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三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

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三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

毕业论文

题目:三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

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三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

摘要

目的探讨肺炎支原体(MP)咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应(PCR)法和血清MP被动凝集法(MP-Ab)等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道(非细菌性)感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,每患儿取咽拭子做快速培养和PCR,同时取血清做MP-Ab检测,对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例,阳性率为51.3%,病程为(4.5±2.6)天;PCR法检测出阳性103例,阳性率为67.8%,病程为(6.2±3.5)天;MP-Ab 法检测出阳性127例,阳性率83.5%,病程(8.1±4.5)天。结论3种MP检测法的敏感性与病程有相关性,临床医生应根据患儿病程选取检测方法,以提高阳性检出率和敏感性。

关键词肺炎支原体,快速培养法,咽拭子聚合酶链反应,血清抗体,配对研究

前言

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)是婴幼儿、青少年急道感染的主要病原体之,临床上表现为呼吸道感染综合征,其中约3%~10%可发展为支原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由MP或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼吸道感染,给临床治疗带来一定的困难。笔者采用3种MP 检测法对362例临床拟诊为呼吸道(非细菌性)感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,通过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法,以协助临床准确做出诊治。

1.文献综述

1.1肺炎支原体的定义

小儿肺炎支原体肺炎多见于5~15岁儿童,婴幼儿患病常表现为毛细支气管炎。多数为亚急性起病,发热无定型,或体温正常,咳嗽较重,初期为刺激性干咳,常有咽痛,头痛等症状。X线改变明显,多为单侧病变,也可见双侧病变,以下叶为多见,有时病灶呈游走性,少数呈大叶性阴影;病程2~3周不等,X线阴影完全消失比症状消退更延长2~3周之久,偶有延长至6周者。

1.2 肺炎支原体的发病机制

肺炎支原体肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia,MPP)的发病机制仍不十分清楚,目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫学发病机制等学说,其中免疫调节异常在MPP 的发生发展中可能起重要作用

1.3肺炎支原体的临床表现

1.3.1多数为亚急性起病,发热无定型,或体温正常,咳嗽较重,初期为刺激性干咳,常有咽痛,头痛等症状。

1.3.2可出现多系统多器官的损害,皮肤粘膜表现为麻疹样或猩红热样皮疹;偶见非特异性肌痛和游走性关节痛;也有表现心血管系统、神经系统损害、血尿及溶血性贫血等。

1.3.3全身症状比胸部体征明显。体检肺部体征不明显,偶有呼吸音稍低及少许干湿罗音者

1.4 肺炎支原体的临床诊断

病原学诊断

肺炎支原体快速鉴定培养法优于被动凝集法,在肺炎支原体肺炎感染的早期可提供重要的依据,可做为临床诊断MP感染的优先试验[8];气管肺泡灌洗液MP-DNA测定不仅能诊断MP感染,且支气管肺泡灌洗术可促进呼吸道症状的改善及体征恢复,且通过纤维支气管镜收集支气管肺泡灌洗液MP-DNA,痰液MP-DNA及血清MP抗体检测阳性率没有差异。CRP的检测是肺炎病原体的辅助诊断方法,一定程度可区分细菌性肺炎和支原体肺炎。聚合酶链反应(PCR)技术检测MP具有可靠、特异性高的特点,逐渐成为早期特异诊断的有力武器。

1.5 肺炎支原体的实验室检查

急性期MPP患儿血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明显升高,IgA明显降低;而恢复期hs-CR、IgG 仍然较高,而IgM和IgA均没有明显变化,补体C3、C4在恢复期内也没有明显变化,因此血清C-反应蛋白、免疫球蛋白和血清补体的监测对诊断急性期或恢复期MPP有重要意义。MP-IgM和冷凝集试验同时检测可提高小儿支原体肺炎实验诊断的准确率;支原体肺炎患儿外周血白细胞大多正常占80%,中性粒细胞增高占61%;65.6%患儿C-反应蛋白增高;53.6%患儿血沉增快;58.4%患儿心肌酶谱增高;24.0%患儿肝酶增高;16.8%患儿尿酸增高。

5流行病学特点及进展

MP肺炎发生率约为22.3%,9~12岁感染率最低,3~6岁最高,10~12月是发病高峰月,小儿支原休肺炎发病率有所上升,发病年龄有趋小倾向,秋冬季发病率高,肺炎支原体只要通过呼吸道进行传播,尤其发病率较高的地区,局部区域每隔3-5年可发生一次肺炎支原体感染,每2-6年可发生一次大范围的肺炎支原体感染,每次感染的时间都持续较长,有的感染可持续一年左右,因此,有关部门一定要采取相应的预防措施,切断呼吸道飞沫传播途径对控制疾病发生和流行具有重大意义。控制支原体感染的发生和流行。

2.材料和方法

2.1 样本

收集某中心医院检验科2015年1月1日~8月6日在儿科就诊住院患儿病例,有呼吸道感染症状,已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对象,其中男175例,女187例;年龄为2

个月~12岁,病程为1~90天。

2.2 方法

具体方法有:(1)用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测,记录结果。(2)通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数,并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。

2.3 临床诊断MP感染的诊断标准

按文献[1]、临床症状、体征标准,包括回顾性诊断——即患儿经红霉素治疗有效,经青霉素、头孢菌素治疗无效者等;以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法:以病历本记录为准,即在患儿开始有症状或体征时开始计算,到患儿来就诊检测时为止进行计算。2.4 MP快速培养法

支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物,严格按说明书进行,将咽拭子用无菌生理盐水处理,接种到预温的培养基中,37 ℃培养;培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮,并且在静置时,瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性,5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法:试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA,严格按试剂盒说明书进行,以在紫外灯下出现180 bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照(阳性对照为MP质粒,阴性对照为无菌生理盐水),由专人进行操作,质量控制。MP-Ab法:试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab 检测试剂SERODIA-MYCOⅡ凝集试验试剂盒,严格按试剂盒说明书操作,抽取患儿静脉血3 ml,采用明胶颗粒被动凝集法,用血清检测,结果以≥1∶40判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清进行测定。

2.5 统计学方法

计量资料用均数±标准差(x±s)表示,各年龄组与3种检测方法结果比较用Spearman 检验;各年龄组间确诊病例的阳性率比较用χ2检验;3种检测方法阳性结果与病程之间的比较用q检验

3.结果

3.1 阳性样本

经过回顾性诊断,在配对研究组362例研究对象中有152例符合MP感染的诊断标准,即有152例确诊病例,其中肺炎45例,支气管炎56例,上呼吸感染49例,支气管哮喘2例。MP快速培养法检测出78例阳性,PCR法检测出103例阳性,MP-Ab法检测出127例阳性。

3.2 结果分析

各确诊病例的年龄分布,见表1。表1显示儿童MP感染的年龄以3~4岁年龄段的病例最多,

为46例,阳性率最高,为70.77%,与其余年龄组段比较P<0.05。3种检测法的阳性检测结果与年龄分布见表1,表1显示3种检测法与年龄之间差异无统计学意义,以3~4岁的年龄段与其余年龄组段比较差异无统计学意义,P>0.05。不同病程患儿3种检测法的检测结果,见表2,表2显示MP快速培养法为阳性的患儿病程均值较短为(4.5±2.6)天,PCR法为阳性的患儿病程均值为(6.2±3.5)天,MP-Ab法为阳性的患儿病程均值较长为(8.1±4.5)天。3组之间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。表1 不同年龄组MP感染确诊病例和3种检测方法结果对比分析注:△□代表与年龄组3~4岁组段比较结果表2 不同病程患儿3种检测方法阳性结果对比分析注:△代表三组之间的两两比较

