【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
【实验目的】
1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】
1.试剂：%的詹纳绿B染液、Ringer试剂
2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等
3.材料：小鼠
【实验原理】
I.线粒体
线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
II.超活染色实验原理
超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）
1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。
2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到
重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则：
1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂
2、具有电化学特性
3、配成稀淡的溶液来使用
4、具有专一性（特异性）
5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原呈无色的色基（即无色状态）。
另外，中性红也属于碱性染料，对植物液泡系的染色有专一性。
【实验步骤】
一、大体流程 剪下合适大小的肝组织小块洗净
用詹纳斯绿B 染色20-30min 取着色部分加
Ringer 溶液制成悬
液 制片，高倍镜观察
断头法处死小
白鼠取肝组织
二、具体操作
1、用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出小白鼠肝组织，选取边缘较薄的肝组织，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将上述洗净的肝组织移入染液中（注意：不可将组织块完全浸没，要是组织块至少三分之一的部分露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色）进行染色，一般染色20—30min，以组织块边缘被染成蓝绿色为准。
3、吸去染液，用剪刀将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加Ringer溶液，用剪刀将组织充分剪碎制成悬液。
4、取上述细胞悬液滴片，加上盖玻片，在高倍镜下观察。
【实验结果与分析】
I.实验结果
理想状态下小鼠肝细胞细胞质中的线粒体应被染成蓝绿色，在高倍镜（10*40）下观察到的结果如下：
图1:10*40倍显微镜下观察小鼠肝细胞图2:10*40倍显微镜下观察图
II.实验分析
在打开小鼠腹腔后，可找到呈淡红褐色的肝脏，其边缘很薄，呈小三角形状；在取下肝脏的操作中，发现其比较柔软，易被镊子的尖端挑破。所以剪的时候要注意，既要是所得的组织块体积较小，又不要让其破碎。在将肝细胞进行染色的过程中，大约20min 左右可看到半浸在染液中的肝组织的边缘部分出现蓝绿色；
取着色部分制成细胞悬液后在40倍显微镜下观察，可以看到小鼠肝细胞细胞质中的线粒体被詹纳斯绿B染液着色，不过着色程度很浅，为浅绿色，可能是染色时间不够，染色不够充分导致的，也有可能是因为所选用的詹纳斯绿B染剂的浓度极稀（%），使得染色过程有一定难度。
在显微镜下观察时，可以看到肝细胞的周围有红细胞出现，但是数量并不是很多，不影响观察。若是在观察中发现有大量的红细胞，可能是在处死小鼠时，放血不够充分，导致大量血液淤留在了肝脏中，使最终视野中红细胞过多；也有可能是取出肝组织块后，
没有用Ringer溶液将血污冲洗干净，使部分血液残留在肝组织块表面，并最终混在了细胞悬液内。
III.实验讨论
使用肝细胞的缘由：
1.线粒体含量较多，每个肝细胞有1000-2000个线粒体；
2.长度适合观察，约5μm；
3.肝脏较软，易于破碎，并且适于快速提取，因而利于保持线粒体活性；
【注意事项】
1、用断头法处死小白鼠后，要将血放干净，可以剪开小鼠两侧颈动脉，使血液尽量流出，防止肝脏中储存过多血液，影响观察。
2、打开腹腔后，可以看到肝脏位于左手边，呈红色，但颜色有一些偏淡，不要与右手边血红色的脾脏混淆，切下小鼠的肝脏，备用，剪的时候要注意避开各种血管，防止出血量过多凝结。
3、在从小鼠体内取肝组织块时要尽快，从而保证它具有更高的活性。
4、剪下来的组织块要立即放到Ringer缓冲液中去洗去其上的血液，因为如果组织块长时间暴露在空气中的话，其上的血液会凝固，使得染色操作变得困难，洗的时候用镊子轻轻的夹住涮洗，这样可使血液快速的被洗脱，但不要太用力，这样会将组织块弄碎。
5、从小鼠肝脏上取组织块的时候，要选取薄边的一端，从此处取2小块，这一部分血少，易取（另一端太厚，不易取也不易染色，而且剪的时候出血量比较多）。在选取肝组织片时要在处于边缘，且为由薄到厚的地方选取。
6、染色时要使组织块上面部分(至少三分之一）露在染液外，不可完全浸没在染液中，以便使线粒体酶系得到氧化。
7、染色结束后，刚开始加入的Ringer液的量不能太多，只需要刚盖过肝组织块即可。如果量太多，则在剪组织块的时候会造成其上浮，从而不易剪碎。
8、观察前要将肝组织充分剪碎，制片时要吸取上悬液，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，而要避免吸取稍大的组织块。
活性染料轧染染棉实验(塔色样卡) 3 掌握了解活性染料轧染染棉工艺及配色的特点 重点：二浴法轧染工艺 难点：二浴法轧染配色 操作
活性染料轧染染棉工艺 一、化料 二、计算 三、二浴法工艺： （一）工艺流程 （二）工艺处方 （三）工艺条件 （四）工艺操作 实验报告
