转基因农作物具有多种全新优良品质，其特征是采用生物工程技术将一个物种基因嵌入另一个物种中。现行的基因工程方法主要有以下几种：
1、首先选择所需特性的DNA片断，以便将它导入农作物中。然后将称为细胞质遗传体的螺旋形DNA链从土壤细菌中抽取出来，再把细胞质遗传体环剪开，以便将所需特性DNA片断嵌入环中，并把再造胞质遗传体环移回土壤细菌中。
2、例如改造西红柿，就将一片西红柿叶浸入这种土壤细菌溶液中以利土壤细菌与西红柿细胞亲合。这样就将改变的细胞质遗传体转移到植物细胞DNA链中。
3、一旦外源DNA被移植到农作物细胞核中，它便成为该植物染色体成分。
4、研究人员继而培植该植物细胞，直至它分裂并生成新型植物。与此同时，新生植物就带有为其基因编码的外源DNA。
5、含有全新特性的植物就可以入土栽培了。
自从美国农业人员纷纷采用首批上市的生物工程技术改良农作物品种以来，研究人员还在研制其它可以大大改进农作物品质且具有保健医疗功效和出产优质纤维的农作物。例如：
抗除草剂农作物：1996年孟山都生物技术公司开始上市销售基因改良大豆，这种新型大豆具有抵抗该公司出产的一种常用除草剂的能力。孟山都和霍伊斯特公司合作还推出了抗除草剂玉米。
生物改良新饲料：不久人们可以给家禽和奶牛喂食生物改良饲料，以便为人类提供更优良的蛋白质并帮助动物吸收磷。生物改良饲料可以产生两项效益，即既能降低饲料成本，又能减少动物粪便中磷含量，因而有益于保护生态环境。
促进健康的食品：杜邦和孟山都公司即将推出多种可榨取有益心脏的食用油的大豆。两大公司还将联手推出味道更鲜美且更容易消化的强化大豆新品种。
含天然杀虫剂的农作物：自1996年以来美国研究人员一直种植一种转基因改良棉花，这种棉花中含有一种从细菌中提取对棉铃虫和苞芽虫有致命危害的基因。目前科学家还在创造含天然杀虫剂基因的玉米和马铃薯。
抗疾病农作物：艾尔姆公司与其它公司合作，正在研究高含量抗癌物质的西红柿，以及可用于生产血红蛋白的玉米和大豆。杜邦公司正在研究如何使大豆含有异黄酮成分，人们食用这种大豆就可以防止心脏病发作。此外，内含疫苗的香蕉和马铃薯也正在加紧研究中。
特种转基因棉花和玉米：孟山都公司正在采用生物工程技术改良棉花，以使其出产天然蓝色和黄褐色纤维用于纺织布料。杜邦公司开发的一种微生物，有助于在棉花中产生超高弹性聚酯纤维，而卡吉尔和道化学公司则计划从玉米中提取塑料。
植物基因的遗传转化是指将外源DNA通过载体、媒体或其他物理、化学方法导入植物细胞并得
到整合和表达的过程。实现这一转化的途径称之为转化系统。外源DNA通过载体介导实现其转化的系统称之为基因载体转化系统。目前已经建立了十余种基因转化方法，按转化系统的原理进行分类，可以分为三大转化系统类型：
（1）以质粒DNA等为载体的转化系统；
（2）不用任何载体，通过物理化学方法直接将外源基因导入受体细胞的直接转化系统；
（3）以植物自身的生殖系统种质细胞，如花粉粒或其它细胞等为媒体的转化系统。
现将常用的植物基因转化方法的特点列表进行分析，见表
《常用植物基因转化方法特点比较》
转化方法农杆菌法PEG法电击法微针注射法基因枪法花粉管通道法
受体材料完整细胞原生质体原生质体原生质体完整细胞卵细胞
宿主范围有无无无无有性繁殖植物
组培条件简单复杂复杂复杂简单无
嵌合体比例有无无无多无
操作复杂性简单简单复杂复杂复杂简单
设备要求便宜便宜昂贵昂贵昂贵便宜
工作效率高低低低高低
单子叶植物应用少可行可行可行广泛广泛
第3节基因工程的应用 【本节重难点】 重点：1.基因工程在农业和医疗等方面的应用 难点：1.基因治疗 【知识精讲】 教材梳理 知识点一植物基因工程的应用 植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力（如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等）以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。 1.提高抗逆性 （1）常用抗虫基因：用于抗虫（杀虫）的基因主要是Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。 （2）常用抗病基因：a.抗病毒基因有：病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因；b.抗真菌基因有：几丁质酶基因和抗毒素合成基因 （3）其他抗逆基因：环境条件对农作物的生产会造成很大影响，并且这些影响是多方面的，因此，抗逆性基因也有多种多样，如：抗盐碱和干旱的调节细胞渗透压基因、抗冻基因、抗除草剂基因等等。 2.改良植物品质 由于人们的食品含有的营养不平衡，不能满足人们对食品的要求，这样，可以通过转基因技术，使植物能够合成某些本来不能合成的物质。如科学家将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物中，或者改变这些氨基酸合成途径中某种关键酶的活性，以提高氨基酸的含量。 3.生产药物 基因工程不但促进了传统技术的变革，也为人类提供了传统产业难以得到的许多昂贵药品，并已形成基因工程制药业的雏形。目前诸如人胰岛素、人生长激素、人脑激素、 α－干扰素、乙肝疫苗、蛋白C、组织血纤维蛋白溶酶原激活剂等数十种基因工程药物已实现商品化。此外，还有促红细胞生成素、白细胞介素－2、肾素、心钠素等一大批珍贵药品正处于试用或临床试验阶段。 知识点二动物基因工程的应用 1.用于提高动物生长速度：由于外援生长激素基因的表达可以使转基因动物生长得更快，将这类基因导入动物体内，以提高动物的生长速率。如：转基因绵羊和转基因鲤鱼。 2.用于改善畜产品的品质：基因工程可用于改善畜产品的品质。如：有些人对牛奶中的乳糖不能完全消化或食用后会出现过敏、腹泻、恶心等不适症状，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，这样所获得的牛奶其成分不受影响，但乳糖的含量大大减低。 3.用转基因动物做器官移植的供体：目前，人体移植器官短缺是一个世界性的难题，用其它动物的器官替代，又会出现免疫排斥现象，现在，科学家正试图利用基因工程方法对一些动物的器官进行改造，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆器官。 知识点三基因治疗 1.概念：基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。 2.方法：体外基因治疗和体内基因治疗 体外基因治疗：先从病人体内获得某种相关细胞，进行培养，然后在体外完成基因转移，再
