安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案
安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案分发QA/QC
1.0目的
通过建立Agilent 1260 HPLC的确认方案，以运行确认主要检查Agilent 1260 HPLC各单元的性能及整机运行是否达到供货单位设计要求;性能确认主要检查Agilent 1260 HPLC四元泵、进样器、柱温箱、检测器的性能符合设计要求，保证仪器在后续运行检测的准确性。
2.0范围
本方案适用于位于制剂厂区质量管理部三楼仪器室固定资产编号为F02-QC00014的Agilent 1260型高效液相液谱仪的确认。
3.0概述
可变波长检测器(VWD)联用，主要用于实验室日常检测。与示差折光检测器(RID)联用，主要用于依诺肝素钠原料药及注射液等分子量及分子量分布的检测。
4.0
5.0确认前准备
5.1参与测试人员培训确认
根据确认方案内容涉及的文件、仪器、人员的情况，以检查参与确认方案的人员是否都参加过相关文件、仪器及本方案的培训，记录培训号和相关的培训内容于附录1“测试人员培训记录”
中。
接受标准：参与仪器确认的人员均应参加过方案涉及的文件、仪器、方案的培训。
5.2测试用试剂、试液确认
检查确认中使用到的标准品、试剂、计量容器信息，可用于仪器确认。
检查内容包括如下：
标准品:名称、规格、批号、含量、来源等信息。( 自制标准品还应包括复标日期。)
试剂:名称、规格、批号、有效期、生产厂家等信息。
以上确认信息应详细记录于附录2“测试用试剂液确认”。
接受标准：所有使用的物料应在有效期内或可用状态。
5.3测试用仪器、仪表确认
检查确认中使用到的仪器信息，可用于仪器确认，记录仪器的名称、编号、有效期等信息于附录3“测试用仪器、仪表确认”。
接受标准：所有使用到的仪器，如需校验或者计量的，均有在校验或者计量的有效期内。
5.4文件检查确认
核查待确认的仪器具有相关的操作文件，IQ/OQ确认前应至少具备使用说明书，PQ确认前应至少具备SOP草案，并将其填写在附录
4“待确认仪器相关文件检查”。
6.0运行确认
以上确认信息应详细记录于附录5：“Agilen t 1260 HPLC运行确认”。
7.0性能确认
此次性能确认包括如下确认模块:四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器、RID 检测器;
测试项目包括:流速准确度/精密度、梯度混合准确性和波动、进样精密度、进样残留、温度准确性、响应值线性(VWD)、波长准确度(VWD)、基线噪音(VWD)、基线漂移(VWD)、基线噪音(RID)、基线漂移(RID)
7.1四元泵性能确认
7.1.1流速准确度/精密度确认
在仪器控制界面分别设定流速为1.00mL/min, 0.5mL/min，以超纯水为流动相，不安装色谱柱。
于废液出口用洁净的10ml容量瓶收集，用秒表开始计时，到容量瓶装满至刻度停止, 记录所用的时间。重复测量5次，结果记录于附录6“Agilent 1260 HPLC性能确认-流速准确度/精密度”。
由超纯水体积与时间的比值计算得测量流速，准确度计算公式为: 准确度=
|平均流速?设定流速|
设定流速
×100%
接受标准:计算所得结果准确度应在±5%，RSD 应≤0.50%。
7.1.2 梯度混合准确性和波动确认
在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min ，以超纯水为流动相A, 0.5%丙酮为流动相B, 不安装色谱柱，检测波长为265nm.程序梯度设置如下表，分别对A-B ，A-C, B-D 通道进行梯度洗脱:
测试前，先用流动相A 平衡系统至少10分钟，然后按上述方法和梯度设置运行，记录色谱图。以程序开始
B 比例为0%时的值为基线值,手动测量出B 占整个混合梯度段的10%、50%、90%、100%时对应的高度h (各梯度开始时的高度)，计
算时以B 占100%时的高度为H 。结果记录于附录7“Agilent 1260 HPL
C 性能确认-梯度混合准确性和波动” 计算公式: 准确度=|h
H
×100%?各混合段B 所占比例| 混合波动=N
h 50
×100%
式中N: B 占50%时梯度时的噪音值，在梯度内选1min 计算; 接受标准:计算所得结果准确度应在±2%，混合波动应≤0.2%. 7.2 自动进样器性能确认 7.2.1 进样精密度和残留确认
流动相配制:色谱级甲醇与超纯水按体积比6:4混匀，即得60%的甲醇水溶液。
样品溶液配制过程:对照溶液a:称取15mg 尼泊金丙酯溶于100 00mL 流动相中;对照溶液b ：吸取1.0mL 对照溶液a 于流动相中并定容至10.00mL:对照溶液C:吸取1.0mL 对照溶液b 于流动相中并定容至100.00mL.结果记录于附录8“Agilent 1260 HPLC 性能确认-进样精密度和残留”。仪器设定条件及进样顺序见下表:
