丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)
简介：
丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。
丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)检测原理是在酸性条件下，丙酮酸与二硝基苯肼反应，生成丙酮酸丙酮酸-二硝基苯腙复合物，后者经氧化呈樱桃红色，通过分光光度比色法测定520nm 处吸光度，据此通过与标准曲线对比可以计算出PA 水平。该试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量，尤其适用植物样品丙酮酸含量的检测。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
① 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于
本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。
② 细胞或组织样品：取2g 组织样品，加入组织匀浆液，仔细研磨，转移至新的离心
中，清洗研磨器一并倒入离心管中，补组织匀浆液至，充分混匀，离心取上清，-20℃冻存，用于PA 的检测。
③ 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进
行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。
2、 配制标准品工作液：如果检测血清、血浆、尿液等样品，取丙酮酸标准(6mg/ml)，按
取丙酮酸标准(6mg/ml)：蒸馏水=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml 3、 检测血清、血浆、尿液等样品时，按下表操作：
试管号/ml 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准(60μg/ml)
0.3
0.6
0.9
1.2
1.5
编号 名称
TC0751 50T Storage
试剂(A): 丙酮酸标准(6mg/ml) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 组织匀浆液 250ml RT 试剂(C): 苯肼显色液 30ml RT 试剂(D): PA assay buffer 150ml
RT 使用说明书
1份
蒸馏水 1.5 1.2 0.9 0.6 0.3 0 丙酮酸浓度(μg/ml) 0 12 24 36 48 60
检测组织样品时，按下表操作：
试管号/ml 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准(60μg/m,匀浆液配制) 0 0.3 0.6 0.9 1.2 1.5
组织匀浆液(检测组织样本时用) 1.5 1.2 0.9 0.6 0.3 0 丙酮酸浓度(μg/ml) 0 12 24 36 48 60
4、加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免
产生气泡。如果样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置平行管。
检测血清、血浆、尿液等样品时，按下表操作：
加入物/ml 空白管(血清等)标准管测定管蒸馏水0.1——
待测样品——0.1
蒸馏水稀释后的各丙酮酸标准—0.1 —
苯肼显色液0.50.5 0.5
充分混匀
PA assay buffer 2.5 2.5 2.5
检测组织样品时，按下表操作：
加入物/ml 空白管(组织等)标准管测定管组织匀浆液 1.5——
待测样品—— 1.5
匀浆液稀释后的各丙酮酸标准— 1.5 —
苯肼显色液0.50.5 2.5
充分混匀
PA assay buffer 2.5 2.5 2.5
4、PA检测：混匀，用分光光度计，以空白管调零，比色杯光径1.0cm，读取标准管、测定管的520nm吸光度(即A标准、A测定)。以各丙酮酸标准浓度为横坐标，以对各丙酮酸标准A标准为纵坐标，绘制丙酮酸标准曲线。
计算：
血清、血浆、尿液等的丙酮酸含量直接根据标准曲线求得。
组织丙酮酸(mg/g)=A×N/(m×100)
注意事项：
1、配制好的PA显色液，4℃保存，36h有效。
2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，检测样品量会相应增加。。
3、抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。
