实验报告
课程名称：生物工艺学实验
实验名称：大肠杆菌生长曲线测定专业：___生物工程__________ 学号：________
姓名：____________ 实验地点：_________________
实验日期：_________________
[实验目的和要求]
1．了解光电比浊计数法的原理。
2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。
3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲线的方法。
[实验器材]
1．菌种大肠埃希菌（E.coli）1~18h液体培养物或菌悬液。或者上次实验诱变得到的菌种。
2．培养基营养肉汤培养基，生理盐水
3．其它：721型光电比色计、1ml无菌移液管、摇床等。
[实验原理和方法]
原理：细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图得到的曲线。
典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个时期。
细菌培养物在生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高。细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度（OD值），表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进而反映出其相对生长量。
步骤：
1．接种、培养
采用无菌操作技术用移液管向每个100ml营养肉汤培养基的三角瓶中试管准确加入大肠埃希菌悬液3ml，轻轻振荡混匀，另设一空白对照组（不加大肠埃希菌悬液）。
将接种后的9组三角瓶置于摇床上，37℃,220r/min，振荡培养。间隔一定时间，即0、1、2、3、4、5、6、7、8、9~18小时后，从摇床上将取下其中一瓶三角瓶培养物（标记时间），置4℃冰箱保存。2．吸光度测定
每组取9支干净小试管，从不同时间培养菌液中摇匀各取3ml，将大肠埃希菌培养液进行适当稀释，使光密度在0.1~0.65之间，以没有接种的空白对照组液体培养基调零点，在600nm波长，1cm比色杯中依次进行测定OD值。测定从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。
经稀释后测定的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液的实际OD值。3．绘制生长曲线
以光密度(OD值)为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制大肠埃希菌的生长曲线。
[实验数据和结果]
时间培养时长OD值
19日 16:300/
18:302-0.08
20:20 5.67-0.135
20日 8:5016.170.188
10:1017.50.204
12:1019.50.243
13:2220.70.281
15:3022.830.369
16:3023.830.45
17:5025.160.454
19:3026.830.42
讨论：本次实验结果并不理想，主要有以下几个方面：
1、由于空白对照有可能被污染，含有大量杂菌，在以此为标准进行调零后测得的OD值有几个是负值。
2、由于实验实在下午开始，在前16小时仅取了两次样，前半部分曲线缺乏足够数据
3、OD值的测量分为两批，使用了两台不同的分光光度计，其中上午使用的仪器有一定问题，前4个数据可能有较大误差
4、最后一瓶培养液中发现有大量白色物质，现状类似于鸡蛋汤汤中的蛋花，可能是混入了杂菌，此组数据不可靠，因此特意留做最后一组，以减少对实验影响。
评语及成绩：
教师（签署）
测定细菌生长曲线 一、实验目的 1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2．学习液体培养基的配制以及接种方法； 3．反复练习无菌操作技术； 4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法； 二、实验原理 将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为： G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2] 式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。 三、实验器材 大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板； 培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基； 取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计； 四、实验步骤 1．活化菌种 将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块； 2．接种 6人大组分为3个小组，按表1接种。 表1.各培养基接入菌种及培养条件
细菌生长曲线的测定 1 目的 1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理 1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 2 原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 3 材料 3.1菌种 某细菌 3.2培养基 液体培养基 3.3 仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4 流程 种子液→标记→接种→培养→测定 5 方法 5.1种子液制备 取细菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中（液体培养基接种法），静止培养24h作种子培养液。 5.2标记编号 取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
5.3接种培养 用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD 值。 5.4生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基（空白对照）倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 6 结果 6.1 将测定的OD值填入下表： 时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值（OD600） 0 6.2 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。 Point： 1液体培养基的配制以及接种方法 2无菌操作技术 3直接计数法
一、实验方案设计
实验数据原始记录： 随时间的变化大肠杆菌液吸光度的数据（括号内数字表示稀释倍数）
3.5 曲线图时间/h 0 1 3.75 6 7 8 8.5 9 10 OD600 0.073 0.073 0.079 0.282 0.456 1.105 1.168 1.662 2.284 时间/h 11 12 13 14 18.33 20.5 23 24 OD b。 2.564 2.016 3.020 2.605 3.315 2.860 3.024 3.324 时间/h 0 1 3.75 6 7 8 8.5 9 10 11 13 18.33 20.5 0应0 0.073 0.073 0.079 0.282 0.456 1.105 1.168 1.662 2.284 2.564 3.020 3.315 2.86 时间/h 0 1 3.75 6 7 8 8.5 9 10 11 OD6b0 0.073 0.073 0.079 0.282 0.456 1.105 1.168 1.662 2.284 2.564 前小时的大肠杆菌的吸光度数据 六?参考文献 前12小时的大肠杆菌的生长曲线图 [1] .牛天贵?食品微生物学实验技术?第1版?北京：科学出版社，2010. [2] .杨革.微生物学实验教程.第2版.北京：科学出版社，2010. [3] .何国庆，贾英民，丁立孝等.食品微生物学.第2版.北京：中国农业大学出版社，2009. [4] .周德庆，胡宝龙.微生物学实验教程.第2版.北京：高等教育出版社，2006.