接受标准:进样精密度:对照溶液b 色谱图中所有峰的峰面积，RSD 应S1.0%。
进样残留:第1针空白中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶
液b 中尼泊金丙酯峰面积的10倍的比值不超过0.5%;对照溶液c 中尼泊金丙酯峰面积与空白后进样的对照溶液b 中尼泊金丙酯峰面积的比值在0.9~1.1%之间。 7.3 柱温箱性能确认 7.3.1 柱温箱温度准确性确认
设定柱温箱的温度分别为20C.30"C. 40C 、50C.等待约30min 平衡系统，将校正过的多点巡回检测仪(或者校正过的温度计)放入柱温箱，等待10min 后，每隔一分钟记录一次柱温箱内左侧、右侧的温度,连续记录10次。实验结果记录于9“Agilent 1260 HPLC 性能确认-柱温箱温度准确性”。
接受标准:平均值与设定值之差应在±2C 。 7.4 VWD 检测器性能确认 7.4.1 响应值线性确认(WWD)
咖啡因标准溶液配制方法:
标准溶液5 (50.0μg/mL) :称取9.0mg 至11.0mg 咖啡因标准品，用色谱级甲醇稀释至200.0mL ，混匀。
标准溶液4 (25.0μg/mL) :取5.0ml 标准溶液5，用色谱级甲醇稀释至10.00mL,混匀。标准溶液3 (5.0μg/mL) :取1.0ml 标准溶液5，用色谱级甲醇稀释至10.00mL,混匀。标准溶液3 (5.0μg/mL) :取1.0ml 标准溶液5，用色谱级甲醇稀释至10.00mL,混匀。标准溶液1 (0.5μg/mL) :取1.0ml
标准溶液3,用色谱级甲醇稀释至10.00mL ，混匀。仪器设定及进样顺序见下表:
以浓度为横坐标，峰面积作纵坐标，建立线性回归曲线，计算r 值，实验结果记录于附录10
“Agilent 1260 HPLC 性能确认-响应值线性(WWD)”。接受标准：2应大于等于0.999.
注:由于此检测中要注入不同浓度，因此也包括了自动进样器样品瓶位置正确性的确认。 7.4.2 波长准确性确认(VWD)
在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min ，柱温箱温度设为40C ，超纯水为流动相，进样体积为20μL ，进样时间为1min ，按照附录11“Agilent 1260 HPLC 性能确认-波长准确性”设置波长，每次增加1nm ，依次进25μg/mL 的咖啡因溶液(具体配制见7.4.1响应值线性确认标准溶液4)，记录各个波长处的峰面积，分别记录波长为197nm~213nm 之间峰面积最大处的波长.237m~253nm 之间峰面积最小处的波长、265nm~281nm 之间峰面积最大处的波长，实验结果记录于附录11“Agilent 1200 HPLC 性能确认-波长准确性(VWD)”。
接受标准:标准波长分别为205.0nm ，245.0nm, 273.0 nm,分别计算波长偏差。波长偏差应在+2nm 。7.4.3 基线噪音与基线漂移确认(VWD)
选用C18色谱柱，在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min, 100%甲醇为流动相，波长设定为254nm ，检测灵敏度调到最灵敏档。开机预热，待仪器稳定后记录基线30min,选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式计算基线噪声，用检测器自身的物理量(AU)作单位表示。基线漂移用30min 内基线偏移起始点最大信号值(AU/30min)表示。
实验结果记录于附录12“Agilent 1260 HPLC 性能确认-基线噪音
与基线漂移(WWD)” . 计算公式: N=KB 7.5 RID 检测器性能确认
7.5.1 基线噪音与基线漂移确认(RID )
将选用C18色谱柱，在仪器控制界面设定流速为1.00mL/min, 100% 超纯水为流动相，将仪器各部分连接好(检测器接10mv 输出口)，接通电源。量程范围选择0.01×10-6RIU, 工作站放大倍数为5。启动泵，待基线稳定后记录基线60min 。根据检测器衰减的倍数和测得的基线峰高对应的记录仪标度，按下式计算基线噪声和基线漂移。实验结果记录于附录13“Agilent 1260 HPLC 性能确认-基线噪音与基线漂移(RID)”. 基线噪声= A×0.01× 10?6
10×5
基线漂移=
B×0.01× 10?610×5
式中：10-检测器输出电压为10mv;
5-工作站放大倍数:
0.01×10-6 -为设置量程，RIU;
A-单一基线波段基线峰高值的变化，mv;
B-基线在60min内偏离原点的值，mvh.
接受标准:基线噪声≤±2.5×10-9RIU，基线漂移< 200×10-9RIU/h.