实验八食品中总抗坏血酸的测定（2，4-二硝基苯肼比色法） Method for determination of ascorbic acid in foods （by colorimetry with 2,4-dinitrophenylhydrazine） (一)目的 掌握2，4-二硝基苯肼比色法测定食品中总抗坏血酸含量。 (二)原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。 (三)仪器与试剂 1.仪器和设备 1.1 恒温箱(37±0.5)℃。 1.2 可见—紫外分光光度计 1.3 捣碎机 2.试剂 本实验用水均为蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。 2.1 4.5 mol／L硫酸谨慎地加250mL硫酸(相对密度1.84)于700 mL水中，冷却后用水稀释至1000 mL。 2.2 85％硫酸谨慎地加900 mL硫酸(相对密度1.84)于100 mL水中。 2.3 2％2，4—二硝基苯肼溶液溶解2g 2，4—二硝基苯肼于100 mL 4.5 mol／L 硫酸内，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。 2.4 2％草酸溶液溶解20g草酸(H2C2O4)于700 mL水中，稀释至1000mL。2.5 1％草酸溶液稀释500mL 2％草酸溶液到1000mL。 2.6 1％硫脲溶液溶解5g硫脲于500 mL 1％草酸溶液中。 2.7 2%硫脲溶液溶解10g硫脲于500mL 1％皋酸溶液中。 2.8 l mol／L盐酸取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200 mL。 2.9 抗坏血酸标准溶液溶解100mg纯抗坏血酸于100 mL l％草酸中，配成每毫升相当于l mg抗坏血酸。 2.10 活性炭将100g活性炭加到750mL l mol／L盐酸中，回流1—2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子(Fe3+)为止，然后置于110℃烘箱中烘干。
2,4-二硝基苯肼化学品安全技术说明书 说明书目录 第一部分化学品名称第九部分理化特性 第二部分成分/组成信息第十部分稳定性和反应活性 第三部分危险性概述第十一部分毒理学资料 第四部分急救措施第十二部分生态学资料 第五部分消防措施第十三部分废弃处置 第六部分泄漏应急处理第十四部分运输信息 第七部分操作处置与储存第十五部分法规信息 第八部分接触控制/个体防护第十六部分其他信息 第一部分：化学品名称 化学品中文名称：2,4-二硝基苯肼 化学品英文名称：2,4-dinitrophenylhydrazine 中文名称2： 英文名称2： 技术说明书编码：468 CAS No.: 119-26-6 分子式：C6H6N4O4 分子量：198.14 第二部分:成分/组成信息 有害物成分含量CAS No. 2,4-二硝基苯肼119-26-6
第三部分：危险性概述 危险性类别: 侵入途径: 健康危害：对眼和皮肤有刺激性。对皮肤有致敏性。本品吸收进入体内，可引起高铁血红蛋白血症，岀现紫绢。 环境危害: 燃爆危险：本品易燃，具爆炸性，具刺激性，具致敏性。 第四部分：急救措施 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 吸入： 迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：饮足量温水，催吐。就医。 第五部分：消防措施 危险特性： 遇明火极易燃烧爆炸。干燥时经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出有毒的刺激性烟雾。与氧化剂混合能形成爆炸性混合物。有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳、氮氧化物。 灭火方法： 尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。灭火剂：二氧化碳、泡沫、干粉、砂土。 第六部分：泄漏应急处理 应急处理： 隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。小量泄漏： 避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。大量泄漏：用塑料布、帆布覆盖。使用无火花工具收集回收或运至废物处理 场所处置。 第七部分：操作处置与储存 操作注意事项：密闭操作，局部排风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防尘
实验总维生素C的测定 —二硝基苯肼比色法 The following text is amended on 12 November 2020.
实验：总维生素C的测定—2，4-二硝基苯肼比色法 一、实验目的 1.了解天然维生素C 的结构功能以及天然存在形式。 2.掌握测定总维生素C 的原理与方法。 二、实验原理 总抗坏血酸包括还原型Vc、脱氢型Vc 和二酮古龙糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4 -二硝基苯肼作用生成红色脎。脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，由此通过比色可对样品中总坏血酸进行定量。 三、仪器和试剂 仪器：恒温水浴锅（37±0.5℃）、紫外-可见分光光度计、组织捣碎机。 试剂：本实验用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。 1、4.5mol/L 硫酸：小心将250mL 硫酸(比重1.84)加入到700mL 水中，冷却后用水稀释至1000mL。 2、(9+1)硫酸：小心将900mL 硫酸(比重1.84)加入到100mL 水中，搅拌均匀。 3、2% 2，4-二硝基苯肼溶液(20g/L2，4 -二硝基苯肼溶液)：溶解2g 2，4 - 二硝基苯肼于100mL 4.5mol/L 硫酸内，过滤使用（不用时存于冰箱内，每次用前过
