采用酶联免疫吸附试验(间接法)检测不同血清标本中抗结核抗体。
1、用包被缓冲液分别把PPD、重组蛋白稀释成5μg/ml, 每孔100μl,4℃包被过夜;
2、PBST洗扳(洗扳机程序设定为洗6次); 用含1%BSA的PBS封闭, 每孔200μl 37℃孵育
2h;
3、PBST洗扳; 用含1%BSA的PBST稀释血清(稀释比例1∶100), 每孔100μl,37℃孵育1h;
4、PBST洗扳;用含1%BSA的PBST稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG(稀释比例
1∶10000),每孔100μl,37℃孵育1h;
5、PBST洗扳; 将4mg邻苯二胺溶于10ml 柠檬酸-Na2HPO4底物缓冲液中, 待溶解后加入
15μl30%H2O2, 每孔100μl, 避光显色30min, 然后加入50μl 的2mmol/L H2SO4终止反应, 在492nm处以空白对照孔调零后读取各孔吸光度(OD值)。
结果判定: 以健康对照者血清标本的平均OD值加上2倍标准方差(SD)作为判断标准, 若病人血清标本OD值大于此标准, 即判断为阳性, 反之则为阴性。
摘要............................................................................. .. (4) 【实验过程】 (5) PartⅠ. NDV 抗血清制备 (5) 一、实验原理 (5) 二、实验仪器、材料和试剂 (7) 1. 仪器 (7) 2. 材料 (7) 3. 试剂 (7) 三、方法和步骤 (7) （一）NDV 兔抗血清制备 (7) 1. 家兔捉拿方法 (7) 2. 家兔固定方法 (8) 3. 初次免疫 (9) 4. 二次免疫 (10) 5. 终末免疫 (10) 6. 试血 (10) 7. 颈动脉放血 (10) 8. 血清分离 (12)
9. 抗血清保存 (12) （二）NDV 鼠抗血清制备 (12) 1. 小白鼠的捉拿和固定 (12) 2. 初次免疫 (13) 3. 二次免疫 (15) 4. 终末免疫 (15) 5. 试血 (16) 6．放血 (18) 7．血清分离 (19) 8．抗血清保存 (19) Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (19) 一、基本原理 (19) 二、实验仪器、材料和试剂 (20) 1. 仪器 (20) 2. 材料 (20) 3. 试剂 (20) 三、方法和步骤 (20) 1. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取 . 20 2. 1%琼脂糖配制 (20) 3. 倒平板 (21) 4. 打孔 (21) 5. 稀释抗血清 (22)
6. 加样 (22) 7. 孵育 (23) 8. 结果观察 (23) Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价 (23) 一、基本原理 (23) 二、实验仪器、材料和试剂 (24) 1. 仪器 (24) 2. 材料 (24) 3. 试剂 (24) 三、方法和步骤 (25) 1. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取 . 25 2、抗原包被 (25) 3. 封闭 (25) 4. 洗板 (25) 5. 稀释抗血清 (25) 6. 加抗血清 (26) 7. 洗板 (26) 8. 加酶标二抗 (26) 9. 洗板 (27) 10. 显色 (27) 11. 终止 (27) 12. 读数 (27)
第十章凝集性试验 学习要点： 凝集试验的概念、原理、分类，以及常用的凝集试验类型。沉淀试验的概念、原理、分类，以及常用的沉淀试验类 由于所用抗原的性状不同，出现的现象也不同： 1、细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等不溶性颗粒抗原,当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块，即(agglutination)。 2、病毒、蛋白质等可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时,可形成较大的不溶性免疫复合物，在反应体系中出现不透淀反应(precipitation reaction)。 第一节凝集试验（agglutination test） 细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等不溶性的颗粒抗原,当与相应抗体结合，在有电解质存在时,抗原与抗体结合形凝集试验。凝集试验中的抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin） 一、凝集试验的一般原理 通常，细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷,周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负子层，使颗粒相互排斥。 当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的电位，而使颗粒聚集在一起。 二、凝集试验的发生分两阶段 1、抗原抗体的特异结合； 2、在电解质的参与下，出现可见的凝集颗粒。 三、凝集试验的用途