8.0偏差与变更
任何偏差和变更都必须按照SMP-V A-1001.R01“验证偏差处理单”和SMP-V A-1001.R02“验证变更处理单”进行操作，并按照附录14“偏差和变更汇总”进行总结。
9.0再确认周期
当仪器正常运行时，规定校验周期为2年，当仪器的安装位置发生变更或仪器更换重要部件时，应及时进行仪器的校验工作，以保证仪器的正常检测。
10.0附录
附件1.测试人员培训记录
附件2.测试用试剂液确认
附件3.测试用仪器、仪表确认
附件4.待确认仪器相关文件检查
附件5.Agilent 1260 HPLC运行确认
附件6.Agilent 1260 HPLC性能确认~流速准确度/精密度附件7.Agilent 1260 HPLC性能确认-梯度混合准确性和波动附件8.Agilent 1260 HPLC性能确认-进样精密度和残留
附件9.Agilent 1260 HPLC性能确认-柱温箱温度准确性
附件10.Agilent 1260 HPLC性能确认-响应值线性(VWD) 11.0修订历史
1目的 规范Agile nt 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。 2适用范围 适用于Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。 3职责 实验室分析人员负责Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。 4系统组成 4.1 Agile nt 1260 系列四元泵（G1311C）和脱气机； 4.2可变波长紫外检测器（VWD G1314F ； 4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站 4.4国产柱温箱（AT-550）色谱柱； 4.5电脑、打印机等辅助设备。 5定义 无 6操作程序 6.1开机前的准备 6.1.1检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。 6.1.2检查上次《实验室仪器设备使用记录表》和仪器状态，确认仪器处于正常状态； 6.1.3流动相的制备： 6.1.3.1按《高效液相色谱法流动相配制标准操作规程》配制需要的流动相。 6.1.3.2用前超声脱气（一般10?20min）。 6.1.4更换流动相： 6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖； 6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。 6.1.5供试溶液的配制：
6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。 6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制 2份。 6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。 6.1.6选择色谱柱： 6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱； 6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。 6.1.7更换色谱柱 6.1. 7.1拆卸原色谱柱： 先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线； 松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线； 用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内 6.1. 7.2安装新色谱柱： 从专用包装盒内取出色谱柱，松动并取下色谱柱出入口的止动塞； 将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端，拧紧螺帽； （注意：安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。 ） 将与检测器相连的管线一端插入色谱柱出口端，拧紧螺帽。 6.2开机 6.2.1通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 6.2.2接通电源，打开计算机和打印机开关 6.2.3等待计算机自检完毕后，进入 Windows 桌面，依次打开泵、进样器、检测器各模块电源。 打开柱温箱开关。 6.2.4待各模块自检完成后，点击 6.2.5确定仪器与工作站已连接，若未连接，需关闭工作站，重新连接。注意必须先打开检测器, 再连接 工作站。 6.2.6从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面 ，也可单击工作站画面左侧的“方法和运行 控制”项，进入方法和运行控制窗口。 6.3 操作 6.3.1泵的开启和设置 6.3.1.1打开Purge 阀（逆时针），右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵 编辑画面。 Win dows 桌面 lc ”图标进入化学工作站画面
一、开机 1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相B瓶：为有机相。 2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。 3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。 4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。 该页面主要由以下几部分组成： ——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等； ——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等； ——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告； ——中下部为动态监测信号； ——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。 4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。 二、编辑参数及方法 1、开始编辑完整方法： 从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。 2、方法信息： 在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。 3、泵参数设定： 进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。 4、DAD检测器参数设定： 进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择Stoptime：as Pupm； 在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；范围Range：可选范围为190~950nm；步长Step可选2.0nm； 阀值：选择需要的灯； Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s； Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm
1、目的 确保Agilent 1260高效液相色谱仪的正确使用及管理。 2、范围 研发分析中心实验室Agilent 1260高效液相色谱仪。 3、责任 仪器使用者对本标准的实施负责。 4、内容 4. 1 开机 4.1.1打开计算机，进入Windows 画面。 4.1.2自下而上打开1260LC各模块电源，待各模块自检完成后，双击电脑桌面上LC1260-1(Online)图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面。 4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击工作站 画面左下角【Method and Run control】项，进入方法和运行控制窗口。 4.2 安装色谱柱 正确安装实验所需的色谱柱，注意色谱柱流速箭头方向，试验过程中需检查是否存在漏液。 4.3 溶剂瓶体积设置 把事先配好的流动相倒入相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下【Bottle filling】，在参数设置处输入各溶剂瓶（A、B、C、D）内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。 4.4 设置【Seal wash】 单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在seal wash这栏中选择“On”, 清洗功能开始运行，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。
4.4 脱气 逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行。设置“solvents”一栏中相应参数，将试验中所用到的管道逐一脱气，直至管内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止所需时间，3ml/min冲洗大约需5min～10 min ,,完成后选择“off” , 单击OK键关泵，顺时针旋紧Purge阀。 4.5 平衡色谱柱 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】项下“Quat Pump”, 在“solvents”一栏将试验中要用到的有机相通道（甲醇/乙腈）设置为100%，并将“Flow”从低流速逐级设为1ml/min，在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行，冲洗约10min钟后，设定与测试方法相同的柱流速和流动相比例平衡色谱柱(梯度采用起始流动相比例)，冲洗色谱柱，直至基线走平，一般需要30 min ～60 min。若测试方法用到缓冲盐作为流动相，还需10%甲醇或乙腈水溶液冲洗过渡色谱柱，约30min，再设置为流动相得比例，平衡色谱柱。 4.5 方法编辑 4.5.1 进样体积设定 标准进样：单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择“Sampler”模块, 在“Injection V olume”处输入进样体积，选择“Standard Injection”方式，单击OK键即可。 带洗针进样：单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】, 在此窗口上方选择“Sampler”模块, 在“Injection V olume”处输入进样体积，选择“Injection with needle wash”方式，单击OK键即可。此方式进样后会在事先放置的洗瓶中洗针，减少样品残留此种方式比较，比较适合 4.5.2 柱温设定 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，此窗口上方选择“column”模块,输入柱温，左右两边柱温要保持一致。
安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案 安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案分发QA/QC 1.0目的 通过建立Agilent 1260 HPLC的确认方案，以运行确认主要检查Agilent 1260 HPLC各单元的性能及整机运行是否达到供货单位设计要求;性能确认主要检查Agilent 1260 HPLC四元泵、进样器、柱温箱、检测器的性能符合设计要求，保证仪器在后续运行检测的准确性。 2.0范围 本方案适用于位于制剂厂区质量管理部三楼仪器室固定资产编号为F02-QC00014的Agilent 1260型高效液相液谱仪的确认。 3.0概述 可变波长检测器(VWD)联用，主要用于实验室日常检测。与示差折光检测器(RID)联用，主要用于依诺肝素钠原料药及注射液等分子量及分子量分布的检测。 4.0
5.0确认前准备 5.1参与测试人员培训确认 根据确认方案内容涉及的文件、仪器、人员的情况，以检查参与确认方案的人员是否都参加过相关文件、仪器及本方案的培训，记录培训号和相关的培训内容于附录1“测试人员培训记录” 中。 接受标准：参与仪器确认的人员均应参加过方案涉及的文件、仪器、方案的培训。 5.2测试用试剂、试液确认 检查确认中使用到的标准品、试剂、计量容器信息，可用于仪器确认。 检查内容包括如下： 标准品:名称、规格、批号、含量、来源等信息。( 自制标准品还应包括复标日期。) 试剂:名称、规格、批号、有效期、生产厂家等信息。 以上确认信息应详细记录于附录2“测试用试剂液确认”。 接受标准：所有使用的物料应在有效期内或可用状态。 5.3测试用仪器、仪表确认 检查确认中使用到的仪器信息，可用于仪器确认，记录仪器的名称、编号、有效期等信息于附录3“测试用仪器、仪表确认”。 接受标准：所有使用到的仪器，如需校验或者计量的，均有在校验或者计量的有效期内。 5.4文件检查确认 核查待确认的仪器具有相关的操作文件，IQ/OQ确认前应至少具备使用说明书，PQ确认前应至少具备SOP草案，并将其填写在附录
安捷伦1260髙效液相色谱仪确认方案分发QA/QC