滤）。 4、2%草酸溶液(20g/L 草酸溶液)：溶解20g 草酸(422O C H )于700mL 水中，再加水 稀释至1000mL 。 5、1%草酸溶液(10g/L 草酸溶液)：稀释500mL 2%草酸溶液到1000mL 。 6、1%硫脲溶液(10g/L 硫脲溶液)：溶解5g 硫脲于500mL 1%草酸溶液中。 7、2%硫脲溶液(20g/L 硫脲溶液)：溶解10g 硫脲于500mL 1%草酸溶液中。 8、1mol/L 盐酸：取100mL 盐酸，加入水中，并稀释至1200mL 。 9、抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)：溶解100mg 纯抗坏血酸于100mL 1%草酸中。 10、活性炭：将100g 活性炭加到750mL 1mol/L 盐酸中，水浴回流1-2h ，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（ 3e F ）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。 检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾（20g/L 亚铁氰化钾）与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。 四、操作步骤 （全部实验过程应避光） (一)样品的测定 1.浸提： 鲜样的制备：称100g 鲜样和100g 2%草酸溶液(20g/L 草酸溶液)，倒入捣碎机中
化学品安全技术说明书 化学品中文名：2,4-二硝基苯肼 化学品英文名：2,4-dinitrophenylhydrazine 企业名称： 生产企业地址： 邮编: 传真: 企业应急电话： 电子邮件地址： 技术说明书编码: √纯品混合物 有害物成分浓度CAS No. 2,4-二硝基苯肼119-26-6 危险性类别：第4.1类易燃固体 侵入途径：吸入、食入、经皮吸收 健康危害：对眼和皮肤有刺激性。对皮肤有致敏性。本品吸收进入体内，可引起高铁血红蛋白血症，出现紫绀。 环境危害：对环境有害。 燃爆危险：易燃。受撞击、磨擦，遇明火或其它点火源极易爆炸。 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。如有不适感，就医。眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。如有不适感，就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸、心跳停止，立即进行心肺复苏术。就医。 食入：用水漱口，就医。 危险特性：遇明火极易燃烧爆炸。干燥时经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出有毒的刺激性烟雾。与氧化剂混合能形成爆炸性混合物。
有害燃烧产物：一氧化碳、氮氧化物。 灭火方法：用二氧化碳、泡沫、干粉、砂土灭火。 灭火注意事项及措施：消防人员须戴好防毒面具，在安全距离以外，在上风向灭火。 尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结 束。 应急行动：隔离泄漏污染区，限制出入。消除所有点火源。建议应急处理人员戴防尘口罩，穿防毒、防静电服。禁止接触或跨越泄漏物。小量泄漏：用洁净 的铲子收集泄漏物，置于干净、干燥、盖子较松的容器中，将容器移离 泄漏区。大量泄漏：用水润湿，并筑堤收容。防止泄漏物进入水体、下 水道、地下室或密闭性空间。 操作注意事项：密闭操作，局部排风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防尘口罩，戴化学安全防护眼镜，穿 防毒物渗透工作服，戴防毒物渗透手套。远离火种、热源，工作场所严 禁吸烟。使用防爆型的通风系统和设备。避免产生粉尘。避免与氧化剂 接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。禁止震动、撞击和摩 擦。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。倒空的容器 可能残留有害物。 储存注意事项：为安全起见，储存时常以不少于25％的水润湿、钝化。储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过35℃。包装密封。应与氧 化剂分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产 生火花的机械设备和工具。储区应备有合适的材料收容泄漏物。 接触限值： MAC(mg/m3): 未制定标准PC-TWA（mg/m3）: 未制定标准 PC-STEL（mg/m3）: 未制定标准TLV-C(mg/m3): 未制定标准 TLV-TWA(mg/m3): TLV-STEL(mg/m3): 监测方法：无资料。 工程控制：密闭操作，局部排风。 呼吸系统防护：可能接触其粉尘时，必须佩戴过滤式防尘呼吸器。 眼睛防护：戴化学安全防护眼镜。 身体防护：穿防毒物渗透工作服。 手防护：戴防毒物渗透手套。 其他防护：工作现场禁止吸烟、进食和饮水。工作完毕，淋浴更衣。注意个人清洁卫生。
