丁基苯酞对低糖低氧引起神经细胞内钙升高的作用
熊 杰,冯亦璞3
(中国医学科学院,中国协和医科大学药物研究所,北京100050)
摘要 目的:探讨抗脑缺血新药丁基苯酞(NBP)对脑缺血过程中细胞内游离钙升高的影响及其作用机制。方法:采用低糖低氧损伤胎鼠或新生鼠神经细胞以模拟脑缺血,用Fura22/AM作荧光指示剂,观察手性丁基苯酞对神经细胞内游离钙升高的抑制作用,并用内钙释放剂thapsigargin,外源性谷氨酸,高K+及钙离子载体A23187作工具药,对其作用环节进行分析。结果:d2,l2,dl2丁基苯酞能完全抑制低糖低氧造成的神经细胞内钙升高。手性NBP 能降低thapsigargin引起的内质网钙库释放,d2NBP还对谷氨酸引起的内钙升高表现出抑制作用。结论:丁基苯酞抑制低糖低氧条件下神经细胞内钙升高的作用环节主要是抑制细胞内钙库的释放。
关键词 丁基苯酞;低糖低氧;细胞内钙;钙离子荧光指示剂(Fura22/AM)
丁基苯酞(dl232n2butylphthalide,dl2NBP)是我所研制的抗脑缺血一类新药,药效学研究表明有良好的抗脑缺血活性[1～5]。以往在大鼠尾动脉环实验中曾发现dl2NBP能抑制去甲肾上腺素引起的细胞[Ca2+]i升高作用,而对外钙入胞无影响[6],同时大量实验还提示NBP对脑缺血时细胞内钙升高可能有抑制作用[7]。为此,我们用Fura22/AM作为荧光指示剂[8],采用双波长荧光分光光度法,观察了低糖,低氧或低糖低氧处理对大鼠胎鼠神经细胞[Ca2+]i水平的影响及手性丁基苯酞(d2,l2NBP)和消旋丁基苯酞(dl2NBP)的作用;并用内钙释放剂Thapsigargin,外源性谷氨酸,高K+以及钙离子载体A23187作工具药,分析了NBP对[Ca2+]i影响的可能作用机制。
材料与方法
动物 清洁级Wistar孕鼠,孕期16～18d,购于中国医学科学院实验动物繁殖中心。
药品与试剂 d2,l2和dl2NBP,由本所合成室杨靖华教授提供,黄色油状液体,纯度>96%。先溶于少量DMSO中,再加入4倍体积双蒸水,制成10-2mol?L-1的混悬液,再以双蒸水依次稀释至
收稿日期:1999204226
基金项目:国家科委1035工程重大项目基金(942ZD201)和国家自然科学基金重大项目基金资助项目(29790122) 3联系人 Tel:(010)63165173,Fax:(010)63017757,
E2mail:fengpy@https://www.doczj.com/doc/df9388640.html, 10-3,10-4和10-5mol?L-1。Fura22/AM,本所合成室提供,溶于DMSO成1mmol?L-1溶液,-20℃分装保存。EGTA[ethylenegly colbis2(22aminoe2 thyl2ether)tetracetic acid]购于北京化学试剂公司,溶于3mol?L-1Tris中,成015mol?L-1溶液。BSA 和M K2801,购于Sigma公司;Triton X2100,购于香港FARCO化学公司;谷氨酸,购于Serva公司,均溶于019%生理盐水。Thapsigargin,购于Sigma公司,完全溶解于DMSO成3mmol?L-1溶液,-20℃分装保存,使用时以DMSO稀释。小于3μmol?L-1的稀释液只可一次性使用[12]。A23187,购于Sigma 公司,溶于DMSO。高糖(含D2葡萄糖415g?L-1)和低糖(含D2葡萄糖110g?L-1)DM EM培养基,购于GIBCO BRL公司。Hanks液(mmol?L-1): NaCl137,KCl5,CaCl2113,MgSO4?7H2O018, Na2HPO4?H2O016,KH2PO4014,NaHCO3310, G lucose516,p H712。
仪器 F24010双波长荧光分光光度计,日本Hitachi公司。
方法 Wistar孕鼠以10%水合氯醛(360 mg?kg-1,ip)麻醉后,取出胎鼠7～8只。将完整大脑半球置高糖DM EM中制成细胞悬液,经200目细胞筛过滤3次,经1000r?min-1离心5min,去上清液,正常对照组细胞悬浮于高糖DM EM中,低糖低氧组悬于Ar2饱和的低糖DM EM中,并以封口膜密闭。细胞数均在5×106个?mL-1,给药组同时加入药物,置37℃,含5%CO2环境中处理。处理后的样本经1000r?min-1离心5min,倾去上清液,所得
细胞重新悬浮于等体积Hanks液中,常规进行负载,清洗和细胞荧光测定。