4.讨论

4.1.MP 感染的临床表现常无特异性,临床的实际工作中,容易与一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状:(1)发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰,偶带血丝。(2)可有咽痛、头痛、胸痛,全身症状比体征明显。(3)肺部体征不典型而胸片炎症显著,可见云雾状大片阴影。(4)WBC正常或升高。(5)青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效,改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。(6)实验室MP检验有1项或1项以上阳性具备以上2个条件或以上者可初步诊断为MP感染。多时候,临床医生为了尽快缓解患儿的症状,需根据患儿的症状、体征和病史做MP感染的诊断性治疗,但应与肺结核相互鉴别。

4.2.近年来由于诊断技术的提高,MP感染报道日渐增多,一般认为MP感染以年长儿发病较多,本文表1资料显示,2~8岁年龄段是发病的高峰期[2]。占同期呼吸免疫科住院患儿的9.3%,比有关文献报道各年龄组支原体肺炎占肺炎发病的10%~20%低。说明MP感染的发病年龄有提前,且年龄越小,临床表现愈不典型。

4.3.临床实验室检测MP的方法很多,过去所用的冷凝集试验法诊断MP感染缺乏特异性,敏感性也差,易受病程的影响[3]。本文采用配对资料研究,对疑为MP感染的患儿进行3种MP检测法,以探讨MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等方法在儿童支原体肺炎诊断治疗过程中的敏感性。提示临床医生根据患儿不同的病程选取不同的检测方法,以提高实验室的阳性检出率。

4.4.MP快速培养法是利用MP生长代谢产物使培养基液体中指示剂颜色发生改变来判断MP生长;标本中的其他支原体和细菌则因培养基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。该法阳性结果可48 h检出。结果显示,培养法阳性率为51.3%(78/152),低于另外两种方法的阳性率。可能与在检测前患儿已经用了MP敏感药物有关。表2结果显示,该法阳性病例病程最短。提示病程时间较短的患儿选择此方法对检测的阳性率较高。MP培养是诊断MP的金标准[4]。

4.5.咽拭子PCR法检测质粒核酸,该法快速、敏感和特异,通过一技术可从患儿痰

中检测MP-DNA。由于此方法相当敏感,易受污染,故实验室操作时应特别小心。统计结果显示,该法的阳性率为67.76%(103/152),高于快培法。此法弥补了极微量的和被药物杀死的MP不能通过快速培养法检出的病例。表2结果显示,该法阳性病例,病程为(6.2±3.5)天。详细资料显示,有病程在30天以上的患儿经抗MP治疗,该法仍可为阳性,说明MP的生存力相当强,要系统化治疗。

血清MP-Ab法阳性率是3种检测方法中最高的,为83.55%(127/152),该法是检测患儿血清中的MP抗体,而非直截了当检测MP本身,因而阳性结果并不能确诊是MP感染。对患儿状态的综合评估应包括对患者临床症状和试验结果的严谨分析。极低量的抗体可能不被此试验检测出来。另外还有些MP感染的患者不产生抗体或只产生少量的抗体,高抗体滴度的样品要出现前带现象。表2结果显示,该法阳性病例,病程最长,这是由于发病初期,机体中尚未产生抗体而不能被检测出,提示发病时间较长或经过多种药物治疗过的患儿选择此方法有较高的阳性率。此检测法结果往往受抗体出现的时相及患儿年龄、机体免疫系统状况等多方面的影响。

5.结论

临床应根据患儿的不同病程、不同年龄以及用药情况来选取实验室的检测方法,

以提高MP的阳性检测率,以更好地结合临床症状进行综合分析,从而提高小儿

MP感染诊断的准确率。

参考文献

1 檀卫平.聚合酶链反应及血清学检测在肺炎支原体感染诊断中的意义.广东医学,1996,17(4):218.

2 陆定,陆诗强,庄丽宝,等.肺炎支原体引起小儿上呼吸道感染的临床研究.中国当代儿科杂志,2006,8(3):205-206.

3 杨莉.小儿肺炎支原体感染的早期诊断.南京铁道医学院学报,1997,16(2):116.

4 周金凤,黄秀琼.1362例呼吸道感染患者痰、咽拭子肺炎支原体培养结果分析.现代医院,2006,6(6):86-87.

1医学检验毕业论文 (三种肺炎支原体检测法的临床应用分析)

毕业论文 题目:三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 地市: 学校: 准考证号: 考生姓名: 王莹 指导老师: 二〇一八年八月十四日

三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘要 目的探讨肺炎支原体(MP)咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应(PCR)法和血清MP被动凝集法(MP-Ab)等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道(非细菌性)感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,每患儿取咽拭子做快速培养和PCR,同时取血清做MP-Ab检测,对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例,阳性率为51.3%,病程为(4.5±2.6)天;PCR法检测出阳性103例,阳性率为67.8%,病程为(6.2±3.5)天;MP-Ab法检测出阳性127例,阳性率83.5%,病程(8.1±4.5)天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性,临床医生应根据患儿病程选取检测方法,以提高阳性检出率和敏感性。 关键词肺炎支原体,快速培养法,咽拭子聚合酶链反应,血清抗体,配对研究

目录 前言 (4) 第一章文献综述 (5) §1.1 肺炎支原体的定义 (5) §1.2 肺炎支原体的发病机制 (5) §1.3 肺炎支原体的分类 (5) §1.4 肺炎支原体的临床表现 (5) §1.5 肺炎支原体的临床诊断 (5) §1.6 肺炎支原体的实验室检查 (6) 第二章材料和方法 (7) §2.1 样本 (7) §2.2方法概述 (7) §2.3临床诊断MP感染的诊断标准 (7) §2.4实验方法 (7) §2.5统计学方法 .................................................................... .. (8) 第三章结果 (9) 第四章讨论 (10) 结论 (11) 参考文献 (11) 附录 (12) 错误!未定义书签。

肺炎支原体IgM抗体检测SOP

肺炎支原体IgM抗体检测SOP 一、检验目的 规范实验室人员操作,以保证实验结果的准确性。 二、预期用途 该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一,可以导致支气管炎和非典型性肺炎。主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎,多经口和呼吸道等途径传播,多发于儿童和青年人。MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上,且有增加趋势。人体感染肺炎支原体后,能产生特异性IgM和IgG抗体。IgM 抗体出现早,一般在感染后1周出现,3~4周达高峰,以后逐渐降低。再次感染或重复感染后,常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别,MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一,灵敏度和特异性适中,常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。 三、检验原理 本产品以胶体金作为指示标记,用胶体金标记抗人IgM单抗,以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜,应用“间接法”免疫层析技术原理,检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中,若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物,复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区,与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合,多余的未被结合的结合物继续移动到质控区,与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合,反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线;若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区,与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合,仅形成一条红色的质控线。 四、主要组成成份 1、试剂盒组分 包括肺炎支原体1gM抗体检测卡,样品稀释液。 1.1、检测卡主要组分:包括金标垫和硝酸纤维素检测膜,金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体;硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原,质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)