基因工程基本过程 基因工程（genetic engineering），也叫基因操作、遗传工程，或重组体DNA 技术。它是一项将生物的某个基因通过基因载体运送到另一种生物的活性细胞中，并使之无性繁殖（称之为"克隆"）和行使正常功能（称之为"表达"），从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。一般说来，基因工程是专指用生物化学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的DNA片段）与载体系统（病毒、细菌质粒或噬菌体）的DNA 结合成一个复制子。这样形成的杂合分子可以在复制子所在的宿主生物或细胞中复制，继而通过转化或转染宿主细胞、生长和筛选转化子，无性繁殖使之成为克隆。然后直接利用转化子，或者将克隆的分子自转化子分离后再导入适当的表达体系，使重组基因在细胞内表达，产生特定的基因产物。 常用的工具酶 限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接 核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰 其它酶类--用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、检测等。 主要过程有为四步： 一．获得目的基因 有多种方法可获得目得基因 1.构建cDNA文库分离目的基因 过程： （1）从真核细胞中提取mRNA，以其为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA的第一条链。 （2）以第一条链为模板，以反转录酶或DNA聚合酶Ｉ作用下合成cDNA的第二条链。 （3）在甲基化酶作用下使cDNA甲基化。
（4）接头或衔接子连接。 （5）凝胶过滤分离cDNA。 （6）通过核酸探针法或免疫反应法从cDNA文库中分离特异cDNA克隆。 2.人工化学合成法 适于已知的核苷酸序列且校小的ＤＮＡ片断合成，常用方法有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、固相合成法、自动化合成法等。 过程：先用以上方法合成基因DNA不同部位的两条链的寡核苷短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段。然后将这些DNA片段按正确的次序进行退火连接起来形较长的ＤＮＡ片段，再用连接酶连接成完整的基因。 3.利用PCR技术直接扩增目的基因 PCR（Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物，类似于DNA的天然复制过程，用ＰＣＲ法进行扩增，特异地合成目的cDNA链，用于重组、克隆。 二．载体的选择与制备 1.载体的选择（以质粒为例） ⑴载体必须是复制子。 ⑵具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。 ⑶具备多克隆位点（MCS），便于外源基因插入。 ⑷自身分子量较小，拷贝数高。 ⑸在宿主细胞内稳定性高。 (6)应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别 (7)应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。 (8)应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，且所产生的mRNA较为稳定。 (9)所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。 2.制备有多种分离质粒的方法，如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。 目前一般使用碱变性法制备质粒DNA。这个方法主要包括培养收集细菌菌体，裂解细胞，将质粒DNA与染色体DNA分开及除去蛋白质和RNA。
（0589）《基因工程》网上作业题及答案 1：第一次作业 2：第二次作业 3：第三次作业 4：第四次作业 5：第五次作业 1：[论述题] 一、名词解释 1、限制性核酸内切酶； 2、基因文库； 3、cDNA文库； 4、RFLP； 5、核酸探针； 6、转录 二、简答题 1、试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？ 2、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 3、什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈Gene Engineering 诞生的基础？ 4、抗性基因是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 5、Y AC 载体具有什么样的功能性元件？为什么它在克隆大片段时具有很大的优越性？ 三、论述题 1、分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？ 参考答案： 一、名词解释 1、DNA重组：是指用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接，组成一个新的DNA 分子的过程。 2、克隆：原指一个亲本细胞经无性繁殖产生无数个相同细胞的子代群体的过程。 3、DNA克隆：是指将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中，使其扩增和繁殖，以获得大量的相同的DNA分子，又称分子克隆或基因克隆。 4、目的基因：要分离和克隆的相应基因常称为目的基因。因目的基因片段需插入载体，导入宿主细胞内进行复制或表达，所以对宿主细胞DNA而言，又称它为外源性基因或外源性DNA。 5、基因载体：能够携带外源DNA进入受体细胞内进行复制或表达的DNA分子，被称为基因载体。
