附件1 手足口病标本采集及检测技术方案
一、采集标本的种类、保存和运输
（一）粪便标本。
采集病人发病3 日内的粪便标本，用于病原检测。粪便标本采集量5-8g/份，采集后立即放入无菌采便管内，外表贴上带有唯一识别号码的标签，4℃暂存12 小时内送达实验室，-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。
（二）咽拭子标本。
采集病人发病3 日内的咽拭子标本，用于病原检测。用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3-5ml 保存液（含5%牛血清维持液或生理盐水，推荐使用维持液）的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。4℃暂存并在12 小时内送达实验室，-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。
（三）血清标本。
各省（区、市）在手足口病流行年份中均应采集EV71 和CV A16感染的手足口病患儿的双份血清。采集急性期（发病0-7d）和恢复期（发病14-30d）双份配对血清用于阐明和分析EV71和CV A16感染后IgG和IgM抗体的动态变化，评价血清学抗体试剂盒的敏感性和特异性。静脉采集3-5ml全血，置于真空无菌采血管中，自凝后，分离血清，将血清移到2ml 外螺旋的血清保存管中，外表贴上带有唯一识别号码的标签。将血清置于-20℃以下冰箱中冷冻保存。
（四）疱疹液。
在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液中分离到病毒即可确诊该病毒为病因，可同时采集多个疱疹作为一份标本。先用75%的酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入内装有3-5ml保存液（含5%牛血清维持液或生理盐水，推荐使用维持液）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签。所采集标本4℃暂存立即（12h 内）送达实验室，－
20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。
（五）肛拭子标本。
采集病人发病3日内的肛拭子标本，用于病原检测。用专用采样棉签，从患儿肛门轻轻插入，适度用弧型左右擦拭数下，拔出后,迅速将棉签放入装有3－5ml保存液（含5%牛血清细胞维持液）的15ml外螺旋的采样管中，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签。在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖，并密封，以防干燥。
（六）尸检标本。
采集脑、肺和肠淋巴结等重要组织标本，每一采集部位分别使用单独的消毒器械。每种组织应多部位取材，每部位应取2-3份约5-10g的组织，淋巴结 2 个，分别置于15ml-50ml 无菌的有外螺旋盖的冻存管中，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签。
（七）脑脊液标本。
出现神经系统症状的病例，可采集脑脊液标本，进行病毒分离或核酸检测。采集时间为出现神经系统症状后 3 天内，采集量为1.0-2.0ml。采集后立即装入无菌带垫圈的冻存管中，4℃暂存立即(12h 内)送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱。但EV71 感染神经系统时，很难在脑脊液中检测到EV71病原。临床标本在运输和贮存过程中要避免反复冻融。标本采集后要全程冷藏或冷冻保存和运输，12小时内送达实验室。依照《人间传染的病原微生物名录》，肠道病毒或潜在含有肠道病毒的标本按B类包装，置于冷藏保存盒内运输，尽量缩短运输时间。可采用陆路或航空等多种运输方式，但在运输过程中应采取保护措施，避免强烈震动、重力挤压等现象。在送到省、地、市级CDC实验室时，包装盒内应带冰且包装完整。在上送标本的同时，需附带相关的《手足口病病例临床标本采样登记表》。
二、标本采集注意事项
在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离到病毒即可诊断该病毒为病因。用于采集咽拭子的无菌拭子要放在标本保存液中，如含5%牛血清维持液。用于分子生物学诊断的标本采集与病毒分离标本的采集方法一样。为了保证检测结果的准确性和有效性，标本应在病例发病后尽早采集，尽快检测。不能立即检测的标本应冷冻保存。对于血清学诊断，
急性期血清应该在发病后尽早采集，恢复期血清在发病两周后采集。标本保存液的配置见下表：
保存液
Eagle`s 液(MEM) 80.5ml
3%L-谷氨酰胺200mM 1.0ml
胎牛血清 5.0ml
7.5%NaHCO3溶液 3.5ml
青、链霉素10ml
（各10000U/ml）
三、实验室检测操作流程
（一）病毒分离。
1.试剂配置
（1）细胞的生长液、维持液的配制见下表：
生长液（GM）维持液（MM）Eagle`s 液(MEM) 86.5ml 92.5ml
3%L-谷氨酰胺200mM 1.0ml 1.0ml
胎牛血清10.0ml 2.0ml
7.5%NaHCO3溶液 2.5ml 3.5ml
青、链霉素 1.0ml 1.0ml
（各10000U/ml）
（2）粪便标本和肛拭子的处理液
完全PBS 液中加入P．S 溶液，终浓度为青霉素100 单位/ml，链霉素为100μg/ ml。完全PBS 液的配置：取以下 1 份 B 液和 1 份 C 液加到8 份 A 液中即为完全PBS工作液。
A液：
试剂品名加入量
NACL 8.00g
KCL 0.20g
Na2HPO4(无水) 0.91g
KH2PO4 0.12g
用600～800ml蒸馏水溶解以上盐类，加蒸馏水补至1000ml，10psi（70Kpa）15分钟高压灭菌，即为不完全PBS工作液（不含钙、镁离子）。
B液：
溶解于100ml蒸馏水中，10psi（70Kpa）15分钟高压灭菌。
C液：
溶解于100ml蒸馏水中，10psi（70Kpa）15分钟高压灭菌。
2．病毒分离细胞系
许多细胞系可支持人肠道病毒（如EV71、CV A16）生长。对于检测手足口病的病原来说，建议所有怀疑含EV71、CV A16 等肠道病毒感染的标本均需接种到以下两种细胞系： RD细胞，来源于人横纹肌肉瘤细胞。
HEp-2细胞，来源于人喉癌上皮细胞。
3．标本的处理
（1）粪便标本和肛拭子的处理
操作步骤：
1）在离心管上标记标本号；
2）每管中加入10ml PBS、1g玻璃珠、1ml氯仿；
3）在生物安全柜中将每一份粪便标本取大约2g加入标记好的离心管中（确保离心管上的标号与原始标本的标号一致）；肛拭子为2ml；
4）剩余的原始标本最好留在原容器中，冻存于－20℃；
5）确保拧紧离心管，用机械震荡器剧烈震荡20min；
6）在确保离心机的盖子盖好和离心桶密封的情况下，用冷冻离心机在1500g条件下离心
20min；
7）在生物安全柜中将每1 份标本的上清液分别吸入2 个有外螺旋盖的冻存管中（如果上清液不清澈，应再用氯仿处理1次）；
8）1 管粪便悬液冻存于－20℃作为备份，另1 管存于4-8℃以备接种。
（2）疱疹液标本的处理
疱疹液标本通常直接用于RNA提取或病毒分离。
（3）脑脊液标本的处理
脑脊液标本通常直接用于病毒分离。
（4）咽拭子标本的处理
咽拭子要在标本运输（保存）液中充分搅动（至少40 下），以洗下拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，用于病毒分离时，需要冻融一次（防止多次冻融），使细胞破裂，释放病毒颗粒。然后在4℃条件下，10000 rpm 离心20min，用上清接种到细胞上或直接提取RNA。如果发现有细菌污染，须用滤器过滤除菌。
4．接种和观察（病毒分离）
（1）通常使用８ml的斜面试管培养细胞，传细胞时，每管加细胞培养液1.5ml。显微镜下观察单层细胞，以确保细胞是健康、无污染的。一个健康的单层细胞会在传代后48小时左右形成；
（2）倒掉生长液（GM），换上1-1.2ml的维持液（MM）；
（3）每一份标本需要同时接种 2 支RD 细胞和 2 支HEp-2 细胞，正确标记每支细胞培养管（包括标本的编号、日期、传代数）；
（4）每一种细胞至少标记一管作为阴性对照；
（5）每支试管接种0.2ml的标本悬液，培养温度要求36℃。（或者使用吸附的方法接种病毒：接种标本前，倒掉生长液（GM），每支试管接种0.2ml 的标本悬液，培养温度为36℃；吸附 1 小时后，换上1.5ml的维持液（MM）。同样每份标本需同时接种2支RD细胞和2支HEp-2细胞。
（6）使用倒置显微镜每天观察细胞培养管，以观察有特征性的肠道病毒致细胞病变效应（CPE）的出现（如细胞变圆，折光增强并脱离管壁等）；
（7）记录接种管和对照管细胞所发生的变化至少一周，记录CPE（1+—4+）、提示细胞
受毒性反应、老化或污染的影响而发生的变化（1+，<25%; 2+, 25%-50%; 3+, 50%-75%; 4+, 75%-100%）；
