郁脾虚证中药的药效学研究 (30) 33、治疗肝胃不和证中药的药效学研究 (31) 34、治疗胃热证、胃阴虚证中药的药效学研究 (31) 35、治疗痞满证中药的药效学研究 (32) 36、治疗肝炎中药的药效学研究 (32) 37、治疗消渴证（糖尿病）中药的药效学研究 (33) 38、安胎保婴中药的药效学研究 (34) 39、调经中药的药效学研究 (35) 40、治疗淋证（泌尿系感染）中药的药效学研究 (36) 41、治疗慢性肾炎中药的药效学研究 (37)
实验十一抗生素的抑菌试验 一目的要求 1、掌握纸片法测定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌谱 二实验原理 抗生素是某些植物与微生物生长到对数期前后所产生的次生代谢产物，其在低浓度下可其它微生物生长具抑制作用或杀死作用的物质。抗生素对敏感微生物的作用机理分为抑制细胞壁的形成、破坏细胞膜的功能、干扰蛋白质合成及阻碍核酸的合成。 由于不同微生物对不同抗生素的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作用范围成为抗生素的抗菌谱，作用对象广的抗生素称为广谱抗生素，作用对象少的抗生素称为窄谱抗生素。而且当某种抗生素长时间用于敏感微生物生长后，即使同一种菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生抗性菌株，则抗生素将失去对抗性菌株生长的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生长与繁殖，因而不断开发新的抗生素是保健人类身体健康的重要工作。新抗生素产生菌的分离筛选应通过拮抗菌发酵，然后以发酵产物进行抗菌活性实验，根据实验结果而获得产新抗生素的菌株。微生物代谢产物的抗菌活性常以管碟法与纸法进行检测，根据透明抑菌圈的有无与大小作为依据。 三实验器材 1、菌种枯草杆菌、大肠杆菌。 2、培养基MH（Mueller-Hintion）琼脂。 3、试剂青霉素、链霉素。 四方法步骤 1、无菌滤纸片以孔径6mm打孔器将滤纸打为圆形纸片，放入培养皿内，121℃蒸汽湿热灭菌，100℃烘干2h。 2、抗生素溶液制备将取适量青霉素、链霉素，以无菌水溶解。 3、指示菌悬浮液的制备枯草杆菌、大肠杆菌斜面菌种分别以无菌水洗下菌苔细胞，到入无菌三角瓶内，制备适宜浓度的细胞悬浮液。 4、混菌平板制备取批示菌细胞悬浮液1mL加入无菌培养皿内，再加入温度为43~45℃的PDA培养基或牛肉膏蛋白胨琼脂培养基20mL，立即振荡使细胞与培养基混合均匀，静置冷凝。 5、平板加抗生素溶液将滤纸片在抗生素溶液中充分浸泡2min以上，然后将纸片放于混菌平板上，每皿呈三角形放3点，每点贴放纸片2张。 6、培养与观察将平板放于33℃左右的温度培养，每24h测量一次透明抑菌圈直径，共测量3次。
新药临床前药效学评价的体会 新药临床前药效学评价的体会 更新日期：2009-11-23点击：高月，杨素娟，陶来宝，付艳荣，谭红铃 摘要：对十余个新药的临床前药效学评价工作作了论述。讨论了建立相应实验模型和实验方法的经验、问题及体会。 关键词：新药评价；疾病模型，动物；评价指标；筛选方法 中图分类号：R965文献标识码：B文章编号：1003-9783(1999)03-0136-02 近十年来，我室进行了十几个新药临床前药效学评价，包括中药、西药和生物制剂。积累了经验，建立了相应的实验模型和方法，同时也存在一些问题及想法，讨论如下。 1动物及模型 健康的动物是完成临床前药效学评价的最基本条件，不健康的动
物必定出现各种不正常的反应而致假阴性或假阳性结果。此外，动物和人种属差异很大，人与动物在药效学、毒理学及药代动力学方面都存在着对药物质与量反应的差异。所以，临床前药效学评价应根据药物作用的特点尽可能选择与人同源性大的动物，并且在动物品种的选择上要尽可能多选几种动物。目前存在的主要问题是动物合格率低，品种少，有些动物甚至根本没有，如国外常用的食蟹猴等，大鼠也只有Wistar品系，这极大限制了药效学评价的选择范畴。 我们的新药评价建立了多种多样的模型，主要观察一个新药在不同种属、不同方法所致模型中的药物效果。但要指出的是，任何一种动物模型都不能替代临床药理的研究。人和动物对药物的敏感性差别很大，有些药物对动物有效，而对人无效。反之，有些药物对人有效，而对动物无效。因此，动物模型的选择至关重要。 2指南与指标 许多药物的评价已不是单指标所能满足的，更需要多指标的综合评价。如果只按照研究指南中的规定去单纯评价某一新药的有效性，就会使得药效学评价过于死板和僵化。因此，除了从技术的角度对所研究的新药进行规范化评价外，还需要根据每一个新药的特色及适应症进行全面的综合探讨，确保每一个新药做到立法有据，安全有效。我们曾进行了中药复方益心康治疗心血管疾病的药效学评价，除按《中药新药研究指南》中的有关要求进行心肌缺血、心脏功能、