凝集试验方法简便，敏感度高，因而在临床检验中被广泛应用。 1、可用于定性的检测，即根据凝集现象的出现与否判定结果阳性或阴性。 2、也可进行定量检测，即将标本作一系列倍比稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。 四、凝集试验的分类 1、直接凝集试验（direct agglutination） 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。 直接凝集试验分为：玻板凝集试验和试管凝集试验。 （1）玻板凝集试验：为定性试验方法 ①用已知抗体作为诊断血清、与待检颗粒抗原悬液各加一滴在玻板上，混匀； ②数分钟后即可用肉眼观察凝集结果：出现颗粒凝集的为阳性反应 此法简便、快速，适用于：细菌分离株的鉴定与分型；红细胞ABO血型的鉴定。 （2）试管凝集试验：为定量试验方法 ①常用已知抗原液与一系列稀释的受检血清混合； ②保温后观察每管内抗原凝集程度；以产生50%凝集的最高稀释度作为血清中抗体的效价,亦称为凝集价、滴度。
血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。 血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。
令狐采学创作 胶乳凝集试验 令狐采学 ——类风湿因子的检测 【实验目的】 1.学习凝集反响的类型及原理 2.掌握胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的办法 【实验原理】 1.凝集反响是一种血清学反响。颗粒性抗原（完整的病原微生 物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一按时间，呈现肉眼可见的凝集小块。介入凝集反响的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。根据凝集反响产生的条件分为玻片法和试管法，也可分为直接凝集反响和间接凝集反响两
令狐采学创作 类。胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验，它是以聚苯乙烯胶乳微粒作为惰性载体。 2. 胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的原理：类风湿因子主要为IgM类自身抗体，但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体,可与IgG的Fc段结合。胶乳凝集试验是将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即可产生肉眼可见的凝集。胶乳凝集试剂是由纯化的人IgG和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。RF胶乳超出20U/ml即呈现肉眼可见的凝集颗粒。如呈现年夜颗粒凝集的为阳性反响，坚持均匀乳液状为阴性反响。根据阳性阴性反响即可知血清中是否有类风湿因子。检测类风湿因子对类风湿性关节炎(RA)的诊断、分型和疗效观察有着重要的意义。 【实验资料】
令狐采学创作 1.待测血清 2.类风湿因子(RF)测定试剂盒(胶乳凝集法)： 胶乳液成分：类风湿因子胶乳、牛血清白卵白、磷酸盐缓冲液；阳性对比成分：羊抗人IgG抗血清、牛血清白卵白、磷酸盐缓冲液； 阴性对比成分：牛血清白卵白、磷酸盐缓冲液。 3.微量加样器，反响板 【实验办法】 1.标识表记标帜：取四个反响板孔，标识表记标帜1号为待测，2号为阳性对比，3号为阴性对比，4号为空白对比。 2.加样：取待测血清，加入4个孔中，每孔加20μl。1号加50μl胶乳液,2号加阳性对比成分50μl，3号加阴性对比成分50μl 。 3.搅匀：轻轻晃动，充分混和。23分钟后观察结果。
标准血清效价测定 （一）凝集效价的测定 1．取小试管20 支，分两排放置于试管架上，前排标明 A ，后排标明 B ，再将各排由左而右注明号码。 2．各管均加生理盐水0．2 ml 。 3．吸取A 型被测血清0．2 ml ，加入A 排第1 管中，混匀，从第一管 中吸出0．2 ml 加入第2 管中，依次稀释至第10 管，从第10 管吸出 的0．2ml 弃掉，用同样的方法取B 型被测血清在B 排中稀释，最后两 排管的血清稀释倍数分别为1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶ 64 、1∶128 、1∶256 、1∶512 、1∶1024 。 4．A 排管各加B 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml；B 排管各加A 型 2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml，混匀。 5．放置室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果，以稀释倍数最高而 又显凝集者为其凝集效价。上述操作过程见下表。 表 A 型标准血清(抗B)效价测定
表 B 型标准血清(抗A)凝集效价测定 如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为1∶128 。如第八管仍显凝集则其凝集效价为1∶256 。O 型标准血清抗A 、抗B 的凝集效价测定，可参照上述 （二）标准血清的质量要求 A 型（抗B）效价应在1∶64 以上， B 型（抗A）效价应在1∶128 以上，如果低于上述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，重新制备，如果效价太高，可按效价规定加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价＜1∶4 。 （三）亲和力的测定 所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小而言。测定方法如下： 取待测血清0．1ml 放于玻片或瓷板上，取对应的10 ％红细胞生理盐水悬液0．05 ml ，加于血清中混匀并涂成直径约1cm 的圆形，立即记时。观察出现凝集的时间。并继续转动玻片或瓷板，至3 分钟时观察凝集块的大小。标准血清亲和力的质量要求，在15 ～30 秒以内应出现凝集，3 分钟时凝集块应在1m- m2 以上，标准血清中不应含脂肪（脂肪可使效价迅速降低），不可污染细菌。