1 第一课时 一、化料 １、活性染料红、黄、蓝每种化500ml ，浓度为30g/l 。（称15g 化500ml ） ２、Na 2SO 4 200 g/l 与 Na 2CO 3 40g/l 合化（称Na 2SO 4100g 和Na 2CO 320g 化500ml ） 二、计算 计算染液体积:V=10g/l ×30×10-3 l ／30g/l=10ml 加水:30-10=20ml 根据具体配方加染液.(附加页) 三、二浴法活性染料轧染染棉工艺 （一）工艺流程 织物准备→浸轧染液→烘干→浸轧固色液→汽蒸→水洗→皂洗→水洗→烘干 （二）工艺处方 １、轧染液： 活性染料 X g/l 水 Y 合成 30ml ２、固色液（倒入）： Na 2SO 4 200 g/l Na 2CO 3 40g/l 合成 30ml （三）工艺条件 １克织物 二浸二轧
烘干温度：80 ℃ 烘干时间: 5 min 汽蒸温度：130℃(包膜) 汽蒸时间：2 min （四）工艺操作 １、织物准备 ２、浸轧染液（二浸二轧），使织物带液均匀，并具一定轧余率。 ３、烘干：加热均匀，用夹子夹住。 ４、浸固色液，或将固色液倒于织物上，用薄膜包好，挤干膜内空气。５、汽蒸：将织物放于130℃烘箱内蒸2 min。 ６、水洗 ７、皂煮 肥皂 2 g/l 织物1g/块 T 95℃ t 5 min 浴比1:50 ８、水洗 ９、烫干 第二、三、课 重复实验 配色实验 教师巡回指导 小结 药品仪器整理 卫生打扫 实验报告 2
课程设计报告 设计题目：二叉树结点染色问题学生姓名： 专业：计算机科学与技术 班级： 学号： 指导教师： 完成日期：2015-7-7
（一）需求和规格说明 一棵二叉树可以按照如下规则表示成一个由0、1、2组成的字符序列，我们称之为“二叉树序列S”： 例如，下图所表示的二叉树可以用二叉树序列S=21200110来表示。 任务是要对一棵二叉树的节点进行染色。每个节点可以被染成红色、绿色或蓝色。并且，一个节点与其子节点的颜色必须不同，如果该节点有两个子节点，那么这两个子节点的颜色也必须不相同。给定一棵二叉树的二叉树序列，请求出这棵树中最多和最少有多少个点能够被染成绿色。 （二）设计 分析过程： 这是一道二叉树的染色问题，求染成绿色的最大最小情况，从本质上 看，这是一道动态规划问题。为了方便直观起见，代码开始时用先 enum Color{ nocolor = 0, green = 1, red = 2, blue = 3 };定义了不同的颜色。 举个简单的例子，如下图所示：
将整个二叉树划分成三个部分：根节点、左子树、右子树。由于有约 束条件，所以这三个部分存在着互相限制作用如下： 1. 二叉树的根节点与左子树的根节点颜色不同； 2.二叉树的根节点与右子树的根节点颜色不同； 3.左子树根节点与右子树根节点颜色不同。 显然，上述的三个限制表示的是标号为1、2、3三个点之间的互相关系。除此以外，左子树中的点与右子树中的点没有任何直接的限制关系！也就是说，如果我们事先确定了上述二叉树中标号为1、2、3的三个点的颜色，那么接下来，对左子树染色和对右子树染色将变成两个互不干扰的子问题，左子树最值与右子树最值不影响，可以分开求解。 【互不干扰，可以分开求解】 如此一来，通过将三点染色，我们就可以把二叉树分成左右两个子树，整个问题被分解成两个较小规模的子问题。 算法设计： 如图二所示，将二叉树划分成三部分，给标号为1、2、3三个点先染色后，将依次处理左子树，右子树。
【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 【实验目的】 1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。 2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。 【实验材料与用品】 1.试剂：%的詹纳绿B染液、Ringer试剂 2.器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等 3.材料：小鼠 【实验原理】 I.线粒体 线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。 线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。 线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。 II.超活染色实验原理 超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定） 1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。 2）体外活染：又称超活染色，它是由活的动植物分离出的细胞或组织小块，以染料溶液浸染，燃料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色之所以能固定，堆积在细胞内某些特殊部分，主要是染料的“电化学”特性起到 重要作用；碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染液的胶粒表面带阴离子，被染的部分本身也是具有阳离子或阴离子，这样它们彼此之间就发生了吸引作用，从而使样品着色。不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料。 活体染色剂的选择原则： 1、对细胞无毒性或毒性极小的染剂 2、具有电化学特性 3、配成稀淡的溶液来使用 4、具有专一性（特异性） 5、一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。 本实验采用的活体染色剂---詹纳斯绿B 詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态--蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原呈无色的色基（即无色状态）。 另外，中性红也属于碱性染料，对植物液泡系的染色有专一性。 【实验步骤】 一、大体流程 剪下合适大小的肝组织小块洗净 用詹纳斯绿B 染色20-30min 取着色部分加 Ringer 溶液制成悬 液 制片，高倍镜观察 断头法处死小 白鼠取肝组织