抗肿瘤药物药效学指导原则 一、基本原则 1. 抗肿瘤药物分类 (1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等； (2) 生物反应调节剂(biological response modifier)； (3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)； (4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)； (5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)； (6) 分化诱导剂(differentiation inducing agent)； (7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)； (8) 反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。 2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容 2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。 2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。 2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。 二、体外抗肿瘤活性试验 1. 试验目的 1.1 对候选化合物进行初步筛选； 1.2 了解候选化合物的抗瘤谱； 1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。 2. 试验方法 选用10-15株人癌细胞株，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养；推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺
酰罗丹明B染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。 3. 评价标准 以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。体外试验至少重复一次。 附注：评价药物抗癌活性的方法： 1. MTT还原法 1.1 基本原理： 四氮唑[MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide]是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲[月替] (formazan)，而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲[月替]后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。 1.2 操作步骤: 1.2.1选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMI l640培养基配成5000个／ml的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔接种200μl，37℃，5％CO2 培养24 h。 1.2.2 实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3～5平行孔，37℃，5％CO2 培养4～5 d。 1.2.3 弃去上清液，每孔加入200 μl新鲜配制的含0.2 mg／ml MTT的无血清培养基．37℃继续培养4 h。小心弃上清，并加入200 μl DMSO，用微型超声振荡器混匀后，在酶标仪上以试验波长为570 nm，参比波长为450 nm测定光密度值。1.3 结果评定: 按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率： 肿瘤细胞生长抑制率％＝(1- OD实验/OD对照) ×100％