红细胞凝集试验 血球凝集(HA)试验: 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验 血球凝集抑制(HI)试验:病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝 集抑制(HI)试验 阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液 指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的红细胞凝集。 （1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）发现流感病毒能使鸡的红细胞发生凝集，其后又发现其它各种病毒也能引起同样的红细胞凝集反应。即红细胞表面存在着对各种病毒的受体，病毒与受体结合，以红细胞为桥梁的结果而引起凝集。利用此反应可以进行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗体时，则由病毒引起的凝集作用将被抑制，所以可用于抗病毒抗体的检出。 （2）由抗体引起的凝集：（a）如果存在对红细胞表面决定基的抗体，则红细胞亦将凝集。可用于测定对抗红细胞的抗体的效价或鉴定人的血型。（b）在红细胞表面，如果人为地使之吸附或结合特定的抗原物质，则与该抗原相对应的抗体将引起红细胞凝集（被动凝集反应或间接凝集反应，psssive he-magglntination）。 血凝及血凝抑制试验 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 [目的要求] 掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。 [材料与试剂] 1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL定量移液器，滴头，微型振荡器。 2. 生理盐水，0.5%鸡红细胞悬液，新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。 [实验内容及操作方法] （一）血球凝集(HA)试验 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 uL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 uL；第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 uL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一.IgG 类 I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清 600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。 二.IgM 1?血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐
水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。 四． 五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）
附录ⅪJ抗狂犬病血清效价测定法 第一法小鼠中和试验法（仲裁法） 本法系根据抗狂犬病血清能中和狂犬病病毒的作用，将供试品与标准品做系列稀释，分别与狂犬病病毒悬液结合，小鼠脑内注射，在规定时间内观察小鼠存活和死亡情况，以测定供试品效价。 试剂（1）量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，调pH值至7.2～8.0。于磷酸盐缓冲液98ml中，加入2ml灭能小牛血清，临用前配制。 （2）20％小牛血清磷酸盐缓冲液称取磷酸二氢钾1.2g、磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)20.8g，加注射用水溶解并稀释至1000ml，溶解后过滤，调pH至7.6。灭菌后pH值应为7.2～8.0。于磷酸盐缓冲液80ml中，加入20ml灭能小牛血清，临用前配制。 中和用病毒悬液的制备（1）病毒悬液的制备取CVS毒种(一般为冻干毒种)制成10-2悬液，制法见本法（2）项，脑内接种体重10～12g小鼠每只0.03ml，待发病后取鼠脑再制成10-2悬液，接种于小鼠脑内进行传代，一般传2～3代。选用第5天发病并麻痹的鼠脑以脱脂牛乳研磨稀释成20%的脑悬液，按0.5ml分装安瓿,冻干后真空封口，制成冻干中和用病毒，-30℃冻存待用；或用第5天发病并麻痹的鼠脑用20%小牛血清磷酸盐缓冲液研磨稀释成10-1悬液，以每分钟2000转离心20分钟，取上清液混匀后分装小管，-70℃冻存待用。 （2）病毒悬液毒力的预测 ①冻干病毒的预测。取含20%脑悬液的冻干病毒，启开后加入2%小牛血清磷酸盐缓冲液1.0ml，吹打均匀后加入4.0ml 2%小牛血清磷酸盐缓冲液与病毒液充分混匀，以每分钟1500转离心10分钟，取上清液与等量的2%小牛血清磷酸盐缓冲液混合即为10-2悬液，然后再稀释至10-3、10-4、10-5、10-6，从10-6至10-2的稀释液中各取0.5ml置于5个小管内，每管再加入2%小牛血清磷酸盐缓冲液0.5ml，置37℃水浴1小时。用体重10～12g小鼠30只，分成5组，每组6只，用经37℃作用的10-6至10-2病毒悬液接种小鼠，每个稀释度接种6只小鼠，每只小鼠脑内接种0.03ml，每天观察小鼠发病死亡情况，观察14天，接种后4天内死亡的小鼠按非特异性死亡计。