1.0目的 通过建立Agilent 1260 HPLC的确认方案，以运行确认主要检查Agilent 1260 HPLC各单元的性能及整机运行是否达到供货单位设计要求;性能确认主要检查Agilent 1260 HPLC四元泵、进样器、柱温箱、检测器的性能符合设计要求，保证仪器在后续运行检测的准确性。 2.0范围 本方案适用于位于制剂厂区质量管理部三楼仪器室固定资产编号为F02-QC00014的Agilent 1260型高效液相液谱仪的确认。 3.0概述 可变波长检测器(VWD)联用，主要用于实验室日常检测。与示差折光检测器(RID)联用，主要用于依诺肝素钠原料药及注射液等分子量及分子量分布的检测。 4.0 5.0确认前准备 5.1参与测试人员培训确认 根据确认方案内容涉及的文件、仪器、人员的情况，以检查参与确认方案的人员是否都参加过相关文件、仪器及本方案的培训，记录培训号和相关的培训内容于附录1“测试人员培训记录” 中。 接受标准：参与仪器确认的人员均应参加过方案涉及的文件、仪器、方案的培训。 5.2测试用试剂、试液确认 检查确认中使用到的标准品、试剂、计量容器信息，可用于仪器确认。 检查内容包括如下： 标准品:名称、规格、批号、含量、来源等信息。( 自制标准品还应包括复标日期。) 试剂:名称、规格、批号、有效期、生产厂家等信息。 以上确认信息应详细记录于附录2“测试用试剂液确认”。 接受标准：所有使用的物料应在有效期内或可用状态。 5.3测试用仪器、仪表确认 检查确认中使用到的仪器信息，可用于仪器确认，记录仪器的名称、编号、有效期等信息于附录3“测试用仪器、仪表确认”。 接受标准：所有使用到的仪器，如需校验或者计量的，均有在校验或者计量的有效期内。 5.4文件检查确认 核查待确认的仪器具有相关的操作文件，IQ/OQ确认前应至少具备使用说明书，PQ确认前应至少具备SOP草案，并将其填写在附录4“待确认仪器相关文件检查”。 6.0运行确认
珍视明药业文件编号：QR-YQ/BG-06-00 Agilent_1260高效液相色谱仪确认报告 （YQ/BG） 江西珍视明药业有限公司 2013年
目录1.概述 2.培训 3.确认内容 3.1相关文件 3.2安装确认 3.3运行确认 3.4性能确认 4.结论
1.概述 Angilent 1260高效液相色谱系统包括四元泵、可变波长检测器等组成。 1.1. 2 3.确认内容
2.2.安装确认 依照确认方案测试方法确认了环境条件、仪器外观 2.3.运行确认 2.3.1.依照确认方案测试方法确认了泵性能 泵性能测试包括泵耐压测试、泵流量准确度、稳定性和精密度测试。测试过程如下：2.3.1.1泵耐压的检定 将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以100%甲醇为流动相，流量设定为1.0mL/min，按仪器操作规程启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处，应无湿迹。卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min无泄漏。 结论： 检查者/日期：复核者/日期： 2.3.1.2 确认了泵流量设定值误差、流量稳定性误差 测试记录（表二）
结论： 检查人检查日期：年月日复核人复核日期：年月日2.3.2可变波长检测器性能测试 依照确认方案测试方法确认了基线漂移和基线噪声、波长准确度、最小检测浓度和线性范围 2.3.4 进样器性能测试 依照确认方案测试方法确认了进样器性能包括定量重复性，定性重复性
2.3.5梯度组成测试 依照确认方案测试方法确认了梯度准确度和梯度准确度的精密度 测试图谱见附图 结论： 检验者/日期：复核者/日期： 4.结论：通过Agilent_1260高效液相色谱仪进行安装确认、运行确认、性能确认等一系列确认工作，均达到预定的标准要求，该仪器可正式投入使用.
Agilent1260安捷伦高效液相色谱仪计算机系统确认方案Agilent1260安捷伦高效液相计算机系统确认方案 Page 1 of 9 Agilent1260安捷伦高效液相计算机系统 确认方案 Agilent1260安捷伦高效液相 QC-YQ 项目项目编号 计算机系统确认 设备名称 Agilent1260安捷伦高效液相制造商 Agilent1260 型号设备编号 质量控制实验室方案编号生产线/地点 方案批准执行 部门姓名签字日期 编制人年月日 年月日 审核人年月日 年月日 年月日 批准人 年月日 Agilent1260安捷伦高效液相计算机系统确认方案 Page 2 of 9 目录 1 过程描 述 .....................................................................
................................................................. 3 1.1 概 述 ..................................................................... ............................................................... 3 1.2 适用范 围 ..................................................................... ....................................................... 3 1.3 确认小组人员及职责 表 ..................................................................... ............................... 3 1.4 人员培 训 ..................................................................... ....................................................... 3 1.5 确认依据及采用文 件 ..................................................................... ................................... 3 2 测试目 的 ..................................................................... ................................................................. 3 3 可接受标准 / 准 则 ..................................................................... .................................................. 4 4 运行确 认 ..................................................................... ................................................................. 4 4.1 计算机的确 认 .....................................................................