观察药物作用时,神经细胞直接悬浮于Hanks 液中,进行负载和荧光测定。测定前对样品和DMSO均进行扫描,以消除药品和溶剂自身的荧光干扰。d2,l2或dl2NBP在工具药加入前2min加入样品池。
测定条件 Ex WL1340nm,Ex WL2380nm, Em WL500nm,Ex bandpass5nm,Em bandpass10nm,测定温度37℃。
数据处理 所测得各数据均减去细胞自发荧光值,给药组数据均减去细胞和药物自发荧光值,再代入Grynkiewicz公式[8][Ca2+]i=Kd(R-Rmin)/ (Rmax-R)×(Sf2/Sb2),计算细胞内游离钙浓度。全部数据均采用t检验进行统计学处理。
结果
1 低糖低氧损伤条件的确立
由表1可见,正常胎大鼠神经细胞[Ca2+]i水平较低,为142137±21153nmol?L-1;单纯低氧或单纯低糖处理细胞1h,并不影响[Ca2+]i水平;而低糖合并低氧处理细胞1h,则[Ca2+]i明显升高。
T ab1 Changes in[C a2+]i level in rat fetal neurons subjected to hypoxia,hypoglycemia or hypoxia/ hypoglycemia compared with normal group.H ypo: hypoxia/hypoglycemia
Group[Ca2+]i/nmol?L-1
Normal 142.37±21.53
Hypoxia-1h167.23±23.31
Hypoglycemia-1h140.42±27.17
Hypo.-0.5h249.02±51.9833
Hypo.-1h262.02±21.6133
Hypo.-3h538.04±74.4233
x±s,n=4.33P<0101vs normal.
由低糖低氧处理引起神经细胞内钙升高的时间曲线表明,胎大鼠神经细胞[Ca2+]i水平随低糖低氧时间的延长而持续升高。当处理时间分别为015 h(Hyp.-015h),1h和3h时,细胞[Ca2+]i水平分别达到249102±51198,262102±21161和538104±74142nmol?L-1,与正常对照组均有明显差异。说明神经细胞对低糖低氧损伤的反应极为敏感,短时间(015h)的低糖低氧即可造成[Ca2+]i水平的明显升高,而较长时间(3h)的低糖低氧会引起严重的细胞内钙水平上升。其他实验表明此时细胞损伤严重,功能几乎丧失,不利于药物作用的观察,因而我们选择低糖低氧处理1h作为神经细胞损伤模型,观察药物的作用。
2 NBP对低糖低氧所致神经细胞内游离C a2+升高的抑制作用
由图1可见,d2,l2和dl2NBP对低糖低氧处理1h所致[Ca2+]i升高均有明显抑制作用。其中以l2NBP的作用最强,在011μmol?L-1时可使升高的[Ca2+]i(226161nmol?L-1)降至165118nmol?L-1,在110μmol?L-1时,[Ca2+]i进一步降至129109nmol?L-1,基本接近正常水平(101139 nmol?L-1)。而d2NBP在110μmol?L-1时才出现类似的抑制作用,[Ca2+]i降低至161156nmol?L-1;在10μmol?L-1时,[Ca2+]i恢复到接近正常水平,为134131nmol?L-1。dl2NBP的作用基本介于二者之间,也在110μmol?L-1时才表现出抑制[Ca2+]i升高的作用,使[Ca2+]i由262102降至207165nmol?L-1,在10μmol?L-1时,这一数值进一步降至164126nmol?L-1,基本恢复正常。d2,l2和dl2NBP的作用强度均有一定的量效关系,高浓度时(10μmol?L-1)3者的作用强度趋于一致,均使升高的[Ca2+]i恢复到正常水平。3者的作用表明它们对低糖低氧造成的细胞内钙升高均有较好的逆转作用
。
Fig1 Effect of d2,l2and dl2NBP on the increase of intracellular calcium in rat fetal neurons subjected to1h2hypoxia/hypoglycemia compared with vehicle group. x±s,n=4.3P<0105,##(33)P<0101 compared with normal(vehicle)group.□Normal; Vehicle; 011μmol?L-1; 1μmol?L-1;■10μmol?L-1.