（8）如果有特征性的肠道病毒CPE出现，要如实记录，并观察直到75%的细胞发生变化（3+ CPE），然后储藏在－20℃以备二次传代；
（9）第一代培养见可疑细胞病变时应继续传代，待细胞病变稳定出现后－20℃或－70℃冻存；
（10）一代阳性分离物再传二代，如果又有明显的CPE 出现，将病毒保存在－20℃冰箱（二代病毒）。因二代病毒滴度高于一代病毒，所以选用二代病毒进行鉴定；
（11）如果7d之后没有CPE出现，那么盲传1代继续观察7d。（注意：同一病例标本的细胞培养物不能混在一起再传代，例如：不同细胞的培养物应单独传代）；
（12）盲传两代后，仍然没有出现CPE的，则判定为阴性；
（13）注意：如果接种后24h内出现CPE，很可能是标本中的非特异性成分导致的毒性反应。取100μl 阳性分离物传二代，继续观察；或者在接种标本吸咐1h后用维持液清洗细胞层，可能会降低毒性反应；
（14）几个概念：
A：毒性反应：如果在接种后1-2d 内细胞快速凋亡，这可能是由于标本中含有毒性物质而导致的非特异性毒性反应。这些已接种标本的试管应在-20℃冻存，融化后取0.2ml接种到同一类型细胞中（此时是第二代）。如果又出现了毒性反应，那么应该取原始标本用PBS稀释10倍，再次接种到同种细胞中。这时应被认为是第一代。
B：微生物污染：由于细菌污染而造成培养液混浊或细胞死亡经常使病毒造成的CPE 无法确定或根本无法出现。重新取原始标本，用氯仿或抗生素处理，按上述步骤重新接种到新鲜细胞上。
C：盲传：有时一周之后传代细胞会老化，甚至细胞对照也出现了病变。这时已接种标本的试管应在-20℃冻存，融化后取0.2ml接种到同一类型的新鲜单层细胞中，再观察7-10d。如果盲传两代后仍然没有产生CPE，那么认为这个标本是阴性的。
5．病毒分离结果解释
RD 细胞支持HFMD 的主要病原体——CV A16 和EV71 等多种肠道病毒的复制，CV A16和EV71均能在RD细胞培养中引起特殊的肠道病毒致细胞病变效应（CPE），表现为细胞圆缩、分散、胞浆内颗粒增加，最后细胞自管壁脱落。但相同滴度的CV A16 和EV71 在RD 细胞中生长的速度不同，EV71 的生长速度要快于CV A16，表现为EV71 感染RD 细
胞后出现CPE的时间比CV A16早，EV71接种细胞后出现CPE很快，但CV A16一般要经过2次以上传代才出现明显的CPE。若在使用RD细胞分离的同时再增加HEp-2细胞，可提高肠道病毒的分离率（分离出其他可能致HFMD的病原体，如一些柯萨奇B组病毒）。但CV A16和EV71在HEp-2细胞中均不繁殖。
（二）测定人双份血清标本的中和抗体滴度。
比较患者急性期血清与恢复期血清中和抗体滴度，可作为肠道病毒感染的血清学诊断方法，最常用的是中和实验，即用微量板法测定抗体滴度，是目前人肠道病毒抗体检测的最常用方法，该方法精确且具有型特异性。作为肠道病毒感染的诊断方法之一，可以测定血清中肠道病毒中和抗体的滴度，通常用急性期血清与恢复期血清滴度进行比较，抗体滴度 4 倍或4 倍以上增高证明病毒感染。但是，肠道病毒隐性感染也很常见，所以在评估检测结果时就要小心一些。在中和实验中，一般要用人肠道病毒参考毒株（即原型株，EV71 原型株为BrCr 株，CV A16原型株为G-10株）或流行株，有时同时（或单独）使用临床分离株会有助于得到更准确的检测结果。使用对肠道病毒敏感的细胞，如RD细胞。用病毒（血清）稀释液（下面液体配制中的 C 液，可用维持液代替）稀释血清和制备病毒悬液，因为是用病毒来确定血清中抗体的滴度，所以要使用参考病毒（原型株），但有时使用所分离到的毒株（临床分离株）有助于得到更准确的检测结果，但分离株的滴度（100 CCID50/0.05ml）要事先测定。中和实验的检测原理：病毒感染敏感靶细胞后，引起细胞形态学变化，出现CPE，特异性中和抗体与病毒结合后，可使病毒颗粒失去感染性，抑制CPE的出现。
1．液体配制
A液：血清处理液：（100ml中含下列试剂成份）
MEM 85ml
3% L-谷氨酰胺1ml
7.5%碳酸氢钠2ml
胎牛血清2ml
青、链霉素（各10000U/ml）10ml
B 液：细胞营养液：（按生长液配方配制，100ml 中含下列试剂成份）
MEM 85ml
3% L-谷氨酰胺1ml
7.5%碳酸氢钠2ml
HEPES 1ml
胎牛血清10ml
青、链霉素（各10000U/ml）1ml
C 液：病毒（血清）稀释液：（按维持液配方配制，100ml 中含下列液体）
MEM 93ml
3% L-谷氨酰胺1ml
7.5%碳酸氢钠2ml
HEPES 1ml
胎牛血清2ml
青、链霉素（各10000U/ml）1ml
2．攻击病毒CCID50滴定和滴度梯度制备
（1）将增殖后的病毒悬液冻融3次，然后在4℃、12000rpm条件下离心10min，取上清液分装于10 支冻存管中，每管 1.5ml，一般每管应在一次试验中用完，有剩余应高压后废弃；
（2）加Eagle液10倍系列稀释为10-1至10-8病毒液，各加入细胞板内，每孔50μl，每稀释度4孔细胞；
（3）每孔加细胞悬液50μl，同时设细胞对照（50μl稀释液+50μl细胞悬液），36℃培养7d，观察细胞病变；
（4）按Behrens-K?rber公式计算出分离病毒株的CCID50；log CCID50 = L-d (S-0.5)，其中：
L = 实验中使用的最低稀释度的对数值；
d = 稀释梯度的对数值；
S = 终判时阳性部分的总和（即出现CPE 的细胞孔所占的比例之和）。
（5）正式试验前应先滴定攻击病毒2-3次，取其平均值，求出每0.05ml中含100 CCID50的病毒载量；
（6）按照计算好的稀释比例配制攻击病毒，求出试验所需的病毒总量（即100 CCID50/0.05ml）；
（7）取3支小试管，每只加病毒稀释液（液体配制中的C液）0.9ml；
（8）用带滤芯的吸尖（ART 吸尖）吸0.1ml 已经稀释好的攻击病毒液（即100CCID50/0.05ml）到第一支小试管中，换另一支ART 吸尖，轻轻并彻底地混匀，避免产生大量气溶胶，按照此方法依次稀释至 1 CCID50/0.05ml和0.1 CCID50/0.05ml。
3．稀释血清
（1）发病1-3d 内采取患者急性期血清，发病后2-4 周采取恢复期血清，分别冻存在-20℃备检。
（2）取无菌小试管若干支（每份血清使用一支）置试管架上，每管加血清处理液（上面液体配制中的A液）0.3ml，加待测血清0.1ml，盖紧塞子，震摇混匀，放4℃冰箱过夜，即为1：4稀释血清。次日56℃、30min灭活。
（3）打开独立无菌包装48 孔组织培养板，纵向使用，每孔加血清稀释液（上面液体配制中的C液）0.3ml，每份血清使用一排，每排4孔。使用移液器吸取处理过的血清0.1ml 加入第一孔（即为1：16），吹吸8-10 次，吸0.1ml 加入第二孔（即为1：64），依次至1：1024，血清稀释的过程中不必更换吸尖。即每份血清标本进行4倍倍比稀释，即1：4、1：16、1：64、1：256、1：1024。
（4）每份血清标本的每个稀释度都要平行做两孔。
4．病毒中和抗体测定的操作步骤：
（1）取一块96孔板横向使用，每块板可以做8份（4对）待测血清，版面设计如下图所示。A1-A2 孔（B1-B2、C1-C2、D1-D2、E1-E2、F1-F2、G1-G2、H1-H2）中每孔加入1:1024稀释度的待测血清0.05ml，不必更换吸尖，在A3-A4 孔（B3-B4、C3-C4、D3-D4、E3-E4、F3-F4、G3-G4、H3-H4）中每孔加入1:256 稀释度的待测血清0.05ml，A5-A6孔（B5-B6、C5-C6、D5-D6、E5-E6、F5-F6、G5-G6、H5-H6）中每孔加入1:64稀释度的待测血清0.05ml，A7-A8孔（B7-B8、C7-C8、D7-D8、E7-E8、F7-F8、G17-G8、H7-H8）中每孔加入1:16 稀释度的待测血清0.05ml，A9-A10孔（B9-B10、C9-C10、D9-D10、E9-E10、F9-F10、G9-G10、H9-H10）中每孔加入1:4 稀释度的待测血清0.05ml，A11-A12 孔
（B11-B12、C11-C12、D11-D12、E11-E12、F11-F12、G11-G12、H11-H12）为每份待测血清对照孔，每孔中补加稀释液0.05ml；
（2）上述孔中分别加入病毒0.05ml（病毒滴度事先已经稀释为100 CCID50/0.05ml）；
（3）盖好盖子后用微量板混匀器混匀，放入36℃CO2孵箱中孵育2h；
（4）另取一块96孔板纵向使用，做100 CCID50/0.05ml病毒滴度的核实（每次实验都必须做）。每孔先加病毒稀释液（试剂配制中的C液）0.05ml，然后从0.1 CCID50/0.05ml 加起，每孔0.05ml，每个稀释度8 孔，不必更换吸尖，一直加至100 CCID50/0.05ml；同时留出 4 孔做为细胞对照孔，每孔加入0.1ml病毒稀释液，然后放入4℃冰箱中暂存；
（5）在孵育期间，用消化液消化细胞，准备细胞悬液，细胞悬液的浓度为2×105
个/ml，每块96孔板至少需要准备10ml；