一、 理化特性： 二、 危险性概述： 1、 危险性类别：对眼和皮肤有刺激性。对皮肤有致敏性。本品吸收 进入体内，可引起高铁血红蛋白血症，出现紫绀。 2、 GHS-分类：易燃固体 (类别1)；急性毒性, 经口 (类别4)；严 重眼睛损伤/眼睛刺激性 (类别2B)。 3、 图标或危害标志： 信号词：危险 4、 危险信息：本品易燃，吞咽有害，造成眼刺激。 5、 预防措施：
远离热源/火花/明火。禁止吸烟。容器和装载设备接地/等势联 接。使用防爆的电气/通风/照明设备。作业后彻底清洗皮肤。使 用本产品时不要进食、饮水或吸烟。戴防护手套/戴防护眼罩/戴 防护面具。 三、急救措施 1、皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。 2、眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 3、吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 4、食入：禁止催吐。切勿给失去知觉者喂食任何东西。用水漱口。请教医生。 四、消防措施 1、危险特性：遇明火极易燃烧爆炸。干燥时经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出有毒的刺激性烟雾。与氧化剂混合能形成爆炸性混合物。 2、灭火方法与灭火剂：尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。灭火剂：二氧化碳、泡沫、干粉、砂土。 3、灭火注意事项及措施：隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。大量泄漏：用塑料布、帆布覆盖。使用无火花工具收集回收或运至废物处理场所处置。 五、泄漏应急措施 1、作业人员防护措施：使用个人防护装备。避免粉尘生成避免吸入蒸气、
实验：总维生素C 的测定—2，4-二硝基苯肼比色法 一、实验目的 1.了解天然维生素C 的结构功能以及天然存在形式。 2.掌握测定总维生素C 的原理与方法。 二、实验原理 总抗坏血酸包括还原型Vc 、脱氢型Vc 和二酮古龙糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4 -二硝基苯肼作用生成红色脎。脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，由此通过比色可对样品中总坏血酸进行定量。 三、仪器和试剂 仪器：恒温水浴锅（37±0.5℃）、紫外-可见分光光度计、组织捣碎机。 试剂：本实验用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。 1、4.5mol/L 硫酸：小心将250mL 硫酸(比重1.84)加入到700mL 水中，冷却后用水稀释至1000mL 。 2、(9+1)硫酸：小心将900mL 硫酸(比重1.84)加入到100mL 水中，搅拌均匀。 3、2% 2，4-二硝基苯肼溶液(20g/L2，4 -二硝基苯肼溶液)：溶解2g 2，4 - 二硝基苯肼于100mL 4.5mol/L 硫酸内，过滤使用（不用时存于冰箱内，每次用前过滤）。 4、2%草酸溶液(20g/L 草酸溶液)：溶解20g 草酸(422O C H )于700mL 水中，再加水
稀释至1000mL。 5、1%草酸溶液(10g/L草酸溶液)：稀释500mL 2%草酸溶液到1000mL。 6、1%硫脲溶液(10g/L硫脲溶液)：溶解5g 硫脲于500mL 1%草酸溶液中。 7、2%硫脲溶液(20g/L硫脲溶液)：溶解10g 硫脲于500mL 1%草酸溶液中。 8、1mol/L 盐酸：取100mL 盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。 9、抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)：溶解100mg 纯抗坏血酸于100mL 1%草酸中。 10、活性炭：将100g 活性炭加到750mL 1mol/L 盐酸中，水浴回流1-2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（ 3e F）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。 检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾（20g/L亚铁氰化钾）与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。 四、操作步骤 （全部实验过程应避光） (一)样品的测定 1.浸提： 鲜样的制备：称100g 鲜样和100g 2%草酸溶液(20g/L草酸溶液)，倒入捣碎机中打成匀浆，取10-40g 匀浆(含1-2mg 抗坏血酸)倒入100mL 容量瓶中，用1%草酸溶液(10g/L草酸溶液)稀释至刻度，混匀。