3 NBP对零外钙时Thapsigargin所致胞内C a2+升高的抑制作用
外钙为零时,thapsigargin在2,10和50 nmol?L-1剂量均可迅速引起内质网钙库释放,造成神经细胞[Ca2+]i的升高,但作用并无明显量效关系(图2),只在给药后的1min内可以看出3种浓度下的thapsigargin作用强度稍有不同,达峰时间均在给药后110～115min,峰值均较低,最大内钙增长为4319nmol?L-1,并且作用达峰值后持续时间较短,为115～210min,随后逐渐减弱,而2nmol?L-1剂量组衰减较慢,因此本实验采用该剂量作为观察药物作用的浓度。等体积DMSO对胞内钙水平未见明显作用。
在该条件下,d2,l2和dl2NBP对2nmol?L-1 Thapsigargin所致[Ca2+]i升高均有明显的抑制作用(图3),且dl2和l2NBP的作用比d2NBP要强,在011μmol?L-1时即表现出明显抑制作用,使[Ca2+]i 增加由40180nmol?L-1分别降至26148和30192 nmol?L-1,在110和10μmol?L-1浓度,亦有明显抑制作用;d2NBP的作用出现在110μmol?L-1, [Ca2+]i净增降为35129nmol?L-1,10μmol?L-1时为33117nmol?L-1
。
Fig2 Increasing effect of different concentrations of
thapsigargin(Tha)on[Ca2+]i of neurons in the
absence of extracellular calcium.n=6.(○)DMSO;
(●)Tha2nmol?L-1;(△)Tha10nmol?L-1;(▲)
Tha50nmol?L-1.
Fig3 Effect of d2,l2and dl2NBP on the increase
of[Ca2+]i caused by2nmol?L-1thapsigargin in rat
fetal neurons in the absence of extracellular calcium.
x±s,33P<0101compared with vehicle group.
011μmol?L-1;■1μmol?L-1; 10μmol?
L-1.
4 NBP对外源性谷氨酸诱导胎鼠和新生鼠神经细
胞内钙升高作用的影响
结果见表2。200μmol?L-1谷氨酸虽能引起胎
鼠(孕期16～18d)神经细胞[Ca2+]i升高,且与正
常组相比也有显著性差异,但程度较小,净增值小于
30nmol?L-1。在谷氨酸刺激的同时给予d2,l2,
dl2NBP共同处理,[Ca2+]i上升的水平并不降低,
10μmol?L-1dl2NBP甚至表现出略有升高的趋势。
总的来说,外源性谷氨酸对胎鼠神经细胞的作用较
小,NBP对此无影响,统计学差异的出现很大程度
上是由于很小的标准误。
而谷氨酸对新生鼠(出生3d)脑的影响强于它
在胎鼠脑的作用。由表2可见,200μmol?L-1谷氨
酸可使[Ca2+]i净升高约80nmol?L-1。此时手性
NBP的作用表现出较大差异,d2NBP能够抑制这种
形式的[Ca2+]i升高,而l2NBP和dl2NBP未见明
显作用。此时M K2801表现出明显抑制[Ca2+]i升
高的作用。
5 NBP对外源性高K+及钙离子载体A23187引起
神经细胞内钙升高的影响
由表3可见,KCl及A23187均可引起胎鼠神
经细胞[Ca2+]i升高,其中KCl的作用较小,50
mmol?L-1浓度时使[Ca2+]i净增53119nmol?L-1,
而钙离子载体A23187的作用极强,011μmol?L-1
浓度即可使[Ca2+]i净增700nmol?L-1,形成严重
的钙超载。d2,l2,dl2NBP在10μmol?L-1水平均
不能使这两种工具药引起的[Ca2+]i升高有所降
低。
T ab2 E ffects of d2,l2and dl2NBP on the increase of[C a2+]i in rat fetal or ne w born rat(3d)neurons induced by200μmol?L-1glutamine
Group Concentration/
μmol?L-1
[Ca2+]i/nmol?L-1
in fetal neurons
[Ca2+]i/nmol?L-1
in new born neurons
Normal 159.28±3.84 269.07±28.28 Vehicle G lutamate200187.23±3.72#345.30±36.30## d2NBP 0.1 186.39±4.36
1.0185.65±5.29
10183.90±5.18 271.83±43.573 l2NBP0.1198.41±7.42
1.0193.77±6.85
10198.71±9.47295.71±76.45
dl2NBP0.1174.49±8.97
1.0197.82±7.84
10217.33±10.463302.27±29.67
M K2801 1.0244.72±25.9333 x±s,n=4.#(3)P<0105vs normal(vehicle)group.