四川中安检测有限公司 作业指导书 Agilent1260高效液相色谱仪 操作规程
1.目的 正确使用仪器，确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器使用寿命。2.范围 适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作。 3.职责 3.1操作人员：按照本操作规程操作仪器，对仪器进行自检，作使用登记。 3.2负责人：负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期自检、仪器综合管理。 4.要求 4.1开机 4.1.1溶剂准备 按要求准备所需流动相，每瓶均超声10min排气，将原来浸泡在甲醇中的滤头取出对应放在各个流动相中（A：二次蒸馏水；D:缓冲溶液；B:色谱纯甲醇C：色谱纯乙腈）。 4.1.2开启工作站 4.1.2.1启动计算机 打开计算机电源，登陆windows 操作系统。 4.1.2.2启动工作站 打开Agilent 1260 各模块电源，待Agilent 1260 各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕桌面图标“HPLC -1260（联机）”，则进入工作界面。 模块右上角状态灯颜色说明： 无色：未开电源或者模块准备就绪； 黄色：模块未准备就； 绿色：正在进样分析；
红色：模块出错； 所有模块红色：仪器有漏液 工作站图形颜色说明： 绿色：模块准备就绪； 黄色：模块未准备就绪； 蓝色：正在进样分析； 红色：出错或者不能联机； 灰色：此模块没启用。 将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏，系统会自动显示未就绪或出错的原因。 4.1.3冲洗流动相管路 反时针旋开泵模块上的溶液排空阀，右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为5ml/min。将实验中需要的各个通道分别设置“溶剂”为100%，点击确定开始冲洗，每个通道冲洗3-5分钟，若冲洗通道时压力显示超过10 bar，则可换过滤白头。 4.1.4平衡柱子 冲洗完柱子，按要求调整流动相速率及流动相比例，顺时针旋转排空阀，关闭溶液排空阀(确认泵流量为1ml/min)，然后右键点击需用检测器模块视图的空白处，选择“方法”进入检测器的参数设置界面，按要求设置参数（停止时间与泵一致），后点击右键，选择“控制”，在弹出的窗口选择打开，开始平衡柱子，监视信号基线和压力，等待平稳后即可进样（若用缓冲溶液和有机相作为流动相，先用水和有机相平衡30 min，比例与所要求的缓冲溶液和有机相比例一致），待基线平稳后换用所要求的缓冲溶液和有机相按比例混合平衡柱子30 min）。 4.1.5保存方法 将编辑好的方法保存起来。 4.2进样分析 在每个样品进样前，从“运行控制”菜单中点击“样品信息”，编辑好数据的保存路径。进样时，逆时针旋动进样器六通阀旋钮，进样完毕立即顺时针旋回该旋
安捷伦1260 型高效液相色谱仪操作规程 开机 1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Win dows XP画面。 1.2 打开1260 LC 各模块电源（不分先后）。待各模块自检完成后，双击“仪器2联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。（注意：在“仪器2 脱机”关闭的情况下，“仪器2 联机”方能打开。） 1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。 1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵” 模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。单击“确定”。（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。 1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4 即可，不可用力太 过）。右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量6ml/min，溶剂A设到100%单击“确定”。 右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。
1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量为：0ml/min ，单击“确定”，轻轻关闭排气阀(旋紧即可)。 2. 数据采集方法、系列编辑： 2.1 编辑完整方法： 2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。 2.1.2. 方法信息： 在“方法注释”中写入方法的相关信息。此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/ 位置”。 2.1. 3. 自动进样器参数设定: 选择“ Als ”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。 2.1.4. 方法参数设定：在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“ B”、“C”“D处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。在“停止时间”项下输入样品运行时间，在“压力限值”输入 柱子的最大耐高压，如300bar ，以保护柱子。 选择“进样器”选项输入进样体积。 选择“ TCC” 选项，在左侧输入所需温度或选“不控制“，选中“和左侧相同” --- 使柱温箱的温度左右一致。
Agilent1260液相色谱仪 验 证 案 案编号：STP-VP-013-00
案制定 案审核 案批准
验证小组人员
目录 1 液相色谱仪概述 2 验证目的 3 验证围 4 验证参考文件 5 计划及进度 6 设计确认 7 安装确认 8 运行确认 9 性能确认 10 验证期
1 液相色谱仪概述 液相色谱仪是常茂生物化学工程股份用于检测成品，原料，中间品的检测设备。设备由输液泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，色谱工作站组成。由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱，自动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并依次进入检测器，由色谱工作站软件记录和处理色谱信号。 2 验证目的 确认Agilent1260液相色谱仪能符合GMP标准及设计要求，所制定的标准及文件符合GMP要求，确保液相色谱检查法的准确性。 3 验证围 本验证案适用于常茂生物化学工程股份的Agilent1260液相色谱仪，该设备安装于质量部质量控制室的仪器室。 验证容包括对Agilent1260液相色谱仪进行设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。 4 验证参考文件 本案以药品监督管理局颁布的《药品生产质量管理规》、由食品药品监督管理局组织编写的《药品生产验证指南》、中国药典2010年版为依据，制定了高效液相色谱仪的验证案。 5 计划及进度 整个验证活动分四个阶段完成： 设计确认：从_____年_ _月_ _日至_____年___月___日； 安装确认：从_____年___月__ 日至_____年__ 月__ 日； 运行确认：从_____年___月__ 日至_____年__ 月__ 日； 性能确认：从_____年___月_ _日至_____年__ 月__ 日。 6 设计确认 6.1 供应商的资格和服务 6.1.1 设备供应商应有良好的生产运营情况，没有与法规或地法规相违背的生产状况。 6.1.2 安装时能提供现场指导或培训的技术人员数量、资格，并且将来在日常使用
