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IgM抗体纯化办法

IgM抗体纯化办法

Anti-Mouse IgM (μ-chain specific)–Agarose antibody produced in goat IgG fraction of antiserum Catalog Number A4540

Storage Temperature 2–8 °C

Product Description

The IgG fraction of goat anti-mouse IgM (μ-chain

specific) antiserum is covalently attached to cyanogen bromide activated cross-linked beaded agarose. A minimum of five milligrams of the IgG fraction is bound per milliliter of resin. After equilibration, ≥0.4 mg of mouse IgM can be bound and eluted per milliliter of packed resin.

Specificity for the μ-chain of mouse IgM is determined by Ouchterlony Double Diffusion (ODD), prior to agarose bead coupling. The antibody preparation is specific for mouse IgM when tested against purified mouse IgA, IgG (all subclasses), and IgM myeloma proteins.

Identity and purity of the antibody is established by immunoelectrophoresis (IEP), prior to agarose bead coupling. Electrophoresis of the product followed by diffusion against anti-goat IgG and anti-goat whole serum results in single arcs of precipitation in the gamma region.

The antibody-agarose is supplied as a suspension in 0.5M NaCl containing 0.01% thimerosal as a preservative.

Precautions and Disclaimer

This product is for R&D use only, not for drug,

household, or other uses. Please consult the Material Safety Data Sheet for information regarding hazards and safe handling practices.

Storage/Stability

Store the antibody-agarose at 2–8 °C. Do not freeze. After use the regenerated antibody-agarose may be stored at 2–8 °C in 0.01M sodium phosphate buffer, pH 7.2, containing 0.5M NaCl (PB) containing preservative.

Procedure

A two milliliter column of antibody-agarose is prepared using four milliliters of the antibody-agarose

suspension. The column is equilibrated in 0.01M sodium phosphate buffer, pH 7.2, containing 0.5M NaCl (PB). The antigen solution to be bound is applied slowly and followed by a PB wash. Unbound effluent fractions are collected and assayed for protein content (Lowry). The column is then stripped by washing with 0.1M glycine with 0.15M NaCl, pH 2.4, or 0.5M acetic acid with 0.15M NaCl, pH 2.4. Fractions containing protein are collected, brought to neutral pH, and assayed for protein content (Lowry).

Resin Regeneration

Goat Anti-Mouse IgM-Agarose may be regenerated and used for future adsorptions. Strip the agarose with ten column volumes of 0.1M glycine with 0.15M sodium chloride, pH 2.4, or 0.5M acetic acid with

0.15M sodium chloride, pH 2.4. Then wash with 0.01M sodium phosphate buffer, pH 7.2, containing 0.5M sodium chloride (PB).

KAA,JWM,MAM 02/10-1

Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc.

Sigma-Aldrich, Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Sigma-Aldrich publications. Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see reverse side of

the invoice or packing slip.

免疫球蛋白IgM测定 1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。 2原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物,出现凝集,进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点,可增加灵敏度,降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置―150C――200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4.1 试剂:上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014) 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液:20 mmol/l,pH 8.0;氯化钠:200 mmol/L;PEG:3.6%;防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白M抗体(羊):取决于滴度;TRIS缓冲液:20 mmol/l;氯化钠:150 mmol/L;防腐剂 4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存:2-8°C下保存期限:见试剂标签上的有效期。机上稳定期:90天。 4.1.4变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品:使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准 4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。

AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制

如对您有帮助,可购买打赏,谢谢 生活常识分享免疫球蛋白igm偏高的原因是什么 导语:免疫球蛋白img是人血浆内免疫蛋白球五种中的的一种,又称免疫蛋白m。免疫球蛋白igm是人血浆内不可缺少的免疫细胞。但是并不代表免疫球蛋白i 免疫球蛋白img是人血浆内免疫蛋白球五种中的的一种,又称免疫蛋白m。免疫球蛋白igm是人血浆内不可缺少的免疫细胞。但是并不代表免疫球蛋白igm含量越多越好,这种看法是错误的。免疫球蛋白img偏高会影响身体健康。下面就为大家介绍一些导致免疫球蛋白img 偏高的原因,希望能对大家有所帮助。 球蛋白偏高与慢性肝病机体免疫系统有关人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白(γ-球蛋白)中可分为五类即免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D (IgD)和免疫球蛋白E(IgE)其中IgG是最主要的免疫球蛋白约占人血浆丙种球蛋白的70分子量约15万含糖2~3IgG分子由4条肽链组成其中分子量为2.5万的肽链称轻链分子量为5万的肽链称重链轻链与重链之间通过二硫键(-S-S-)相连接免疫球蛋白是机体受抗原(如病原体)刺激后产生的其主要作用是与抗原起免疫反应生成抗原-抗体复合物从而阻断病原体对机体的危害使病原体失去致病作用另一方面免疫球蛋白有时也有致病作用在慢性乙肝患者长期白、球比例倒置警惕有肝硬化迹象 1.临床上的过敏症状如花粉引起的支气管痉挛青霉素导致全身过敏反应皮肤荨麻疹(俗称风疹块)等都是由免疫球蛋白制剂能增强人体抗病毒的能力可作药用.如注射人血清或人胎盘中提取的丙种球蛋白制剂可防治麻疹传染性肝炎等传染病. 2.偏高说明是过敏性体质。体内有过敏源。用些增强体质的中成药

如对您有帮助,可购买打赏,谢谢巨细胞病毒igm抗体偏高介绍 导语:虽说巨细胞病毒是一种古老的病毒,到现在已经有很长一段的研究时间,但是每一个人的感染率还是很高的。这种病毒感染后的具体表现是和感染者 虽说巨细胞病毒是一种古老的病毒,到现在已经有很长一段的研究时间,但是每一个人的感染率还是很高的。这种病毒感染后的具体表现是和感染者的体质、免疫力和年龄都有关系。如果孕妇感染了这种病毒,轻者影响宝宝的发育,严重的话会直接导致腹中胎儿死亡。 新生儿的巨细胞病毒感染可在分娩过程中经过母亲产道时的接触而感染,或通过母乳喂养感染,还可通过多次输血感染。大多数新生儿感染巨细胞病毒后多无不良反应,但对早产儿和体弱儿有较大的危险,以神经肌肉受损为主要特点。幼儿与儿童感染后多无明显症状,偶见肝脾肿大、肝功能异常和呼吸道疾病。青少年与成人感染多无症状,少数可出现发热、肝炎、全身淋巴结肿大或各种疹子,少见的并发症有肺炎、心肌炎、心包炎、神经炎、神经根炎、脑炎;细菌性脑膜炎、血小板减少性紫癜、溶血性贫血和视网膜炎。巨细胞病毒是一种疱疹病毒组DNA病毒。分布广泛,其他动物皆可遭受感染,引起以生殖泌尿系统,中枢神经系统和肝脏疾患为主的各系统感染,从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。巨细胞病毒亦称细胞包涵体病毒,由于感染的细胞肿大,并具有巨大的核内包涵体,故名。 新生儿生命力还不是很旺盛,但是他们感染这种病毒的机率和成年人一样的。因此如果新生儿感染了这种病毒的话,那么能够治愈的概率是低之又低。父母在孩子出生后一定要多注意他们的身体状况,确保他们是健康的。而且也要确保妈妈的健康,因为这种病毒也会通过母乳传染。 预防疾病常识分享,对您有帮助可购买打赏