6、质粒：是独立于细菌染色体之外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA。 二、简答题 1、答： （1）限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；（2）DNA polⅠ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针；（3）Klenow片段：合成cDNA第二条链，补齐或标记双链DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA体外扩增(PCR)；（5）逆转录酶：催化合成cDNA；(6) T4DNA 聚合酶：聚合补平或标记DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA连接酶：催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键；（8）大肠杆菌DNA连接酶：应用于黏端DNA或切口间连接；（9）T4DNA连接酶：应用于黏性或平末端DNA的连接；（10）末端脱氧核苷酸转移酶：给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物；（11）碱性磷酸酶：防止载体自身连接、32P标记5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端标记放射性核素。 2、答： （1）分离制备目的基因――“分”；（2）切割目的基因和载体――“切”；（3）目的基因与载体的连接――“接”；（4）将重组DNA导入宿主细胞――“转”；（5）筛选并鉴定含重组DNA分子的受体细胞克隆――“筛”；（6）克隆基因在受体细胞内进行复制或表达――“表”。 3、答： （1）制备基因组文库；（2）构建cDNA文库；（3）PCR扩增目的基因；（4）人工合成DNA技术。 4、答： ⑴黏性末端连接：将靶基因片段和载体DNA经相同的限制酶分别切割，使它们两端产生相同的黏性末端。然后经黏性末端碱基配对，再经DNA连接酶作用，共价连接成新的重组DNA分子；⑵平头末端连接：将平末端的DNA分子在T4DNA连接酶催化下，使DNA分子的3′OH和5′P进行共价结合；⑶人工接头法：是指利用人工接头加在平端DNA 片段的两端，然后用相应限制酶切割人工接头以产生黏性末端，再与带相同黏性末端的载体相连；⑷同源多聚尾连接法：在末端脱氧核苷酸转移酶催化下，在线型载体分子的两端加上单一核苷酸如dG组成的多聚尾；而在目的DNA分子的两端加上dC尾，两者混合退火，然后经DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填补裂口处缺失的核苷酸，再通过DNA连接酶修复成环状的双链DNA。
When the lives of employees or national property are endangered, production activities are stopped to rectify and eliminate dangerous factors. （安全管理） 单位：___________________ 姓名：___________________ 日期：___________________ 基因工程安全管理办法(通用版)
基因工程安全管理办法(通用版)导语：生产有了安全保障，才能持续、稳定发展。生产活动中事故层出不穷，生产势必陷于混乱、甚至瘫痪状态。当生产与安全发生矛盾、危及职工生命或国家财产时，生产活动停下来整治、消除危险因素以后，生产形势会变得更好。"安全第一" 的提法，决非把安全摆到生产之上;忽视安全自然是一种错误。 第一章总则 第一条为了促进我国生物技术的研究与开发，加强基因工程工作的安全管理，保障公众和基因工程工作人员的健康，防止环境污染，维护生态平衡，制定本办法。 第二条本办法所称基因工程，包括利用载体系统的重组体ＤＮＡ技术，以及利用物理或者化学方法把异源ＤＮＡ直接导入有机体的技术。但不包括下列遗传操作： （一）细胞融合技术，原生质体融合技术； （二）传统杂交繁殖技术； （三）诱变技术，体外受精技术，细胞培养或者胚胎培养技术。 第三条本办法适用于在中华人民共和国境内进行的一切基因工程工作，包括实验研究、中间试验、工业化生产以及遗传工程体释放和遗传工程产品使用等。 从国外进口遗传工程体，在中国境内进行基因工程工作的，应当
西南大学网络与继续教育学院 课程代码： 0886 学年学季：20192 单项选择题 1、下列属于基因工程疫苗的的是：（） .弱毒苗 .亚单位疫苗 .多肽疫苗 .灭活苗 2、 下列关于强菌（毒）种的叙述，不正确的是（） .可直接用于诊断制品、抗病血清、灭活疫苗、弱毒疫苗的制造。 .用作人工弱毒株的原始毒种 .用于微生物、免疫学及动物传染学等研究 .常从疾病流行地区的典型患病动物体内分离 3、用下列哪种成份制成的疫苗不属于亚单位疫苗。（） .荚膜 .鞭毛 . DNA或RNA .衣壳蛋白 .囊膜 4、下列不能用于增殖病毒的是( ) .动物 .禽胚 .细胞 .培养基 5、 下列哪项属于被动免疫制品（） .弱毒苗 .灭活苗