临床疗效的评价 绪论 临床治疗研究的发展 ?正反两方面的经验和教训 ?发展了科学性的临床疗效考核方法 ?大量临床试验的结果开始用于指导临床医师的医疗实践, 循证医学的发展?随着大量新的防治手段的出现，对治疗的安全性应有足够的认识 评价的内容： ?药物 ?手术 ?预防措施 ?治疗方案（如肿瘤化疗) ?特定形式的治疗单元的评价（如冠心病监护病房的作用) 临床疗效评价的重要性 ?循证医学 询证医学简介 ?定义：evidence-based medicine, EBM ?基本思想:任何临床决策的确定，都要基于临床科研所取得的最佳数据。证据是基石询证医学与产生的背景 传统医学与询证医学的区别 询证医学与临床药效学评价 ?证据：按质量与可靠程度分为5级 ?证据分级，推荐分级 对临床治疗设想进行检验的重要性 ?临床治疗本身的复杂性 –许多疾病产生的机理并未完全了解，多病因共同作用 –治疗措施本身可以对人体产生多方面的作用 –人体疾病的复杂性：轻重、病程、并发症、药物间的作用 ?避免下结论时的主观性 临床疗效评价设计的原则(1) ①明确的研究目的和检验假设 ②确定疗效考核指标及具有临床意义的最小疗效 ③明确入选标准和排除标准 ④正确设立对照组和进行随机化分组 ⑤由②计算出需要研究的病例数 临床疗效评价设计的原则(2) ⑥制订干预措施、步骤、时间、中止治疗原则 ⑦采用盲法原则 ⑧选用正确的统计分析方法 ⑨对结果作出正确的解释
?最重要的是对照组的设立和采用随机化分组的原则 临床疗效评价基本设计方案： ?临床试验: –随机对照临床试验 –非随机同期对照研究 –历史对照研究 –自身前后对照研究 –交叉对照研究 –序贯试验 临床疗效评价的三大要素 设立对照 随机分组 盲法评定 设立对照组的重要性 ?治疗后所产生的病情变化，不仅仅是所给治疗的特异性作用结果，还可能包含： –疾病的自行缓解 –霍桑效应： –安慰剂效应: 临床疗效评价的目的 ?识别所考核治疗措施本身的特异性治疗作用 –最好的方法就是在治疗组以外，另行设立一个同样受到关注的对照组，并给予安慰剂，最后将两者的结果进行比较，得出结论。 ?确定新的治疗方法的不良反应或安全性 理想的对照组 ?除了未接受所考核的治疗措施外，其病情特点和预后因素，以及同时接受的其它治疗措施均应与治疗组病例相同，即 治疗组和对照组应均衡可比 对照组的设立方法(1) ?根据对照组患者所接受治疗内容 ?根据对照组和治疗组的时间关系 ?根据对照组来源的不同 对照组所接受的治疗 ?空白对照：对照组不给任何处理 ?安慰剂对照 ?标准对照（“阳性对照”） 安慰剂对照 ?安慰剂：不含活性成分的制剂 –确定受试药物的“ 真实” 或” 绝对” 疗效与不良反应 –适用于病情较轻
关于中药新药临床前药效学评价的思考
关于中药新药临床前药效学评价的思考 摘要：中医药是中国的传统医药，在维系中华民族的繁衍昌盛中起过重要作用，特别是在防治许多慢性疾病中具有目前西药无法比拟的优势。但是，由于种种原因，目前我国的中药制剂在国际市场的占有率仅为3％～5％，究其原因主要有以下几点：一是成分不清，致使无法对中药的质量进行有效控制；二是目前在市场上生产、销售的中药品种虽多，但多数品种没有自身的作用特点，致使临床医生无法进行正确选择。三是临床前研究结果与临床疗效相差甚远。造成上述情况的原因固然与目前的检测技术有关，也与目前没有合适的符合中医药理论的疾病（或证候）动物模型有关；以及进行中药药效学评价相关手段、检测技术远远落后于实际需要有关；更为重要的是与从事中药药效学评价的科研人员素质偏低、研究方案的设计缺乏科学性密切相关。为加快中药现代化的步伐，必须加强中医临床与基础研究的密切配合，尽快突破中医证候动物模型难关，为中药药效学评价提供可靠的研究对象；加强相关平台建设，为系统阐述中药有效性的相关机制提供保障；加强相关人才队伍的建设，提高中药药效学设计方案水平，凸现中药疗效特色，为指导临床合理用药提供科学的理论依据和实验依据。 关键词：中药新药；药效学；评价 中医药是我国的传统医药，在维系中华民族的繁衍昌盛中起过重要作用，特别是在防治许多慢性疾病中具有目前西药无法比拟的优势。但是，由于种种原因，目前我国的中药制剂在国际市场的占有率仅为3％～5％，其根本原因与目前中药新药质量标准低下有关（目前多数中药的质量控制指标与其有效性脱节，也与其安全性失耦联），也与目前临床前药效学评价技术含量不高密切相关。 1 中成药广泛用于临床，但缺乏指导其合理使用的实验依据 中药是指在我国传统医药理论指导下使用的药用物质及其制剂。这种定义给人们的印象就是中成药只限于中医院的中医师，而西医师就不能使用中药，但这种现象并不是真实的。近年来，中成药以其疗效确切、副作用较小而越来越受到医生和患者的青睐，随着国家对中成药开发的投入加大，中成药的质量得到了明显提高。有人统计发现中成药在三级甲等综合医院的使用比例约为12％～14％，这个比例仅次于西药抗生素的用药比例［1］，提示，中成药并非只是中医院的中医师在使用，许多西医医生也在大量地使用中成药。进一步