扎染实验小结扎染古称扎缬、绞缬、夹缬和染缬，是中国民间传统而独特的染色工艺。织物在 染色时部分结扎起来使之不能着色的一种染色方法，中国传统的手工染色技术之一。 在扎染课程开始之前，我和同学们一样对扎染有着颇为浓厚的兴趣。并且认为扎染是很容易的事情，但通过自己亲手制作实践体验以后才发现其实扎染并不简单。首先因为染料的原因选择扎染的面料时就需要全棉的白色布料，而且要考虑到面料的厚薄。面料过厚容易使染料染色时不能完全渗透其中，同样的，面料过薄会使染料过于渗透面料，致使面料上的图案变糊等等。而且除厚薄外，面料的柔软程度也需考虑到，若是面料太硬在接下来的扎结过程中也较易出现扎的不紧等情况。面料不宜有弹性，弹性面料会影响扎花效果。 扎染工艺分为扎结和染色两部分。它是通过纱、线、绳等工具，对织物进行扎、缝、缚、缀、夹，等多种形式组合后进行染色。其目的是对织物扎结部分起到防染作用，使被扎结部分保持原色，而未被扎结部分均匀受染。从而形成深浅不均、层次丰富的色晕和皱印。织物被扎的愈紧、愈牢、防染效果愈好。它既可以染成带有规则纹样的普通扎染织物；又可以染出表现具象图案的复杂构图及多种绚丽色彩的精美工艺品，稚拙古朴，新颖别致。扎染以蓝白二色为主调所构成的宁静平和世界，即用青白二色 的对比来营造出古朴的意蕴，且青白二色的结合往往给人以“青花瓷”般的淡雅之感，而平和与宽容更体现在扎染的天空中。 在面料选好后便是扎结工艺了，我的第一幅作品因为没有经验，所以在绘图的过程中图案的选择 比较复杂，细小琐碎的东西比较多，而且比较密集。致使在接下来缝制图案的过程中花的时间比较多，然而最后的结果却并不如意，图案的线条很模糊。导致这样的结果，首先一个问题是扎结的时候扎的不够紧，其次就是图案的选择上最好不要太过复杂繁琐。图案和图案之间要有一定的间隔，如果图案间太密集，扎结到最后容易使图案间堆积起来，那样会使染料很难进入到图案间的面料里，容易导致留白或是染色不均匀。另一点是在缝制的时候每一针之间的间距要控制好，不要间距太大，那样容易把染料渗进去。 扎结完之后就要染色了，染色首先就是要把扎好的面料浸泡在水中一会儿，再捞出拧干后放入已 经煮沸的染盆中染煮。染煮的时候要注意几点，第一，要适当的翻动面料使之着色均匀；第二，如若包有保鲜膜，那么在翻动面料是就要小心不要把保鲜膜弄破；第三，再染多色面料时要先染浅色再染深色；另外很重要的一点是要控制好染煮的时间，尤其是多色面料染煮时，时间上的变化会使颜色有较大的差异。 染煮后将面料清洗完一定要注意将面料晾干后再烫平，否则会使面料出现较大的颜色不匀和变色 的情况。 整一个扎染的过程还是比较有趣的，在这个过程中所累积的经验和知识对我本身而言是很有帮助的，总而言之是受益良多的一次实践。篇二：实验报告 武汉职业技术学院实验报告 实验名称多色扎染及染色成绩： 服工10302 班 作者郭丹 日期 2012/5/24 指导教师: 解子燕
实验四线粒体的活体染色 实验目的： 1.掌握线粒体的活体染色原理及方法。 2.熟悉在耳缘静脉用空气栓塞法处死兔子的方法。 3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 实验原理： 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 实验用品： 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器普通光学显微镜、手术器材一套、解剖盘、腊盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、20ml注射器、吸管。 三、试剂l／300詹纳斯绿B染液、0.9%Ringer氏液(哺乳类用)。 实验内容和方法： 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）方法 1.用空气栓塞法处死兔子（见图4-1），置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（约2～3mm3大小）。 2.放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，再用吸管吸去Ringer 氏液。 3.在平皿内滴加1／300詹纳斯绿B（Janus green B）染液，，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成蓝色时即可，一般需要染色30分钟。染色期间翻动组织块几次，使其各表面均有机会接触空气和染液。 4. 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，去除大组织块，就会