.基因工程苗 .高免血清 6、 下列哪一项不属于安全检验的内容。（） .检验外源性污染 .检查杀菌、灭菌和脱毒情况 .检查残余毒力或毒性物质 .检查抗原的热稳定性 .检查对胚胎的毒性 7、 根据新城疫病毒对鸡胚的平均致死时间，对1日龄雏鸡脑内接种致病指数和对6周龄的鸡静脉接种致病指.缓发型和速发型 .缓发型和中发型 .中发型和速发型 .缓发型、中发型、速发型均可 8、 下列关于类毒素的描述，不正确的是（）。 .接种动物后能产生自动免疫 .可用于制备抗毒素血清 .是细菌的内毒素灭活后的产物 .具有免疫原性 9、 下列不属于异源疫苗的是（） .猪瘟兔化弱毒兔体组织活疫苗（预防猪瘟） .麻疹疫苗（预防犬瘟热） .猪型布鲁氏菌弱毒苗（预防牛型布鲁氏菌病） .牛痘疫苗（预防天花） 10、 下列不属于被动免疫制剂的物质是( ) .抗猪瘟血清 .破伤风抗毒素血清 .鸡传染性法氏囊病卵黄抗体
论证方法有哪些 试题： 论证方法有哪些？ 答案： 论证方法有举例论证、道理论证、比喻论证、比较论证和引用论证。 【相关阅读】 论证方法有哪几种 中学阶段常见论证方法有五种，它们是举例论证、道理论证、比喻论证、比较论证、引用论证。其中引用论证是道理论证的一种。 下面我们简述一下这几种论证方法。 一、举例论证又叫事实论证，是指运用典型事例来证明论点的方法。列举确凿、充分、有代表性的事实，能够增强论述的力量和说服力。 例如初中课文《哨子》一文列举作者从社会生活中观察到的“猎取恩宠荣禄”、“醉心于名望”、“积累财产”、“寻欢作乐”、“爱慕虚荣”、“贪求富贵”这六种哨子现象，论证了许多人“所遭受的人类很大一部分悲苦都是由于他们对事物的价值作出错误的估价而造成的，都是为他们的哨子付出了太高的代价”。推荐阅读：举例论证和举例说明的异同 二、道理论证就是运用经典著作中的精辟见解、古今中外名人名言及被人们公认的科学原理、定理、公式等来证明观点。
由于道理论证所引用的材料都是被客观实际所证实的科学结论，或是被人们所公认的道理，具有理论的权威性和思想的深刻性，因而具有不可辩驳的力量和说服力。 例如课文《论求知》第十段列举“读史使人明智，读诗使人聪慧，演算使人思维精密，哲理使人思想深刻，伦理学使人有思想，逻辑修辞使人善辨”这六门科学知识的作用进行论证，归纳出“知识能塑造人的性格”的结论。列举的资料丰富翔实，得出的论断令人信服。 三、比喻论证又叫喻证法，就是用打比方形象地对论点进行证明的一种论证方法。用人们熟知的事物作比喻来论证观点的正确。 透过比喻论证使所论述的道理浅显透彻，形象易懂，具有更强的说服力。 例如《哨子》用生活中的物?D“哨子”来比喻许多人所追求的、对其价值作出错误估价的事物，人们为了“哨子”而付出了过高的代价，从而论证了论点。 又如《论求知》的第四段用“人的天性犹如野生的花草，求知学习好比修剪移栽”这一组比喻来论证“求知能够改善人的天性”的论点。有如《劝学》第四段，“蟹六跪而儿螯，非蛇蟮之穴无可寄托着，用心躁也”。这样写，使论述的道理通俗易懂。 四、比较论证是从事物的相反或相异的属性的比较中来揭示需要论证的论点的本质。 比较可进行横向比较，古今中外、大小强弱等，都适合于进行比较，在比较中分析和阐明了两者的差异可对立之后，是非昭然，自然就能够确立论点了。 也可进行纵向比较，即对同一对象自身前后不一样阶段也可比较，运用纵向比较的论证方式，不能停留在形式逻辑的静态决定的层面上，否则，有时会显得说服力不够。
基因工程制药 姓名：惠霞 学号：2011506024 班级：2011级生技1 班
基因工程制药 一．基因工程制药常用的工具酶： 基因工程的重要特点之—是在体外实行DNA分子的切割和重新连接。例如要取得所需药物之目的基因并要将此特定目的基因与载体DNA连接在—起，在很大程度上要依赖于某些工具酶。 (一) 限制酶(Restriction enzymes) 限制酶即限制性核酸切酶的简称，是一类专一性很强的核酸切酶。与一般的DNA水解酶不同之处在于它们对碱基作用的专一性上及对磷酸二酯键的断裂方式上具有一些特殊的性质。限制酶的种类 Ⅰ型酶：早期提取的酶类，是一类复杂的多功能酶，在基因工程上的应用价值不大。 Ⅱ型酶：相对分子质量较小，为20000～100000，是简单的单功能酶，作用时无需辅助因子或只需Mg2＋。能识别双链DNA上特异的核苷酸序列，底物作用的专一性强，而且其识别序列与切断序列相一致。这类酶对基因工程中的生化操作特别重要。 (二) DNA聚合酶(DNA polymerase) DNA聚合酶是能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶，这类酶作用时大多数需要DNA模板并且优先作用于DNA模板，也可作用于RNA模板，但效率较低。 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 2. 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片断Klenow 片断 3. T4噬菌体DNA聚合酶 4. 经修饰的T7噬菌体DNA聚合酶（测序酶） 5. T aqDNA聚合酶及AmpiTaqTMDNA聚合酶 6. 反转录酶
（三）DNA连接酶（DNA ligase）：能将两段DNA拼接起来的酶。 1. T4噬菌体DNA连接酶：催化DNA的5'羟基之间形成磷酸二酯键。 2. 大肠杆菌DNA连接酶：用途较窄，不常用。 （四）基因工程中常用的其他酶 1. 末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶或TDT酶） 2. T4噬菌体多核苷酸酶 3. 核酸酶（Nuclease） 4. 碱性磷酸酯酶（Alkaline phosphodiesterase）：能催化去除单链或双链DNA和RNA 分子中的5' 磷酸基（脱磷酸作用）。分为细菌碱性磷酸酯酶（BAP），牛小肠碱性磷酸酯酶（CIP）。 二．基因工程制药中常用的克隆载体 载体：能在细胞进行自我复制的DNA分子就是外源DNA片段（基因）的运载体（Vector）,又可称为分子载体或无性繁殖载体。基因工程制药中常用的目的基因克隆载体主要有：质粒、λ噬菌体、M13噬菌体和粘粒。 （一）质粒 1.质粒（Plasmid）是一些存在于微生物细胞染色体外的闭合环状双链的小型DNA分子，是能进行独立复制并保持恒定遗传的辅助性遗传单位。 2 常用的几种质粒载体 （1）pBR322及其衍生载体 pBR322 最早构建成功的较理想载体，分子质量2.6×106u，4.36kb，属松弛型复制，含有两个抗性基因（Tetr和Ampr），已确定32个限制酶切割位点的相对位置。BamH I