七?教师对实验方案设计的意见 签名： 年月日 、实验报告 宴验现象验现象、实验结果的分析及其结论 分随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，味道很难闻。实验结果随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，味道大肠杆菌难培养基因为大肠杆菌增长迅越来越后来数量达一定数量后此时培养基内的营养物质已被进行营尽，养和空间肠杆菌进行营些大肠杆间的死亡争，最后数量肠杆菌死亡，直最后数量不断减尙，。直至变为0。 ②通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解了细菌生长 的特点，是：刚开始时细菌缓慢增长，后来增 长迅速，呈“ J”型，最后细菌生长缓慢，数量达到顶峰，在一段时间内保持不变。 因实验测量的时间不够合理等各种因素，因此用原始数据绘制出来的大肠杆菌的生长曲线图不够有规律，经修正后生长曲线比较好。 结论: 细菌的生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。体内及自然界细菌的生长繁殖受机体 免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解细菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
實驗六細菌生長曲線之測定 ◎ Exp 11. Turbidity of bacteria 一、目的： 在進行細菌生長曲線之測定前，必須先了解 U-2001 Spectropho- tometer 操作方法，才能將細菌的數量以吸光值的方式表示出來。二、原理： 請詳讀整理 p. 90-92，學會調整 Optical density (O.D.) 【Exp 13.會用到】。 三、器材： 1. culture：(每組) 24 hr Escherichia coli (broth) 2. medium： (每組) Nutrient broth 3. equipment ： 1 ml pipette，pipette aid，cuvette，拭鏡紙，廢菌液杯，裝蒸餾水的洗 瓶，滅菌空試管，U-2001 Spectrophotometer，振盪器。 四、實驗步驟 ※由助教先示範操作方法，再由學生自行操作與測量待測液之吸光值。 1. 了解 U-2001 Spectrophotometer 操作方法： a. 溫機約 15 分鐘。 b. MENU → (主目錄) 選 1. Photometer →輸入波長 600 nm 及 ABS → Forward → c. Nutrient broth 歸零 autozero → (前、後二支 cuvette) ※1 d. 取出後面之 cuvette ，倒入待測液※2，等到右上方數據穩定後，按 下 Start →記錄。 ※1 cuvette 有石英管 (測波長 340 nm 以下)、玻璃管、塑膠管等材質，本實驗使用塑膠材質之比色管。 ※2 每次測定前需先用蒸餾水滴洗cuvette，再以待測液潤濕，倒掉，再裝入待測液，測完倒掉，用蒸餾水滴洗。測定之前
实验九测定细菌生长曲线 [实验目的] 1．了解细菌生长曲线特征：2．学习液体培养基的配制以及注意事项。3．学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4．利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。 [仪器和材料] 1．实验材料 (1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。 (2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml／250ml 三角瓶X 4瓶／大组)，配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，pH7．5。 2．实验仪器 取液器(5000μl，1000μl，200tμl 各一支)；培养箱．摇床，722s分光光度汁；1000μl 无菌吸头100个；5000μl 无菌吸头2个；1ml或4ml玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。 [实验原理] 将一定量的细菌接种在液体培养基内．在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图9 1)。 单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的． 测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测OD550或OD620或OD600或OD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示。其计算公式为； G=(t2-t1)/[(1gW1—lgW2)／lg2] 式中tl和t2为所取对数期两点的时间；w1和w2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L)或OD。 [实验步骤] 1．准备菌种：将大肠杆菌，枯草杆菌分别接种到装有牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基的三角瓶中，37℃，200r／min振荡培养14-18h．另外准备大肠杆菌单菌落平板l块(37'C培养24h)。 2．接种：分别将1．5ml(1％接种量)和4-5ml(3％接种量)大肠杆菌菌液和一个大肠杆菌单菌落接人含150ml培养液的三角瓶中．37℃，200r／min振荡培养；把4．5ml枯草杆菌(3%接种量)接入含150ml培养液的三角瓶中，37℃，200r／min振荡培养。 3．测量；每培养1h取样一次．净培养(不包括取样时间)10h结束培养，测量培养液pH值。零小时也要测。 如果选用4ml比色皿取500μl培养液到2000μl蒸馏水中(稀释5倍)，以蒸馏水为对照，测OD650。或OD620或OD600或OD420任选一波长)，如果选用lml比色皿，可以取1000μl培养液，以蒸馏水为对照，直接测OD620 、OD600或OD420(任选一波长)，当OD值大于0.6时，下一样品要稀释1倍测量． [实验结果]．
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玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。 [实验原理] 将一定量的细菌接种在液体培养基内．在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图91)。 单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的．测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测oD550或oD620或oD600或oD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以g表示。其计算公式为；