（6）孵育结束后每个待测血清孔、血清对照孔（待检标本板）和病毒回滴孔和细胞对照孔（病毒回滴板）分别加入0.1ml 细胞悬液，然后用微量板混匀器混匀，放入36℃CO2孵箱中孵育培养；
（7）使用倒置显微镜每天观察CPE，并记录病毒滴定结果，以不产生细胞病变的血清最高稀释度的倒数为终点效价。当100 CCID50/0.05ml的病毒对照孔出现完全病变时，判定
最终结果（约5~7d）；
（8）注意：如果病毒对照结果（病毒回滴）不在32~320 CCID50/0.05ml的范围内，实验无效，就要重复实验。
5．结果判定
当最高稀释度血清的 2 孔中有 1 孔出现细胞病变，另一孔不出现细胞病变，该稀释度的倒数计即为该血清标本的中和抗体效价；当高稀释度 2 孔完全病变，相邻低稀释度 2 孔完全不病变，则两者平均稀释度的倒数即为该血清标本的中和抗体效价；当两个相邻稀释度血清均出现 1 孔细胞病变，另 1 孔不出现细胞病变，则两者平均稀释度的倒数即为该血清标本的中和抗体效价。对于HFMD的双份血清中和实验结果来说，如果恢复期血清较急性期血清EV71或CV A16中和抗体滴度出现4倍或4倍以上增高即可确诊；如果恢复期血清较急性期血清其它肠道病毒中和抗体滴度出现 4 倍或4倍以上增高可证实该肠道病毒感染，是否为病因需要其它相关实验证实；如果单份血清中和抗体滴度大于1:256 也有诊断意义，血清中和抗体滴度为1:128判定为可疑阳性。
（三）逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）。
1．RNA提取
可使用多种商业化试剂盒来提取RNA，针对临床标本应选择质量较高的“用于临床标本病毒RNA提取的试剂盒”，也可使用全自动RNA提取仪进行提取。针对病毒分离物，核酸提取比较容易，大部分商业化RNA提取试剂盒都可有效的提取到RNA。RNA提取依据使用的试剂不同，严格按说明书进行操作。
2．逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）
（1）引物序列合成
国家脊灰实验室自行设计3对引物，分别为人肠道病毒通用引物、EV71 特异性引物和CV A16 特异性引物。各省CDC 依据引物序列在质量有保证的公司合成,引物合成后,需要做预实验，保证引物合成没有质量问题后,分发给地市级CDC。
1）人肠道病毒（包括EV71、CV A16）核酸检测通用引物序列：
PE2（上游）：5`- TCC GGC CCC TGA ATG CGG CTA ATC C -3`
PE1（下游）：5`- ACA CGG ACA CCC AAA GTA GTC GGT CC -3`
2）EV71核酸检测引物序列：
EV71-S（上游）：5`- GCA GCC CAA AAG AAC TTC AC -3`
EV71-A（下游）：5`- ATT TCA GCA GCT TGG AGT GC -3`
3）CV A16核酸检测引物序列：
CV A16-S（上游）：5`-ATT GGT GCT CCC ACT ACA GC-3`CV A16-A
（下游）；5`-TCA GTG TTG GCA GCT GTA GG-3`
（2）实验设计
1）在PCR记录纸（实验记录纸）上记录本次实验操作者姓名，实验日期，所鉴定标本的名称以及标本的顺序，与PCR仪排列的顺序一致。
2）标记好加标本和对照的PCR管（阳性对照，阴性对照和试剂对照）。
A：阳性对照：参比RNA，省级CDC提供（只是在初次使用，常规不建议使用，以防污染）。
B：阴性对照：使用正常细胞RNA或临床标本肠道病毒阴性的RNA（每次实验要设立）。
C：试剂对照：用去离子水代替标本（试剂初次使用时必须做）。
（3）RT-PCR扩增反应和条件
1）从临床标本或病毒中提取的RNA 和各种RT-PCR 试剂应该一直放在冰浴盒上；
2）配下列试剂主溶液：
3）在PCR仪上进行RT-PCR反应，反应步骤如下：
3．电泳分析
（1）将已经聚合的3%的琼脂糖凝胶放在电泳装置上；
（2）在帕拉膜（Parafilm）上加上6 ×电泳载样缓冲液（每个反应需1μl）。再加上5μl的PCR反应产物与之混合；
（3）将电泳缓冲液倒在电泳装置中，用吸尖将样品与载样缓冲液的混合溶液加到孔中；
（4）盖上盖子，接通电源，以10V/cm电压（恒定电压）电泳，大约35-40min，直到溴酚蓝跑到凝胶的底部的时候，停止电泳；
（5）将胶取出，并注意保持凝胶的方向；
（6）在1μg/ml的溴化乙锭溶液中染色15min，注意：溴化乙锭溶液是有毒、致畸、并且致肿瘤的物质，操作时要加小心，并戴双层手套。如果储存在避光的容器中，溴化乙锭溶液可以重复使用。溴化乙锭废弃物按医疗废弃物中化学品的有关规定处理。
（7）在蒸馏水中涮一下凝胶；
（8）在紫外透射仪下观察PCR 产物电泳结果，并照相作记录。有条件的实验室可以使用全自动电泳分析仪。
4．结果解释
使用全自动电泳分析仪的实验室可以通过仪器自动读取PCR 产物大小，来判断结果。通过琼脂糖凝胶做PCR 产物电泳的实验室，需要参照DNA 分子量对照对照，比较标本的PCR 产物与阳性对照的PCR 产物在凝胶上的位置以及大小来解释结果。
(四) Real-time RT-PCR （rRT-PCR）
1. 病毒核酸提取
参考常规RT-PCR病毒核酸提取步骤和注意事项。
2. Real-time RT-PCR （rRT-PCR）
依据不同厂家的试剂盒，严格按相应说明书操作和判断结果。有5待检标本RT-PCR 结果鉴定结果HEV(-), EV71(-), CV A16(-) 非肠道病毒（NEV）HEV(+), EV71(-), CV A16(-) 非EV71、CV A16 的其它肠道病毒HEV(+), EV71(+), CV A16(-) EV71 HEV(+), EV71(-), CV A16(+) CV A16种试剂盒，分别为One Step Real-time PCR法检测EV71病毒核酸（单通道检测）；One Step Real-time PCR法检测CV A16核酸（单通道检测）；One Step Real-time PCR 法检测肠道病毒核酸（单通道检测）；One Step Real-time PCR法同时检测EV71和CV A16核酸（双通道检测）；One Step Real-time PCR法同时检测EV71和肠道病毒核酸（双通道检测）。下面举2个例子来说明单通道检测和双通道检测的操作规程和注意事项。
（1）One Step Real-time PCR法检测EV71病毒核酸（单通道检测）
①反应体系配置：反应体系共25μl，模板量可根据样本情况自行决定（临床标本通常使用5μl 的RNA 模板量），不够部分以水补足。如选用另外试剂盒，反应体系及条件随之变化。
a.从试剂盒中取出相应的试剂，反应液在室温融化后，瞬时离心，按n+1 配置反应体系
（n=样本数+1 管阳性对照+1 管阴性对照），每个测量反应体系配置如下表：
b.将上述反应液混匀离心后，按照每管20μL 分装于各荧光PCR仪适用的PCR管中。
c.加样：将提取好的样本RNA，分别加入上述分装好的PCR反应管中，模板量可根据样本情况自行决定（临床标本通常使用5ul模板量），不够部分以水补足。总反应体积25μL。
②荧光RT-PCR循环条件设置
③对照设置
阴性对照：核酸提取时以灭菌双蒸水代替标本，每次实验应设立。
阳性对照：由省级实验室提供EV71阳性核酸（只在评价试剂时使用）
④结果分析条件设定和结果判断
阈值设定
原则以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准，或可根据仪器噪音情况进行调整。
Ct值≤35.0的样本为阳性。
38.0> Ct值>35.0的样本为临界值。
Ct值≥38.0的样本或无数值的标本为阴性。
（2）One Step Real-time PCR法同时检测EV71和CV A16核酸（双通道检测）双通道可以同时检测EV71 和CV A16 核酸,在提取核酸后短时间(2.5小时)内检测到标本中是否含EV71或CV A16核酸。
①反应体系配置反应体系共25μl，模板量可根据样本情况自行决定（临床标本通常使用5μl 模板量），不够部分以水补足。如选用另外试剂盒，反应体系及条件随之变化。
a.先将试剂解冻，从试剂盒中取出相应的试剂，反应液在室温融化后，瞬时离心，按n+1 配置25μl 反应体系（n=样本数+1 管阳性对照+1管阴性对照），每个测量反应体系配置如下表：
b.将下述反应液混匀离心后，按照每管20μL 分装于适用的PCR管中。
c.加样：将提取好的样本RNA，分别加入上述分装好的PCR 反应管中，模板量可根据样本情况自行决定（临床标本通常使用5ul模板量），不够部分以水补足。总反应体积25μL。
②荧光RT-PCR循环条件设置
③结果分析条件设定和结果判断
阴性对照：核酸提取时以灭菌双蒸水代替标本。
阳性对照：提取好的阳性核酸作为模板RNA。
阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准，或可根据仪器噪音情况进行调整。
Ct值≤35.0的样本为阳性。
Ct值无数值的标本和Ct值≥38.0的样本为阴性样本。