肺炎支原体抗体检测 (被动凝集法) 1.目的:规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。 2.范围: xxxx院xxxx科 3.测定原理: 将肺炎支原体(Mac株)的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。这种致敏粒子和样本中的肺炎支原体抗体进行反应发生凝集,由此可以检测出血清和血浆中的肺炎支原体抗体,并且用来测定抗体的效价。 4.标本: 4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本,血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆,枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。 4.2样本中的沉淀物和悬浮物,红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样本未变质方可使用。 4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。 4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。 5.试剂:珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。 5.1试剂盒在2℃—10℃储存,防止冷冻,避免强光照射,有效期12个月。 5.2 试剂盒开启使用后,冷冻干燥品配好后,2℃—10℃保存可使用7日,使用前必须做对照试验。 5.3试剂组成 5.3.1血清稀释液(液体):用于稀释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。 5.3.2致敏粒子(冷冻干燥):肺炎支原体(Mac株)抗原致敏的明胶粒子。使用时加入规定量的血清稀释液。复溶后的试剂含有0.9%的致敏粒子。 5.3.3未致敏粒子(冷冻干燥)鞣化的明胶粒子冻干制品。使用时加入规定量的血清稀释液。 5.3.4阳性对照血清(液体)肺炎支原体(Mac株)抗体阳性的兔血清用血清稀释液1:10 稀释后的制品。 6.临床标本测定 6.1试剂的准备 6.1.1溶解液(液体):按照测定操作规则使用。 6.1.2血清稀释液(液体):按照测定操作规则使用。 6.1.3致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。 6.1.4未致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。 6.1.5阳性对照血清(液体):按照操作规则使用。 6.2 手工操作步骤 6.2.1 用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul),从第2孔至第8孔(或更多)各滴入1滴(25ul)血清稀释液。 6.2.2 用微量移液管取样品25ul至第1孔中,然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释的方式从第1孔稀释至第8孔中(或更多)。 6.2.3用试剂盒中提供的滴管在第2孔中加入1滴(25ul)未致敏粒子,用另一个滴管向第3

肺炎支原体检测方法的选择

肺炎支原体检测方法选择的几个注意点 肺炎支原体(MP ),主要引起咽炎及支气管炎,少数累及肺。以其顶端结构与宿主细胞上受体结合粘附于上皮细胞上,一般为表面感染,除穿透支原体外(艾滋病人感染)大多不侵入血液。产生有毒代谢产物如外毒素或过氧化氢等引起发热及局部细胞损伤。 选择检测方法的注意事项: 1.临床常用全血(指尖血)或血清(橘黄管)检测IgM 来判定肺炎支原体的感染,但是,抗体检测只是各种实验室方法的一种,尚有其他方法可用,如培养及DNA 检测,每种方法各有利弊,对不同病程各有针对性。 2.每一种实验结果都需要另外一种实验结果来验证,正常人咽部或支气管可携带MP ,所以不能用一种实验数据来下诊断。 3.初次感染时, IgM 、IgG 都会产生,再次感染时,有时IgM 不产生。 4.儿童由于初次感染几率大,常能产生IgM ,成人由于机体可能感染过多次,常不产生IgM 。 5. 检测方法的选择需要根据病程确定: <6个月 6-12个月 1-9岁 IgM + IgM — 年龄对IgM 抗体产生的影响

抗体 抗原 MP感染不同时段产物的比较 由此图可以看出: a.感染早期,7天之内以检测抗原为主,宜培养或DNA检测: 培养为“金标准”,据国内文献显示,快速培养法阳性率为24%;PCR--DNA检测为96%。美国一篇文献显示,培养阳性率为5%,DNA为57%。 b.早期未产生抗体,导致延误治疗,后期抗体阳性,病原体消失,导致过用抗生素。 c.7天之后可检测IgM抗体; d.IgM可持续较长时间,感染后三个月抗体浓度依然较高,有的可以终生阳性,如果短时间内检测抗体,常不能分辨是否为MP现症感染或其他感染。 e.感染早期宜病原体筛查,此时抗体尚未产生,可导致延误治疗;中后期适宜抗体检测,主要用于回顾性验证试验,此时病原体消失,可导致过用抗生素。

肺炎支原体抗体

简易卡 一.【肺炎支原体抗体(IgG)检验方法】 1.将待测血清样本和试剂盒,恢复至室温(20~37℃). 2.取出反应板,于反应板孔中滴入血清二滴,静置,待血清完全吸入. 3.在20分钟内观察反应板孔中现象. 三.【单纯疱疹检验方法】 1.用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml,轻轻颠倒混匀8-10次,3000r/min 离心10-15分钟,分离血浆. 2.取出反应板,用吸管吸取样本垂直加入,2-3滴. 3.15分钟内观察反应板孔中现象. 七.【革兰氏染色的检验方法】 目的: 1.涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌位于待检品的两侧(中间要有足够的空间),分别作为阴阳性对照。用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2.干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯火焰高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3.固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉得烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4.初染:在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。 5.水洗:斜置载玻片,用洗瓶小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6.媒染:取1-2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 7.水洗:斜置载玻片,用洗瓶小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 8.脱色:斜置载玻片,滴加革兰氏脱色剂脱色,至流出的脱色剂不现紫色为止,大约需时20-30S,随即水洗。

病例分析——肺炎.doc

第三章病例分析——肺 炎 一、概念 肺炎是指终末气道、肺泡腔及肺间质的炎症,病因以感染为最常见,其他尚有理化因子、免疫损伤,药物因素等。病原体主要有细菌、病毒、真菌、寄生虫等。当人体免疫力降低,呼吸道防御功能下降时,病原体可侵入下呼吸道,引起肺泡毛细血管充血、水肿,肺泡内纤维蛋白渗出和细胞浸润。临床上出现发热、咳嗽、咳痰、气促、胸痛等症状,肺部可闻及固定的湿啰音,出现肺实变体征,胸片出现相应改变。 二、分类 (一)按解剖学或影像学分类 1.大叶性肺炎:病变起始于肺泡,经肺泡间孔(Cohn孔)蔓延至邻近肺泡,直至整个肺叶或肺段。影像学表现为肺渗出性阴影,通常不累及细支气管。典型的大叶性肺炎呈整叶肺实变。由于抗菌药物广泛应用,典型大叶性肺炎已少见,而多数仅表现肺段或亚肺段的渗出和实变。 2.小叶性肺炎 也称支气管肺炎。基本病变亦为炎症渗出,但病变常起于支气管或细支气管,继而累及肺腺泡或肺泡。影像学特征是沿肺纹理分布的小片状或斑片阴影,密度不均匀,边缘淡薄而模糊,以两下肺、内中带多见。病灶亦可融合成片状或大片状,密度深浅不一,且不受肺叶或肺段限制,区别于大叶性肺炎。