ASTM E411-00 2，4-二硝基苯肼测定微量的羰基化合物 1范围 1．1本标准测定总羰基的范围为0.5-50ug，以一氧化碳计。 1．2这是一个常规方法，不包括样品的制备。 1．3本标准还测定在实验条件下水解的乙缩醛。 1．4羰基化合物容易水解形成可以用选择性步骤测定的乙缩醛及亚胺。 1．5所生成的颜色不稳定，必须在指定的时间内测量。 1．6对于毒性、急救方法、处理及安全预防的详细信息，查阅近期的材料安全数据表。 1．7这些数值的单位与国际标准单位一致。 2 方法概要 样品中微量的羰基化合物组分与2，4-二硝基苯肼在酸性溶液中反应生成腙。腙进一步与氢氧化钾反应产生深红色，与醌产生共轭分子。红色的强度反应了羰基化合物的含量，用分光光度计进行测定，羰基化合物的含量从事先绘制的校正曲线上读取。本标准是基于Lappin和Clark的工作。 3 意义及用途 本标准能测定水溶液及多种有机试剂中微量的醛和酮。 4 干扰 4．1本标准确立了相关的干扰信息，这是有必要的。对于样品测试尽量避免干扰。 4．2含有不饱和共轭分子的羰基化合物在不同的波长下测定吸光度时，会干扰其它的羰基化合物。 4．3有干扰存在的条件下，乙缩醛只能部分的水解，完全水解需要更高的反应温度。 4．4某些羰基化合物组分，例如二异丁基酮因反应不完全而使结果偏低。如果对有问题的组分进行校正，这些组分也是可以测定的。 4．5因为本标准的灵敏度很高，在室内排除丙酮或其它羰基化合物组分的蒸汽对测试是有必要的。 5 设备
5．1分光光度计：可以用1cm的比色池在480nm处测量吸光度。 5．2比色池：1cm。 5．3所有的玻璃器皿在使用前必须是干净的，先用水，最后用甲醇。不要用丙酮来干燥玻璃器皿。 6 试剂 6．1试剂纯度：除非特别指定，所有的试剂都要符合美国化工协会分析试剂委员会的技术规定。其它级别的试剂如纯度更高或不影响测定的精密度，也是可以使用的。 6．2纯水：除非特别指定，所用的水是规范D 1193中指明的2级或3级试剂水。6．3无羰基化合物的甲醇：于4升甲醇中加入20g 2，4二硝基苯肼与2mL浓盐酸。用2-3英尺的分馏柱回馏2小时。弃去先前的200mL馏出液。继续蒸馏直到约75%的甲醇被蒸馏。 6．3．1不要使用壶去蒸馏，因为会导致残渣剧烈分解。（见8.2）如果贮存于一个盖紧瓶盖的瓶中，在甲醇中会残留不确定的游离羰基。合理的准备甲醇是用空白时吸光度在0.8以下。 6．4氢氧化钾溶液（100g/L）：溶解100克氢氧化钾于200mL水中，冷却后用甲醇稀释至1升。 6．5 2，4-二硝基苯肼(1g/L)：用4mL浓盐酸的50mL的无羰基的甲醇溶解0.01g2，4二硝基苯肼，并用水稀释至100mL，此溶液在2周后需重新配制。 7 取样 为确保用于分析的所取全部样品的代表性，规定注意事项是有必要的。详细讨论取样步骤，参考Practice E300。 8 校正 8．1于100mL具塞玻璃容量瓶中加入50mL无羰基的甲醇，将待测的25mg的羰基化合物转移至容量瓶中，称取重量精确至0.1mg（见注4）。用无羰基的甲醇稀释容量瓶至刻度并混匀。（见注5） 注4：正确的称取重量可以通过下式计算： W=0.893×E
一药典附录试液配制: 1、二硝基苯肼乙醇试液取2,4-二硝基苯肼1g，加乙醇1000ml使溶解，再缓缓加入盐酸10ml，摇匀，即得。 2、二硝基苯肼试液取2,4-二硝基苯肼1.5g，加硫酸溶液(1→2)20ml，溶解后，加水使成100ml，滤过，即得。 二、其它配制方法 （一）有机试剂中微量羰基化合物测定用 1、0.050g2，4-二硝基苯肼溶于25mL无羰基的甲醇和2mL盐酸溶液中，用水稀释至50mL。2周内有效。 2、0.030g2，4-二硝基苯肼溶于94mL无羰基甲醇中，加1 5mL盐酸，混匀，当日 配制。 注：在酸性介质中，羰基化合物与本试剂反应，生成2，4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈暗红色，可用于分光光度法（445nm处测吸光度）或目视比色法测定羰基化合物。 （二）羰基化合物定性用 1、在50mL30%高氯酸中溶解1 2g2，4-二硝基苯肼。贮于棕色瓶中，长期不坏。 2、2g2，4-二硝基苯肼溶于15mL浓硫酸中，把所得溶液缓缓注入150mL95%乙醇 中，用水稀释至500mL，必要时过滤。贮于棕色瓶中。 注：醛或酮与2，4-二硝基苯肼反应生成黄色、橙色或红色的2，4-硝基苯腙沉淀。2，4-二硝基苯腙的颜色与醛、酮的分子结构有一定的联系，不含共轭双键的醛、酮所形成的腙一般为黄色；和碳碳双键或芳环共轭的醛、酮所形成的腙一般为橙色或红色。 试剂1在水中溶解度大，可以检定稀水溶液中的醛，而试剂2差得多，用浓硫酸配成的试剂，日久会产生沉淀，影响试验的灵敏度。 （三）油脂羰基价测定用 1、50mg2，4-二硝基苯肼溶于100mL精制苯中 注1：油脂经氧化所生成的过氧化物会进一步分解为含羰基的化合物，羰基化合物与本试剂反应生成腙，在碱性条件下形成醌离子，呈褐红色或酒红色，在440nm处测吸光度值，可计算油品中的总羰基价。 注2：精制苯方法：取500mL苯，置1L分液漏斗中，加入50mL浓硫酸，小心振摇5min，开始振摇时注意放气，静置分层，弃去酸液，再加50mL浓硫酸，重复处理一次。将苯层移入另一分液漏斗中，用水洗涤3次，然后用无水硫酸钠脱水。用全玻璃蒸馏装置蒸馏，收集馏液