以接种5天后的发病死亡小鼠统计LD50。 ②-70℃冻存病毒的预测。取含10%脑悬液的冰冻病毒融化后即为10-1悬液，然后再稀释至10-2～10-7。从10-7至10-3各取0.5ml加至5个小管内，每管再加入2%小牛血清磷酸盐缓冲液0.5ml，置37℃水浴1小时。用体重10～12g小鼠30只，分成5组，每组6只，用经37℃作用的10-7至10-3病毒悬液接种小鼠，每个稀释度接种小鼠6只，每只小鼠脑内接种0.03ml，每天观察小鼠发病死亡情况，观察14天。接种后4天内死亡的小鼠按非特异性死亡计。以接种5天后的发病死亡小鼠统计LD50。 （3）中和用病毒悬液的制备按病毒悬液预测的100个LD50的病毒稀释度作为中和用病毒悬液稀释倍数，用于小鼠中和试验。要求中和用病毒悬液经37℃水浴作用1小时的病毒量在32～320LD50之间。 抗狂犬病血清标准品溶液的制备由国家药品检定机构提供，或用经国家药品检定机构认可的各生产单位工作用标准品。配制方法按使用说明书进行。
标准操作规程（SOP ） 中国国家流感中心 流感/禽流感病毒红细胞凝集试验 一、目的 本SOP 为了规范红细胞凝集试验（HA ，hemagglutination test ）操作，确保试验的质量而制定。 二、范围 适用于中国国家流感中心所有技术人员进行流感/禽流感病毒红细胞凝集试验。 三、程序 （一）生物安全要求 季节性流感病毒或经完全灭活的高致病禽流感病毒和H2N2流感病毒操作可以在BSL-2实验室里进行，操作人员采取BSL-2级防护。禽流感H5、H7亚型高致病性禽流感病毒及H2N2亚型流感病毒的操作需要在BSL-3级实验室中进行，操作人员采取BSL-3级防护。具体防护参见“生物安全个人防护SOP ”。 （二）材料 1．待测毒株 2．1%红细胞悬液（鸡、豚鼠，由于“O ”相毒株不能凝集鸡红细胞，所以在对该类病毒进行鉴定时应使用豚鼠红细胞） 3．磷酸缓冲液（PBS ），0.01M ， pH 7.4 (Sigma P 3813) 4．多道及单道可调加样器 单通道可调加样器量程为 20μL ～200μL 、200μL ～1000μL 8通道或12道可调加样器量程为 20μL ～200μL 5．96孔微量板：鸡红细胞选择“V ”型或“U ”型底微量板；豚鼠红细胞选择“U ”型底微量板。 6．其它耗材，200μL 、1000μL 滴头、试管、加样槽等。 （三）实验步骤 1．进入实验室前做好个人防护。 2．试验前试剂准备： 编号：CNICSOP07024 制定时间：2007.01 制定人：张烨 审核人：董婕 批准人：舒 跃 龙 生效日期：2007.03 版本号：V-2
（1）PBS配制：按照Sigma的说明书的要求配制PBS缓冲液。121℃高压灭菌20min，分装，4℃储存。 （2）1%红细胞悬液：按照“1%鸡红细胞悬液配制SOP、1%豚鼠红细胞悬液配制SOP”配制红细胞悬液。 3．根据所用的红细胞种类选用适当的微量板.。将微量板横向放置：垂直方向称列，如孔A1～H1称为第一列；平行方向称行，如A1～A12称为A 行。标记好待检病毒的实验室编号及加样顺序。 4．加PBS，取8道加样器装好200μL带滤芯滴头，于加样槽中吸取50μL PBS 加入微量板的第二列，依次加入50μL PBS直至最后一列。 5．加入待检病毒，单道加样器装好200 μL带滤芯滴头，吸取100μL待检病毒液，加入已标记好的微量板的第一列相对应的孔内。最后的H1孔内加100μL PBS作为红细胞对照。 6．8道加样器装好200 μL带滤芯滴头，从第一列的各孔分别取50μL病毒液，加入到第二列的相应的各孔，混匀数次。依次从微量板的第二列至第十二列做二倍系列稀释。最后一列每孔弃去50μL液体。 7．8道加样器装好200 μL带滤芯滴头，于加样槽中吸取50μL红细胞悬液。 每孔加入50μL 1%的红细胞悬液，轻弹微量板，使红细胞与病毒充分混合。 8．室温孵育30～60min，观察红细胞凝集现象并记录结果。 9．结果判定：红细胞凝集滴度的判定以出现完全凝集的最高稀释度为终点，其稀释度的倒数即为病毒的红细胞凝集滴度。红细胞完全凝集以“+”记录；无凝集或部分凝集“-”记录。
西安医学院教案 （专业课程） 课程名称临床免疫学 与检验 班级检本1008 专业，层次检验，本科 教师武永红专业技 术职务 讲师 授课方式 （大，小班， 实习） 实验学时9学时 授课题目（章，节）抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定 基本教材或主要参考书王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012 刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009 曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011 教学目的： 1.掌握：细菌接种培养的操作能力，加强细菌性抗原免疫动物的实验操作能力，肥达氏反应的模拟操作及间接血凝实验测定细菌性抗体的效价， 2.熟悉：临床用于诊断细菌或病毒感染的凝集反应测定效价试验的原理。 教学内容： 1.细菌培养与免疫原的制备 2.“O”和抗“H”血清的制备 3.试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价 4.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价 教学方法：启发式教学；讲授重点内容。 教具：板书示教 教学重点、难点： 1. 间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价 教研室审阅意见 （教研室主任签名） 年月日