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准 4.３标准比浊管 用硫酸钡比浊管(０、5麦氏比浊标准),标定接种菌液浓度。比浊管制备方 法如下:(１)0、048mｏl/L BaＣｌ 2,(１、175% w／v BaＣｌ 2 ·2H 2 O)0、５ml, 加到99、5ml的０、18 mol/Ｌ(0.3６N)H 2SＯ 4 (1％v/ｖ)溶液中,制成比浊管;(2) 用光径为1cｍ的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。0、5麦氏标准比浊管在６25nｍ波长的吸收光度应为0、0８-0、1;(3)选管径与制备菌液试管相同的螺口试管,每管分装4-6ml;(4)将试管帽拧紧,放室温暗处保存;(5)用前,将比浊管在旋转振荡器上混匀。如出现大颗粒,应更换;(6)每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。 ５操作步骤 5、1 制备接种菌液 5、1、１增菌法步骤如下:(1)选琼脂平板上形态相同的菌落至少4-5个,用接种环挑其顶部,移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中;(２)置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度(一般需2－6小时),浓度约1－２×10８CFU/ml;(３)用生理盐水或肉汤校正菌液浓度,与比浊管相同。可用光电比浊。目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。 5、１、2 直接菌悬液法步骤如下:(1)做常规药敏试验,可直接用过夜培养的菌落(必须用无选择性培养基平板,如普通琼脂培养基)在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0、5麦氏管;(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌与链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验;(３)当用此法做复方磺胺药的试验时,从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂,造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。 ５.2 接种平板步骤如下:(1)校正的菌液须在15分钟内使用。用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次,去掉过多的菌液;(2)用试子涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,每次将平皿旋转60度,保证涂布均匀。(3)将平皿盖打开3-5分钟,使培养基表面的水份吸收掉。然后贴药敏纸片;(4)注意:避免用过浓的菌液,禁用未经稀释菌或其她不标准菌液接种平板。 5、３贴纸片 (1)接种平板后,贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀,纸片与纸片中心距离不得小于24mm。原则上,直径150ｍm得平板贴１2张纸片,直径100mm平板贴5张纸片。纸片贴后不应再移动,因为有些药物会立即扩散;(2)贴上纸片15分钟内,须把平板倒放在35℃恒温箱中。因为抑菌环解释标准就是在普通环境中标定的,所以除嗜血杆菌与淋病 奈瑟氏菌外,平板不可放在高CO ２的环境中。ＣO 2 与某些因素作用可使抑菌环增 大。 5、4 读取结果 (１)经16-18小时培养后,观察结果。菌液浓度适合且涂得好,抑菌环规则,细菌呈融合生长。如果出现单个菌落,说明接种量小,需重做试验,测量抑菌环直径须包含纸片直径:手持平皿从背面目测检查每块平板,借反射光(黑色无放光背景),用卡尺、普通尺或特制的模板量取抑菌环直径,单位为毫米。培养基中如果加了血液,须打开平皿盖,借反射光,从正面量抑菌环。如果就是葡萄球菌或肠球菌,须培养２4小时后,经投射光检查苯唑青霉素与万古霉素的抑菌