高校中微生物学的主要研究方向有：资源与应用微生物学 病原微生物学 微生物发酵与代谢工程 生物防治微生物学 环境微生物学 真菌学
微生物分子遗传与功能基因组学 海洋微生物学 1.资源与应用微生物学 微生物资源是地球上三大生物资源之一，微生物资源开发与利用具有重要的意义。许多高校已经把它作为一个独立的研究方向，并且也形成了各自的研究特色。 中科院微生物所，有微生物资源前期开发国家重点实验室，主要研究方向为微生物资源收集、微生物分类和功能评估、极端环境微生物。该所有中国科学院院士5名，拥有一支具有国际竞争力的研究队伍，仪器装备达到了国际先进水平。该所的微生物菌种保藏中心所保藏的菌种数量在国内首屈一指，真菌标本馆的标本数量则为亚洲之最。 云南大学，有教育部微生物资源研究开发重点实验室，主要研究领域有：放线菌生物学,微生物资源学,菌根生物学, 极端环境微生物学,其中放线菌方面研究处于全国先列，重点开展极端（重点是高温、高盐碱）环境或各种特殊环境(植物内生或海洋)下的放线菌资源收集、保存及分类学、系统学、生态学、生物地理学及其应用价值评估（活性筛选、代谢产物化学及酶学等）研究。 广西大学，有广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，主要研究方向是，利用广西省丰富的微生物资源发掘、鉴定和克隆具有特殊用途微生物的功能基因，并对重要功能基因进行改造和利用；发现、分离和克隆农作物抗病虫功能基因、构建抗病虫作物新种质。 中国农业大学，有农业部农业微生物资源及其应用重点实验室，主要研究领域有微生物分类及系统发育、微生物生理及遗传学、发酵工程、药用及食用真菌、环境微生物学、分子病毒学和分子免疫学等，微生物学专业师资力量雄厚，有中国科学院院士李季伦教授等多名著名教授。 四川大学，微生物学为省级重点学科，拥有资源微生物及微生物生物技术四川省重点实验室，主要研究方向：资源微生物，天然产物，生态环境保护。 西北农林科技大学，拥有西北农林科技大学微生物研究中心，主要研究方向之一微生物资源多样性及利用研究，包括极端环境条件微生物的菌种资源、基因资源及多样性研究；根瘤菌为主的固氮微生物多样性及利用。 华南理工大学，主要研究华南地区丰富的微生物资源，包括微生物资源的采集和开发利用，进行微生物菌种筛选和改造，重点应用在工业、农业等领域的研究。 河北大学，有河北省微生物多样性研究与应用实验室。 黑龙江大学，有微生物资源挖掘与利用和微生物产品开发与制备方向的研究。 山西大学微生物资源与生态方面的研究等。
1.改造鼠源性单克隆抗体的首要目的是 C. 降低免疫源性 2.能用于防治血栓的酶类药物有（）D. 尿激酶 3.以下可用于菌种纯化的方法有（）B. 平板划线 4.下列属于多肽激素类生物药物的是（）D. 降钙素 5.由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（）C. 凝胶过滤 6. 获得目的基因最常用的方法是：B. PCR 技术 7.促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（） D. 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 8.以下能用重组DNA技术生产的药物为（） B. 生长素 9.以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：（） C. 容易培养，产物提纯简单 10.外源基因在动物细胞与大肠杆菌中表达产物的主要区别是（）A. 糖基化 11.筛选杂交瘤细胞（脾-瘤融合细胞）选用的培养基是：（） B. HAT 12.鼠源性单克隆抗体改造后得到小分子抗体，常用的是（） B. 单链抗体 13.能够实现微生物菌种定向改造的方法是（）D. 基因工程 14.目前分离的1000多种抗生素，约2/3产自（）B. 放线菌 15.基因表达最常用的宿主菌是：（）B. 大肠杆菌 16.分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（）A. 分离量大分辨率低的方法 17.能够用沙土管保存的菌种是（）C. 青霉菌 18.人类第一个基因工程药物是：（）A. 人胰岛素 19.外源基因的高效表达会影响宿主细胞正常的生长代谢。A.√ 20.抗体中结合抗原的部位分布在恒定区B.× 21.质粒不具有自主复制能力。B.× 22.单克隆抗体就是单链抗体B.× 23.单克隆抗体只识别一种表位(抗原决定簇)的高纯度抗体，一般来自单个Ｂ淋巴细胞的克隆或一个杂交瘤细胞的克隆。A.√ 24.PCR是聚合酶链式反应法的缩写A.√ 25.生物药物指包括生物制品在内的生物体的初级和次极代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗疾病的医药品。A.√ 26.细胞因子：由细胞分泌的能调节生物有机体生理功能，参与细胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽物质 27.生物药物：利用生物体、生物组织或其成分，综合应用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学、生物技术和现代药学的原理和方法，进行加工、制造而成的一大类用于预防、治疗和诊断疾病的制品
议论文的结构方式通常有以下几种： 1.纵贯式结构方式 按照引论(导论、绪论)、本论(正文)、结论三部分组织材料，叫纵贯式结构方式。它大体上是按照提出问题——分析问题——解决问题的逻辑顺序来安排的。又称“三段式结构方式”。 2.并列式结构方式 围绕中心论点，从不同角度进行论证，形成若干分论点，几个分论点构成并列关系，共同论证中心论点，这就是议论文的并列式结构方式。 分论点基本要求 1、分论点的位置宜在每一部分的开头。 2、分论点的数量两到三个为宜。 3、分论点的语言要精练，一般控制在15字。 4、分论点的表述要尽量紧扣话题的关键字眼，以保证每一段都扣 题。 5、分论点句子的结构要一致，构成排比或准排比句。 6、各分论点处于同等地位，不重复，不包括，也不交叉。 （三）拟写分论点的角度：是什么、为什么、怎么办。 例1：以“诚实就是财富”为中心论点，从“是什么”角度展开构 思 ①诚实是做人的根本。 ②诚实是处事的原则。 ③诚实是求知的惟一途径。