教学内容教学手段 时间分配 抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定 （一）细菌培养与免疫原的制备 （二）“O”和抗“H”血清的制备 （三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价 （四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价 （一）细菌培养与免疫原的制备 伤寒沙门菌标准菌株干粉→生理盐水溶解→接种肉汤培养基→接种普通平板→生理盐水菌液（100℃水浴制备O抗原，甲醛处理制备H抗原） （二）“O”和抗“H”血清的制备 Ag伤寒沙门菌O和H抗原→分别免疫两组家兔→抗O血清和抗H血清 O/H抗原的免疫程序： 日序（天）免疫剂量（ml）免疫途径 1 1 皮内五点注射 8 1.5 耳静脉注射 15 1.5 耳静脉注射 22 1.5 耳静脉注射 放血方法：颈动脉采血 试血方法：试管凝集试验 （三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价 试管凝集试验的原理：在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。步骤和方法： 1．试管编号标记。 2．试管凝集操作程序（单位：ml） 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9（对照） 生理盐水0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1：10血清0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃 0.5 诊断菌液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 终稀释度1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 -＃讲解 20分 学生操作160分 讲解 20分 学生操作160分
布病试管凝集试验 一、实验前准备 1、试管的准备 ①把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。先 用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍。 ②试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160℃干燥3个小时 （整个干燥过程需要5~6个小时）。 ③实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水 配置方法：称取0.5克石炭酸，加入100ml的生理盐水中，配置后置高压锅中121℃高压30分钟。 2、试剂的准备 ①标准抗原:按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作1，20(工作浓度)稀释。 ②标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 ③标准阴性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 3、被检血清 ①按常规方法采血分离血清 血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。 ②运送和保存血清样品 防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。 二、试验操作过程 1、确定被检血清的稀释度 牛、马、骆驼稀释用1:50,1：100,1：200,1：400(4个稀释度);猪、山羊、绵羊和狗用1：25,1:50,1:100,1:200(4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度，即牛、马、骆驼用1：50,1：100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25,1:50,为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。 2、稀释被检血清--猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释 ①每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加1.15 mL稀释液，第2-4管各加人0.5 m L稀释液。 ②取被检血清0.1 mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25 mL。 ③从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5 m L至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5 mL，稀释完毕。 ④从第1至第4管的血清稀释度分别为1：12.5,1：25,1：50,1：100。 3、加抗原 将0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1 : 25,1 : 50,1 : 100,1：200，牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1：50,1：100,1：200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。 4、设立对照--每次试验都应设立下列对照。