3.间质性肺炎 病变位于肺泡壁及其支持组织,影像学上表现为弥漫性不规则条索状及网织状阴影,其间可散布有密度增高的小点状阴影。 (二)按病原体分类 1.细菌性肺炎 常见细菌有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌、卡他莫拉菌等。此外,分类学上不属于细菌、但某些特征类似于细菌的肺炎支原体、肺炎衣原体,以及分类学上属于细菌的细胞内病原体军团菌常被统称作“非典型病原体”,也是肺炎的常见病原体。 2.病毒性肺炎 以儿童最常见,主要有腺病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒等。 3.真菌性肺炎 大多为条件致病性真菌。引起肺炎的真菌主要有念珠菌、曲霉菌、隐球菌和毛霉菌。真菌性肺炎大多为继发性的,如免疫抑制、长期应用广谱抗生素以及其他重危患者。 4.寄生虫性肺炎(肺寄生虫病) 阿米巴原虫、弓形体、肺吸虫和棘球绦虫、血吸虫等均可以引起或主要引起肺部感染。 (三)按发病场所分类 1.社区获得性肺炎 社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)最为常见。是指在社区环境中机体受微生物感染而发生的肺炎,包括在社区感染,尚在潜伏期,因其他原因住院后而发病的肺炎,并排除在医院内感染而于出院后发病的肺炎。肺炎链球菌为最主要的病原体。 2.医院获得性肺炎 医院获得性肺炎(hospital acquired pneumonia,HAP),是指患者入院时不存在、也不处在感染潜伏期,而于入院≥48h在医院内发生的肺炎,包括在医院内获得感染而于出院后48h内发病的肺炎。革兰阴性杆菌为最常见的病原体。 三、诊断要点 1.症状 2.体征 3.辅助检查 以肺炎球菌肺炎为例: 1.症状 患者多为青壮年,起病多急骤,受寒、疲劳、酗酒常为其诱因,先有寒战,继而高热,体温可达39~40℃,常呈稽留热,咳嗽,咳铁锈色痰,患侧胸痛,常伴肺外症状,如头痛,乏力,腹胀,恶心,呕吐,纳差等。数日后体温可急骤下降,大量出汗,随之症状明显好

肺炎支原体及其快速培养法概要

肺炎支原体及其快速培养法 支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,它既不同于细菌,也不同于病毒,是介于细菌和病毒之间,能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界,与人类、nbsp;动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多,造成的危害非常广泛。 作者:罗三艳作者单位:412001 湖南株洲,株洲田心医院检验科支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,它既不同于细菌,也不同于病毒,是介于细菌和病毒之间,能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界,与人类、动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多,造成的危害非常广泛。目前证明对人体有致病作用的支原体有肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体等几种,但临床以肺炎支原体最为常见[1]。肺炎支原体主要以飞沫传播,引起儿童、青少年呼吸道感染、咽炎、气管炎、肺炎等。近年肺炎支原体感染病例明显增多并有局部流行的趋势,早期诊断极为重要。 1 肺炎支原体的实验室检测方法目前,肺炎支原体的实验室检测方法有支原体分离培养、 PCR法检测质粒核酸、抗体检测、支原体快速培养法、分子生物学方法等。支原体细胞分离培养可获得肺炎支原体,可以确诊。由于支原体分离培养要求苛刻,一般医院实验室难以推广。此法阳性率低,需时3 周甚至更长时间,对临床快速诊断意义不大。PCR法检测质粒核酸快速、特异、敏感,但需昂贵设备,不易普及,且方法过于敏感,容易受污染。传统的冷凝集法检测肺炎支原体的IgM 抗体,方法简单、易行,但其敏感性和特异性均较差,易受病程影响。ELISA 检测支原体抗体法较为简便、可靠。由于发病初期,机体中尚未产生抗体不能被检出,发病时间较长此法才有意义。而快速培养法正以其简单、快速、经济、无创伤等优点,被越来越多的临床实验室所推广,也被越来越多的患者所接受。 2 肺炎支原体快速培养法肺炎支原体快速培养法是利用肺炎支原体的代谢产物使培养基液体中的指示剂颜色发生改变来判断其生长,标本中的其他支原体和细菌则被培养基中的青霉素和醋酸陀抑制[2]。此法操作简便、快速、无痛苦。先从冰箱中取出快速培养基,复温,按常规方法采集患者咽拭标本,将标本棉签浸入培养液,沿瓶壁挤压棉签,取出棉签、丢弃。旋紧瓶盖,登记标本号,35℃~37℃孵育24~ 48h,观察结果。培养基由红色变为绿色、黄色,且仍保持清晰透明,说明有肺炎支原体生长,明显混浊变色者不能视为阳性。培养液颜色不变,应判为无肺炎支原体生长。我院检验科是从2007年4月份开始展开此项检测,共检测293 例疑似肺炎支原体感染病例,阳性病例161 例,阳性率54.9%,及早为临床诊断、治疗肺炎支原体感染提供了依据。 3 讨论近年来,肺炎支原体感染明显上升,危害较大,其临床表现常无特异性,易与一般病毒性感冒相混淆。临床医生为了尽快缓解患者的症状,需根据患者症状、体征及肺炎支原体的相关检测,及早诊断、治疗。快速培养法不受病程影响,感染初期就可检测出肺炎支原体。有资料报道,在肺炎支原体检测的各种方法中,该法阳性病例病程最短,提示病程时间较短的患者选择此法检测的阳性率较高。快速培养法是诊断肺炎支原体的金标准 [2]。肺炎支原体快速培养法采咽拭标本,采集标本前,用生理盐水漱口。所采集的标本应迅速接种,若不能及时接种,室温保存不超过2h。使用

肺炎支原体肺炎的诊断

肺炎支原体肺炎的诊断 空军总医院刘春灵 支原体是介于细菌和病毒之间的一类缺乏细胞壁、呈高度多型性、能通过滤菌器、可在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。迄今分离到的支原体已达150余种,已确定与人类疾病关系最大的有3种,肺炎支原体(mycoplasma pneumonia, MP)是其中的一种。MP在国内外都是儿童和成人呼吸道感染的重要病原体之一,主要导致肺炎,所有肺炎的15-20%,约50%的儿童和青少年肺炎是由MP引起的.因此MP肺炎(MP pneumonia,MPP)是常见病和多发病。但迄今为止,MPP仍缺乏快速、可靠的诊断试验,因而临床确诊困难。 MPP的诊断包含两个层面:临床诊断(经验性)和结合了实验室病原学检测的确定诊断。 一、MPP临床诊断:根据流行病学、临床症状、体征、实验室辅助检查等特点经验性综合判断而出。MPP有着不同于一般感染性疾病的的特点:一般肺炎多发于冬季,MPP一年四季均可发病,但多发生于夏秋季节;临床症状大多只有发热和咳嗽;外周血白细胞总数大多不高;疾病早期X线检查即可出现肺炎,约10%-20%的病例会出现肺不张;因MP无细胞壁,临床常用的、作用于细胞壁的、安全性高的治疗肺炎的药物如β-内酰胺类的青霉素类、头孢类抗生素对其无作用;因此易被误诊为病毒性肺炎。综合上述特点,可作出初步的经验性临床诊断。 二、实验室病原学诊断:包括直接病原体检测和血清学检测。下面介绍几种常用或经典的MP实验室诊断方法。 (一)直接病原体检测:主要有MP分离培养和聚合酶链反应(PCR)法检测MP-DNA。检测用标本可取自可疑患者呼吸道的痰、咽拭子、鼻咽吸出物、支气管肺泡灌洗液、胸水等。 1、MP分离培养与鉴定: MP很挑剔,培养基的营养要求比一般细菌高,生长速度慢,较一般细菌难培养;分离培养需要10-14天,而通常需要2-5周才能生长成肉眼可见的菌落。通过生化反应和免疫学方法进行鉴定。还有其它影响因素,如MPP无细胞壁,对环境的影响更为敏感,易被灭活;标本采集后接种到培养基的过程也是培养可能失败的一个环节。由于其费时、费力、阳性率低,实际临床已经弃用此方法,目前主要用于研究性项目。