棉织物的活性染料染色 姓名：商倪锋学号：08139126 班级:轻化工程081班 同组者：史千千 摘要：本实验采用活性艳蓝K--GR对全棉植物进行染色，染色后对活性染料的固色率和吸尽率的测定。 关键词： 活性染料，染色棉织物固色率吸尽率 Dyeing of cotton with active dyes Abstracts：in this paper，we use ReactivebrilliantblueK-GR dyeing cotton, after dyeing we use equipment to evaluate the fixation and exhaustion rate. The result show that reactive dyes on cotton fabric has not a higher exhaustion .fixation and low luster . . 前言： 棉织物是目前纺织市场应用最多的纤维之一，染棉织物可以用直接染料，活性染料进行染色，用直接染料染色后水洗牢度较差，很难达到客户的要求，同时在染色的过程中对染料的浪费也比较严重，吸尽率和固色率都比较低，本实验以活性艳蓝K--GR为染料对棉织物进行染色同时来测定活性染料的吸尽率和固色率。 一、实验目的 1、行选取染料及设计工艺，掌握活性染料对棉的染色过程，巩固所学的活性染料对棉纤维染色的基本理论知识，学会自己设计工艺处方和工艺条件，并进行染色试验。 2、会活性染料吸尽率和固色率的测定 二、实验原理 1、染色原理: 活性染料是一种含有能与纤维起反应形成共价键的活性基团的染料，常见的活性基团有二氯均三嗪型、乙烯砜型和一氯均三嗪型等三种，它们的反应能力各不相同，所以采用的工艺条件也不同，分别采用低温、中温和高温进行染色。 活性染料染色时通过纤维对染料的吸附、染料扩散进入纤维内部达到上染平衡，加入碱后，染料开始与纤维发生反应而固着，并重新达到一个平衡。染后进行皂煮，除去并未与纤维固着的染料或水解染料，提高色泽的鲜艳度。
实验一：细菌、放线菌的形态 观察与革兰氏染色 姓名:陈虹邑 学号：200911233012 系别：生物科学与生物技术 班级：周二第一组 试验日期：2011年9月13日 同组成员：邢悦婷呼波
一、实验目的及意义 1、巩固油镜的使用; 2、掌握细菌形态观察的基本方法； 3、了解细菌的基本形态和结构。 4、了解革兰氏染色的原理； 5、初步掌握细菌涂片的方法； 6、掌握革兰氏染色的方法； 7、掌握放线菌的涂片方法； 8、观察基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。 二、实验材料与方法 【实验材料】 菌种：溶血链球菌(Strptococcus haemolyticus),螺菌(Spirillum sp.) ,巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium), 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis), 普通变形菌(Proteus vulgaris), 丙酮丁酸梭菌(Clostridium acetotylicum), 褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)等细菌永久装片，放线菌5406，金黄色葡萄球菌 （staphulococcus aureus），大肠杆菌（E. coli） 试剂：香柏油、无菌水、结晶紫、番红或沙黄、95%酒精、碘液 仪器及用具：显微镜、擦镜纸、吸水纸、小滴管，接种环、载玻片、盖玻片、酒精灯 【实验方法】 细菌的观察 1、在载玻片上滴一小滴水，用接种环，采用无菌操作，将细菌挑起，涂到载玻片 上，盖上盖玻片。 2、用显微镜对细菌进行活体观察。观察时先用低倍镜，再用高倍镜，有必要的话， 再用油镜观察。 3、观察细菌的永久装片，观察时先用低倍镜，再用高倍镜，有必要的话，再用油 镜观察，找到细菌的各种结构。
线粒体(Mitochondrion)的活体染色 及电镜照片观察 【实验目的】 掌握一种活体染色方法,了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体基本形态结构。 【实验用品】 一、材料和标本兔子一只、线粒体的电镜照片。 二、器材和仪器显微镜、手术器材一套、解剖盘、小平皿、载片、盖片、吸水纸、10ml 注射器、吸管。 三、试剂 l／300詹纳斯绿B染液、Ringer氏液(哺乳类用)。 【实验内容】 一、兔肝细胞线粒体的活体染色 （一）原理 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 （二）方法 用空气栓塞处死兔子，置于解剖盘内，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿内加1／300詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。 染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。 将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上，加一滴Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余水分。 (三)结果 显微镜观察，肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。 二、线粒体的光镜切片观察 用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 三．线粒体的电镜照片观察 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长