T ab3 E ffect of10μmol?L-1d2,l2or dl2NBP on the increase of[C a2+]i caused by A23187(011μmol?L-1)and K Cl(50mmol?L-1)in the presence of113mmol?L-1extracellular calcium
Group A23187KCl
Normal121.34±15.83 121.34±15.83
Vehicle813.57±84.35174.53±12.53
d2NBP833.92±46.28171.60±14.66
l2NBP892.63±57.32162.37±9.87
dl2NBP825.08±46.68165.83±8.23
x±s,n=4.
讨论
文献报道,缺血缺氧造成[Ca2+]i升高主要源于以下3种机制[9～11]:①能量的耗竭,导致离子稳态破坏,膜去极化,兴奋性氨基酸释放引起受体门控性通道激活,而引起外钙内流;②电压门控性钙通道激活,造成大量胞外钙内流;③线粒体和内质网钙库释放。
本实验用外源性谷氨酸,高K+,钙离子载体A23187及内钙释放剂thapsigargin作工具药,分别分析了NBP对上述3种机制造成的[Ca2+]i升高的影响。①对于外源性谷氨酸所致的[Ca2+]i升高,除d2型外,dl2NBP和l2NBP均不产生抑制作用,说明l2,dl2NBP对NMDA受体的激活影响较小;
②d2,l2或dl2NBP均不能抑制由高K+和钙离子载体A23187引起的神经细胞内钙升高,表明NBP 对电压依赖性钙通道的激活无抑制作用,同时也不影响钙离子载体的作用。本实验中给予高K+处理后[Ca2+]i升高不大,原因可能是由于所用K+浓度偏高,但NBP的这一作用是与我们以前的实验结果一致的[7];③d2,l2和dl2NBP均可部分抑制Thapsigargin引起的[Ca2+]i升高。由于thapsigar2 gin的作用机制主要是通过抑制内质网膜上不依赖于IP3的Ca2+2A TPase,促进内质网释放贮存Ca2+,因而说明d2,l2和dl2NBP对内质网钙库的释放均有抑制作用。所有这些结果表明NBP对受体门控(d2NBP除外)和电压门控性钙通道激活引起的[Ca2+]i升高基本无影响,其主要作用是抑制细胞内钙库的释放。
由于d2NBP能抑制低糖低氧造成的[Ca2+]i 升高,同时还对谷氨酸所致新生鼠神经细胞[Ca2+]i 升高表现出抑制作用,表明在低糖低氧时,d2NBP 的作用至少部分是由于它抑制了NMDA受体门控型钙通道。可见dl2NBP抑制低糖低氧造成的[Ca2+]i升高,部分是由于d2NBP对NMDA受体门控型通道的抑制。实验结果还显示新生鼠脑与胎鼠脑对兴奋性氨基酸(excitotic amino acid,EAA)的反应性不同,胎鼠脑有更强的EAA抗性,可能是由于新生鼠脑的谷氨酸受体门控型钙通道发育较完善[17]。
大量文献和我们已有的工作都表明,在脑缺血和低糖低氧过程中,线粒体的结构和功能都受到很大损伤,内膜通透性增大,膜电位减小,呼吸链复合酶活性降低,能量供应急剧减少,这些作用导致线粒体对钙离子的摄取和储存能力下降。由于NBP能够改善脑缺血和低糖低氧细胞内的能量供应,并直接作用于线粒体,改善其膜电位和呼吸链功能[9],推测它必将大大增强线粒体对Ca2+的摄取储存能力,从而使[Ca2+]i水平降低。这一推论尚有待今
后工作的进一步证明。
综合以上分析,d2,l2和dl2NBP均能完全抑制由低糖低氧引起的神经细胞[Ca2+]i升高,因而减少由[Ca2+]i升高造成的细胞损伤,发挥其良好的脑保护作用。对其作用机制研究表明NBP主要通过抑制细胞内钙库释放来降低[Ca2+]i,d2NBP还可通过抑制NMDA受体的激活来降低[Ca2+]i,也可能包括对能量状态的改善作用,但没有对电压依赖型钙通道的抑制作用。
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EFFECTS OF32n2BUTYLPHTHALIDE ON THE INCREASE OF