肺炎支原体感染的血清学检验

肺炎支原体感染的血清学试验 参考范围: 补体结合试验(CF) <1:8 代谢抑制试验(M1) 阴性 问接血凝试验(PHA) 阴性 酶联免疫吸附试验(ELISA) 阴性 MG链球菌凝集试验<1:40 临床评价: 1.肺炎支原体(MP)是主要的病原性支原体之一,在临床上主要引起上呼吸道感染、气管艾气管炎及支原潍肺炎。过去称为“原发性非典型性肺炎”的病原体中,MP最为常见。约有80%的慢性支气管炎患者合并MP感染。肺炎病例中约有10%~20%由MP引起。MP感染后,可用各种血清学试验检测体内产生的特异性抗体,有助于疾病的诊断。 2.测定病人血清中特异性抗体,常用的方法有CF、MI、PHA和ELISA等,其中CF 试验是诊断支原体肺炎最常应用的方法。支原体有较强的补体结合反应,单份血清抗体效价>1:6 4或恢复期较急性期抗体滴度增加4倍以上即有诊断价值。一般补体结合抗体在感染后7~9天开始上升,3~4周达到高峰,维持4~6个月。问接血凝试验在MP感染的急性期即可出现阳性,血凝抗体可存在数年。代谢抑制试验可测定MP脂多糖胞膜抗原的相应抗体,方法敏感且特异性强。这种抗体的出现较上二者为迟。ELISA所用抗原为MP表面P蛋白,采用间接法检测特异IgM抗体,具有早期诊断意义。 MG链球菌凝集试验是检测患者血清中MG链球菌凝集素效价的一种方法。MG链球菌是从某些原发性非典型性肺炎病人的呼吸道或肺部分离出的一种非溶血性菌株,约有40%~50%的支原体肺炎患者恢复期血清中常产生MG链球菌凝集素,本试验呈阳性,故检测患者血清内凝集素效价对支原体肺炎有辅助诊断意义。本试验还有助于与病毒性肺炎的鉴别,病毒性肺炎不出现MG链球菌凝集反应。 3.采用分离培养的方法检测患者痰、咽拭等标本中的MP,对支原体肺炎具有病原确诊意义,但需要2周以上时间,且阳性率不等,在临床上不能早期、快速诊断。寒冷凝集试验是一种非特异性反应,在临床上常用作支原体肺炎的辅助诊断,约有50%以上病例可出现冷凝集抗体。应用PCR技术检测患者呼吸道分泌物和支气管肺泡冲洗物中MP的DNA,是敏感、特异且快速的实验室诊断方法。 4.影响本试验结果的因素 (1)CF试验的敏感性和特异性不高,所用的MP糖脂抗原可与许多微生物、植物及人体组织有交叉反应。 (2)MG链球菌凝集试验在某些严重感染性疾病也可呈阳性。 寒冷凝集试验 参考范围: 寒冷凝集试验 临床评价: 1.寒冷凝集素是由I抗原刺激机体产生的一种非特异性抗体,属IgM类,在0~10℃的寒冷情况下,能与O型人红细胞或自身红细胞的膜抗原结合,产生凝集现象。此种凝集反应具有可逆性,若将已凝集的红细胞再放置于37℃时,凝集现象即可消失。支原体肺炎患者血清中常可出现高效价的寒冷凝集素,寒冷凝集试验可用于测定该抗体的效价,有助于支原体肺炎的诊断。 2.寒冷凝集素大多在发病后1~2周开始出现,以后继续增高,于病程3~4周达到

肺炎支原体检测的SOP内容

HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件B9.1【检验目的】 肺炎支原体是人类原发性支原体肺炎的病原体,经呼吸道感染。多发生于儿童、青年,发病初期临床症状不明显,隐性感染和轻型感染较多,也可致严重肺炎,出现头痛、发热、咳嗽等,本试验用胶体金法定性检测人血清中的肺炎支原体IgM 抗体。 B9.2【检验原理】 用肺炎支原体抗原固相硝酸纤维素膜,应用渗滤式间接法原理,检测血清中肺炎支原体抗体。 B9.3【样本要求】 血清样品不能溶血,应为新鲜血清或2℃~8℃条件保存不超过3天。高脂血症血清不能使用。 B9.4【样本采集】 不抗凝血2ml,避免溶血、混浊、或脂血标本 B9.5【试剂盒主要组成成份】 斑点反应板:40块(或20块) 试剂A: 1瓶, 约10ml 试剂B: 1瓶,约8ml, 胶体金标记物 B9.6【储存条件及有效期】 产品应储存在2℃~8℃条件中,不能冷冻;有效期8个月。

HQBJS/MYXM-9-2015 SOP文件 B9.7【检验方法】 滴入二滴试剂A于反应板中央孔中,待完全渗入; 滴入100μl血清于反应板孔中,待完全渗入; 滴加三滴试剂B于反应板孔中,待完全渗入; 渗入三滴试剂A于反应板孔中,待完全渗入。 B9.8【结果解释】 阳性:反应板孔中出现红色圆斑和清晰的红色质控线,为肺炎支原体抗体阳性; 阴性:反应板孔中只显现清晰的红色质控线,为肺炎支原体抗体阴性;失效: 反应板孔中未显现红色质控线,为操作失误或试剂失效。 B9.9【检验方法的局限性】 本试剂试验仅用于检测肺炎支原体抗体而非直接检测肺炎支原体,因而阳性结果并不能确诊是肺炎支原体感染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。 抗体含量低的血清样品,不能被检测出来是可能的。部份肺炎支原体感染的患者,不产生抗体或产生少量的抗体。此时,可能显示阴性结果。 试验结果可疑时,应用培养基进行培养确诊。

肺炎支原体抗体检测试剂盒(胶体金法)