一、实验目的 (1)自行选取染料及设计工艺，掌握活性染料对棉的染色过程，巩固所学的活性染料对棉纤维染色的基本理论知识，学会自己设计工艺处方和工艺条件，并进行染色试验。 (2)学会活性染料吸尽率和固色率的测定 二、实验原理 (1)染色原理:活性染料是一种含有能与纤维起反应形成共价键的活性基团的染料，常见的活性基团有二氯均三嗪型、乙烯砜型和一氯均三嗪型等三种，它们的反应能力各不相同，所以采用的工艺条件也不同，分别采用低温、中温和高温进行染色。 活性染料染色时通过纤维对染料的吸附、染料扩散进入纤维内部达到上染平衡，加入碱后，染料开始与纤维发生反应而固着，并重新达到一个平衡。染后进行皂煮，除去并未与纤维固着的染料或水解染料，提高色泽的鲜艳度。 活性染料浸染的上染曲线 由于活性染料在水溶液中要发生水解，从而影响活性染料的利用率，为了改善上述情况，现在开发出双活性基团甚至三活性基团的活性染料，可以使活性染料的固色率达到80%以上。 双活性基染料常见的有：含两个相同的一氯均三嗪型如国内KE型活性染料；含一个一氯均三嗪、一个为乙烯砜型的染料如国内M型活性染料。 (2) 固色原理: 活性染料与棉纤维的反应在碱性条件下，纤维素能形成纤维素负离子，能和活性染料发生亲核取代、加成反应，进而形成染料--纤维共价键，二氯均三嗪型较活泼，只需在较低温度下即可反应，而一氯均三嗪型则需在温度较高、碱性较强条件下才能反应。影响此反应的因素有很多。染料与纤维与水的反应为平行反应，因为水也是亲核试剂，反应条件机理相同。染料一经水解即失去与纤维的反应能力，固色率大为降低。从反应动力学研究得到，固着反应比水解反应快40倍左右，染色时PH一般为10~11为宜，X型可用碱性较弱的小苏打，对K型，则采用Na2CO3、Na3po4，甚至NaOH。染色温度具体根据不同染料性能而定。促染用元明粉，加入要掌握一多二早，分批加入的原则。浴比尽可能小些，以提高固色率。水解染料的存在，对纤维有一定的亲和力，但不够大，它会染着于纤维上，皂煮时不能完全煮下来，有时还会污染到其它纤维，特别是KN型染料耐碱牢度不高，易造成污染现象。水解染料的存在也是湿摩牢度较低的重要原因 ( 3 ) 加盐促染原理: 三、给定实验材料、药品及仪器 材料：丝光漂白棉布（各2g、8块） 药品：活性艳蓝K--GR，无水硫酸钠、碳酸钠、净洗剂EL-C
染料化学实验 实验一 合成酸性橙Ⅱ 用途：羊毛、蚕丝、皮革等的染色。 一、 反应 1、重氮化反应 NH 2SO 3Na + 2HCl + NaNO 2SO 3- N=N +Cl - + 2NaCl + 2H 2O 10℃ 2、乙萘酚的溶解 -OH + NaOH -ONa + H 2O 3、偶合反应 SO 3- N=N +Cl --ONa NaO 3S-N N OH ++ HCl 二、 主要原料 1、对氨基苯磺酸 8.7克 2、30%HCl （d=1.15） 18.3克 3、NaNO 2 3.5克 4、30%NaOH （d=1.33） 7.4克 5、乙萘酚 7.3克 6、食盐 约7.5克 7、碳酸钠 2.7克 8、尿素
三、实验方法 1、重氮化 ⑴在150ml烧杯中，加入55ml水，8.7克对氨基苯磺酸，2.7克碳酸钠，加热使其全部溶解。冷却后，再加入溶于8ml水的3.5克NaNO2的溶液，搅拌，备用。（用手搅即可） ⑵在250ml烧杯中，加入40ml水，再加入16ml 30%HCl搅匀，冰浴冷却，控制温度在10℃~15℃。将上述混合液于10~15分钟内均匀加入。加完后保持此温度，继续搅拌30分钟，得重氮盐白色悬浮液。 用刚果红试纸检测呈兰色，显示悬浮液保持酸性。加入少量尿素破坏过量的亚硝酸。 2、偶合 在400ml烧杯中，加入60ml水，7.3克乙萘酚，在搅拌下加入6ml 30%NaOH，升温到80℃，使其全部溶解。然后把此溶液倒入已经备有冰浴冷却，电动搅拌的500ml搪瓷烧杯中，使其冷却至8℃，加盐2克，快速加入重氮盐全部量的1/2，此时pH为8~10，再加盐3克，然后将剩余的1/2重氮盐控制在10分钟内均匀加完，并随时用液碱调pH≥8。加完重氮盐，继续搅拌30分钟，再加盐2.5克，并用HCl调染液pH= 7。继续搅拌约30分钟，直至重氮盐消失时为偶合终点。（用H酸作渗圈实验）。 偶合完成后染料应全部析出，用水抽过滤，得橙红色滤并，自然干燥，作实验三染色之用。
实验三 1实验目的与原理 1.1实验目的： 观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；掌握一些细胞活体染色的原理和技术。 1.2实验原理： 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 2实验材料与方法 2.1实验材料： 洋葱鳞茎内表皮 2.2洋葱鳞茎细胞液泡的活体染色： 撕取洋葱鳞茎内表皮→中性红溶液染色5~10min→吸去染液，滴加Ringer液→盖上载玻片，显微镜观察。 2.3洋葱鳞茎细胞线粒体的活体染色：
撕取洋葱鳞茎内表皮→詹纳斯绿B溶液染色10min→吸去染液，滴加Ringer 液→盖上载玻片，显微镜观察。 3实验结果 图1中性红染色洋葱内表皮细胞图2詹纳斯绿染色洋葱内表皮(X100) (X100) 在图1中性红染色的洋葱鳞茎内表皮细胞中可见表皮细胞中央液泡所占据被染至砖红色，细胞核被挤至旁边 图2是经詹纳斯绿B染色的洋葱鳞茎内表皮细胞，图中细胞被染成蓝色可以看见有许多蓝色颗粒状物体，这就是经染色的线粒体。
组织学与胚胎学实验报告 专业临床五年制 班级 2012级8班 姓名路海燕 学号 201250426 电子信箱 1094565143@https://www.doczj.com/doc/156871058.html, 完成日期 2013.5.24
实验一 上皮组织 报告主题：假复层纤毛柱状上皮 主题属性：指定 标本号：27# 染色：HE 材料：豚鼠气管横切片 教学要求：掌握假复层纤毛柱状上皮的侧面形态结构 假复层纤毛柱状上皮（豚鼠气管切片，HE 染色，40×10） 假复层纤毛柱状上皮由柱形细胞、梭形细胞、锥体形细胞和杯状细胞组成。光镜下杯状细胞最多，游离面有大量纤毛。所有细胞基底面均附着在基膜上，细胞高矮不一，核的位置高低不齐地排列在不同水平面上，垂直切面观形似复层，实为单层。此种上皮以保护功能为主。
实验二 软骨和骨 报告主题：骨单位 主题属性：指定 标本号：6# 染色：Schmorl 式染色 材料：脱钙骨切片 教学要求：掌握光镜下骨组织的结构特点 骨单位（骨切片，Schmorl 氏法块染，40×10） 骨单位是长骨起支持作用的主要结构单位，光镜下可见骨单位中央为圆形的中央管，多层骨板围绕中央管呈同心圆排列，骨单位间还有一些不规则的间骨板，骨板之间或骨板中可见可见棕黄色的小腔，为骨陷窝。骨陷窝之间有细小的骨小管相连通，最内层的骨小管开口于中央管。