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程 1、目的 为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。 2、适用范围 本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。 3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。 4、原理 将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。 5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。 6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。 7、操作步骤与方法： 7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心
机离心5分钟。吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。 7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。 7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。 7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。在所有孔中加入50ul与父亲同型的A型或B型0.8%红细胞悬液，测定孕妇血清中的抗A（B）IgG血型抗体。 7.5将加样后的试剂卡，置37℃孵育器中孵育15分钟后用专用离心机离心5分钟(900rpm 2分钟，1500rpm 3分钟), 取出，判定结果。 8、结果判定： 8.1产生1+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 8.2 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。 8.3阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。 9、注意事项：
血清凝集试验标准操作程序 1. 检验目的 规范血清凝集试验操作程序。 2. 实验原理 用已知的抗体在载玻片上直接与细菌纯培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌菌体含有相应的抗原。 3. 操作步骤 3.1 沙门菌血清凝集试验 3.1.1首先用可疑菌与沙门菌O多价血清(A-F）进行凝集，若呈明显凝集，提示被检菌株可能属于A-F6个群范围之内，再用H因子血清第一相（特异相）定型，最后用H因子第二相辅助定型。 3.1.2若生化反应符合沙门菌，但A-F多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断O抗原于相应抗体发生凝集，加热将其破坏。应将细菌制成菌悬液，放入沸水浴中加热15-30分钟，冷却后再次做凝集试验。若除去Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A-F以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。 3.2 志贺菌血清凝集试验 3.2.1首先用志贺菌属4种多价血清和鲍氏志贺多价血清做玻片凝集，如凝集再进一步做血清定型（用福氏志贺菌1-6型、痢疾志贺菌1-2型以及宋内志贺菌鉴定到种、型）。一般先用福氏志贺菌血清凝集，因我国以B群最为多见，如出现生化反应符合志贺菌，而4种多价血清不凝集的菌株，应考虑为K抗原存在，将菌液加热到100℃15-30分钟后再进行凝集。 3.2.2与各型志贺菌血清不发生凝集，菌落特征与生化反应似痢疾志贺菌，可考虑非典型性痢疾血清型，应送到专业实验室进行鉴定。
3.3致病性大肠埃希菌血清凝集试验 3.3.1 先以生化反应确定为大肠埃希菌，再以抗原分析定型。 3.3.2 用接种环挑取大肠埃希菌依次于数组多价OK抗血清做玻片凝集试验（其分组血清型见试剂说明书），若与某一单价血清呈凝集反应，可初步确定为相应血清型，再用菌液与OK 抗血清确定亚型。 3.3.3如不凝集或凝集微弱，可视为阴性。再挑取另一个菌落，如上法试验，如此检查5-10个菌落。若均不凝集，可最终判断为阴性。 3.4 霍乱弧菌血清凝集试验 3.4.1先用接种环挑取一环生理盐水于玻片上，以接种针挑取少许菌落与盐水混匀，再取稀释血清1环与之混合，立即出现凝集者为阳性。 3.4.2 若有自凝现象改用生理盐水稀释的血清再做凝集。与O1群O139霍乱弧菌抗血清凝集者菌，然后再进一步对霍乱弧菌分型。 3.5 结果判断：阴性：试验一侧及对照一侧均匀浑浊。阳性：对照一侧均匀浑浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧凝集。 4. 注意事项 试验时应同时用生理盐水做对照，以防止出现假阳性。
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑. 实验报告 课程名称：病原生物学与免疫学实验指导老师：陈玮__ _____成绩： 实验名称：凝集反应和吞噬作用______实验类型：_____________同组学生姓名：钟一鸣____ 1.直接凝集反应——ABO血型鉴定 【实验原理】 细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。常用的包括玻片法和试管法两种。 玻片凝集试验为定性实验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒性抗原如菌液或红细胞，各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便、快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。 在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含有A、B抗原而分为A（含A抗原）、B（含B抗原）、AB（含A、B抗原）、O（均不含A、B抗原）型。将受试者的红细胞加入抗B抗体试剂和抗A抗体试剂中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞上有无A、B抗原。 表1 ABO血型鉴定表 血型抗A分型试剂抗B分型试剂 A+- B- + AB++ O- - 【实验现象】 1）.在抗A抗体中，可见红细胞均匀分散，虽有时会见红细胞在圆孔中间沉积，但再加以摇晃便可发现红细胞分散。整体液体较为浑浊 2）.在抗B抗体中，可见红细胞在圆孔中央凝集成块，加以摇晃也不分散，周围液体较为澄清。 【实验结论】 该受试者血液红细胞含B抗原，为B型血 【实验讨论】