2,4-二硝基苯肼法Vc的测定方法 实验原理： 总抗坏血酸包括还原型、脱氧型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性氧化为脱氢抗坏血酸，在与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎，其呈色强度与总坏血酸含量呈正比，可进行比色定量。 仪器与试剂： 1.仪器 恒温箱或电热恒温水浴锅，可见光分光光度计，捣碎机。 2.试剂 （1）4.5mol/L硫酸：谨慎地加入250mL硫酸（相对密度1.84）于700mL，水中，冷却后用水稀释至1000mL。 （2）85%硫酸：谨慎地加入900mL硫酸（相对密度1.84）于100mL水中。 （3）2，4-二硝基苯肼溶液（20g/L）：溶解2g 2，4-二硝基苯肼于100mL 4.5mol/l硫酸中，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。 （4）草酸溶液（20g/L）：溶解20g草酸于700mL水中，稀释至1000mL。 （5）草酸溶液（10g/L）：取500mL草酸（20g/L）稀释至1000mL。 （6）硫脲溶液（10g/L）：溶解5g硫脲于500mL草酸溶液（10g/L）中 （7）硫脲溶液（20g/L）：溶解10g硫脲于500mL草酸溶液（10g/L）中 （8）1mol/L盐酸：取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。 （9）抗坏血酸标准溶液：称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL 20g/L草酸溶液中，此溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸。 （10）活性炭：将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中，回流1h～2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子为止，然后置于110℃烘箱中烘干。 检验铁离子方法；利用普鲁士蓝反应。将20g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。 实验步骤： 1、称2g～5g样品放入乳钵内，加入10g/L 草酸溶液磨成匀浆，倒入100mL容量瓶内，用10g/L草酸溶液稀释至刻度，混匀。将样品液加入10%钨酸钠数滴至底面有沉淀，过滤，离心，备用。 2、氧化处理 取25mL上清滤液，加入2g活性炭，振摇1min过滤，弃去最初数毫升滤液。取10mL此氧化提取液，加入10mL 20g/L硫脲溶液，混匀，此试样为稀释液 3、呈色反应 取三个试管，各加入4mL氧化处理稀释液。一个试管作为空白，在其余每支试管中加入1.0mL 20g/L 2，4-二硝基苯肼溶液，将所有试管放入37℃±0.5℃水浴中，保温3h。 3h后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷却到室温，然后加入1.0mL 20g/L 2，4-二硝基苯肼溶液，在室温中放置10min～15min后放入冰水内。其余试管同试样。 4、85%硫酸处理 当试管放入冰水后，向每一试管中加入5mL 85%硫酸，滴加时间至少需要1min，需边加边
2,4-二硝基苯肼化学品安全 技术说明书 第一部分：化学品名称 化学品中文名称：2,4-二硝基苯肼 化学品英文名称：2,4-dinitrophenylhydrazine 技术说明书编码：468 CAS No.：119-26-6 分子式：C6H6N4O4 分子量：198.14 健康危害：对眼和皮肤有刺激性。对皮肤有致敏性。本品吸收进入体内，可引起高铁血红蛋白血症，出现紫绀。 燃爆危险：本品易燃，具爆炸性，具刺激性，具致敏性。 第四部分：急救措施 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：饮足量温水，催吐。就医。第五部分：消防措施 危险特性：遇明火极易燃烧爆炸。干燥时经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出有毒的刺激性烟雾。与氧化剂混合能形成爆炸性混合物。 有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳、氮氧化物。 灭火方法：尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。灭火剂：二氧化碳、泡沫、干粉、砂土。 第六部分：泄漏应急处理 应急处理：隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。大量泄漏：用塑料布、帆布覆盖。使用无火花工具收集回收或运至废物处理场所处置。 第七部分：操作处置与储存