38.0> Ct值>35.0的样本为临界值。
注：荧光PCR 同时读取FAM 和HEX，进行双通道检测，FAM 荧光Ct值为CV A16的结果，HEX荧光Ct值为EV71的结果。
四、生物安全
根据2006 年 1 月11 日卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》，柯萨奇病毒、埃可病毒、EV71型和目前分类未定的其他肠道病毒均属于危害程度第三类的病原微生物。因
此在保证安全的前提下，对临床和现场的未知样本检测操作可在生物安全II级或以上防护级别的实验室进行，涉及病毒分离培养的操作，应加强个体防护和环境保护。操作粪便、脑脊液和血液等临床标本时要特别注意生物安全，要在II级生物安全柜中进行标本处理、病毒分离和病毒鉴定，无脊灰疫苗免疫史的人员要进行脊灰疫苗免疫。
灭活后的血清抗体检测与PCR检测可在生物安全I级实验室进行。
所有操作应遵守国家相关法律法规。
附表：1．手足口病病例临床标本采样登记表
2．手足口病病例临床标本检测结果登记表
手足口病防治知识培训 材料 集团文件版本号：(M928?T898?M248-WU2669?I2896?DQ586小41988) 手足口病的早期诊断及治疗
手足口病（hand food and mouth disease, HFMD）是由肠道病毒 （主要由柯萨奇A组16型（COXAl6）、肠道病毒71型（EV71 ））引起的 急性传染病，多发生于学龄前儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高。 2007年至2010年，手足口病在中国大陆大范围流行。除西藏外，全国各地均有病例报告，多个地区有大规模流行暴发，患病人数呈逐年上升趋势，并不断有死亡病例出现。全国发病人数：07年为85844例；08年为 488955例；09年为1155525例，2010年为09年的2倍以上。 病原学 手足口病的病原体包括数十种肠道病毒，包括柯萨奇病毒（COX） , A2、 A4> A5> A7、A9、A10、A16型等，以及肠道病毒71型（EV71）,其中以COXAI6、EV71最常见。但近年来报告由EV71引起的症状较重，还可伴发无菌性脑膜炎、脑炎及瘫痪。 流行病学 传染源病人及隐性感染者，传染期一般为1 — 2周至3-5周之间，有 时更长，病毒可经粪便排出，也可经疱疹破溃时的液体流出。 传播途径主要经口传播，粪口传播，密切接触，另有报导公共游 泳池、医院门诊口腔检诊器消毒不严格也可传播本病，其次接触传播， 飞沬也可传播。 人群易感性婴幼儿对手足口病的各型病毒普遍易感，易感性随年龄增长而降低。发病后的免疫力不我巩固，可再次感染。病毒之间无明显交叉免疫。隐性感染病例较多，1983年天津发生本病的流行，总发病率为 2.O2%o,幼托机构发病率2 3. O3%0o
手足口病防治培训心得 手足口病是一种由肠道病毒引起的春季常见传染病，以3岁左右的婴幼儿发病率为最高，重症患儿可因多器官功能损害而死亡。手足口病具有传播速度快、传播范围广等特征，严重危害着儿童的生命健康。为认真做好小一班的手足口病防治工作，我参加了24团医院防疫站组织的手足口病防治培训，现将培训心得阐述如下： 1.培训以《传染病防治法》、《手足口病诊疗指南》等为主要内容，详细介绍了手足口病的病原体及发病人群特点、手足口病的传染源和传播途径、手足口病的具体临床表现及诊断标准、轻型手足口病处理流程、手足口病的消毒隔离措施、重症手口足病的诊断标准与救治措施，突出了实用性，确保了我们幼师熟练掌握手口足病的特征。 2.我们在平时工作中应该时刻注意，要把幼儿手足口病防治工作放在重要位置，切实增强责任心，及时发现可疑病例并及时报告处置，同时要做到：①提醒家长在手足口病高发期尽量少带孩子到人群密集、空气流通差的公共场所，以免孩子被传染。（手足口病病毒是可以通过空气、飞沫进行传播的）②注意室内卫生，开窗通风，确保室内的空气流通，孩子的衣服和被子也要经常拿出去晾晒，达到紫外线杀菌的效果。③要督促帮助孩子用洗手液或者肥皂洗手，尤其是饭前、便后和外出后，必须认真洗手，避免病从口入。④对孩子的玩具、水杯、毛巾等物品要认真清洗，及时消毒。⑤如果发现有孩子患手足口病，老师应该让其他孩子避免接触患儿，以免相互传染。⑥孩子们每天的活动量大，加上气候干燥，应该及时给宝宝补充水分，避免因为上火导致口腔疱疹。 ⑦孩子饮用被污染的水或者吃了被污染的食物，都会发生感染，必须注意
孩子的食品卫生，不让孩子喝生水、吃生冷的食物。⑧家长、老师每天与孩子的亲密接触是很多的，所以家长、老师也要注意个人卫生，在接触孩子之前、喂饭之前...都应该认真洗手。 通过这次培训，我认识到了手足口病防治的严峻形势，也基本掌握了手足口病防治的一般常识，为做好小一班手足口病防治工作打下了坚实的基础，，促进了幼儿健康快乐成长。 24团幼儿园小一班王军 2018.4.10
手足口病预防控制指南手足口病（Hand-foot-mouth Disease, HFMD是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要症状。少数患者可出现无菌性脑膜炎、 脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。手足口病常出现暴发或流行，为指导各地做好手足口病的预防控制工作，制定本指南。 一、目的 （一）指导医疗机构、疾病预防控制机构开展疫情报告与监测。 （二）指导疾病预防控制机构开展流行病学调查、病原学监测。 （三）指导疾病预防控制机构、医疗机构开展重点场所及公众预防控制工作。 二、疾病概述 （一）病原学。 引起手足口病的病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，包括柯萨奇病毒A组（Coxasckievirus A, CVA）的 2、4、5、7、9、10、16 型等，B组（Coxasckievirus B, CVB）的 1、2、3、4、5 型等；肠道病毒 71 型（Human Enterovirus 71, EV71）;埃可病毒（Echovirus, ECHO等。其中以 EV71及CVA16型较为常见。 肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，75%酒精和5%来苏不能将其灭活，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感；对紫外线和干燥敏感，各种氧化剂（高锰酸钾、漂白粉等）、甲醛、碘酒以及56C 30分钟可以灭活病毒。病毒在 4C可存活1年，-20 C可长期保存，在外环境中可长期存活。 （二）流行病学。 1?传染源。人是人肠道病毒的唯一宿主，患者和隐性感染者均为本病的传染源，隐性感染者难以鉴别和发现。发病前数天，感染者咽部与粪便就可检出病毒，通常以发病后一周内 传染性最强。 2?传播途径。肠道病毒可经胃肠道（粪-口途径）传播，也可经呼吸道（飞沫、咳嗽、打喷嚏等）传播，亦可因接触患者口鼻分泌物、皮肤或粘膜疱疹液及被污染的手及物品等造成传播。尚不能明确是否可经水或食物传播。 3. 易感性。人对人肠道病毒普遍易感。不同年龄组均可感染发病，以5岁及以下儿童为主，尤以3岁及以下儿童发病率最高。显性感染和隐性感染后均可获得特异性免疫力，产生的中和抗体可在体内存留较长时间，对同血清型病毒产生比较牢固的免疫力，但不同血清型
幼儿园手足口病预防宣传保健知识 “手足口病的预防，关键在于春季。”专家介绍：手足口病是一种常见的儿童传染病，并不可怕，家长不必惊慌。只要早发现、早治疗，是完全可防可治的。 一、幼儿园预防手足口病知识问答 1、什么是手足口病？这是一种发生在年龄较小的托班、小班（4岁以内）幼儿多见的空气传播的传染病一般传染病，年长儿及成人也感染，但一般症状较轻，或为无症状的隐性感染。在托幼机构内容易 发生流行。 此病主要表现为口腔炎及位于手足的皮疹，手足口病的临床上首先表现为口痛、厌食及低热（38度），亦可不发热。口腔内可见散发性小疱疹或溃疡，位于舌、颊粘膜及硬腭处。四肢，尤以手足部可 见斑丘疹或疱疹，数量多少不定。病程短，多于1周左右痊愈。皮疹发展很快，痊愈后不留疤，不痒不痛，不流脓，成簇状出现个别患者 可引起肺炎、心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等致命性并发症 2、手足口病通过哪些途径传播？可通过鼻涕、唾液、粪便、共 用玩具等传染。人群间的密切接触，既通过直接接触病人或无症状带菌者的鼻和咽喉分泌物及粪便而感染，也可通过飞沫传播。 3、手足口病的潜伏期是多少？一般为3~6天，平均4天。