B19病毒抗体检测试剂盒(胶体金法) 说明书 【产品名称】B19病毒抗体检测试剂盒(胶体金法) 【包装规格】24人份/盒 48人份/盒 【预期用途】用于检测试验血清中的B19病毒抗体(IgM/IgG) 【检验原理】用B19病毒抗原固相硝酸纤维素膜,应用渗滤式间接法原理,检测血清中B19病毒抗体。 【主要组成成份】 1、反应板 24份或48份 2、试剂Ⅰ 1瓶 0.02mol/L PH 7.4 PBS 3、试剂Ⅱ 1瓶胶体金标记物 【储存条件及有效期】产品应储存在2℃~8℃条件中,不能冷冻;有效期24个月。 【样本要求】 1、血清样品不能溶血,应为新鲜血清或2℃~8℃条件保存不超过一周。 2、高脂血症血清不能使用。 【检验方法】 1、滴入二滴试剂Ⅰ于反应板中央孔中,待完全渗入; 2、滴入100μl血清于反应板孔中,待完全渗入; 3、滴加三滴试剂Ⅱ于反应板孔中,待完全渗入; 4、渗入三滴试剂Ⅰ于反应板孔中,待完全渗入。 【结果解释】 阳性:反应板孔中C端出现红色圆斑,T端出现红色圆斑,为B19病毒抗体阳性; 阴性:反应板孔中C端出现红色圆斑,T端不出现红色圆斑,为B19病毒抗体阴性。 失效:反应板孔中C端不出现红色圆斑,或C端、T端均不出现红色圆斑,为试剂盒失效。 【检验方法的局限性】 1、本试剂试验仅用于检测B19病毒抗体而非直接检测B19病毒抗原,因而阳性结果并不能确诊是B19病毒感 染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。 2、抗体含量低的血清样品,不能被检测出来是可能的。部份B19病毒感染的患者,不产生抗体或产生少量 的抗体。此时,可能显示阴性结果。 3、试验结果可疑时,应用PCR法确诊。 【产品性能指标】 1、批内精密度:阳性符合率和阴性符合率均应≥95%,反应斑点颜色深浅程度应接近。 2、批间精密度:阳性符合率和阴性符合率均应≥95%。 【注意事项】 1、本产品尚未获得产品注册证号,仅供研究,不用临床诊断。 2、试验一旦开始操作,应按操作步骤连续进行,直至结束。 3、试剂盒从冰箱取出时,应使试剂恢复至室温。

肺炎支原体检测样本采集标准操作规程

肺炎支原体检测样本采集标准操作规程 1目的 本程序规范样品的采集,以确保检验结果的准确。 2范围 适用于郑州安图绿科生物工程有限公司生产的肺炎支原体培养药敏试剂盒所检测的临床样本。 3 工作程序 采样人员必须经过培训合格,方可进行采样。对于患者自行收取标本,须接受专业人员的指导。 采样前,采样人员根据申请者申请的检验项目的要求,确认采样计划和进行适当的准备工作。这些准备包括核对医嘱,打印条形码,选择恰当的容器粘贴条形码,指导患者做好采样前的。 采样容器应贴(或记号笔注明)含有验单上的ID号或住院号、病人姓名和临床科室等资料的条码,条码不能全包试管妨碍观察标本情况。用申请单包裹标本时,应将有病人姓名和检验项目的一面包在最外层。 采样人员必须根据检验项目的要求和计划以及医嘱要求执行的时间,选择恰当的部分,采集适当的样品量。实验室应定期评审检验所需的样品量,保证样品量适合所进行的检验。采集标本前必顺认真核对患者、标本容器和检验申请是否一致,严防差错。 3.1 采集器皿: 3.1.1 无菌痰杯:用于痰液采样使用。 3.1.2 无菌拭子:用于咽拭子采样使用。无菌拭子包括有采样棒,采样棉棒,采样棉签,一次性拭子等。 3.2 痰液的采集 3.2.1 以采集清晨第1-2口痰为佳。 3.2.2 自然咯痰法:先让病人用清水漱口数次,以除去口腔内大量杂菌,用力自气管深部咳出痰液吐至无菌试管内,对于痰量少或无痰的病人可采用雾化吸入加温至45℃的10%氯化钠水溶液而使痰易排出。 3.3 咽拭子标本的采集 3.3.1 采取前数小时不得用消毒药物漱口,对刚治疗过或用药物的患者,最好在停药24小时后采集标本。 3.3.2用棉拭子采集咽部标本时应小心、准确,避免触及舌、口腔粘膜和唾液,以免污染。 3.3.3让患者头部微仰,嘴张大,并发“啊”音,露出两侧咽扁桃体,手持拭子在病人两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次,然后再在咽后壁上下擦拭至少3次;无菌拭子取出后放入无菌试管后送检。 3.4 样本的运输:因肺炎支原体在体外极易死亡,采样后的痰液或咽拭子应尽快送检进行培养,室温保存不超过四个小时。 3.5 样本的接种:

218例肺炎支原体肺炎临床分析

218例肺炎支原体肺炎临床分析 发表时间:2010-05-27T16:09:41.233Z 来源:《中外健康文摘》2010年第2期供稿作者:吴文华[导读] 随着医学的发展,检测水平的提高,人们生活及卫生条件的改善,细菌性疾病逐渐被控制 吴文华 (黑龙江省勃利县人民医院黑龙江勃利 154500) 【中图分类号】R563.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)02-0117-02 【关键词】肺炎支原体肺炎临床分析 肺炎支原体肺炎是由肺炎支原体引起的急性呼吸道感染和肺部炎症,病原为肺炎支原体是介于细菌和病毒之间的原核细胞型微生物。无细胞壁。由口鼻分泌物经空气飞沫传播,侵入上呼吸道,并向气管-支气管和肺蔓延,其致病性在于产生过氧化物损害气道黏膜细胞。肺炎支原体肺炎是儿童和青年呼吸道感染最常见病,秋冬季节发病较多。肺炎支原体传染主要发生在急性期咳嗽时的飞沫经呼吸道吸入感染。常伴发咽炎、耳鼓膜炎、气管炎和支气管炎。 随着医学的发展,检测水平的提高,人们生活及卫生条件的改善,细菌性疾病逐渐被控制,但肺炎支原体等非细菌感染性疾病出现增多的趋势。现就肺炎支原体肺炎诊断和治疗讨论如下: 1 临床资料 1.1病例 2003年9月至2008年9月我院内科共收治肺炎支原体肺炎218例,占同期住院病人的21.5%。218例中,男132例,占61%;女86例,占39.2%。6至16岁71例,占3 2.6%,16岁以上147例,占67.4%。217例(99.5%}6)以发热、刺激性咳嗽为突出表现,l例(0.5%)以溶血性贫血起病,13例(12.0%)伴呕吐、腹泻及肝功损害,11例(5.1%)伴心肌炎,9例(4.1%)伴猩红热样皮疹,8例( 3.7%)伴游走性关节痛,7例(3.2%)伴咽痛、胸闷及胸痛。体检:双肺呼吸音粗82例(37.6%),下肺呼吸音减弱78例(35.8%),双肺可闻及少许干罗音35例(16.1%),双肺可闻及哮鸣音及湿性罗音23例(10.6%)。 1.2实验室检查白细胞升高82例(40.8%),白细胞降低23例(44.0%),白细胞正常113例(6.0%),均有血沉增快20~-40mtll/h。 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺炎支原体(MP)抗体,在MP感染症状发作7天左右,血清中特异性IgM抗体可被检出,10~30天达高峰,12~26周消失[1]。而测血清冷凝素(属IgM型)阳性率56%,冷凝素大多于起病后第1周末或第2周初开始出现,至第3~4周达高峰,以后降低,2~4月消失。此为非特异性反应[1]。本组IgM升高109例(50.0%),IgM及IgG升高96例(44.0%),IgG≥4倍升高13例(6.0%)。 1.3 X线检查以支气管肺炎改变78例(35.8%),肺门阴影增浓为主者58例(26.6%),问质性肺炎改变52例(23.9%),右下肺炎改变30例(13.8%)。 1.4诊断通过ELISA法测Mt,抗体、结合症状、体征及x线等检查,103例(47.2%)在起病l周确诊为肺炎支原体肺炎,102例(46.8%)在起病l~2周得到确诊,13例(6.0%)在起病2~3周确诊。 1.5治疗有190例(87.2%)曾以上呼吸道感染、急性支气管炎、支气管肺炎(病毒性和/或细菌性),用“青霉素”、“头抱类抗生素”等治疗,11例(5.0%)以“心肌炎”治疗,8例(3.7%)以“风湿热”治疗,8例(3.7%)以“肝炎”治疗,1例(0.5%)以“溶血贫血”治疗等,未见好转,才查MP抗体,确诊为肺炎支原体肺炎,改用大环内酯抗生素,疗程轻症3~4周,重症4~6周,重症患儿加用肾上腺皮质激素治愈。 对于大环内酯类抗生素的选用,因考虑红毒素剐作用较大,半衰期短,组织内及细胞内浓度较低,多选用罗红霉素,用量为5~10mg/kg·d,分两次口服,疗程3~4周或克拉霉素,用量为10~15mg/kg·d,分两次口服,疗程2~3周,静脉滴注20mg/kg·d,症状缓解,改为口服,总疗程3~4周,或阿奇霉素10mg/kg·d,每天1次口服,或静脉滴注,3天后,停用7天,为l疗程,连用3~4疗程。 2 讨论 肺炎支原体肺炎是儿童及青年常见的一种肺炎,婴幼儿也不少见,主要通过呼吸道飞沫传染,近几年有增多趋势,除肺炎外,还可表现为支气管炎、气管炎及咽炎,不少门诊病人症状较轻,如不测肺炎支原体抗体,极易漏诊。而且部分患儿有多个系统病变表现,如心肌炎、溶血性贫血、肝炎、各型皮疹、游走性关节痛等。肺外疾病可伴有呼吸道感染症状,也可直接以肺外表现起病。故儿童如有发热、咳漱、同时伴有其他脏器受累、血沉增高而中毒症状不重者,应考虑MP感染,必须进一步用ELISA测血清中1VI},抗体,此法灵敏,特异性高,且快速、经济,为目前诊断MP感染的一种实用而可靠的血清学方法[川,以便早发现、早诊断、早治疗,防止误诊及抗生素的滥用。参考文献 [1]官道华,吴升华,主编.感染病学.北京:人民卫生出版社,2002.3:726~72.