INTRACELL U LAR CALCIUM IN NEURONS SUBJECTED TO
H YPOXIA AND H YPOG LYCEMIA AND ITS MECHANISMS
Xiong Jie(Xiong J)and Feng Yipu(Feng YP)
(Instit ute of M ateria Medica,Chi nese A cadem y of Medical Sciences and
Peki ng U nion Medical College,Beiji ng100050)
ABSTRACT AIM:To study the decreasing effects and the mechanisms of d2,l2and dl2butylphthalide (NBP)on intracellular calcium([Ca2+]i)in neurons subjected to hypoxia and hypoglycemia.METH ODS: Neurons were prepared from fetal or newborn rat brain and Fura22/AM was used as fluorescence indicator to study the actions of NBP on[Ca2+]i.Thapsigargin,glutamine,KCl or calcium ionpore A23187,which can induce increase of intracellular calcium,were used as tool drugs to analyze the mechanisms of the action of chiral NBP.RESU LTS:d2,l2and dl2NBP were shown to significantly inhibit the increase of intracellular calcium caused by hypoxia and hypoglycemia.However,chiral NBP was found to have no effect on the increase of [Ca2+]i induced by the tool drugs except thapsigargin.d2NBP seemed to have some decreasing effect on+ glutamate.CONCL USION:The actions of d2,l2and dl2NBP might be mediated mainly by its decreasing effect on the release of calcium from intracellular calcium pool.
KEY WOR DS butylphthalide;hypoxia;hypoglycemia;intracellular calcium;Fura22/AM
Q/ZXJ 对-叔丁基苯酚企业标准 Q/ZXJ 001－2007 对－叔丁基苯酚
前言 对—叔丁基苯酚目前没有国家标准和行业标准，制定本企业标准作为组织生产和检验的依据。本标准附录A为资料性附录。 本标准于2007年6月首次发布并实施。 本标准自发布之日起，有效期限三年，到期应复审。 有效期限三年 本标准由淄博市旭佳化工有限公司提出。 本标准起草单位：淄博市旭佳化工有限公司。 本标准主要起草人：宗云光、于松年、潭春祥。