实验三肌组织 报告主题：心肌 主题属性：指定 标本号：12# 染色：HE染色 材料：人心肌切片 教学要求：掌握人心肌纤维纵断面和横断面的结构特点 心肌（人心肌切片，HE染色，40×10） 心肌分布于心壁和邻近心脏的大血管壁上，光镜下可见心肌纤维走向无一定规则，心肌纤 维连接处为闰盘，闰盘染色深。心肌纤维也呈明暗相间的周期性横纹。
实验二普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色普通光学显微镜的使用 一、实验目的 以染色玻片及活菌为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。 二、显微镜油镜使用的原理 1 普通光学显微镜的基本构造 （1）光学部分: 接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。它使检视物放大, 造成物象。（2）机械部分: 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。2 显微镜的放大倍数和分辨率（1）放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 （2）显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 λ：可见光的波长（平均0.55μm） n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 a：镜口角（即入射角）。3 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、实验材料 1 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、盖玻片、接种环、酒精灯等。 2 细菌三种形态的玻片染色标本。 3 培养12-18h的枯草芽孢杆菌。四、实验方法与步骤 1 染色细菌玻片的油镜观查 （1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光亮度。 （3）低倍镜观察：先粗调再微调至物象清晰。
（4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。 （5）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 （6）绘出所观察到的细菌形态图像。 （7）、换片：另换新片观察，必须从（3）步开始操作。 （8）、用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去油镜头上的香柏油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。 2 活菌制片观察 取一张干净的载玻片，在其中央滴上一滴干净的蒸馏水，取培养12-18h的枯草芽孢杆菌一小环，在水滴上反复涂抹至菌体充分分散，盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余的水分，按照油镜的使用步骤，观察草芽孢杆菌形态，边观察边绘图。 五、实验报告 油镜使用的原理 六、思考题 1 油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ 2 使用油镜时，为什么必须用镜头油？ 3 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 七、实验注意事项 1 不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2 镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。 3 观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4 观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5 拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 6 显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 1 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色方法及革兰氏染色。 2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验原理 1 简单染色的原理
微生物的革兰氏染色 一、实验目的： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法； 2、了解革兰氏染色的原理； 3、巩固显微镜的使用。 二、实验原理： 革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分： 1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片； 2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物； 3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色； 4、复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。 