第三章中药药效学研究的基本要求与方法 第一节中药药效学研究的基本要求 中药新药的基本要求是安全、有效、质量可控和稳定。药效学是中药新药研究与开发的重要内容。 一.药效学研究的基本目的 （一）通过药效学研究确定有效性 通过药效学研究可以初步明确新药是否有效，作用的强弱，与同类药比较在药效上的优缺点和特色，确定有无实用价值及开发前景，结合毒理学研究结果，确定可否进行人体试验及临床研究。 （二）提高临床疗效 通过作用机制研究及配伍规律研究，可以揭示药物作用的物质基础和作用原理，使临床使用充分发挥药物特色，提高临床疗效。中药新药的药效学研究应充分运用现代科学特别是现代医学的理论、方法和手段，制定科学、严密、具有中医药特点的试验计划。根据新药的特点、功能主治、临床实践经验及近年研究成果，合理选用试验方法，建立与临床相符的“病”“症”或“证”相似的动物模型与指标，对新药的有效性作出科学的评价。 对天然药物及中药中提出的单一化合物不强求用中医药理论来指导 二.药效学基本要求 （一）试验负责人 应是具有药理、毒理专业高级职称和有较高理论水平、工作经验与资历的人员。确保试验设计合理，数据可靠，结论判断准确。试验报告应有试验负责人签名及单位盖章。 （二）受试药物 应处方固定、制备工艺及质量基本稳定。 （三）研究单位 从事新药安全性研究和药理研究的实验室应符合国家《药品非临床研究质量管理规范》GLP (Good Laboratory Practice)的要求。具有较高的科研水平、技术实力，组织管理，具有较好的客观条件，其实验室、仪器设备、药品试剂等，均应符合要求。 （四）实验动物 应符合国家规定的要求，种属、性别、年龄、健康状况、饲养条件、动物等级、特殊模型动物等，均应符合试验要求。 （五）试验记录 1.记录要求：实验记录应真实、完整、详细、准确、规范，防止漏记和随意涂改，对试验中出现的新问题和特殊现象应详细写明情况。描记和形态学检查应有记录图和照片。不得伪造、编造数据。记录应符合国家《药品研究实验记录暂行规定》的要求。 2.记录内容： 实验名称：每项实验首先记录课题名称及实验名称。 实验方案：实验方案是进行实验的依据。实验首页应有一份详细的实验设计及方案。 实验日期：每次实验须记下年、月、日及时间。 试验动物：种属、性别、年龄、数量、健康状况、提供单位、合格证，动物等级或特殊模型动物、饲养管理、试验前观察与处理，随机分组的方法。 试验用药：品种、学名、产地，提取工艺，药物含量、浓度，给药剂量与容积，给药途径、次数、时间。阳性对照药的选择依据、处方、功能主治，生产厂家名称，批准文号，生产批号及出厂日期，实验前预处理，有无特殊溶媒、基质、防腐剂、助溶剂、填加剂等。试验用其他药品试剂的品名、规格、生产厂家、批号等。 主要仪器及试验用品：型号、规格、性能、生产厂家及批号等。
怀化医专《微生物学检验》教案编号：10
细菌对抗菌药物敏感试验 药敏试验(antimicrobial susceptibility,AST) （一）概念：在体外检测药物抑制或杀死细菌能力的试验。 （二）检测意义： 1、疾病的治疗：指导用药。 2、耐药菌检测和流行病学调查。 3、评价新药抗菌作用。 4、某些菌种的鉴定。 第一节临床常用的抗菌药物 抗菌药物：是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。 一、青霉素类抗生素： 青霉素种类抗菌活性 1、天然青霉素不产青霉素酶的G+G-球菌、普雷沃菌等。 青霉素G、青霉素V 2、耐青霉素酶青霉素产青霉素酶的G+G-球菌 甲氧西林、奈夫西林、苯唑西林等 3、广谱青霉素青霉素G敏感细菌、大部分大肠埃希菌、 氨苄西林、阿莫西林奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等G-菌 替卡西林、羧苄西林、氨苄西林无效的G-菌，产β-内酰胺酶 美洛西林、派拉西林克雷伯菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌、厌氧菌 二、头孢菌素类抗生素： 1、第一代头孢菌素 （头孢噻啶、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢羟氨苄等） 作用：对G+菌作用强，如金葡菌、链球菌等。 2、第二代头孢菌素 （头孢羟唑、头孢呋辛、头孢克洛、头孢尼西、头孢雷特等） 作用：产青β-内酰胺酶G-菌有作用，如肠杆菌科细菌，铜绿假单胞菌等。 3、第三代头孢菌素 注射用头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢派酮：对产青β-内酰胺酶G-菌有很大