操作注意事项：密闭操作，局部排风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防尘口罩，戴化学安全防护眼镜，穿防毒物渗透工作服，戴防毒物渗透手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。使用防爆型的通风系统和设备。避免产生粉尘。避免与氧化剂接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。禁止震动、撞击和摩擦。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。 储存注意事项：为安全起见，储存时常以不少于25％的水润湿、钝化。储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不超过30℃，相对湿度不超过80％。包装密封。应与氧化剂分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。储区应备有合适的材料收容泄漏物。 第八部分：接触控制/个体防护 中国MAC(mg/m3)：未制定标准 前苏联MAC(mg/m3)：未制定标准 TLVTN：未制定标准 TLVWN：未制定标准 工程控制：密闭操作，局部排风。 呼吸系统防护：可能接触其粉尘时，必须佩戴自吸过滤式防尘口罩。 眼睛防护：戴化学安全防护眼镜。身体防护：穿防毒物渗透工作服。 手防护：戴防毒物渗透手套。 其他防护：工作现场禁止吸烟、进食和饮水。工作完毕，淋浴更衣。注意个人清洁卫生。 第九部分：理化特性 主要成分：纯品 外观与性状：红色结晶性粉末。 熔点(℃)：197～198 沸点(℃)：无资料 相对密度(水=1)：无资料 相对蒸气密度(空气=1)：无资料 饱和蒸气压(kPa)：无资料 燃烧热(kJ/mol)：无资料 临界温度(℃)：无资料 临界压力(MPa)：无资料 辛醇/水分配系数的对数值：无资料 闪点(℃)：无意义 引燃温度(℃)：无资料 爆炸上限%(V/V)：无资料 爆炸下限%(V/V)：无资料 溶解性：微溶于水、乙醇，溶于酸。 主要用途：用于炸药制造，也作化学试剂。第十部分：稳定性和反应活性
丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法) 简介： 丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。 丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)检测原理是在酸性条件下，丙酮酸与二硝基苯肼反应，生成丙酮酸丙酮酸-二硝基苯腙复合物，后者经氧化呈樱桃红色，通过分光光度比色法测定520nm 处吸光度，据此通过与标准曲线对比可以计算出PA 水平。该试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量，尤其适用植物样品丙酮酸含量的检测。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于 本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。 ② 细胞或组织样品：取2g 组织样品，加入组织匀浆液，仔细研磨，转移至新的离心 中，清洗研磨器一并倒入离心管中，补组织匀浆液至，充分混匀，离心取上清，-20℃冻存，用于PA 的检测。 ③ 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进 行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。 2、 配制标准品工作液：如果检测血清、血浆、尿液等样品，取丙酮酸标准(6mg/ml)，按 取丙酮酸标准(6mg/ml)：蒸馏水=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml 3、 检测血清、血浆、尿液等样品时，按下表操作： 试管号/ml 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准(60μg/ml) 0.3 0.6 0.9 1.2 1.5 编号 名称 TC0751 50T Storage 试剂(A): 丙酮酸标准(6mg/ml) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 组织匀浆液 250ml RT 试剂(C): 苯肼显色液 30ml RT 试剂(D): PA assay buffer 150ml RT 使用说明书 1份