igm和igg的区别 IgM和IgG均属于免疫球蛋白家族。免疫球蛋白是机体在抗原物质刺激下由浆细胞产生的一类能与抗原特异性结合的血清活性成分。根据其分子结构和抗原特异性的不同,将免疫球蛋白分为五类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。 免疫球蛋白的种类一般情况下,在被病毒感染后,机体会产生一系列的变化来抵御这种入侵,其中免疫球蛋白的含量会发生如所示变化:抗原初次进入机体后,经过一定的潜伏期产生浆细胞并合成分泌抗体。最早出现的是IgM,但该抗体维持时间短,消失快,在血中持续数日至数周。其次出现的是IgG。 感染过程中IgM与IgG的含量变化IgG是免疫球蛋白的主要成分,是唯一能通过胎盘的免疫球蛋白,在IgM接近消失时,IgG的含量达到高峰,并在血中持续较长时间。当数月乃至数年再次接触相同抗原时,最初原抗体量稍有下降,可能是由于一部分原有抗体被再次进入的抗原所结合,从而暂时降低了抗体含量,但短期内抗体含量迅速增加,可能比原来抗体含量高数倍至数十倍,以IgG为主,在体内持续时间也长,IgM很少增加。本次疫情中,我们通过对COVID-19患者进行研究发现,病毒侵入人体后,IgM抗体大约需要5~7天产生,IgG抗体在10~15天时产生。IgM与IgG同属于免疫球蛋白,有何区别,我们从含量、产生时间及对临床诊断作用等方面对二者区别做IgG是免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG,IgG)的缩写,是血清主要的抗体成分,约占血清Ig的75%,IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在机体免疫中起保护作用,大多数抗菌、抗病毒;IgM是免疫应答中首先分泌的抗体,不能通过胎盘,IgM占血清免疫球蛋白总量的5%~10%,Igm是初次体液免疫应答中最早出现的抗体,血清中检出IgM,提示新近发生感染,可用于感染的早期诊断。

梅毒螺旋体IgM抗体检测的临床意义 作者:李步荣,贺军涛,张毅,岳天海,李丽华,张小玉 【Abstract】 AIM: To evaluate the clinical significance of detection of IgM antibody against Treponema pallidum in diagnosing syphilis. METHODS: The serum samples of 90 syphilitic patients were collected and treated with IgG/RF immunoabsorbent, then were detected for TP IgM with Treponema pallidum particle agglutination(TPPA) assay. The serum samples were also detected for TP DNA by RT PCR method. RESULTS: The TP IgM positive rates were 75.9%, 100% and 77.8% in primary syphilis, secondary syphilis and latent syphilis, respectively. The total positive rate of TP IgM was 81.1%(73/90) in syphilis sera. The positive rates were statistically different between the 3 different syphilis groups(χ2=90.20, υ=2, P<0.05). The TP DNA positive rate was 78.9%(71/90). There was no significant difference between the positive rates of TP IgM and TP DNA(χ2=0.5, υ=1, P>0.05). CONCLUSION: The detection of IgM antibody against Treponema pallidum in serum is important for the clinical diagnosis of syphilis. 【Keywords】syphilis; IgM antibodies; treponema pallidum

TORCH抗体IgM检测的临床意义 何谓 TORCH TORCH是以下四种微生物英文首字母的缩写:弓形虫(Toxoplasmagondi,TOXO),风疹病毒(Rubella RUB),巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV),单纯疱疹病(Herpes simplex virus,HSV) ,HSV又可分为两型,即 HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型。当机体从不同的途径感染上述病原体后血清中就可以产生相应的抗体IgM和IgG,IgG检测主要用以说明既往感染史和慢性病患者,而IgM是检测微生物的近期感染,或慢性病患者的近期活动情况,因而能较为准确的反应临床现病症。本科近期引进了 TORCH 系列IgM抗体ELISA试剂合用以满足临床诊断需要。 TORCH抗体IgM检测的临床意义 TORCH系列中的四种微生物都可通过胎盘影响胎儿早期的正常发育并引起多种先天性疾病。如 TOXO导致先天性弓形虫病,引起胎儿死亡或畸形;目前流行饲养宠物,如猫等,弓形虫可因人们接触了含有卵囊的猫粪而传染,这也许是近年来弓形体病发病率增高的因素之一。RUB 是一种呼吸道病毒其传播途径主要为呼吸道,通常只引起轻度的青春期疾病,但是,孕妇在妊娠早期感染 RUB 可使胎儿患先天性风疹病,导致胎儿慢性心脏病,发育迟缓,肝脾肿大,畸形和其他严重异常。 CMV和HSV均属于疱疹病毒科,CMV在人群中的感染非常广泛,通常呈隐性感染,少数有临床症状。CMV感染可发生于产前(先天性)、产时、产后。与其他疱疹病毒感染一样, CMV原发感染也可导致持续性感染或潜伏感染,在不同刺激下病毒可再激活。①先天性感染:妊娠时,母体发生 CMV感染病毒经胎盘传至胎儿,引起宫内感染。CMV感染在0.5%-2.5%的新生儿中查到,在查出的引起先天性感染的病因当中,CMV最为常见。在新生儿期,出现症状的先天性感染的比例在5% 以下。病儿可出现黄疸、肝脾肿大、瘀斑、中枢神经系统异常、脉胳视网膜炎等。有症状的婴儿可在出生后第一个月内死于并发症。更为常见的是幸存儿常有神经系统的损伤,即便是在生命早期没有症状的先天性感染婴儿,