例2：以“没有规矩,难成方圆”为中心论点，从“为什么”角度展开构思。 ①没有规矩，个人不能成才。 ②没有规矩，集体不能稳定。 ③没有规矩，国家不能发展。 例3：以“争做时代的弄潮儿”为中心论点，从“怎么办”角度展 开构思。 ①要有挑战时代的理想。 ②要有过硬的知识技能。 ③要有良好的心理素质。 （四）常见模式： 1．引入 2．中心论点 3．分论点一 + 论据一 4．分论点二 + 论据二 5．分论点三 + 论据三 6．结尾 我喜欢书生气 书生气是什么？是优柔寡断，胆小如鼠？是体弱多病，手无缚鸡之力？还是无病呻吟，为赋新词强说愁？不是！生气是博学多才、温文尔雅的才情，是羽纶巾、弹指一挥、千军湮灭的豪迈，是贵妃捧砚、力士脱靴、凤歌笑孔丘的不羁。 我喜欢书生气，喜欢那一种温文尔雅的风流才情。待月西厢下，张生以他温文尔雅的书生气俘获了莺莺的芳心。花开桃花扇，侯方域凭他
几种常见论证方法及举例解说 议论文论证的方法。统共七种论证方法如下:例证法、引证法、比较法、归谬法、喻证法、归纳法和演绎法。下面重点讲解高考写作常用的四种论证方法。 1.举例论证法 此法也叫事例论证法，作为常见，就是用典型的令人信服的事例来证明自己论点正确的一种方法。为啥要举出一些名人的例子呢?因为常言道“事实强于雄辩”这一句名言也就是论证的方法，让事实说话，典型事例面前，道理将不言而喻。 具体的例子，请参看下文。 2.引用论证法 引证法也叫道理论证，是通过引用名人名言、古诗文名句、反映科学规律的俗语、谚语、警句等来证明自己观点正确可信的一种论证方法。 引用的论证方法，也是极其常用的，使用频率仅次于例证法。由于引用的是世人公认的道理，虽然不像事实一般生动，却是从事实中提炼出来的，能深刻地反映事物的本质，比事实更为深刻，所以具有更加巨大的说服力量。 3.比喻论证法 比喻论证法，是运用比喻来论证论点的论证方法。议论文中的设喻，同样也是讲道理，却会让论点更易懂、更风趣、更容易获得读者的认同。比喻论证法的妙处，是能够化艰深为浅显、化抽象为具体、化枯燥为生动。 4.比较论证法 比较法也是一种常见的论证方法，分对比与类比两种。 红框和蓝框当中的是两种本质相反的事实的对比，真理在对比中显现，学习写议论文，其实可以简单到把两种实例往一块摆，摆得清楚，也就看得明白，论证就在结构之中。 (1)类比论证法。 所谓类比，就是借助类似的故事、实例以及作者安排的情境，进行由此及彼的推理。而且最重要的要完成推理，如果说摆事实和讲道理，主要是借用别人的，那么类比推理的完全是自己的创造。运用类比要注意所选取的“类体”要同类，不能相对或相反;在类比之后要剖析，要善于揭示，一语破的，一刀见血。
基因工程 一、基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 二、基因工程的基本工具 1、限制性核酸内切酶-----“分子手术刀” 2、DNA连接酶-----“分子缝合针” 3、基因进入受体细胞的载体-----“分子运输车” 1．“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）存在：主要存在于原核生物中。 （2）特性：特异性，一种限制酶只能 识别一种特定的核苷酸序列，并且能在 特定的切点上切割DNA分子。 （3）切割部位：磷酸二酯键 （4）作用：能够识别双链DNA分子的 某种特定核苷酸序列，并且使每一条链 中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键断开。
（5）识别序列的特点： （6）切割后末端的种类：DNA 分子经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端。当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA 的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的则是平末端。
2．“分子缝合针”——DNA连接酶 （1）作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。 （2）类型 相同点：都连接磷酸二酯键 3．“分子运输车”——载体 (1)载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 (2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (3)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。 (4)载体的作用: ①作为运载工具，将目的基因送入受体细胞。 ②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 【解题技巧】 (1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。 (2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 (3)在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。 (4)获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生4个黏性末端或平末端。 (5)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。 (6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 (7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子，能将目的