2，4-二硝基苯肼法测定柑橘和苹果中维生素C的含量 摘要：利用2，4-二硝基苯肼法测定苹果和柑橘中维生素C含量，在待测样品中加草酸处理过滤后于490nm处作紫外分光光度测定。结果得出了柑橘和苹果种维生素C 的含量。表明了结果的可靠性。 关键词：2，4-二硝基苯肼；柑橘；苹果；维生素C Abstrat:Use 2, 4-2 determination of nitrobenzene hydrazine in apples and oranges in vitamin C content, for the samples 490nm after adding oxalic acid treatment filter where ultraviolet spectrophotometric. The results concluded that citrus and apple kind of vitamin C content .The results showed the reliability. Key words:2, 4-2 nitrobenzene hydrazine; Citrus;Apple ; Vitamin C 引言 维生素C又称为抗坏血酸，是所有抗坏血生物活性的化合物的统称。它在人体内不能直接合成，必须依靠膳食供给[1]500。维生素C不仅具有广泛的生理功能，能防止坏血病，关键肿，促进外伤愈合，使机体增强抵抗能力[2]489。而且在食品工业上常用作抗氧化剂，酸味剂及强化剂[3]673-676。因此，测量食品中维生素C的含量以评价食品品质及食品加工过程中维生素C的变化情况具有重要的意义。 抗坏血酸在机体同具有广泛的生理功能，已知体内许多重要物质的代谢反应都需要抗坏血酸的参与。它是脯氨酸羟基化酶的辅酶，故有增进胶原蛋白合成的作用。机体中许多含疏基的酶，需要依赖于作为还原剂的抗坏血酸的保护，使酶分子的疏基处于还原状态，从而维持其催化活性。由于抗坏血酸的氧化还原作用，它可促进免疫球蛋白的合成，增强机体的抵抗力。同时还能使氧化型谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽（简称GSH），而GSH可与重金属结合而排出体外，因此维生素C常用于重金属的解毒。此外，抗坏血酸尚有许多其他生理功能，但其作用机理还不十分清楚。抗坏血酸是一种不饱和的多羟基内酯化合物，稍有酸味的糖类白色晶体，易溶于水，故属于水溶性维生素。在溶液中其分子内C2和C3之间的烯醇式羟基上的氢极易解离并释放出H+ ，而被氧化成脱氢抗坏血酸，氧化后仍具有维生素C的生理活性，但它易分解为二酮古洛糖酸，此化合物不再具有维生素C的生理活性。维生素C有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，易被氧化而破坏。还原型和氧化型抗坏血酸可以互相转变，在生物组织中自成一氧化还原系统。由于维生素在营养学和临床方面的重要意义，故对食物和生物材料中维生素含量的测定是十分必须的。 维生素C纯品为白色无臭晶体，熔点在190-192℃，易溶于水微溶于丙酮，在乙醇中溶解度更低，不溶于油剂[4]41-42。结晶抗坏血酸在空气中稳定，但它在水溶液中易被空气和其他氧化剂氧化，生产脱氢抗坏血酸；在碱性条件下易分解见光加速分解，在弱酸
一、 理化特性： 二、 危险性概述： 1、 危险性类别：对眼和皮肤有刺激性。对皮肤有致敏性。本品吸收 进入体内，可引起高铁血红蛋白血症，出现紫绀。 2、 GHS-分类：易燃固体 (类别1)；急性毒性, 经口 (类别4)；严重 眼睛损伤/眼睛刺激性 (类别2B)。 3、 图标或危害标志： 信号词：危险 4、 危险信息：本品易燃，吞咽有害，造成眼刺激。 5、 预防措施： 远离热源/火花/明火。禁止吸烟。容器和装载设备接地/等势联接。 使用防爆的电气/通风/照明设备。作业后彻底清洗皮肤。使用本
产品时不要进食、饮水或吸烟。戴防护手套/戴防护眼罩/戴防护 面具。 三、急救措施 1、皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。 2、眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 3、吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 4、食入：禁止催吐。切勿给失去知觉者喂食任何东西。用水漱口。请教医生。 四、消防措施 1、危险特性：遇明火极易燃烧爆炸。干燥时经震动、撞击会引起爆炸。燃烧时放出有毒的刺激性烟雾。与氧化剂混合能形成爆炸性混合物。 2、灭火方法与灭火剂：尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。灭火剂：二氧化碳、泡沫、干粉、砂土。 3、灭火注意事项及措施：隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴防尘面具（全面罩），穿防毒服。小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，置于袋中转移至安全场所。大量泄漏：用塑料布、帆布覆盖。使用无火花工具收集回收或运至废物处理场所处置。 五、泄漏应急措施 1、作业人员防护措施：使用个人防护装备。避免粉尘生成避免吸入蒸气、气雾或气体。保证充分的通风。消除所有火源。将人员疏散到安全区域。避免吸入粉尘。