4、手足口病患儿多久可以返回幼儿园？病程通常一周左右，愈 后良好，到幼儿的疱疹全部干燥结痂可返回幼儿园。 5、接触过手足口病患儿的幼儿要医学观察多久？7天（5~10天）。 6、发生手足口病如何护理？手足口病没有特效药，对症治疗有 发烧进行退热，服用板兰根冲剂，清热解毒口服液，桂林西瓜霜口腔 治疗溃疡。幼儿穿宽松透气的鞋袜，多洗手保持清洁，饮食上可以吃 些绿豆薏苡仁粥，或是山药米仁赤豆粥，起到清热利湿健脾利湿的作用。 二、手足口病的预防方法有那些？ 1、注意环境和个人卫生可以减少感染机会。尤其是小孩子，一 定要养成良好的卫生习惯，不要舔手、咬指甲。从公共场所回家后要 洗手、洗脸、换衣服。饭前便后肥皂流动水洗手。 2、在疾病流行时，请大家尽量减少带孩子去公共场所和人群密 集的地方，以减少感染机会 3、居室要经常开窗通风，彻底换气，保持室内空气新鲜清洁。 幼儿要养成良好的生活习惯早睡早起，不要挑食偏食，多吃蔬菜水果。勤洗手，多运动多户外活动晒太阳。 4、幼儿园内加强晨间检查及早发现手足口病做好早隔离早报告 早预防。 5、对家长早做健康教育。 预防手足口病必须注意个人卫生，要注意居室内空气流通、温度适宜，多饮白开水或清凉饮料，多吃新鲜蔬菜和瓜果；经常彻底清洗 儿童的玩具或其他用品。在手足口病流行时，家长尽量少让孩子到拥挤的公共场所，减少被感染机会。此外，家长还要注意幼儿的营养、
手足口病诊疗指南(2013年版) 手足口病是由肠道病毒(以柯萨奇A组16型(CoxA16)、肠道病毒71型(EV71)多见)引起的急性传染病，多发生于学龄前儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高。病人和隐性感染者均为传染源，主要通过消化道、呼吸道和密切接触等途径传播。主要症状表现为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹。少数病例可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，多由EV71感染引起，致死原因主要为脑干脑炎及神经源性肺水肿。 一、临床表现 潜伏期：多为2-10天，平均3-5天。 (一) 普通病例表现。 急性起病，发热，口腔粘膜出现散在疱疹，手、足和臀部出现斑丘疹、疱疹，疱疹周围可有炎性红晕，疱内液体较少。可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。部分病例仅表现为皮疹或疱疹性咽峡炎。多在一周内痊愈，预后良好。部分病例皮疹表现不典型，如：单一部位或仅表现为斑丘疹。 (二) 重症病例表现。 少数病例(尤其是小于3岁者)病情进展迅速，在发病1-5天左右出现脑膜炎、脑炎(以脑干脑炎最为凶险)、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，极少数病例病情危重，可致死亡，存活病例可留有后遗症。 1.神经系统表现：精神差、嗜睡、易惊、头痛、呕吐、谵妄甚至昏迷； 肢体抖动，肌阵挛、眼球震颤、共济失调、眼球运动障碍；
无力或急性弛缓性麻痹； 惊厥。查体可见脑膜刺激征，腱反射减弱或消失，巴氏征等病理征阳性。 2.呼吸系统表现：呼吸浅促、呼吸困难或节律改变，口唇紫绀，咳嗽，咳白色、粉红色或血性泡沫样痰液； 肺部可闻及湿啰音或痰鸣音。 3.循环系统表现：面色苍灰、皮肤花纹、四肢发凉，指(趾)发绀； 出冷汗； 毛细血管再充盈时间延长。心率增快或减慢，脉搏浅速或减弱甚至消失； 血压升高或下降。 二、实验室检查 (一)血常规。 白细胞计数正常或降低，病情危重者白细胞计数可明显升高。 (二)血生化检查。 部分病例可有轻度谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)升高，病情危重者可有肌钙蛋白(cTnI)、血糖升高。C反应蛋白(CRP)一般不升高。乳酸水平升高。 (三) 血气分析。 呼吸系统受累时可有动脉血氧分压降低、血氧饱和度下降，二氧化碳分压升高，酸中毒。 (四) 脑脊液检查。 神经系统受累时可表现为：外观清亮，压力增高，白细胞计数增多，多以单核细胞为主，蛋白正常或轻度增多，糖和氯化物正常。 (五) 病原学检查。
手足口病防治知识培训材料 1．手足口病的流行特性 手足口病流行无明显的地区性，是全球性传染病。一年四季均可发病，以夏秋季多见。该病流行期间，可发生幼儿园和托儿所集体感染和家庭聚集发病现象。 2．什么是手足口病? 手足口病是由(肠道病毒EV71型和A组柯萨奇病毒、埃可病毒)等多种肠道病毒引起的常见传染病。 手足口病≠肠道病毒EV71，肠道病毒EV71只是引起手足口病的其中的一种病毒。3．手足口病的的症状? 以发热和手、足、口、臀部四个部位的皮疹或疱疹为主要特征。部分患儿可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、恶心、呕吐和头疼等症状。皮疹不像蚊虫咬、不像药物疹、不像口唇牙龈疱疹、不像水痘所以又称四不像；疱疹具有不痛、不痒、不结痂、不结疤的四不特征。手、足、口病症状在同一患者不一定全部出现。 4．手足口病严重吗？ 大多数患者症状轻微，约一周左右具有自愈的倾向。少数患者可并发无菌性脑膜炎、肺水肿和心肌炎、急性弛缓性麻痹等，重症患儿病情进展快，易发生死亡。 5．哪些人容易感染手足口病？ 人是唯一宿主，普遍易感，以婴幼儿发病为主。≤3岁年龄组发病率最高。少年儿童和成人感染后多不发病，但能够传播病毒。 6．哪些消毒剂对EV71肠道病毒有效? 75%酒精和5%来苏不能将其灭活，但对紫外线及干燥敏感。各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、碘酒都能灭活病毒。病毒在50℃可被迅速灭活。 7．手足口病的主要传播途径？ （1）经（接触被患者粪便污染的物品，病从口入）粪-口传播; （2）呼吸道飞沫（近距离飞沫）传播; （3）经接触病人皮肤、粘膜泡疹液而感染。 8．预防控制措施 手足口病传播途径多，婴幼儿和儿童普遍易感。做好儿童个人、家庭和托幼机构的卫生是预防本病感染的关键。 幼儿园预防控制措施 1. 教室和宿舍等场所要保持良好通风； 2. 每日对不可移动的共用物品、游玩设施进行清洗消毒； 3. 衣被及其它日常用品和玩具要勤晒太阳； 4. 饭前便后要洗手，预防病从口入； 5. 保持充足的睡眠，提高儿童的抗病能力； 6. 落实晨检制度，发现有发热、皮疹的孩子，要立即要求家长带小孩去医院就诊； 7. 患儿增多时，要及时向卫生和教育部门报告。 培训人员：本园全体教师 主讲：班良伟 培训时间：2014年5月8日
手足口病防治知识 手足口病防治知识问答（1） 什么是手足口病？ 手足口病（HFMD）是婴儿和儿童的一种常见疾病。以发热、口腔溃疡和疱疹为特征。初始症状为低热、食欲减退、不适并常伴咽痛。发热1－2天后出现口腔溃疡，开始为红色小疱疹，然后常变为溃疡。口腔疱疹常见于舌、牙龈和口腔颊粘膜。1－2天后可见皮肤斑丘疹，有些为疱疹,皮疹不痒，常见于手掌和足底，也可见于臀部。有的病人仅有皮疹或口腔溃疡。 手足口病严重吗？ 通常不严重。几乎所有病人不需治疗便可康复。手足口病通常在7－10天内痊愈。并发症不常见。极少病人可并发无菌性或病毒性脑膜炎，其症状是发热、头痛、颈直或背痛，这需要住院治疗一段时间。手足口病是如何发生的？ 有数种病毒可引起手足口病。最常见的是柯萨奇病毒A16型，此外柯萨奇病毒A的其他株或肠道病毒71型也可引起手足口病。柯萨奇病毒是肠道病毒的一种。肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒和埃可病毒。 手足口病会传染吗？ 会。手足口病有中度传染性。人与人之间的传染是通过直接接触
感染者的鼻和咽分泌物或粪便。在发病的第一周传染性最强。手足口病不会在人和动物或宠物间传播。 人感染后多长时间发病？ 从感染到出现症状即潜伏期通常是3－6天，发热是手足口病常见的首发症状。 哪些人易得手足口病？ 手足口病主要发生在5岁以下的儿童，但成人也有可能得病，因此可以说每个人都是易感的。感染后只获得该型别病毒的免疫力，对其它型别病毒再感染无交叉免疫，即患手足口病后还可能因感染其它型别病毒而再次患手足口病。 手足口病在何时何地发生？ 世界各地都有手足口病的散发和爆发，以夏季和早秋较常见。如何诊断手足口病？ 手足口病只是可引起口腔溃疡的许多种传染病中的一种，另一种常见的口腔溃疡的原因是口腔疱疹病毒感染，它使口腔和牙龈产生炎症（有时称口炎）。医生通常能根据病人的年龄、病人或家长的诉说的症状，及检查皮疹和溃疡来鉴别手足口病和其他原因所致的口腔溃疡。可将咽拭子或粪便标本送至实验室检测病毒，但病毒检测需要2－4周才能出结果，因此医生通常不提出做此项检查。 如何治疗手足口病？它能预防吗？ 对手足口病无特效治疗方法。对症治疗以减轻发热、头痛和口腔溃疡引起的疼痛。预防措施包括常洗手，尤其是换尿布后；消毒有可