议论文常用四种论证方法_2017年公务员考试申论答题技巧 一、例证法 例证法也叫事例论证，是用令人信服的典型事例来证明自己论点正确的一种方法。它是议论文写作中最常用的一种论证方法。“事实强于雄辩”，在典型的事例面前，道理不言而喻。要用好例证法，必须注意以下几个方面： 1、事例要典型、确凿、有影响力。一般来讲，应优先考虑著名的人物或事例，慎用校园、家庭、市井街头的琐碎事例。 2、事例的叙述要简明扼要，切忌拖泥带水，过于详细。举例是为了证明观点，不是为了弄清事实，切忌本末倒置。 3、事例切忌单一狭隘，要丰富广阔，要点面结合，古今中外相映成辉。同类事例掌握多时可考虑采用句式排比列举。 4、事例列举之后要简短分析，不能将例证法变成事例整理，忌有例无证。 5、勤于积累，精于筛选。“书到用时方恨少”，平时多读书报，摘记、剪贴是主要手段。积累多了，自然能融会贯通、左右逢源。 二、引证法 引证法也叫道理论证，是通过引用名人名言、古诗文名句、反映科学规律的俗语谚语警句等来证明自己观点正确可信的一种论证方法。引证法在考场或平时练笔写作中的使用频率仅次于例证法。由于引证法引用的是世人公认的思考结晶，能够深刻地反映事物的本质已为无数事实所证明，所以具有巨大的说服力。怎么用好引证法呢? 1、所引用的名言警句等针对性要强。每句名言都产生于特定的背景，都应用于特定的交际目的，即使谈同一个问题，也有不少名言可供选取。要仔细分析每个道理论据的特有功能，将它引用到最恰当的语言环境之中。例如：强调立志的重要性，要选用“三军可夺帅也，匹夫不可夺其志。”强调志向高洁远大，要选用“燕雀怎知鸿鹄之志”，某同学沉湎于上网，要选用“玩物丧志”，某同学不能只持之以恒、一暴十寒，要选用“有为之人立长志，无为之人常立志。”
第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理：DNA双链复制 （2）过程： 第一步：加热至90～95℃DNA解链； 第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 1. 转化的概念： 是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+ 处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步：目的基因的检测和表达 1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA
基因工程的基本内容 基因工程的基本内容一.本周教学内容：基因工程的基本内容二.学习内容：本周学习基因工程的操作过程，指导进行基因工程操作时需要的基本工具：限制酶、连接酶、运载体，了解他们的特点，及其在基因工程中的应用。理解基因工程操作的基本步骤，理解如何提取目的基因，怎样将目的基因导入受体细胞，怎样鉴定试验的成果等等。基因工程的基本内容 一. 本周教学内容： 基因工程的基本内容 二.学习内容： 本周学习基因工程的操作过程，指导进行基因工程操作时需要的基本工具：限制酶、连接酶、运载体，了解他们的特点，及其在基因工程中的应用。理解基因工程操作的基本步骤，理解如何提取目的基因，怎样将目的基因导入受体细胞，怎样鉴定试验的成果等等。了解基因工程对现代社会的贡献及基因工程应用的发展。 三. 学习重点： 1. 基因工程的概念 2. 基因工程的操作工具 3. 运载体的基本条件 4. 基因工程的基本操作步骤
5. 基因工程的应用和发展 四. 学习难点： 1. 基因工程工具：限制酶、运载体 2. 运载体的基本要求 3. 基因工程的操作步骤 4. 如何检测基因操作 5. 基因工程应用的两面性 五. 学习过程： （一）概念：基因工程——又叫基因拼接技术或DNA重组技术。 是指在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 概念要点： 1. 在DNA分子水平上进行设计操作的 2. 在生物体外实现的基因改造 3. 对受体细胞进行无性繁殖 4. 重组基因最终表达获得性状 （二）基因操作的工具 1. 抗虫棉的培育：将抗虫的基因从某种生物（如苏云金芽孢杆菌）中提取出来，“插入”到棉花的细胞中，及棉细胞
九、论证方法 一、定义 论证方法是议论文的三要素之一，它是指运用论据来证明论点的过程和方法，是论点与论据之间逻辑关系的纽带。如果说论点主要解决“需要证明什么”的问题，论据主要解决“用什么来证明”的问题，那么论证方法则主要解决“怎样证明”的问题。 二、方法 一篇议论文要写得好，离不开对论点、论据的分析，更离不开一定的论证方法。那么，常见的议论文的论证方法有哪些呢？ 1、举例论证法（例证法） 举例论证法简称例证法，指的是论述时举出具体事例证明中心论点的一种论证方法。它要求所举事例要充分、确凿、有代表和根据性。例证法在议论文中运用得最多最广，它也是卓有成效的一种推理方法。 例1、有时候磨难，恰恰能够历练人生，绽放光彩。贝多芬双耳失聪，却能在这样的磨难下创造出不朽的交响曲，撼人心灵，那是因为他不屈服命运的压打，顽强抗拒厄运，才谱出了人类的心灵之歌；司马迁遭受腐刑，却能在这样的耻辱中写成《史记》，汗青溢光，那是因为他有坚定如山的信念，刚毅如铁的意志，于诽谤讥嘲中坚持自己的志向，才突围成为“史圣”；一代体操王子李宁泪洒汉城黯然退出体坛后，却又另辟天地开创了自己的事业，让李宁牌系列运动用品风靡中国的体育用品市场，那是因为他懂得承受失败，不为失败所吓倒，才能在失败中开拓出一条新路。磨难，是祸，又是福。它对于意志坚强者，只不过是人生路上的一帘风雨，只要勇敢地走过去，前方是另一片蓝天。 例2、（2006海南省课改试验区有删改）歌德用了差不多半生的精力学画无成，面对人生的不断碰壁，及时调整了人生目标，在文学道路上做出一番成就。孙中山青年时悬壶行医，最后发现治一人并不能救社会，于是转而投身革命，终于成就了令世人敬佩的伟业。无数成功的例子告诉我们，成功者是在不断的实践中发现了成功的道路，并不是一开始就站到了正确的起点上。