实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实
实验三微生物生长曲线的测定 一、实验目的目的 1、了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、实验材料 1、菌种 2、培养基：肉膏蛋白胨培养基 3、仪器和器具 721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4、流程 种子液→标记→接种→培养→测定 四、实验步骤 1、种子液制备 取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。 2、标记编号 取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、2 0。 3、接种培养 用2mL无菌吸管分别准确吸取1mL种子液加入已编号的6个三角瓶中，于37℃下振
荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出测定OD值。 4、生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。 五、实验结果与分析 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。
实验八细菌生长曲线的测定及 血球计数板测定微生物生长 一、细菌生长曲线的测定及 ★细菌的生长曲线就是把一定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延续而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为细菌的生长曲线，它反映了细菌的群体生长规律。 ★大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。 ★依据其生长速率的不同，可把细菌的生长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。 ★微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700nm 都是微生物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。 ★本实验测定细菌生长曲线的方法是，将待测菌种接入一只大试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此试管，在600纳米波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在一定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌生长繁殖的进程。将所测得的一组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的生长曲线。 ☆实验操作 1、菌种培养：取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液（LB）中，静止培养12--14h，备用。 2、制备LB培养基100ml置于200ml三角瓶内，备用。 3、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、 4、6、8、10、12、14、16和20h。 4、接种：分别用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h)转入盛有100ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
实验七 测定细菌生长曲线 一、 实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3. 反复练习无菌操作技术； 4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法 二、 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。 图一 微生物生长曲线示意图 单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。其计算公式为： 2 lg /)lg (lg 121 2W W t t G --= 式中t1和t2为所取对数期两点的时间； W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。 三、 实验仪器、材料和用具 1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板； 2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基
细菌生长曲线测定 生05 边晔2010030026 四班 同组成员：竞国梁夏川两位学弟 实验时间2012年11月29日 一、实验目的 1.了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时 2.学习液体培养基的配制以及接种法 3.反复练习无菌操作技术 4.了解不同细菌，不同接种法在同一培养基上生长速度的不同 5.掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的法 二、实验原理 将一定量的菌种接种在液体培养基，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。 本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 三、实验仪器、材料和用具 大肠杆菌，枯草杆菌，金黄色葡萄球菌菌液及平板； 培养基(100mL/250mL三角瓶X10瓶/大组)，牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基； 取液器(5000ul, 1000ul 各一支)； 培养箱，摇床，722s分光光度计； 比色皿3个+共用参比杯一个。 四、实验步骤 1.准备菌种（已做）：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡 培养18h，另外准备单菌落平板各1块； 2.接种，分成3小组做，实验结果共享： 第（1）小组 1)取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm
实验日期：2017.11.1实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实