安捷伦1260操作规程 安捷伦（Agilent）1260操作规程 一、仪器概述 安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。 二、仪器准备 1. 确保仪器的电源已连接并接通。 2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。 3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充，以及是否有足够的溶剂。 三、方法设置 1. 打开色谱软件，并选择合适的方法模板。 2. 根据分析需求，在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。 3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。 四、进样操作 1. 打开进样器的盖子，将待测样品加入样品瓶中。 2. 点击软件中的进样按钮，设置样品名称和进样量。 3. 将样品瓶放入进样器，并关闭盖子。 4. 点击软件中的进样按钮，开始进样。
5. 进样完成后，从进样器中取出样品瓶，并将它放入垃圾桶中。 五、色谱柱操作 1. 打开色谱柱的阀门，并将柱端与色谱柱连接。 2. 检查色谱柱是否没有泄漏，如果有泄漏，则需重新连接。 3. 检查色谱柱的温度，确保它处于合适的温度范围内。 六、液相泵操作 1. 打开液相泵的电源，并连接到电脑上。 2. 设置合适的流速和梯度梯度。 3. 点击软件中的启动按钮，开始进行分析。 七、数据分析 1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。 2. 根据需要选择适当的数据处理方法，如峰面积计算、定量分析等。 3. 导出分析结果并保存。 八、仪器维护 1. 分析结束后，关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。 2. 清洗色谱柱和进样器，保持其清洁。 3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。 九、安全操作 1. 在操作仪器时，注意安全，避免接触到有害化学品。 2. 在操作过程中，严禁随意触摸仪器或移动连接线。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程 一、仪器介绍 二、前期准备 1.打开仪器电源，待仪器自检完成后，确保所有指示灯都亮起。 2.检查溶剂瓶的液位，确保足够的溶剂供给。 3.清洁好色谱柱并连接到系统中。 三、仪器启动 1.打开色谱软件，选择相应的方法。 2.点击“系统”菜单，选择“启动系统”命令，系统开始进行初始化。 3.在系统初始化完成后，点击“准备”菜单，选择“准备系统”命令，系统开始进行一系列的自动化准备工作，比如冲洗和平衡柱子。 4.检查系统的压力和温度，确保在正常范围。 四、样品进样 1.准备好待测样品和标准品。 2.将样品装入进样瓶中，注意不要超过瓶口。 3.将进样瓶插入样品进样系统中，按照方法设置的条件进行进样。 4.点击软件界面上的“进样”按钮，开始进样。 五、色谱柱选择 1.根据待测样品的性质和分离特点，选择合适的色谱柱。
2.将色谱柱连接到色谱仪系统中。 3.检查色谱柱的压力和温度，确保在正常范围。 六、色谱条件设置 根据分析方法的要求，设置好色谱条件，包括流量、温度、柱温等参数。 七、检测器设置 1.根据需要选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等。 2.设置检测器的工作参数，如波长、增益、基线噪声等。 八、开始分析 1.在样品进样后，点击软件界面上的“开始”按钮，开始进行色谱分析。 2.监控检测器输出的信号，根据需要可以对信号进行放大或调整。 九、结果解析 1.根据所用方法的要求，对分析结果进行解析。 2.可以通过软件导出结果并进行后续处理。 十、仪器关机 1.关闭色谱仪软件。 2.关闭色谱柱进样系统。 3.关闭色谱仪电源。
安捷伦1260型高效液相色谱仪 确认报告
报告审核批准:
目录 目录......................................................................................................................... 错误!未定义书签。 1. 概述................................................................................................................... 错误!未定义书签。 2. 目的................................................................................................................... 错误!未定义书签。 3. 范围................................................................................................................... 错误!未定义书签。 4. 确认实施时间................................................................................................... 错误!未定义书签。 5. 内容................................................................................................................... 错误!未定义书签。 5.1. 验证总则.................................................................................................... 错误!未定义书签。 5.2. 人员培训确认............................................................................................ 错误!未定义书签。 5.3. 设计确认.................................................................................................... 错误!未定义书签。 5.4. 安装确认.................................................................................................... 错误!未定义书签。 5.5. 运行确认.................................................................................................... 错误!未定义书签。 5.6. 性能确认.................................................................................................... 错误!未定义书签。 6. 结论................................................................................................................... 错误!未定义书签。 7. 附件................................................................................................................... 错误!未定义书签。 第3页
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项 一、操作规程 ㈠开机 1．把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。 2．打开计算机，打开主机各模块电源（从上至下），再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。 3．旋开排气阀（逆时针），右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。 4．依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。 ㈡数据采集 1. 编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。 2. 编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。 3. 四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”,在