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 1）实验时应当注意抗体和抗原的比例。即滴加的血液含量以及抗体含量应适当，而不要一个特别多一个特别少，会影响实验结果 2）当看到有红细胞类似在圆孔中间凝集时，可多加晃动，看其是否会分散——有可能是因为圆圈状离心晃动使红细胞向中间沉积，而不是因凝集产生的现象。若分散则为干扰现象，并不是凝集反应。 2.间接凝集反应——血清类风湿因子测定 【实验原理】 以红细胞为载体，将人丙种球蛋白（可溶性抗原）吸附在载体表面而成为致敏红细胞，然后用此致敏红细胞检测类风湿性关节炎患者血清中的类风湿因子（抗变性IgG抗体），当患者血清中含有类风湿因子时红细胞发生凝集。此方法常用于检测血清中的抗体，辅助诊断疾病。 【实验现象】 理论上第九孔阴性对照中，孔中的红细胞应紧密集中与孔中央，成为一暗红点，孔周围整齐光滑。第十孔阳性对照红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。第1-8孔，若有类风湿因子，则应随着稀释度增加，红细胞由完全凝集于孔四周看不到中央红点，逐渐转变为可看见中央有疏松的红点，若最终稀释过多可致如阴性对照的结果。 本次实验，所有孔中，包括阴性对照，红细胞均凝集并均匀地铺于孔的四周，孔中央无红细胞沉积的暗红点。 【实验结论】 十个孔均为“++++”，无法判断凝集效价以及结果是否阳性 【实验讨论】 1）.本次实验阴性对照仍出现完全凝集并均匀铺于孔四周的现象。经分析可能是由于稀释液遭到污染，使得所有孔中红细胞均发生完全凝集。 2）.实验时从恒温槽中取出96孔板时要注意轻拿，防止铺于孔四周已经凝集的红细胞因震动向孔心滑动，出现类似阴性的现象。 3）.加致敏红细胞悬液时应从第9孔阴性对照开始一次从低浓度向高浓度进行。 3.协同凝集实验 【实验原理】 金黄色葡萄球菌细胞壁含有一种蛋白质，称为金黄色葡萄球菌A蛋白SPA。SPA具有
标准血清及标准红细胞的制备 一、标准A 、B 、O 血清的制备 选择A 型、B 型、O 型的健康青、壮年，无菌操作采取静脉血液，使其在37 ℃凝固，待血清开始出现后，放冰箱内12 小时或24 小时，使冷凝素被自身红细胞吸收。取出离心沉淀分离血清，再将分离出来的血清置于56 ℃水浴中30 分钟或60 ℃5 分钟灭活补体，然后测定其效价和凝集力，符合规定要求时，即成标准血清。各级血站亦可将试验后的无异常、无乳糜的A 、B 、O 血型管分别抽出，按以上步骤处理，即成标准血清。 （一）凝集效价的测定 1．取小试管20 支，分两排放置于试管架上，前排标明A ，后排标明B ，再将各排由左而右注明号码。 2．各管均加生理盐水0．2 ml 。 3．吸取A 型被测血清0．2 ml ，加入A 排第1 管中，混匀，吸出0．2 ml 加入第2 管中，如此稀释至第10 管，从第10 管吸出的0．2ml 弃掉，用同样的方法取B 型被测血清在B 排中稀释，最后两排管的血清稀释倍数分别为1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶64 、1∶ 128 、1∶256 、1∶512 、1∶1024 。 4．A 排管各加B 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml；B 排管各加A 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml，混匀。 5．放置室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果，以稀释倍数最高而又显凝集者为其凝集效价。上述操作过程见表20 －2 和表20 －3 。 表20 －2 A 型标准血清效价测定
管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 生理盐水（ml） A 型血清（ml） 2 ％B 型红细胞（ml）稀释倍数0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2 0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 表20 －3 B 型标准血清凝集效价测定 管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 生理盐水（ml） B 型血清（ml） 2 ％A 型红细胞（ml）稀释倍数0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2 0．2 0．2 0．2 0． 2 0． 2 0． 2 混匀后，放室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果。 如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为1∶128 。如第八管仍显凝集则其凝集效价为1∶256 。O 型标准血清抗A 、抗B 的凝集效价测定，可参照上述方法进行。 （二）标准血清的质量要求 A 型（抗B）效价应在1∶64 以上， B 型（抗A）效价应在1∶128 以上，如果低于上述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，重新制备，如果效价太高，可按效价规定加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价＜ 1∶4 。 （三）亲和力的测定 所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小而言。测定方法如下：