手足口病预防控制指南 手足口病（Hand-foot-mouth disease, HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。少年儿童和成人感染后多不发病，但能够传播病毒。引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型（EV71）和A组柯萨奇病毒（CoxA）、埃可病毒（Echo）的某些血清型。EV71感染引起重症病例的比例较大。肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行。为指导各地做好手足口病的预防控制，制定本指南。 一、目的 （一）指导医疗机构、疾病预防控制机构开展肠道病毒病的疫情报告和监测； （二）指导疾病预防控制机构开展流行病学调查和实验室检测； （三）指导疾病预防控制机构、医疗机构开展公众预防和疫情应急处置。 二、病原学 引起手足口病的主要为小RNA病毒科、肠道病毒属的柯萨奇病毒(Coxsackie virus) A组16、4、5、7、9、10 型，B组2、5型；埃可病毒（ECHO viruses）和肠道病毒71型（EV 71），其中以EV 71及Cox Al6型最为常见。 肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感，75%酒精和5%来苏亦不能将其灭活，但对紫外线及干燥敏感。各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能灭活病毒。病毒在50 ℃可被迅速灭活，但1mol浓度二价阳离子环境可提高病毒对热灭活的抵抗力，病毒在4 ℃可存活1年，在- 20 ℃可长期保存，在外环境中病毒可长期存活。 三、流行病学
手足口病预防控制指南 手足口病(Hand-foot-mouth disease, HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。少年儿童和成人感染后多不发病，但能够传播病毒。引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型(EV71)和A组柯萨奇病毒(CoxA)、埃可病毒(Echo)的某些血清型。EV71感染引起重症病例的比例较大。肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行。为指导各地做好手足口病的预防控制，制定本指南。 一、目的 (一)指导医疗机构、疾病预防控制机构开展肠道病毒病的疫情报告和监测； (二)指导疾病预防控制机构开展流行病学调查和实验室检测； (三)指导疾病预防控制机构、医疗机构开展公
众预防和疫情应急处置。 二、病原学 引起手足口病的主要为小RNA病毒科、肠道病毒属的柯萨奇病毒(Coxasckie virus) A组16、4、5、7、9、10 型， B组2、5、13 型；埃可病毒(ECHO viruses)和肠道病毒71型(EV71)，其中以EV71及Cox Al6型最为常见。 肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感，75%酒精和5%来苏亦不能将其灭活，但对紫外线及干燥敏感。各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能灭活病毒。病毒在50℃可被迅速灭活，但1mol浓度二价阳离子环境可提高病毒对热灭活的抵抗力，病毒在4℃可存活1年，在-20℃可长期保存，在外环境中病毒可长期存活。 三、流行病学 (一) 流行概况 手足口病是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道。1957年新西兰首次报道该病。1958年分离出柯萨奇病毒，1959年提出手足口病命
手足口病防治知识 什么是手足口病? 手足口病是由肠道病毒引起的婴幼儿常见传染病。引起手足口病的肠道病毒有20多种，主要是柯萨奇病毒A组4、5、7、9、10、16型和B组2、5、13型，肠道病毒71型。人群对手足口病普遍易感，主要以学龄前儿童为主。 手足口病怎样传播 手足口病隐性感染率高，患者、隐性感染者为主要传染源，该病主要通过被患者的粪便、唾液、咽部分泌物污染的食物而传播，直接接触患者穿破的水泡亦会传播病毒，患者咽喉分泌物及唾液中的病毒,可通过空气飞沫传播。患者的粪便在数周內仍具传染性。 手足口病的主要症状 手足口病潜伏期一般为3～7天，没有明显的前驱症状，多数病人突然起病。约半数病人于发病前1～2天或发病的同时有发热，多在38℃
左右，并出现丘疹或疱疹，好发于手、足、口、臀四个部位，有不像蚊虫咬、不像药物疹、不像口唇牙龈疱疹、不像水痘的“四不像”特征，临床上更有不痛、不痒、不结痂、不结疤的“四不”特点。初期可有轻度上感症状。由于口腔溃疡疼痛，患儿流涎拒食。口腔粘膜丘疹出现比较早，起初为粟米样斑丘疹或水疱，周围有红晕，主要位于舌及两颊部，唇齿侧也常发生。手、足等远端部位出现或平或凸的班丘疹或疱疹。 手足口病的危害 手足口病的临床表现主要为发热，咽痛，在口腔、手、足等部位出现丘疹或疱疹，可自愈，不留痂。一般仅需对症治疗，预后良好。少数病例可有脑炎、心肌炎、肺水肿等并发症，个别危重病人可因多种原因导致死亡 怎样护理手足口病患儿 对手足口病患儿要加强护理，注意加强营养、休息，做好口腔卫生，食物以流质及半流质等为宜，避免日光曝晒时间过长,防止过度疲劳引发机体
抵抗力降低,出现心肌炎、脑炎和肺水肿等并发症时应及时到医疗机构进行诊治。 手足口病的预防 1、预防手足口病的主要措施是做好病人粪便等排泄物的处理。 2、手足口病常在婴幼儿聚集场所发生，因此，托幼机构、学校等单位要做好晨检，及时发现疑似病人，及时隔离治疗。 3、被污染的食物、日常用品、食具、玩具、床上用品以及便器等物品应及时消毒处理，衣物置阳光下暴晒，保持室内通风换气。 4、要勤洗手，搞好环境卫生、食品卫生和个人卫生，把好病从口入关。 5、该病流行期间家长要尽量少让孩子到拥挤公共场所，减少被感染机会。
手足口病预防控制指南（2014版）手足口病是由多种人肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病。大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位皮疹和疱疹为主要症状。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性迟缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。手足口病常出现爆发或流行，为指导各地做好手足口病的预防控制工作，制定本指南。 一、目的 （一）指导医疗机构、疾病预防控制机构开展疫情报告与 监测。 （二）指导疾病预防控制机构开展流行病学调查、病原学 监测。 （三）指导疾病预防控制机构、医疗机构开展重点场所及 公众预防控制工作。 二、疾病概述 （一）病原学 引起手足口病的病毒属于肖RNA病毒科肠道病毒属，包括柯萨奇病毒A组的2、4、5、7、9、10、16型等，B 组的1、2、3、4、5型等；肠道病毒71型；埃可病毒等。 其中以EV71及CVA16型较为常见。 肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，75%酒精和5%来苏不能将其灭活，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏 感；对紫外线和干燥敏感，各种氧化剂（高猛酸钾、漂白
粉等）、甲醛、碘酒以及56℃30分钟可以灭活病毒。病毒在4℃可存活一年，-20℃可长期保存，在外环境中可长期存活。 （二）流行病学 1、传染源人是人肠道病毒的唯一宿主，患者和隐性感 染者均为本病的传染源，隐性感染者难以鉴别和发 现。发病前数天，感染者咽部和粪便就可检出病毒， 通常以发病后一周内传染性最强。 2、传播途径肠道病毒可经胃肠道（粪-口途径）传播, 也可经呼吸道（飞沫、咳嗽、打喷嚏等）传播，亦 可因接触患者口鼻分泌物、皮肤或粘膜疱疹液及被 污染的手及物品等造成传播。尚不能明确是否可经 水或食物传播。 3、易感性肠道病毒普遍易感。不同年龄组均可感染发 病，以五岁及以下儿童为主，尤以3岁及以下儿童 发病率最高。显性感染和隐形感染后均可获得特异 性免疫力，产生的中和抗体可体内存留较长的时间， 对同血清型病毒产生比较牢固的免疫力，但不同血 清型间鲜有交叉免疫。 4、流行特征该病流行无明显的地区性，全年均可发生， 一般5-7月为发病高峰。幼托机构等易感人群集中 单位可发生暴发。肠道病毒传染性强、隐形感染比 例较大、传播途径复杂、传播速度快，控制难度大，
手足口病培训小结 手足口病是一种由肠道病毒引起的春季常见传染病，最近几年来在我国许多地区蔓延流行，严重危害儿童生命健康。手足口病是临床上小儿常见的疱疹性疾病之一，全年均可发病，但以3-11月份多见，6-8月为高峰期。这种疾病传播速度极快，传播范围广。发病年龄可从4个月的婴儿到成人。但以5岁以下的婴幼儿发病率最高，手足口病主要通过人群密切接触传播为主，病毒可通过唾液、疱疹液、粪便等直接传播，也可通过被污染的毛巾、玩具、床上用品、内衣等间接传播，患儿咽喉分泌物及唾液中的病毒还能通过飞沫传播，也能通过接触被病毒污染的水源而感染，特别在托幼机构及小学校容易引起大面积流行。为了让广大医务人员都能掌握手足口病防治基本知识，根据区疾控中心统一部署，中心制定详细的培训计划，认真开展培训，具体情况总结如下： 2017年3月28日分别对中心医务人员和公共卫生管理所全体人员以及两个卫生服务站医务人员进行手足口病知识 培训，今年的培训是在手足口病发病高峰之前进行的，主要目的是要求医务人员通过培训能够提高认识，把手足口病防治工作放在重要位置，在平时工作中时刻注意，增强责任心，及时发现可疑病例并及时报告。培训人员根据手足口病防制要求，就手足口病的一般可疑症状，传播途径，临床诊断标