“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。 4. TCC（柱箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。 5. VWD检测器参数设定：在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。 6. 仪器曲线设置：默认即可。 7. 关闭排气阀（顺时针），冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。 8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时（定量环体积为20uL），用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。 ㈢数据处理 1．在桌面上单击“LC1260(脱机)”进入数据分析界面。 2．从“文件”菜单选择“调用信号”选中您的数据文件名，单击“确定”。 3．谱图优化，从“图形”菜单中选择“信号选项”，从“范围”中选择“自动量程”及合适的显示时间单击“确定”,或选择“自定义量程”调整，反复进行直到图的比例合适为止。
文件内容： 1、目的 (1) 2、范围 (1) 3、职责 (1) 4、内容 (1) 5、变更记载和原因 (4) 颁发部门：质量部 发放范围： □质量部□生产部□物流部□人事行政部□设备动力部
1.目的：能正确使用仪器,确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器 使用寿命。 2.范围：适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操 作。 3.职责：质量控制检验员。 4.内容： 4.1 开机： 4.1.1 打开计算机，登陆windows操作系统。 4.1.2 打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双 击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。 4.1.3 把各流动相放入溶剂瓶中。 4.1.4 旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点 击“方法”选项进入泵编辑画面。将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力。 4.1.5 依此切换到B、C、D溶剂分别排气。 4.1.6 将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如 A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。 4.1.7 再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到 1ml/min，冲洗色谱柱20—30分钟。 4.1.8 把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯， 观察基线情况。
4.2 数据采集方法编辑： 4.2.1编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者 姓名，样品数据文件名等。 4.2.2编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选 中项单击“确定”进入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确 定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”进入 下一画面“设臵方法”进行参数设定。 4.2.3四元泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂” 处输入比例，如：B：80%(A=100-B-C-D)，在右面注释栏中标明 各溶剂的名称；设臵“停止时间”和“后运行时间”，在“压力 限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250bar，在“时间表”添加编辑梯度。 4.2.4进样器参数设定：在进样模式中输入进样量xxul。“标准进针” ——只能输入进样体积此方式无洗针功能。“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位臵为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。 4.2.5进样器进样程序参数设定：选中使用进样程序，在“函数”中添 加相应函数即可按程序进样。 4.2.6 TCC（柱温箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所 需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温 度左右一致。 4.2.7 VWD（紫外检测器）参数设定：在“波长”下方的空白处输入所 需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式
Agilent1260高效液相色谱仪操作规程(word版可编辑修改) 编辑整理： 尊敬的读者朋友们： 这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（Agilent1260高效液相色谱仪操作规程(word版可编辑修改)）的内容能够给您的工作和学习带来便利。同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。 本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为Agilent1260高效液相色谱仪操作规程(word版可编辑修改)的全部内容。
四川中安检测有限公司 作业指导书 Agilent1260高效液相色谱仪 操作规程
1.目的 正确使用仪器，确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器使用寿命。 2。范围 适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作。 3。职责 3.1操作人员：按照本操作规程操作仪器，对仪器进行自检，作使用登记。 3。2负责人:负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期自检、仪器综合管理。 4。要求 4。1开机 4.1.1溶剂准备 按要求准备所需流动相,每瓶均超声10min排气，将原来浸泡在甲醇中的滤头取出对应放在各个流动相中（A:二次蒸馏水；D:缓冲溶液;B:色谱纯甲醇C：色谱纯乙腈)。 4。1.2开启工作站 4。1.2。1启动计算机 打开计算机电源，登陆 windows 操作系统.
4.1。2.2启动工作站 打开 Agilent 1260 各模块电源,待 Agilent 1260 各模块自检完成后（各模块右上角指示灯为黄色或者无色），点击屏幕桌面图标“HPLC —1260(联机）”，则进入工作界面。 模块右上角状态灯颜色说明: 无色：未开电源或者模块准备就绪; 黄色：模块未准备就； 绿色：正在进样分析； 红色：模块出错; 所有模块红色：仪器有漏液 工作站图形颜色说明： 绿色：模块准备就绪； 黄色:模块未准备就绪； 蓝色：正在进样分析; 红色：出错或者不能联机； 灰色：此模块没启用。 将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏，系统会自动显示未就绪或出错的原因。4。1。3冲洗流动相管路 反时针旋开泵模块上的溶液排空阀，右键单击泵视图的空白处,选择“方法”，设置“流速”为 5ml/min。将实验中需要的各个通道分别设置“溶剂”为 100％，点击确定开始冲洗，每个通道冲洗3-5分钟，若冲洗通道时压力显示超过10 bar，