肺炎支原体抗体的标准操作程序

肺炎支原体抗体的标准操作程序 1 试剂盒的来源: 2试剂盒反应原理:本试剂是一种检测肺炎支原体抗体的体外诊断试验,它用肺炎支原体(Mac株)细胞膜成分致敏人工明胶粒子制造而成。本试剂试验是基于如下原理:致敏粒子与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。 3试剂盒组成:血清稀释液(液状) 致敏粒子(冷冻干燥), 未致敏粒子(冷冻干燥), 阳性对照血清(液状) 滴管25 u L 2支"U"型微量反应板一块 4操作步骤 1) 取空试管一支,用微量加样器加人稀释液100 u L,再用微量加样器在第1-4孔中各加人稀释液25 u L。 2) 用微量加样器取样品25 u L至已加人稀释液100 u L的试管中。混匀 后用微量加样器取25 u L加入到微量血清反应板第1孔中,混匀。 3)用加样器从第1至第4孔(或更多)进行对倍稀释。 4)用试剂盒中提供的一支滴管向第1孔中滴加1滴末致敏粒子,用试剂盒中提供的另一支滴管向第2至第4孔(或更多)各滴加1滴致敏粒子。 5)用平板混合器彻底混合各孔中内容物约30秒钟,以便充分混匀(小心不要将孔中内容物溅出)。给反应板加盖,在室温下(1500℃)静置3个小时,然后在平板观测器上读取凝集图像。静置过夜不会使图像产生显著变化。 5测定结果的判定方法 阳性 样品与未致敏粒子(最终稀释倍数1:20)的反应图像判定为(一),而与致敏粒子(最终稀释倍数1:40)的反应图像判定为(+)或(++),则结果判定为阳性。将显示出反应图像为(+)时的最终稀释倍数作为抗体滴度。 阴性 不论样品与未致敏粒子呈现何种反应图像,只要与致敏粒子(最终稀释倍数1:40)的反应图像显示为(一),则结果判定为阴性。