抗菌活性。 口服用头孢克肟、头孢布坦等：对肠球菌、铜绿假单胞菌及不动杆菌无用。 4、第四代头孢菌素（头孢匹罗、头孢匹美） 作用：对肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌作用强。 三、其它β-内酰胺类抗生素： 1、单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南、卡芦莫南） 对G-菌作用强 2、头霉素类：对G+菌、厌氧菌作用较好 氧头孢烯类抗生素：抗菌谱广，对产β-内酰胺酶G-菌作用强，对产酶的金葡菌有效3、碳青酶烯类抗生素（亚胺培南、米洛培南等） 广谱（最广），抗菌活力强 4、β-内酰胺酶抑制剂（克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦） 与β-内酰胺类抗生素联用能增强后者的抗菌活性。 四、氨基糖苷类抗生素： 链霉素、卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素、奈替米星、阿米卡星等 作用：对需氧G-杆菌有强大抗菌活性 对沙雷菌属、气单胞菌属、产碱杆菌、不动杆菌属、分枝杆菌属也有一定抗菌活性。但对G-球菌效果差。 五、喹诺酮类抗生素： 第一代：（新恶酸等）窄谱抗生素（G-） 第二代：（环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等）对G+G-菌均有作用。 第三代：（斯帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等）超广谱抗生素。 六、大环内酯类抗生素： 红霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素等 作用：和青霉素相似，主要是G+菌、厌氧菌。 新一代：克拉霉素、罗红霉素、地红霉素、氟红霉素、阿齐霉素等。 七、四环素、氯霉素、林可酰胺类抗生素： 八、糖肽类抗生素 九、磺胺类药物及其增效剂
发布日期20061120 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题抗肿瘤药物药效学评价中的关注问题 作者王海学彭健 部门 正文内容 审评五部王海学彭健 抗肿瘤药物在新药研发中占较大比例。一方面是因为肿瘤疾病目前仍是威胁人类生命的难治性疾病，另一方面也是因为生命科学技术的发展为新抗肿 瘤药物的研发提供了理论基础，如目前正在热点开发中的酪氨酸激酶抑制剂。 抗肿瘤药物研发面临的风险也很大，其主要问题之一是部分临床试验的新药并没有给患者带来明显获益。我们可以接受有一定毒性的新药进入临床试 验，但无明显疗效的新药在临床研究中会被最终淘汰。因此抗肿瘤创新研究 应关注有效性的问题。就其非临床药效学研究而言，应考虑在尽量多的药效 学试验中筛选出可能具有潜力的新化合物。
药品审评中心已经对抗肿瘤药物的非临床研究的制定了相关指导原则，其中包括药效学的研究和评价内容。本人根据自己对抗肿瘤新药药效学审评的体会，进一步总结了抗肿瘤新药药效学评价中需关注的几个问题，以供研发者参考。 一、体外试验 一般应从敏感及天然耐药的人癌细胞系中选用至少12种进行试验。选择肿瘤细胞系时应考虑到细胞的生长和增殖速率，试验还应同时考察药物对正常人源细胞的影响，以考察药物对肿瘤细胞和正常细胞影响的差异。药物与细胞共培养的时间一般为48~72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照为标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。试验至少应重复一次。 二．体内试验 体内试验通常采用动物肿瘤移植模型和人癌移植模型。动物肿瘤移植模型与临床疗效之间的相关性不强，仅可用于侯选化合物的初步筛选。但为了证明新药可能具有明显的抗肿瘤作用，建议在尽可能多的模型中评价其抑瘤作用。目前的评价标准是至少在3种以上模型中显示有明显的抗肿瘤活性。 试验设计：应在移植肿瘤生长至一定大小后开始给药，如达到100mm3以上。受试药物一般包括高、中、低3个剂量的治疗组、阳性对照组和阴性对照组。治疗组受试物剂量的选择应能够体现出药物的量效关系，高剂量不
抗菌药物敏感试验、细菌耐药性检测题库 1-1-6
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列关于K-B纸片扩散法操作的描述错误的是（） A.各纸片中心距离不小于24mm B.纸片距平板内缘不应大于15mm C.直径90mm的平皿可贴6张纸片 D.纸片贴牢后避免移动 E.培养16~18小时后读结果 本题要点为纸片扩散法，其药物纸片各中心应相距24mm，纸片距平板内缘15mm，35℃培养16~18小时后阅读结果。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]培养基的pH过低时，其抑菌圈可扩大的是（） A.米诺环素 B.庆大霉素 C.红霉素 D.诺氟沙星 E.头孢菌素 本题要点为纸片扩散法的培养基要求，其pH值为7.2~7.4，过高或过低的pH值会影响药物效能。碱性可扩大氨基糖苷类药物的抑菌圈，酸性可扩大四环素类药物的抑菌圈，米诺环素为四环素类抗菌药物。