成分占细胞壁干重的% 革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高（50~90）含量很低（~10） 磷壁酸含量较高（<50）无 类脂质一般无（<2）含量较高（~20） 蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较： 1、阳性（G+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。 2、阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。 三、实验步骤： 1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。 2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。 3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。 4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗 5、滴加脱色乙醇，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。 6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干 7、镜检并拍照。 四、注意事项： 1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论： 1、结果： 高倍镜下观察的菌体图像：
微生实验报告 姓名： xx 专业年级：2011级生物技术 学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔
径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种： 金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂： 草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚： 乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材： 废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片： 取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干： 让涂片自然晾干。 3．固定：
活性染料浸染染棉实验 4 1、掌握了解活性染料浸染染棉工艺并能完整的操作 2、拼色的色光 重点：一浴二步法浸染工艺 难点：一浴二步法浸染工艺 操作
活性染料浸染染棉工艺 一、化料 二、计算 三、一浴二步法工艺：（一）工艺流程 （二）工艺处方 （三）工艺条件 （四）工艺操作 实验报告
第一、二、三、四课时 一、实验的准备 １、染料：活性红 活性黄 活性兰 ２、塔色样卡 总浓度为1% 二、实验工艺 （一）工艺流程 织物准备→染色→固色→水洗→皂洗→水洗→烘干 （二）工艺处方 活性染料 X %（1%） Na 2SO 4 15-50 g/l Na 2CO 3 8-20 g/l （三）工艺条件 织物：2克 浴比：1：40 染色温度：60 ℃（烧杯内） 染色时间: 30 min 固色温度：60℃(烧杯内) 固色时间：30min 三、计算 １、移液管移取的染液量： 染液量＝织物重（g ）*染料用量（%）*1000/母液浓度（g/l ）
例：染料用量1%，母液浓度2g/l ，织物重2g 2*1%*1000/2＝10ml 同理可得： 0.05%――――0.5ml 0.4%---------4ml （依次类推） ２、助剂量 求体积：浴比＝1：40＝2：V V ＝80ml ＝0.08L Na 2SO 4 15-50 g/l 称取：15*0.08＝1.2g ；50*0.08＝4g Na 2CO 3 8-20 g/l 称取：8*0.08＝0.64g ；20*0.08＝1.6g 染料用量<0.05%，用助剂10 g/l 助剂化料浓度为10%（100 g/l ）分别吸取： Na 2SO 4 12-40ml Na 2CO 3 6.4-16ml 四、染料,助剂的用量参考 五、皂煮 肥皂 2 g/l
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理60 JanusgreenB中文名称：詹纳斯绿B英文名；小鼠肝细胞线粒体的JanusgreenB染色及观；1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯；（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、；（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿；（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细；目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命；应用：研究 Janus green B 中文名称：詹纳斯绿B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。苏铁木精英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。化学式：C30H31N6Cl 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。