免疫球蛋白是机体在抗原物质刺激下由浆细胞产生的一类能与抗原特异性结合的血清活性成分,也就是我们所说的抗体。免疫球蛋白大家族成员众多,根据其分子结构和抗原特异性的不同,将其分为五类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE(如图1所示),其中最为常见的是IgM 和IgG: 图1:免疫球蛋白分类 首先我们来介绍下免疫球蛋白:IgM。在被病原感染后,机体会产生一系列的变化来抵御这种入侵,其中免疫球蛋白的含量会发生变化:抗原初次进入机体后,经过一定的潜伏期产生浆细胞并合成分泌抗体。可见,当我们身体遇到外来异物侵袭,首先站出来保护我们的是IgM,但是它的持续时间并不长,消失快。 所以它需要其他小伙伴IgG的协助,是生物体内主要的抗体成分,约占血液总抗体量70~75%。由于IgG的含量最高,是人体免疫反应的最重要的物质基础,而且它也是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋

白,所以IgG对新生儿在出生后的数月对于预防白喉,麻疹,脊髓灰质炎等感染起着重要作用。 那么这两位搭档是如何协作保护机体呢?当Ig M逐渐衰退时,IgG 就开始升高并保持较长的时间。灭活病毒或者减毒病毒作为疫苗接种时,疫苗就相当于体外异物,它病毒含量少但保留了自身的免疫原性,可以刺激机体产生抗体却不发病。当遇到真正的病毒时,机体能迅速做出反应再次产生抗体并维持在较高的水平保护我们免于患病。这也是有的疫苗需要再次接种以保证持续的保护力的原因。 IgM抗体一般为保护性抗体具有免疫性。因此IgM抗体的测定,对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。由于IgM 有较高的结合价,所以是高效能的抗生物抗体,其杀菌、溶菌、促吞噬和凝集作用比IgG 高500- 1000 倍,IgM 在机体的早期防御中起着重要的作用。 看到这里,大家应该能够区分出IgM和IgG了,我们从含量、产生时间及对临床诊断作用等方面对二者区别做如表1所示归纳: 表1:IgM和IgG的区别

人抗血小板抗体IgM (PA-IgM)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 产品编号:CSB-E05177h 最低检测限:1 ng/ml 特异性:本试剂盒可检测人PA-IgM,且与其他相关抗体无交叉反应。 有效期:6个月 预期应用:ELISA法半定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中PA-IgM含量。 说明 1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。 2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。 4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 用纯化的血小板裂解抗原包被酶标板,制成固相载体。向微孔中先加入待测样品进行反应,然后再加入辣根过氧化物酶标记抗人IgM进行反应,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PA-IgM呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品中抗体的效价(抗血清最终能显色的最高稀释倍数记为效价)。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 2.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 3.辣根过氧化物酶标记抗人IgM稀释液(HRP-anti-human IgM Diluent):1×10ml/瓶。 4.辣根过氧化物酶标记抗人IgM(HRP-anti-human IgM):1×120μl/瓶(1:100)。 5.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 6.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 7.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof管 5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器 6. 蒸馏水,容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清:全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即 可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心 15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本 放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