辽宁11选5 https://www.doczj.com/doc/7710615570.html, 问题： [单选,A2型题,A1A2型题]ESBL菌株感染者治疗应选用（） A.青霉素 B.氨苄青霉素 C.头孢氨苄 D.亚胺培南-西司他丁 E.氨曲南 目前认为亚胺培南是治疗产ESBL菌感染的最佳选择，产ESBL菌重症感染的患者应首选亚胺培南治疗。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]可同时做测定某种药物对多株菌的MIC的方法为（） A.纸片琼脂扩散法 B.肉汤稀释法 C.琼脂稀释法 D.E试验 E.直接药敏试验 琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时做多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
抗肿瘤药物药效学评价中的关注问题 审评五部王海学彭健 抗肿瘤药物在新药研发中占较大比例。一方面是因为肿瘤疾病目前仍是威胁人类生命的难治性疾病，另一方面也是因为生命科学技术的发展为新抗肿瘤药物的研发提供了理论基础，如目前正在热点开发中的酪氨酸激酶抑制剂。 抗肿瘤药物研发面临的风险也很大，其主要问题之一是部分临床试验的新药并没有给患者带来明显获益。我们可以接受有一定毒性的新药进入临床试验，但无明显疗效的新药在临床研究中会被最终淘汰。因此抗肿瘤创新研究应关注有效性的问题。就其非临床药效学研究而言，应考虑在尽量多的药效学试验中筛选出可能具有潜力的新化合物。 药品审评中心已经对抗肿瘤药物的非临床研究的制定了相关指导原则，其中包括药效学的研究和评价内容。本人根据自己对抗肿瘤新药药效学审评的体会，进一步总结了抗肿瘤新药药效学评价中需关注的几个问题，以供研发者参考。 一、体外试验 一般应从敏感及天然耐药的人癌细胞系中选用至少12种进行试验。选择肿瘤细胞系时应考虑到细胞的生长和增殖速率，试验还应同时考察药物对正常人源细胞的影响，以考察药物对肿瘤细胞和正常细胞影响的差异。药物与细胞共培养的时间一般为48~72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照为标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。试验至少应重复一次。 二．体内试验 体内试验通常采用动物肿瘤移植模型和人癌移植模型。动物肿瘤移植模型与临床疗效之间的相关性不强，仅可用于侯选化合物的初步筛选。但为了证明新药可能具有明显的抗肿瘤作用，建议在尽可能多的模型中评价其抑瘤作用。目前的评价标准是至少在3种以上模型中显示有明显的抗肿瘤活性。 试验设计：应在移植肿瘤生长至一定大小后开始给药，如达到100mm3以上。受试药物一般包括高、中、低3个剂量的治疗组、阳性对照组和阴性对照组。治疗组受试物剂量的选择应能够体现出药物的量效关系，高剂量不宜超过受试物的最大耐受剂量。应根据受试物的药动学特点和毒性反应等确定给药频率和周期；给药途径应尽量与推荐临床用药的途径相同。强调选用合理的阳性对照药，用于验证模型的成功性，并比较新药与现有标准治疗药物的药效学差异。阴性对照组应给予相应的溶剂或辅料。 具有抗转移作用特点的新药应考虑选择具有转移作用的肿瘤疾病模型。 检测指标：推荐使用测量瘤径的方法，动态观察受试物的抗肿瘤效应。肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定，一般为每周2~3次。在试验中还应该观测与药物安全性有关的指标，如动物体重增长和死亡率，将治疗组的这些数据与标准治疗对照组进行比较，对于判断药物的安全性和开发前景具有重要的意义。试验中应记录检测指标的变化与给药时间的关系，以便了解药物的作用特点，减少单次记录试验结果可能引起的误差。体内抗肿瘤试验结果中还应同时附有相应的照片。此外，鼓励药效学研究中测定血液和肿瘤组织中的药物暴露量，以进行PD/PK分析和上临床前新药安全性范围的评估。 三、联合用药的药效学研究 临床上抗肿瘤治疗多数采用联合用药方案。新化合物在临床前药效学研究中单药使用不一定能够显示出优越的抑瘤作用，但若与其它化疗药物合用具有增效减毒特点，也会提示新药的开发潜力。因此建议在药效学研究设计合理的联合用药方案，为新药的临床试验和成功性提供更多依据。