试管法血型抗体效价测定 1. 检验目的 抗体效价测定是一种半定量检测抗体浓度的方法。把效价视为抗体的含量，在临床输血检验中主要用于鉴定标准血清效价、患者血清抗体检测及血清试剂的稀释等。 2. 检验方法 试管法（血凝法）。 3. 检验原理 将被检抗血清用生理盐水作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现肉眼明显可见凝集的最高血清稀释倍数的倒数来表示抗体的效价。 4. 标本要求 4.1 采集患者EDTA抗凝静脉血2.0ml。 4.2 将不抗凝静脉血以3000r/min离心3分钟，分离上层血清4C保存。 5. 试剂 标准2%A1、B型标准红细胞悬液；0.9%生理盐水。 6. 器材 离心机、小试管、刻度吸管或加样器（50?200卩l ）37C水浴箱等。 7. 操作程序 7.1. 取20支小试管，分两排，编号1-10 号，第一排每管加生理盐水0.4ml。 7.2. 用加样器在第一排第一管中加入0.4ml 被检者血清，混匀，移0.2ml 至第二 排第 1 管，依此类推，至第10 管，最后弃去0.4ml。1?10管的稀释度分别为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512。 7.2. 于第一排每管中加入2% A1 型标准红细胞悬液0.2ml ，混匀。 7.3. 于第二排每管加入2%B型标准红细胞悬液0.2 ml，混匀。
7.3. 室温孵育15分钟。 7.4. 以3000r/min 离心10秒，以出现（＋）凝集强度试管的血清稀倍数的倒数 为该抗血清的效价。 8. 结果判断 8.1. 一般盐水凝集试验可立即观察，或置室温1 小时观察结果。 82冷凝集素效价要置4 °C冰箱1小时观察结果。 8.3. 若出现低稀释凝集强度比高稀释凝集强度要强，说明有前带现象发生。 8.4. 对1 份血清重复滴定，结果可能不一样，如果只有一个稀释度的差别，是正常误差范围。 9. 注意事项 9.1 ．稀释操作时要准确，避免稀释不匀出现“跳管”现象。 9.2. 离心后试管内上清出现溶血外观，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激 活，有重要临床意义。 9.3. 稀释液的容量越小，可能产生的误差越大。如果可能，可以增大稀释容量。 9.4. 如果一种血清分别和几种红细胞作用，要将血清做总稀释，然后分别取相同 的血清量到几个试管中，以减少误差。
血液凝集实验报告 篇一：直接凝集反应实验报告 免疫学·直接凝集反应实验报告 实验一：玻片凝集实验 1.实验原理： 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%nacl）存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。凝集反应的方法有两种：①直接法；②间接法。颗粒性抗原（如完整的细菌或细胞）与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。如玻片凝集反应和试管凝集反应。将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。如RF因子检测 玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。 本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类aBo血型的鉴定。aBo血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。人类aBo血型抗原有两种：a抗原和B抗原。a型血红细胞表面具有a型抗原，血液中具有抗B抗体；B型血红细胞表面具有B型抗原，血液中具有抗a抗体；aB型血红细胞表面具有a抗原和B抗原，血液中不具有
抗a、B抗体；o型血红细胞表面不具有a、B抗体，但血液中含有抗a、B抗体。若用已知的抗a血清和抗B血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。 2.实验方法： （1）取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明a、B分区。（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗a血清一滴，滴在a区内；同法在B区内滴加抗B血清一滴。 （3）使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。 （4）用木棒的两端取血，分别在抗a血清和抗B血清中搅拌均匀。（5）用无菌棉棒压迫手指止血。 （6）静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。 3.实验结果： 4.结果分析： 实验二：试管凝集实验 1.实验原理： 试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出现。如出现凝集块者为阳性反应。混合后仍均匀浑浊，无凝集块出现者为阴性反应。根据血清凝集效价判定待检血清中相应抗体的含量。即在试管内用已知颗粒性抗原检测未知抗体的相对含量的半定量试验。本次实验