细菌生长曲线的测定的实验步骤 一、 实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3. 反复练习无菌操作技术； 4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法 二、 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。 图一 微生物生长曲线示意图 单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。其计算公式为： 2 lg /)lg (lg 121 2W W t t G --= 式中t1和t2为所取对数期两点的时间； W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。 三、 实验仪器、材料和用具
实验一、大肠杆菌生长条件的探讨及其生长曲线的测定 （综合性实验） (一)目的 1.通过对大肠杆菌生长条件的探讨及其生长曲线的测定，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.学习用比浊法测定细菌的生长曲线。 4.比较不同培养基的生长曲线 (二)原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。 (三)材料 1. 菌种： 大肠杆菌（Escherichia coli） 2. 营养琼脂培养基：根据产品说明配制 3. 生理盐水（0.9%NaCl）100mL，分装入10支试管（每支9mL） 4．培养基：本实验采取正交实验确定大肠杆菌最优的生长条件，采取L934正交表，正交设计如下： 表头（L934）：
实验设计： 培养基经121℃灭菌20min。 5 仪器及其他用品 721型分光光度计、比色杯、恒温摇床、培养箱、高压灭菌器、电子天平、pH计、酒精灯、电炉、接种环、试管架、培养皿10个、无菌吸管（1mL）10支、烧杯、试管、锥形瓶12个（250mL）、胶头、牛皮纸、硅胶塞等。 (四)流程 种子液标记接种培养测定 (五)步骤 1.标记编号 按要求配制培养基，将无菌培养基装于10个250ml锥形瓶，分别编号为0h，4h，6h，
实验五细菌生长曲线的测定 一、实验目的 1、了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、实验原理 大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期，对数期，稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌 2、培养基： LB液体培养基/牛肉膏蛋白胨液体培养基 3、仪器和器具：721分光光度计，比色杯(1cm)，恒温摇床，无菌吸管(5mL)，大试管， 三角瓶(250mL)。 四、实验流程 标记→接种→培养→测定 五、操作步骤 1、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0，1.5，3，4，6，8， 10，12，14，16和20h。 2、接种：分别用5mL无菌吸管吸取2.5mL大肠杆菌过夜培养液(培养10~12h)转入盛有 60mL 液体培养基的三角瓶内，混合均匀后分别取5mL混合液加至上述标记的11 支无菌大试管中。 3、培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率200~250r/min)，分别培养0， 1.5，3，4，6，8，10，12，14，16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放4℃ 贮存，最后一同比浊测定其光密度值。 4、比浊测定：用未接种的液体培养基作空白对照，选用600nm波长进行光电比浊测定。 从早取出的培养液开始依次测定，对细胞密度大的培养液用液体培养基适当稀释后 测定，使其OD600在0.1~0.65之内(测定OD值前，将待测定的培养液振荡，使细 胞均匀分布)。
实验报告 课程名称：生物工艺学实验 实验名称：大肠杆菌生长曲线测定专业：___生物工程__________ 学号：________ 姓名：____________ 实验地点：_________________ 实验日期：_________________
[实验目的和要求] 1．了解光电比浊计数法的原理。 2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲线的方法。 [实验器材] 1．菌种大肠埃希菌（E.coli）1~18h液体培养物或菌悬液。或者上次实验诱变得到的菌种。 2．培养基营养肉汤培养基，生理盐水 3．其它：721型光电比色计、1ml无菌移液管、摇床等。 [实验原理和方法] 原理：细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图得到的曲线。 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个时期。 细菌培养物在生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高。细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度（OD值），表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进而反映出其相对生长量。
步骤： 1．接种、培养 采用无菌操作技术用移液管向每个100ml营养肉汤培养基的三角瓶中试管准确加入大肠埃希菌悬液3ml，轻轻振荡混匀，另设一空白对照组（不加大肠埃希菌悬液）。 将接种后的9组三角瓶置于摇床上，37℃,220r/min，振荡培养。间隔一定时间，即0、1、2、3、4、5、6、7、8、9~18小时后，从摇床上将取下其中一瓶三角瓶培养物（标记时间），置4℃冰箱保存。2．吸光度测定 每组取9支干净小试管，从不同时间培养菌液中摇匀各取3ml，将大肠埃希菌培养液进行适当稀释，使光密度在0.1~0.65之间，以没有接种的空白对照组液体培养基调零点，在600nm波长，1cm比色杯中依次进行测定OD值。测定从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。 经稀释后测定的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液的实际OD值。3．绘制生长曲线 以光密度(OD值)为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制大肠埃希菌的生长曲线。