准，以及手足口病诊治和护理要点做了详细的介绍。同时对手足口病的报告作具体要求，一定要填写患儿的学校、班级、家长姓名、联系电话等基本信息。 掌握基本的预防知识，指导群众和患者手足口病的护理和预防常识作了进一步部署。还负责对辖区的小学校和幼托机构做好手足口病防治知识的宣传指导，并认真开展可疑病例的监测报告。对确诊的病例及时规范进行隔离治疗和疫点消毒工作。 会后对所有参加培训的医务人员进行了手足口病防治知识的综合考核，参加考核的医务人员共82人全部考核合格。通过这次培训，使全体医务人员都能提高对手足口病防治的意识，能够基本掌握手足口病防治的一般知识，为防治手足口病打下坚实的基础。 营中社区卫生服务中心 2017.03.29 定义、符号、缩
手足口病的预防知识讲座 主讲人： 幼儿园是人群高度密集的场所。为有效预防与控制手足口病在我地发生和流行，确保广大儿童身体健康，我们要关注并了解该病的一般症状、传播途径和预防方法，进一步增强和提高自我防病意识。 一、什么是手足口病？ 手足口病是婴幼儿常见传染病，由肠道病毒引起，夏秋季多发，以5岁以下的婴幼儿多见。临床上以发热和手、足、口腔等部位出现皮疹、溃疡等表现为主，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等致命性并发症。 二、手足口病是怎样发生和传播的？ 人是肠道病毒唯一宿主，患者和隐性感染者均为本病的传染源。传播途径主要是通过人群间的密切接触进行传播的。患者咽喉分泌物及唾液中的病毒可通过空气飞沫传播。唾液、疱疹液、粪便污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等通过日常接触传播，亦可经口传播。接触被病毒污染的水源，也可经口感染，并常造成流行。门诊交叉感染和口腔器械消毒不严也可造成传播。 三、哪类人群容易感染手足口病？ 人群对手足口病病毒普遍易感，各年龄组均可感染发病，显性感染和隐性感染后均可获得特异性免疫力，持续时间尚不明确。病毒的各型间无交叉免疫。实践中发现，患者主要为学龄前儿童，尤以3岁及以下年龄组发病率最高。
四、日常生活中如何预防手足口病？ 手足口病传播途径多，婴幼儿和儿童普遍易感。做好儿童个人、家庭和幼儿园的卫生是预防本病染的关键 （一）、个人预防措施 1、饭前便后、外出后要用肥皂或洗手液等给儿童洗手，不要让儿童喝生水、吃生冷食物，避免接触患病儿童； 2、看护人接触儿童前、替幼童更换尿布、处理粪便后均要洗手，并妥善处理污物； 3、婴幼儿使用的奶瓶、奶嘴使用前后应充分清洗； 4、本病流行期间不宜带儿童到人群聚集、空气流通差的公共场所，注意保持家庭环境卫生，居室要经常通风，勤晒衣被； 5、儿童出现相关症状要及时到医疗机构就诊。居家治疗的儿童，不要接触其他儿童，父母要及时对患儿的衣物进行晾晒或消毒，对患儿粪便及时进行消毒处理；轻症患儿不必住院，宜居家治疗、休息，以减少交叉感染。 （二）、幼儿园的预防控制措施 1、本病流行季节，幼儿活动场所要保持良好通风； 2、每日对玩具、个人卫生用具、餐具等物品进行清洗消毒； 3、进行清扫或消毒工作（尤其清扫厕所）时，工作人员应穿戴手套。清洗工作结束后应立即洗手； 4、每日对门把手、表面进行擦拭消毒； 5、加强宣传，教育指导幼儿养成正确洗手的习惯；
手足口病诊疗指南（2018年版） 手足口病（Hand foot and mouth disease，HFMD）是由肠道病毒（Enterovirus，EV）感染引起的一种儿童常见传染病，5岁以下儿童多发。手足口病是全球性疾病，我国各地全年均有发生，发病率为37.01/10万～205.06/10万，近年报告病死率在6.46/10万～51.00/10万之间。为进一步规范和加强手足口病的临床管理，降低重症手足口病病死率，有效推进手足口病诊疗工作，根据手足口病诊疗新进展制定本指南。《手足口病诊疗指南（2010版）》和《肠道病毒71型（EV71）感染重症病例临床救治专家共识》同时废止。 一、病原学 肠道病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属。手足口病由肠道病毒引起，主要致病血清型包括柯萨奇病毒（Coxsackievirus，CV）A组4～7、9、10、16型和B组1～3、5型，埃可病毒（Echovirus）的部分血清型和肠道病毒71型（Enterovirus A71，EV-A71）等，其中以CV-A16和EV-A71最为常见，重症及死亡病例多由EV-A71所致。近年部分地区CV-A6、CV-A10有增多趋势。肠道病毒各型之间无交叉免疫力。 二、流行病学
（一）传染源 患儿和隐性感染者为主要传染源，手足口病隐性感染率高。肠道病毒适合在湿、热的环境下生存，可通过感染者的粪便、咽喉分泌物、唾液和疱疹液等广泛传播。 （二）传播途径 密切接触是手足口病重要的传播方式，通过接触被病毒污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、食具、奶具以及床上用品、内衣等引起感染；还可通过呼吸道飞沫传播；饮用或食入被病毒污染的水和食物亦可感染。 （三）易感人群 婴幼儿和儿童普遍易感，以5岁以下儿童为主。 三、发病机制及病理改变 （一）发病机制 肠道病毒感染人体后，主要与咽部和肠道上皮细胞表面相应的病毒受体结合，其中EV-A71和CV-A16的主要病毒受体为人类清道夫受体B2 （Human scavenger receptor class B2，SCARB2）和P选择素糖蛋白配体-1（P-selectin glycoprotein ligand-1，PSGL-1）等。病毒和受体结合后经细胞内吞作用进入细胞，病毒基因组在细胞浆内脱衣壳、转录、组装成病毒颗粒。肠道病毒主要在扁桃体、咽部和肠道的淋巴结大量复制后释放入血液，可进一步播散到皮肤及黏膜、神经系统、呼吸系统、心脏、肝脏、胰脏、肾上腺等，引起相应组织和器官发生一系列炎症反应，导致相应的临床
幼儿培训记录 培训时间：2011年10月17号下午14:00-16:00 培训地点：会议室 培训人：朱丽香 培训主题：幼儿如何预防手足口病 手足口病是一种由肠道病毒引起的传染性疾病，以手、足、口3大部位出 现症状为特征，表现为口腔溃疡、手掌和足底出现水疱样皮疹，而且还伴有发烧。这种病在热带地区可以常年发生，而在温暖、寒冷的地区则一般以夏季和初秋多见。 3大部位：手足口病是一种由肠道病毒引起的传染性疾病，以手、足、口3 大部位出现症状为特征，表现为口腔溃疡、手掌和足底出现水疱样皮疹，而且还伴有发烧。这种病在热带地区可以常年发生，而在温暖、寒冷的地区则一般以夏季和初秋多见。 4不特征：在手上和脚上出现的疹子不像蚊虫咬，不像药物疹，不像口唇牙龈疱疹，不像水痘，所以又称“四不像”;而且还有不痛、不痒、不结痂、不结疤的“四不”特征。 手足口病“欺小怕大”主要侵犯5岁以下的小宝宝。 2-7天潜伏期：当孩子受到病毒感染后，先有2-7天的潜伏期，然后会出现低热、不舒服、胃口差、喉咙痛等症状。1-2天后，孩子的口腔中出现红色水疱疹并很快破溃成2-3毫米的小溃疡，分布在舌、牙龈、颊部等处，造成孩 子口腔疼痛，流口水，拒绝进食等，随后在手掌、足底出现红色的斑丘疹，有些还出现含有浑浊液体的水疱，同样的疹子也可以出现在臀部。受到感染的孩 子体温在38.5℃左右，持续2-3天。 7-10天自愈：手足口病是一种比较轻微的传染性疾病，绝大多数患病的孩子能在7-10天左右自愈，愈后良好。通常口腔溃疡在发病一周左右愈合，手掌和足底等处的皮疹在发病10天左右自愈，不会留有疤痕。手足口病很少有并发 症发生，但也有极少数孩子可能会有高热、全身皮疹、腹泻、心肌炎、肺炎、脑膜炎等并发症。
幼儿园手足口病防控工作方案 为加强手足口疾病的预防控制工作,有效控制手足口疾病在园流行,确保幼儿身心健康,下面给大家分享了幼儿园手足口病防控的工作方案，欢迎参考！ 幼儿园手足口病防控工作方案(一) 为了进一步加强手足口病防控工作，切实保护幼儿身体健康和生命安全，根据市、区防疫部门的要求和托幼管理中心及景园总园的手足口病的防控方案，并结合我园实际工作情况，特此制定景园幼儿园的手足口病预防实施方案，具体如下： 1、利用板报和发放宣传单等形式，让家长了解手足口病的常识知识，做好家长宣传动员工作，建议家长不带幼儿到拥挤的公共场所，减少被感染的机会，尽量有效遏制手足口病的传播和蔓延。 2、加强幼儿晨、午检工作，做到早发现、早隔离、早报告，及时切断传染源。 3、加强卫生消毒工作：保持幼儿活动室、寝室等场所良好通风;加强幼儿玩具、口杯、毛巾、及物体表面等物品清洗消毒工作，幼儿被褥曝晒每日两次，餐具顿次消毒，口杯随用随消，幼儿用过的物品在每日离园后用紫外线灯消毒，同时用含氯制剂对幼儿接触的物品进行擦拭消毒，幼儿离园后用含氯制剂进行空气消毒，并做好记录 4、对幼儿食用的蔬菜和水果用盐水浸泡30分钟，并严格执行食品卫生操作规程。