小儿肺炎支原体感染的实验室检测及诊治现状

小儿肺炎支原体感染的实验室检测及诊治现状 发表时间:2013-03-06T16:28:02.047Z 来源:《中外健康文摘》2012年第51期供稿作者:韩富秋[导读] 支原体(mycoplasma)是一类能在无生命的人工培养基中生长繁殖的最小原核型微生物。 韩富秋(内蒙古呼和浩特市第一医院检验科内蒙古呼和浩特 010030) 【中图分类号】R725.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)51-0127-02 肺炎支原体(MP)是儿童社区获得性肺炎的主要病原之一。MP约占小儿肺炎病原的10~30%以上[1]。文献报道MP感染率9.6% ~66.7%不等。MP引起的呼吸系统病变,临床表现多样,自轻型的上呼吸道感染、咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎到严重的致死性肺炎,还可通过免疫机制和/或直接侵犯肺外脏器,引起多系统、多器官的肺外并发症如脑膜炎、心肌炎、肾炎和免疫性溶血性贫血等,部分病例可遗留慢性咳嗽和神经系统后遗症,严重危害儿童健康。 1 肺炎支原体概述 1.1病原学支原体(mycoplasma)是一类能在无生命的人工培养基中生长繁殖的最小原核型微生物。早在1898年Nocard and Roux[2]就首先从患传染性胸膜炎肺炎的病牛体内分离到一种微生物,将它命名为胸膜炎微生物(PPLO), 1967年正式命为支原体,对人致病的有肺炎支原体、人型支原体、解脲脲原体等。肺炎支原体(MP)广泛存在于人、动物及植物体内,无细胞壁,最外层为细胞膜,基本形态呈球形或丝形,长约2-5μm,革兰氏染色阴性。MP含DNA和RNA两种核酸,其基因组为环状双链DNA。 1.2流行病学肺炎支原体(MP)主要通过呼吸道传播,可引起支原体肺炎及慢性支气管炎等呼吸道疾病。肺炎支原体流行性较明显,流行年份的发病率约是非流行年份发病率的数倍。MP肺炎每隔3~8年可在军队或社区中流行一次,有时可造成暴发,但其不是院内感染的主要致病原。MP感染无显著性别差异,人类对MP感染有普遍易感性,主要见于儿童和青少年。全年均可发病,但以秋冬季较多。不同地域的气候,包括气温、湿度等均可影响MP感染的流行曲线。 2 发病机制 2.1病原体直接侵犯,肺炎支原体无细胞壁,在其一端有一种特殊的末端结构,是黏附于宿主细胞的结合位点,在此部位含有P1蛋白对胰酶敏感,具有抗原性和免疫原性,对黏附和致病有重要作用。在感染早期,MP能引起支原体血症,经此环节MP可直接侵犯各组织、系统,在肺外器官生存繁殖而引起肺外器官病变。 2.2 MP抗原与心、肝、肾、脑、淋巴组织、皮肤等组织存在共同抗原,或MP感染后,损伤宿主细胞膜发生抗原结构改变,MP感染刺激淋巴细胞产生相应组织的抗自身抗体,抗原抗体反应损害机体组织、脏器。有研究表明支原体肺炎患儿体内IgM、IgA、IgE水平上升,补体C3、C4水平下降,T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+下降, CD4+/CD8+比值下降,提示肺炎支原体肺炎患儿体液免疫和细胞免疫功能紊乱,免疫机制参与肺炎支原体肺炎以及肺外并发症的发病过程。支原体肺炎患儿在急性期和重症组抑制性细胞因子IL-10水平一过性降低,负调节免疫反应的机制减弱,导致过度免疫反应,对机体损害加重。 2.3循环免疫复合物存在,并沉积在毛细血管基底膜,激活补体免疫反应损害。通过以上机制,从而引起肺外并发症的临床表现。 3 MP感染的临床表现 MP感染既有呼吸道症状,又有肺外损害的特征,单纯依靠临床征象无法确诊。MP可引起呼吸道感染,病程大部分呈亚急性、渐进性,可持续1个月以上。病初有咽痛,一旦感染波及气管、支气管、细支气管,就可能出现顽固难愈的咳嗽、持续干咳或少痰,影响患儿睡眠,可引起喘息,发热并不明显或仅低热。3%-10% MP感染较严重,引起肺炎时,肺部可见大片状阴影、肺部实变、胸腔积液,由于黏液阻塞而导致肺不张和闭塞性细支气管炎等,可出现呼吸困难、气促、喘息等,一些危重儿还可出现急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。混合其他病原感染者、免疫缺陷或药物性免疫抑制患儿、21-三体综合征、镰状细胞性贫血患儿及有心肺功能障碍者MP肺炎往往较重。5-15岁儿童最易发生MP肺炎。 肺外表现包括皮肤、中枢神经系统、心脏、肌肉骨骼、胃肠系统损害及免疫障碍等。(1)皮肤表现:常见也最易发现,包括Stevens-Johnson综合征。急性MP感染患儿可出现雷诺现象,可能与血红细胞冷凝集有关。其他与血管相关的并发症有脑梗死和颈内动脉闭塞。(2)中枢神经系统:包括无菌性脑膜炎、脑膜脑炎、横断性脊髓炎、脑干功能障碍、吉兰-巴雷综合征、末梢神经症状、脊髓灰质炎样综合征、精神障碍、小脑共济失调、脑干脑炎等。 (3)心脏:心包炎、心肌炎相对较常见,其他有充血性心力衰竭、心脏传导阻滞、心肌梗死等。(4)肌肉骨骼系统:表现为多发性骨关节痛,与免疫机制有关。(5)胃肠系统:主要为非特异性胃肠功能障碍,偶可出现肝功能异常和黄疸。(6)血液:溶血性贫血、血栓栓塞、骨髓抑制、血小板减少性紫癜、DIC等。(7)免疫障碍:MP感染过程中或感染后产生暂时性免疫功能抑制。 4 MP感染的诊断 尽管MP肺炎有一定的特点,但仅凭临床表现、外周血白细胞计数和分类、CRP、胸部X线摄片等均无法确诊。支原体培养分离是诊断MP感染的金标准,但其技术要求高、耗时长,无早期诊断价值。血清特异性抗体测定是目前临床诊断MP感染最常用的实验室方法。MP-IgM 检测常应用补体结合试验、间接免疫荧光试验、间接血凝试验和ELISA法等。 PCR技术具有高度特异性和一定敏感性,MP感染1-2d即可呈阳性,届时临床上根本无法将MP感染与其他病原感染相区分。PCR技术使MP感染的早期诊断和针对MP感染的抗生素的正确选择成为可能。需注意的是, PCR标本应取自咽拭子,因为在未稀释的鼻咽吸出物中26%-36%存在PCR抑制物,但这种抑制物并不存在于咽拭子中。Beghetto等用鉴定携带B淋巴细胞抗原表位的重组噬菌体技术来诊断支原体感染,证实在已知的MP B淋巴细胞抗原中有免疫源性的是P1和P30黏附素,作者又筛选出MP-N152、MP-N426、MP-N456和MP-N500片段编码的4组新的有免疫源性多肽,其是能被人体免疫球蛋白所辨认的MP免疫优势抗原表位。 5 治疗 MP感染通常具有自限性,对β-内酰胺类抗生素不敏感,临床治疗常选用红霉素、四环素、喹诺酮类等抗生素,目前多主张使用阿奇霉素序贯疗法治疗支原体感染。其他治疗:免疫抑制剂,中药,血浆置换,丙种球蛋白。 参考文献 [1]胡亚美,江载芳.诸福棠实用儿科学[M]. 7版人民卫生出版社,2002: 1204-1205. [2]Nocard E,RouxER.Lemicrobe de la peripneumonie.Ann Inst Pasteur (Paris)[J]. 1998, 12: 240-62.

肺炎支原体检测意义

非典型性肺炎与支气管炎是儿童的常见病和多发病,肺炎支原体感染在儿童肺炎中占有较大比重,肺炎支原体是1~6岁儿童易感的支原体,是呼吸道感染的常见病原体,多引起急性支气管炎和间质性非典型性肺炎[2],病程较长,易复发和交叉感染,特别是3~6岁的儿童在幼儿园期间极易交叉传播,应及早发现和治疗[3]。肺炎支原体感染的早期诊断多靠血清学检测(ELISA法)肺炎支原体抗体IgM作为诊断治疗的依据。 本检测结果显示,儿童支原体感染性别差异无统计学意义,主要是1~6岁儿童多发,4~7岁儿童阳性率高于1~3岁阳性率,可能与儿童聚集和年龄段的免疫力有关,这与国内王力等报道的发病年龄段一致。支原体感染四季均有发生,秋冬季节发病明显,可能与秋冬季节气候变化及儿童自身的免疫力弱有关,国内作者报道有些地区支原体发病明显在夏秋季节,这进一步说明,支原体发病有四季平衡的趋势,应引起临床重视。 ELISA法检测肺炎支原体抗体特异性高、敏感性强、简单、快速,可以避免非特异性抗体的干扰[4],是临床诊断支原体肺炎的可靠检测方法。 肺炎支原体是秋冬季节易引起儿童支原体非典型肺炎的病原体,婴幼儿、青少年易感,患有老年病的体弱老年群体也容易被感染。大多引起急性支气管炎和间质性肺炎,占临床肺炎发病率的15%~20%,其感染发病率为9.6%~66.7%,感染发病率的范围较大,应引起临床重视,尤其是婴幼儿和青少年人群[1]。目前使用ELISA法检测肺炎支原体抗体,特异性高、敏感性强、检测快速,为临床早期诊断提供了有力的保障。 人体感染肺炎支原体后,能产生特异性IgM和IgG类抗体。IgM类抗体出现早,般在感染后1周出现,3~4周达高峰,以后逐渐降低。由于肺炎支原体感染的潜伏期为2~3周,当患者出现症状而就诊时,IgM抗体已达到相当高的水平,因此IgM抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标[1]。如IgM抗体阴性,则不能否定肺炎支原体感染, 需检测IgG抗体。IgG较IgM出现晚,需动态观察,如显著升高提示近期感染,显著降低说明处于感染后期。由此提示IgG与IgM同时测定,可提高诊断率,达到指导用药、提高疗效之目的。

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