四川大学 化学实验报告 课程名称生物工艺学实验课程号 309119060 学院轻纺与食品学院专业轻工生物技术 学生姓名赵凤佼学号 0843095035 指导教师周荣清成绩评定 实验日期 2011-06-20~2011-06-22 一、实验名称：大肠杆菌生长曲线的制作 二、实验目的： 1.通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生长特征与规律，绘制生长曲线。 2.掌握光电比浊法测量细菌数量的方法。 三、实验仪器及药品： 1.菌种：大肠杆菌。 2.培养基：LB培养基100ml，分装两支大试管（5ml/支），剩余90ml装入250ml三角瓶。 3.仪器和其他药品：722型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管和无菌吸管等。 四、基本原理： 在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次，将一定量的细菌转入新鲜培养液中，在适宜的培养条件下细胞要经历延迟期、对数期、稳定器和衰亡期4个阶段。以培养时间为横坐标，细菌数目的对数或生长速率为纵坐标所绘制的曲线成为该细菌的生长曲线。不同的细菌在在相同的培养条件下其生长曲线不同，同种细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不同。 当光线微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比；而光密度或透光度可以通过光电池精确测出。因此，可利用一系列菌悬液测定的光密度及其含菌量，做出光密度—菌数的标准曲线，然后根据样品液所测得的光密度，从标准曲线中查处对应的菌数。 本实验用分光光度计进行光电比浊，测定不同时间细菌悬浮液的OD值，绘制生长曲线。 五、关键步骤及注意事项： 1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定 2.严格控制培养时间
大肠杆菌生长曲线的测定 蔡小鹏 （南京工业大学生物与制药工程学院制药1104班）【摘要】通过比浊法对大肠杆菌生长曲线进行测定。因为细菌悬液的浓度与光密度成正比，所以可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌悬液的浓度。将培养12h的大肠杆菌进行发酵罐培养，在不同时间段取样，用分光光度计对大肠杆菌的生长曲线进行测定，测定结果显示：大肠杆菌生长曲线基本符合迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期。 【关键字】比浊法；发酵罐培养；生长曲线 大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。除某些菌型能引起腹泻外，一般不致病，能合成维生素B和K，对人体有益。大肠杆菌是肠杆菌科的一员，经常作为细菌的模式生物广泛用于科学研究。 1实验材料与方法 1.1实验材料 1.1.1菌种 大肠杆菌 1.1.2培养基 1.1. 2.1种子培养基 蛋白胨1%，酵母粉0.5%，Nacl0.8%，硫酸卡那霉素800μL/L（灭菌后同冻存管一起加入摇瓶） 在烧杯中加入1.5g/150mL蛋白胨、0.75g/150mL酵母粉、1.2g/mLNacl,再加入适量（少于150ml）的蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至150ml，保持自然PH。平均分装3瓶后，121℃灭菌20min[1] 1.1. 2.2发酵培养基 在烧杯中加入6g/L蛋白胨、3g/L酵母粉、1.5g/L无水硫酸镁、0.013g/L无水氯化钙、5g/L硫酸铵、1.5g/L柠檬酸三钠、3g/L磷酸二氢钾、0.075g/L七水合硫酸亚铁，再加入适量的（少于1L）蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至1L。121℃灭菌20min。 1.2器材 超净工作台，高压灭菌锅，分光光度计，发酵罐及相应装置，摇床，移液枪，枪头，酒精灯，接种环，三角瓶，玻璃棒，烧杯 1.3接种 1.3.1种子培养基接种 选取单菌落生长明显的平板，用接种环挑取适量的菌落转移到灭过菌的种子培养基三角瓶中。 将接种好的种子培养基放到摇床中，200rpm/min转速，37℃，培养12-14 h。 1.3.2发酵罐接种 将灭过菌的发酵液装入发酵罐中，安装好发酵罐。将三瓶种子液混合均匀，
实验九测定细菌生长曲线 实验九测定细菌生长曲线 [实验目的] 1(了解细菌生长曲线特征:2(学习液体培养基的配制以及注意事项。3(学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4(利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。 [仪器和材料] 1(实验材料 (1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。 (2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml,250ml 三角瓶X 4瓶,大组)，配方:牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，pH7(5。 2(实验仪器 取液器(5000μl，1000μl，200tμl 各一支); 培养箱(摇床，722s分光光度汁; 1000μl 无菌吸头100个;5000μl 无菌吸头2个;1ml或4ml玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。 [实验原理] 将一定量的细菌接种在液体培养基内(在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图9 1)。 单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的(
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测OD550或 OD620或OD600或OD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示。其计算公式为; G=(t-t)/[(1gW—lgW),lg2] 2112 式中tl和t2为所取对数期两点的时间;w1和w2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L)或 OD。 [实验步骤] 1(准备菌种:将大肠杆菌，枯草杆菌分别接种到装有牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基的三角瓶中，37?，200r,min振荡培养14-18h(另外准备大肠杆菌单菌落平板l 块(37'C培养24h)。 2(接种:分别将1(5ml(1,接种量)和4-5ml(3,接种量)大肠杆菌菌液和一个大肠杆菌单菌落接人含150ml培养液的三角瓶中(37?，200r,min振荡培养;把4(5ml枯草杆菌(3%接种量)接入含150ml培养液的三角瓶中，37?，200r,min振荡培养。 3(测量;每培养1h取样一次(净培养(不包括取样时间)10h结束培养，测量培养液pH值。零小时也要测。 如果选用4ml比色皿取500μl培养液到2000μl蒸馏水中(稀释5倍)，以蒸馏水为对照，测OD650。或OD620或OD600或OD420任选一波长)，如果选用lml 比色皿，可以取1000μl培养液，以蒸馏水为对照，直接测OD620 、OD600或 OD420(任选一波长)，当OD值大于0.6时，下一样品要稀释1倍测量(