Cas 编号: MDL 编号: 分子式: 中文别名: 2869-83-2 MFCD00011758 C30H31ClN6 EINECS 编号: 220-695-6 Beilstein 编号: 分子量: 511.06 詹姆斯绿B，健那绿，健那绿B，双氮嗪绿，真那氏绿，詹姆斯绿，烟鲁绿，3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium 英文别名: chloride Diazin Green S Union Green B C.I. 11050 棕色呈深棕色结晶性粉末，溶于水呈蓝色，微溶于醇。常用作线粒体专一性活体性状: 染色剂. 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态. 用途: 贮存: 联合国编号: Risk: Safety: Hazard: 用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂。密封干燥保存。S24/25 小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双
微生实验报告 姓名：王晶晖 专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种：金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂：草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚：乙醇=7:3），香柏油。 3、器材：废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片：取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干：让涂片自然晾干。 3．固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰（通常2~3次）固定（具体温度以不烫手为宜）。 4．染色：将固定过的涂片加复红染色1~2min 5．水洗：用水洗去涂片上的染色液。 6．干燥：将吸过地涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 7．镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上滴加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌形态。 （二）革兰氏染色
细胞生物学实验报告 小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 1. 实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿 B 给小鼠的肝细胞线粒体染色。 2. 实验用品： （1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴 管、双凹载玻片 （2）实验药品：蒸馏水、Ringer 液、詹纳斯绿 B 染液 （3）实验材料：小鼠 3. 实验原理： （1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。这种染色方法常用的是化学染料。 目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化 学变化以致细胞的死亡。 应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。 （2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料 被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内 某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离 子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子， 这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论 上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一 般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质( 如卵磷脂、 胆固醇等) 的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B) 和中性红(neutral red) 两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别 具有专一性。 （3）选择活体染料的原则： ①性质：有电化学特性 ②低毒、无毒 ③低浓度：如实验中使用的是1/5000 的詹纳斯绿 B 染液 ④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色 ⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。 4. 实验步骤： （1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，取出肝脏。选取边缘较薄 2 的肝组织0.5cm 放入小烧杯中，用Ringer 液冲洗去血污。 （2）滴加1/5000 的詹纳斯绿 B 染液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液染色20~30mins。以组织边缘被染成蓝绿色为准。 （3）吸去染液，重新把组织置于小烧杯中。滴加Ringer 液约0.5mL，用剪刀充