因此，我们不要盲目地相信自己的兴趣，不要绝对依赖自己的感觉，而要尽可能多地尝试各种各样的发展道路，与时俱进地调整自己的努力方向。 2、引用论证法（引证法） 引用论证法简称引证法，是在议论中引用公理、名言警句、经典著作、历史文献、谚语、成语、俗语、传说、古今诗文等，以此作为论据，来证明观点的一种论证方法。其优点在于有较强的权威性和说服力。 例1、恰如其分的语言表达，利于友情的沟通。高适的“莫愁前路无知己，天下谁人不识君”与王勃的“海内存知己，天涯若比邻”，都用优美的语言送走了友人，达到了友情的沟通。李白《蜀道难》一文中劝说友人归来的语言精辟，达到了友情的沟通。从李白的“上有六龙回日之高标，下有冲波逆折之回川”可知“蜀道之难，难于上青天”，友人便从言语中感受到友人的关怀，沟通也便到了心坎。沟通并不像白居易说的“此时无声胜有声”，它需要语言为它传达彼此的关切。友情的沟通，需要语言的钥匙。 例２、在人类的语言中，有一个最神圣、最崇高、最永恒、最能超越时间和空间、具有不朽的价值的词，那就是“祖国”。屈原抱石怀沙，投身汨罗江时，想到的是祖国；文天祥过零丁洋，浩歌“人生自古谁无死，留取丹心照汗青”时，想到的是祖国；岳飞发出“直抵黄龙府与诸君痛饮尔”的豪言时，想到的是“祖国”；谭嗣同面对刀俎，引颈就戮时，面不改色，“我自横刀向天笑”。他想到的还是“祖国”；陆放翁说：“死去原知万事空，但悲不见九州同。王师北定中原日，家祭毋忘告乃翁。”他梦魂为萦、念兹在兹的也是“祖国”；抗日民族英雄吉鸿昌将军就义时讲：“恨不抗日死，留作今日羞。国破尚如此，我何惜此头！”他甘洒热血，视死如归，所报者，也是“祖国”。
《生命科学奥秘》论文 题目基因工程技术是把双刃剑 学院计算机与信息科学学院 专业自动化（控制方向） 年级2008 级 学号222008321042019 姓名杨雷 指导教师刘文明 成绩 2009年5月24日
基因工程技术是把双刃剑 杨雷 西南大学计算机与信息科学学院，重庆 400715 摘要： 基因工程技术，在医药及农业上应用广泛。这项尖端科技加上最近突破性的生殖科技，却引发人们极大的隐忧及争论。 生物学家在一百多年前就知道，生物的表征遗传自其亲代。生物细胞的细胞核，含有染色体，组成分为DNA。DNA含有四种碱基（简称A、T、C、G）。这些碱基在DNA中看似杂乱无章，但它们的排列顺序，正代表遗传讯息。每三个碱基代表一种胺基酸的密码。基因就是这些遗传密码的组合，亦即代表蛋白质的胺基酸序列。每个基因含有启动控制区，以调控基因的表达。 基因工程是一项很精密的尖端生物技术。可以把某一生物的基因转殖送入另一种细胞中，甚至可把细菌、动植物的基因互换。当某一基因进入另一种细胞，就会改变这个细胞的某种功能。基因工程对于人类的利弊一直是个争议的问题，主要是这项技术创造出原本自然界不存在的重组基因。但它为医药界带来新希望，在农业上提高产量改良作物，也可对环境污染、能源危机提供解决之道，甚至可用在犯罪案件的侦查。但它亦引起很大的忧虑与关切。当此科技由严谨的实验室转移至大规模医药应用或商业生产时，我们如何评估它的安全性？此项技术是否可能因为人为失控，反而危害人类健康并破坏大自然生态平衡？ 关键词：基因工程；人类基因组计划；环境破坏；生物技术；利弊 【正文】 观点：辨证的看待基因工程的利与弊
常见的论证方法有七种： 例证法、引证法、喻证法、比较法、归谬法、归纳法和演绎法。下面细谈四种在议论文写作时常用也比较好用的论证方法。 一、例证法 例证法也叫事例论证，是用令人信服的典型事例来证明自己论点正确的一种方法。它是议论文写作中最常用的一种论证方法。“事实强于雄辩”，在典型的事例面前，道理不言而喻。 要用好例证法，必须注意以下几个方面： １、事例要典型、确凿、有影响力。一般来讲，应优先考虑著名的人物或事例，慎用校园、家庭、市井街头的琐碎事例。 ２、事例的叙述要简明扼要，切忌拖泥带水，过于详细。举例是为了证明观点，不是为了弄清事实，切忌本末倒置。 ３、事例切忌单一狭隘，要丰富广阔，要点面结合，古今中外相映成辉。同类事例掌握多时可考虑采用句式排比列举。 ４、事例列举之后要简短分析，不能将例证法变成事例整理，忌有例无证。 ５、勤于积累，精于筛选。“书到用时方恨少”，平时多读书报，摘记、剪贴是主要手段。积累多了，自然能融会贯通、左右逢源。 二、引证法 引证法也叫道理论证，是通过引用名人名言、古诗文名句、反映科学规律的俗语谚语警句等来证明自己观点正确可信的一种论证方法。 引证法在考场或平时练笔写作中的使用频率仅次于例证法。由于引证法引用的是世人公认的思考结晶，能够深刻地反映事物的本质已为无数事实所证明，所以具有巨大的说服力。 怎么用好引证法呢？ １、所引用的名言警句等针对性要强。每句名言都产生于特定的背景，都应用于特定的交际目的，即使谈同一个问题，也有不少名言可供选取。要仔细分析每个道理论据的特有功能，将它引用到最恰当的语言环境之中。 例如：强调立志的重要性，要选用“三军可夺帅也，匹夫不可夺其志。”强调志向高洁远大，要选用“燕雀怎知鸿鹄之志”，某同学沉湎于上网，要选用“玩物丧志”，某同学不能只持之以恒、一暴十寒，要选用“有为之人立长志，无为之人常立志。” ２、要简洁，不宜过多。议论是在发表自己的见解而不是在介绍他人的见解。引用他人的话，目的是为了让读者更加信服自己的话，自己的话应是议论的主体，应是全文最醒目的部分。过多的引文，很容易将自己的分析淹没。 ３、要注意直接引用和间接引用的区别。直接引用务求文字、甚至标点均准确无误；间接引用只须述其大意，但要注意人称的转换。 三、喻证法 喻证法是用设喻来论证论点的方法。 在议论文中，设喻可以使论点更易懂、更风趣、更容易获得读者的认同。喻证法能化抽象为具体、化艰深为浅显、化枯燥为生动。 运用喻证法必须注意以下三点： １、以小见大，就近取譬。要精选生活中细小的、人们熟悉的事物做为设喻的喻体。喻体如果不是读者常见熟知的，就达不到喻证的目的。 ２、喻体不求形似，求神似。做为喻证的喻体与做为比喻的喻体不同。比喻的喻体是为了强调特征，描绘事物，侧重形似，以形比形；而喻证的喻体是为了阐发观点，以正视听，力求神似，以义取形。一定要对自己所要论争的对象和用来设喻的事物之间的对应关系进行细致入微的体味与揣摩。