5、保教人员要注意个人卫生，并教育指导幼儿养成“勤洗手、洗净手，勤洗澡、喝开水、吃熟食、勤通风、晒衣被”的卫生习惯。 6、加强幼儿家长联系工作，对不出勤幼儿及时做好家长沟通工作，并由本班保教人员和后勤人员进行家访，将不出勤原因详细在幼儿家长联系记录本上登记。 7、发现疫情要及时逐级报告，不能瞒报、漏报，同时做好疑似幼儿的防控登记工作。 幼儿园手足口病防控工作方案(二) 随着季节变化，天气逐渐转暖，手足口病进入了高发，易发时期。为了积极主动做好手足口病的预防工作，切实保障幼儿的身心健康和生命安全，我园积极采取各项预防措施，做到让家长真正放心。 一、明确责任，责任到人 各班级各部门充分认识手足口病引发的危害，明确职责和分工，层层落实各项防控措施，一旦发现疫情立即启动紧急预案，尽快、尽早、及时、有效地处置疫情，防止疫情蔓延和扩散。 二、向家长普及防控知识，并发放手足口病温馨提示卡和消毒防疫知识 三、开展卫生整治工作 1、大力开展全园卫生安全工作，认真治理环境卫生，不留死角。 2、做好卫生消毒工作，餐具采用高压蒸汽消毒，玩具、桌面、地面、门把手采用84消毒液擦拭，室内空气采取开窗通风与紫外线消毒相结合的方法，床上用品一律采用阳光暴晒。
手足口病知识讲座 手足口病是多种肠道病毒引起的常见传染病，人群对手足口病的病毒普遍易感，但以5岁以下小儿为主。手足口病隐性感染率高，患者、隐性感染者为主要传染源，该病主要通过患者的粪便、唾液、咽部分泌物污染的食物而传播，直接接触患者穿破的水泡亦会传播病毒，患者咽喉分泌物及唾液中的病毒,可通过空气飞沫传播。患者的粪便在数周内仍具传染性。 虽然手足口病目前还没有什么疫苗，但可以采取以下措施进行预防:1.、要勤洗手，搞好环境卫生、食品卫生和个人卫生，把好病从口入关。2、手足口病常在婴幼儿聚集场所发生，因此，托幼机构、学校等单位要做好晨检，及时发现疑似病人，及时隔离治疗。3、被污染的食物、日常用品、食具、玩具、床上用品以及便器等物品应及时消毒处理，衣物置阳光下暴晒，保持室内通风换气。4、预防手足口病的主要措施是做好病人粪便等排泄物的处理，切断传播途径。5、该病流行期间家长要尽量少让孩子到拥挤公共场所，减少被感染机会。6. 流行期可每天晨起检查孩子皮肤(主要是手心、脚心)和口腔有没有异常，注意孩子体温的变化 手足口病是一种常见多发传染病，以婴幼儿发病为主，多种肠道病毒都能引起，EV71病毒是其中的一种。一般全年均有发生，5━7月为高发期。 手足口病一般症状较轻，大多数患者发病时，往往先出现发烧症状，手掌心、脚掌心出现斑丘疹和疱疹(疹子周围可发红)，口腔粘膜出现疱疹和/或溃疡，疼痛明显。部分患者可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、恶心、呕吐和头疼等症状。少数患者病情较重，可并发脑炎、脑膜炎、心肌炎、肺炎等，如不及时治疗可危及生命。
2.手足口病是怎么传播的?有疫苗吗? 手足口病传播途径多，主要通过密切接触病人的粪便、疱疹液和呼吸道分泌物(如打喷嚏喷的飞沫等)及被污染的手、毛巾、手绢、牙杯、玩具、餐具、奶瓶、床上用品等而感染。手足口病目前没有疫苗，但只要早发现、早治疗，是完全可防可治的。 3.哪些人容易患手足口病? 婴幼儿和儿童普遍多发，3岁及3岁以下婴幼儿更容易得病。由于成人的免疫系统较完善，成人一旦感染一般不发病，也无任何症状。但感染后会传播病毒，因此成人也需要做好防护，避免传染给孩子。 4.手足口病是不是新的传染病? 手足口病不是新传染病，它是一种全球性传染病，1957年首次认识并命名，世界各国每年均有病例发生。我国1981年发现手足口病，每年都有人患病。 5.手足口病能治好吗? 如果得了手足口病，绝大多数情况下7━10天可以自行痊愈，不会留下后遗症，皮肤上也不会留下疤痕。根据以往的发病与治愈情况看，只有个别重症患者可能出现脑膜炎、肺炎等，只要积极配合医生治疗，多数可以痊愈。 6.孩子出现可疑症状怎么办? 如果孩子出现发热、皮疹等症状，要及时到医疗机构就诊，同时要密切观察。不要去幼儿园和人群聚集的公共场所，避免与其他孩子接触玩耍。一旦出现突然发高烧或神志不清、昏睡、肌肉或身体抽动、呼吸困难等，应立即送孩子到医院就诊。
手足口病应急预案文件排版存档编号：[UYTR-OUPT28-KBNTL98-UYNN208]
鲁山县卫生防疫站手足口病预防控制预案 （试行） 第一部分总则 一、目的 手足口病是由肠道病毒引起的常见传染病，好发于夏秋季，5岁以下儿童多见。主要通过直接接触传播，潜伏期2～7天，可导致流行或暴发。该病的病原体有20多种，其中以柯萨奇病毒Al6和肠道病毒71最为常见。临床表现以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征，病程约为4～8天，大部分患者可无明显或仅有轻微的临床症状，一般仅需对症治疗，预后良好。极少数病例可有脑炎、心肌炎、肺水肿、弛缓性麻痹等并发症，个别危重病人可因多种原因导致死亡。 为有效防止手足口病爆发流行，科学、规范、有序地开展手足口病的预防控制工作，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》、《河南省实施<突发公共卫生事件应急条例>办法》等法律法规，结合工作实际，特制订本预案。 二、指导思想和工作原则 坚持“预防为主，立足准备，指挥有力，协调有序，加强能力，有效应对”的指导思想，全面提高快速反应和应急处理能力，全面落实“早发现、早报告、早隔离、早治疗”措施，加强手足口病疫情的预防控制工作，保障全县人民群众身体健康和生命安全，为社会稳定和经济发展服务。 第二部分组织管理 一、组织领导和工作机构
成立手足口病疫情预防控制工作领导小组（见附件一），全面领导手足口病疫情预防控制工作。下设办公室、疫情监测报告组、疫情应急处置组和后勤供应组等工作机构（见附件二）。 二、职责分工 （一）手足口病防治领导小组办公室负责工作协调人员培训、健康教育和宣传报道等工作。 （二）疫情监测报告组 组织指导全县手足口病监测，保证网络支持，指导和开展疫情网络直报，负责疫情信息的收集、分析、预测、预警和报告工作。 （三）疫情应急处置组 组织指导全县的手足口病例确认、现场流行病学调查、密切接触者的追踪与管理、疫区的消毒与处理、提出控制措施和建议、开展预防控制效果的评估。 （四）后勤供应组 负责手足口病预防控制工作的防护用品、防治药品、消毒器械和药品、流行病学处置等物资的采购、储存、管理与发放、适时更新补充等，确保应急需要。 第三部分人员培训与健康教育 一、人员培训 做好人手足口病知识全员培训工作，对乡镇卫生院及县直医疗机构防保人员进行技术指导。培训的重点为卫生部《手足口病防控指南》、《河南省手足口病防治技术方案（试行）》及手足口病的基本知识，流行病学调查方法，预防控制措施，消毒隔 离和防护，标本采集、运送与存放等知识。
手足口病防治知识培训 手足口病是由肠道病毒引起的传染病，引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），其中以柯萨奇病毒A16型（A16）和肠道病毒71型（71 ）最为常见。 多发生于5岁以下儿童，表现口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡，多数患儿一周左右自愈，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。个别重症患儿病情发展快，导致死亡。目前缺乏有效治疗药物主要对症治疗。 有多种肠道病毒可引起手足口病。最常见的是柯萨奇病毒A16型及肠道病毒71型。其感染途径包括消化道，呼吸道及接触传播。 2临床表现 手足口病主要发生在4岁以下的儿童，潜伏期：多为2?10天，平均3?5天 1.普通病例表现 急性起病，发热、口痛、厌食、口腔黏膜出现散在疱疹或溃疡，位于舌、颊黏膜及硬额等处为多，也可波及软腭，牙龈、扁桃体和咽部。手、足、臀部、臂部、腿部出现斑丘疹，后转为疱疹，疱疹周围可有炎性红晕，疱内液体较少。手足部较多，掌背面均有。皮疹数少则几个多则几十个。消退后不留痕迹，无色素沉着。部分病例仅表现为皮疹或疱疹性咽峡炎。多在一周内痊愈，预后良好。部分病例皮疹表现不典型，如单一部位或仅表现为斑丘疹。 2.重症病例表现
少数病例（尤其是小于3岁者）病情进展迅速，在发病1~5天左右出现脑膜炎、脑炎（以脑干脑炎最为凶险）、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，极少数病例病情危重，可致死亡，存活病例可留有后遗症。 （1）神经系统表现并发中枢神经系统疾病时表现：精神差、嗜睡、易惊、头痛、呕吐、谵妄甚至昏迷；肢体抖动，肌阵挛、眼球震颤、共济失调、眼球运动障碍；无力或急性弛缓性麻痹；惊厥。查体可见脑膜刺激征，腱反射减弱或消失，巴氏征阳性。合并有中枢神经系统症状以2岁以内患儿多见。 （2）呼吸系统表现并发肺水肿表现：呼吸浅促、呼吸困难或节律改变，口唇发绀，咳嗽，咳白色、粉红色或血性泡沫样痰液；肺部可闻及湿啰音或痰鸣音。（3）循环系统表现并发心肌炎表现：面色苍灰、皮肤花纹、四肢发凉，指（趾）发绀；出冷汗；毛细血管再充盈时间延长。心率增快或减慢，脉搏浅速或减弱甚至消失；血压升高或下降。 3检查 常规检查：末梢血白细胞数减低或正常；尿、便一般无异常。可将咽拭子或 粪便标本送至实验室检测病毒，但病毒检测需要2~4周才能出结果。 4诊断 根据临床症状及体征，在大规模流行时，尤其是口腔、手足部位的典型皮疹分布特点。诊断不困难。 5鉴别诊断