血清检查IGG和IGM的区别 IgG抗体是抗体中分子量最小的一种,可通过胎盘输给胎儿,保护了婴儿最初六个月内免受感染。该抗体产生晚,维持时间长,消失慢,浓度高。血中检测到可作为远期感染指标。 IgM抗体是抗体中分子量最大的一种,不能通过胎盘输给胎儿。抗体产生最早,一经感染,快速产生,在感染初期抗感染起作用。但维持时间短,消失快。当IgM 消失,IgG才开始上升,血中检测到可作为近期感染指标。 你结果只说明曾经感染过,无近期感染。可要小宝宝。 灵长类动物主要有四种免疫球蛋白I gG、IgM、IgA、和IgE。 所有用于检测抗原的免疫学方法经适当改良后,均可用于抗体的检测,如IFA、ELISA、RI A、LA......由于抗原方法的敏感性提高和PCR技术的应用,使得HSV抗体在HSV感染个 体中的不均一性和不稳定性影响了这类指标在临床诊断中的意义,但作为一种感染有关指标,在一定的范围和情况下,仍有必要进行检测和深入研究.目前HSV特异性抗体的检测,主要有IgG、IgM和IgA三种. 1.IgG抗体:HSV-IgG主要用于HSE诊断中,单份血清中IgG抗体水平表示自然免疫状况,在我国HSV-IgG阳性率达90%以上,只有在特定部位如CSF中>1∶80、或神经鞘内HSV -IgG阳性才有提示感染的意义;双份血清中IgG抗体滴度有4倍以上升提高者、或血/CSF 值在20~40∶1,才能诊断HSV近期感染;有些研究者对抗体HSV结构蛋白的特异性抗体 进行了探计,结论不一,还有待进一步研究.IgG抗体在ELISA检测时可以跟IgM同步出现或稍后几天. 2.IgM抗体:HSV-IgM作为HSV感染指标,特别是脑部感染具有一定的临床积极意义.HSV-IgM出现在临床症状发作后第3天直到4周,初次感染者100%阳性、再次感染者48%阳性,虽然IgM抗体常作为许多传染病的早期诊断指标、但在HSV感染中,由于HSV反复 感染均可引起IgM出现,影响了作为初次早期诊断的意义.HSV-IgM在CSF中的检测结果 仍有争议,有的结果发现成人HSE的CSF中IgM滴度比血清中更高;有的则只有新生儿脑 炎CSF中发现IgM抗体存在,成人脑炎CSF中未发现;但有的在HSE和急性硬化性全脑炎 的CSF中未发现IgM抗体.一般认为IgM抗体不能通过血脑屏障,在CSF中检测HSV-Ig M对HSE具有诊断价值. 3.IgA抗体:HSV-IgA是一种与局部免疫有关的抗体.SIgA可在HSK初次症状出现后第3~5 天的泪液中达到高峰;在女性生殖道疱疹病毒感染的血清中,初次感染者以11SHSV-IgA为主,再次感染则以7S为主.单纯以ELISA检测血清中HSV-IgA出现,在初次感染者中阳性 率为72.4%,再次感染阳性率为81%,所以从血清中检测HSV-IgA来确诊HSV初次感染

IgM的纯化 大多数IgM类抗体是优球蛋白不溶于水,故可用双蒸水透析纯化IgM。 对那些溶于水的IgM类抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤) 进一步纯化。 颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法又称分子筛层析或凝胶过滤,是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体,可用于样品中IgG和IgM的分离,常用于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。 通过该法纯化所得抗体可用于Ig分子片段的制备、FITC、生物素或同位素标记。 IgM类抗体最好用硼酸缓冲液进行透析并保存,有些IgM类抗体易从溶液中析出,实验中应密切观察。IgM为五聚体,反复冻溶可能会使五聚体打开成单体,影响抗体的功能,因此-70℃保存时,加适量甘油,有助于保持抗体稳定。 PH4.2~4.5有利于非IgG成分沉淀(接近杂蛋白的等电点),如PH大于4.8,则白蛋白和AB球蛋白沉淀不完全。 一、材料和试剂 1.抗血清,杂交瘤腹水或其上清,硫酸铵沉淀粗提γ球蛋白。 2.含0.02%NaN3的硼酸缓冲液,PBS。 3.透析袋;26mm×900mm层析柱。 4.适当筛孔的颗粒排斥(SE)凝胶(AcA Ultragel-或Sephacryl S-200(Pharmacia LKB)。 5.蛋白透析、SE 层析和SDS-PAGE所需的其他试剂和器材。 二、操作步骤 1.待提取样品11,000~13,000r/min(15,000~20,000×g),4 ℃或室温离心,除沉淀。 2.上清液对双蒸水透析4℃24h。 3.11,000~15,000r/min4℃ 或室温离心1h,留沉淀。 4.制备SE凝胶层析柱,以硼酸缓冲液平衡。 5.将步骤3沉淀或饱和硫酸铵粗提γ球蛋白以3~5ml硼酸缓冲液溶解,缓慢加

Anti-Mouse IgM (μ-chain specific)–Agarose antibody produced in goat IgG fraction of antiserum Catalog Number A4540 Storage Temperature 2–8 °C Product Description The IgG fraction of goat anti-mouse IgM (μ-chain specific) antiserum is covalently attached to cyanogen bromide activated cross-linked beaded agarose. A minimum of five milligrams of the IgG fraction is bound per milliliter of resin. After equilibration, ≥0.4 mg of mouse IgM can be bound and eluted per milliliter of packed resin. Specificity for the μ-chain of mouse IgM is determined by Ouchterlony Double Diffusion (ODD), prior to agarose bead coupling. The antibody preparation is specific for mouse IgM when tested against purified mouse IgA, IgG (all subclasses), and IgM myeloma proteins. Identity and purity of the antibody is established by immunoelectrophoresis (IEP), prior to agarose bead coupling. Electrophoresis of the product followed by diffusion against anti-goat IgG and anti-goat whole serum results in single arcs of precipitation in the gamma region. The antibody-agarose is supplied as a suspension in 0.5M NaCl containing 0.01% thimerosal as a preservative. Precautions and Disclaimer This product is for R&D use only, not for drug, household, or other uses. Please consult the Material Safety Data Sheet for information regarding hazards and safe handling practices. Storage/Stability Store the antibody-agarose at 2–8 °C. Do not freeze. After use the regenerated antibody-agarose may be stored at 2–8 °C in 0.01M sodium phosphate buffer, pH 7.2, containing 0.5M NaCl (PB) containing preservative. Procedure A two milliliter column of antibody-agarose is prepared using four milliliters of the antibody-agarose suspension. The column is equilibrated in 0.01M sodium phosphate buffer, pH 7.2, containing 0.5M NaCl (PB). The antigen solution to be bound is applied slowly and followed by a PB wash. Unbound effluent fractions are collected and assayed for protein content (Lowry). The column is then stripped by washing with 0.1M glycine with 0.15M NaCl, pH 2.4, or 0.5M acetic acid with 0.15M NaCl, pH 2.4. Fractions containing protein are collected, brought to neutral pH, and assayed for protein content (Lowry). Resin Regeneration Goat Anti-Mouse IgM-Agarose may be regenerated and used for future adsorptions. Strip the agarose with ten column volumes of 0.1M glycine with 0.15M sodium chloride, pH 2.4, or 0.5M acetic acid with 0.15M sodium chloride, pH 2.4. Then wash with 0.01M sodium phosphate buffer, pH 7.2, containing 0.5M sodium chloride (PB). KAA,JWM,MAM 02/10-1 Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc. Sigma-Aldrich, Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Sigma-Aldrich publications. Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see reverse side of the invoice or packing slip.

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