对－叔丁基苯酚 1 范围 本标准规定了对－叔丁基苯酚的要求、试验方法、检验规则以及标志、包装、运输和贮存。 本标准适用于以苯酚与叔丁醇为原料，经反应、水洗、结晶、离心分离、干燥后制得的对－叔丁基苯酚。该产品主要用作合成抗氧剂，也可用作橡胶、硝化纤维的稳定剂等。 分子式：C10H14O 分子量：150.22 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用与本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 190 危险货物包装标志 GB/T 191—2000 包装储运图示标志 GB/T 6678-2003 化工产品采样总则 GB/T 6679-2003 固体化工产品采样通则 GB/T 9722-1988 化学试剂气相色谱法通则 GB 6283 化工产品水分测定卡尔费休法 3 要求 对－叔丁基苯酚产品的控制项目指标应符合表１的要求。 表１ 4 试验方法 4.1 鉴别试验 鉴别试验与质量分数的试验同时进行，试样中与标样中对—叔丁基苯酚的保留时间相对差值不大于1.5%。 4.2 外观的测定 将试样置于玻璃表面皿中，目测。 4.3 对－叔丁基苯酚质量分数的测定 4.3.1 方法提要 气相色谱法：试样用甲醇溶解，用毛细管和FID检测器，对试样中的对－叔丁基苯酚进行气相色谱分离和测定，用带校正因子的面积归一法进行计算。 4.3.2 试剂与材料 ──对—叔丁基苯酚标样：已知准确含量，≥99.0%；
对叔丁基苯甲酸合成工艺总结说明书 冯勇2010-12-14 对叔丁基苯甲酸(PTBA)又名:对特丁基苯甲酸、4一叔丁基苯甲酸、4一特丁基 苯甲酸等，为无色针状结晶或结晶粉末，是一种重要的有机合成中间体。它的主要用途有:用作生产醇酸树脂的改进剂;用作切削油、润滑油添加剂;用作聚丙烯成核剂;用作食品防腐剂;聚酯聚合作用的调节剂;它的钡盐、钠盐、锌盐等可用作聚乙烯的稳定剂;也可用于汽 车除臭剂的添加剂、口服药物的外膜、合金防腐剂、润滑添加剂、聚丙烯成核剂、聚氯乙烯热稳定剂、金属加工切削液、抗氧剂、醇酸树脂改进剂、助焊剂、染料及新型防晒剂;它还用于生产对叔丁基苯甲酸甲酷，广泛应用于化学合成、化妆品、香精香料等行业。 一.目前常见对叔丁基苯甲酸合成方法： 1.1无溶剂液相氧化法 以对叔丁基甲苯(PTBT)为原料，醋酸钻为催化剂，无溶剂液相氧化法合成对 叔丁基苯甲酸(PTBA)。用40%乙醛作引发剂可以明显缩短诱导期，反应的适宜温 度为170℃，反应100min后PTBA产率为50%，其选择性为98%，确定了在170℃ 下的反应级数为一级，氧化反应的速率仅与PTBT的浓度有关。 1.2 硝酸氧化法 粗品对叔丁基苯甲酸的制备:在500mL高压釜中，加入26mL(0.2mol，29.69) 对叔丁基甲苯，68%的26mL(0.4mol，379)硝酸，加215mL水，盖好釜盖。开动反应搅拌装置，升温至180℃，反应sh。通冷水冷却，打开反应釜，大部分固体沉积于反应釜底部，少时附着于反应釜冷却管上。收集固体，过滤，干燥，得34.59，产率95.5%。 对叔丁基苯甲酸的提纯:称取109氢氧化钠，加90mL水，配成10%的氢氧化 钠溶液，将上述固体加入其中，待充分溶解后，过滤，滤液用盐酸调pH至3左右， 此时有大量结晶出。静置，过滤，得33.49，产率98.2%。 该方法虽然产率高，但硝酸对设备腐蚀性大，反应过程中易产生氮氧化物等副产物，对环境污染较大，反应压力高达3.6Mpa。 1.3醋酸溶剂催化氧化法合成对叔丁基苯甲酸 以对叔丁基甲苯为原料，醋酸钻做催化剂，醋酸为溶剂，溴化钠为引发剂，80—100℃之间反应，该方法为国际上通用合成方法。具有反应条件温和，溶剂和催化剂容易回收利益等特点。 1.4微波辐射合成对叔丁基苯甲酸 在250mL三颈烧瓶中，依次加入6mL对叔丁基甲苯，8.49高锰酸钾，1.09节 基三乙基氯化钱，100mL水，遥匀，置入微波反应器中，装上电动搅拌器、回流冷 凝管和温度计，调节微波辐射功率660W，连续辐射50min，反应结束后，抽滤除去 二氧化锰，所得滤液浓缩后冷至室温，加入盐酸调至pH=2一3，冷冻过液析晶。得粗 对叔丁基苯甲酸，精产品用甲苯重结晶得5.169白色针状晶体，产率82.6%。熔点164一166℃。 1.5高锰酸钾氧化法合成对叔丁基苯甲酸 对叔丁基甲苯的合成:在装有回流冷凝管和电动搅拌器的250mL三口烧瓶内加 入经无水氯化钙干燥过的甲苯和粉状三氯化铝309，在5一8℃将409干燥的叔丁醇缓 慢地滴入反应，将反应液移到500mL的烧杯中，倒入约2009碎冰，分层，用盐水 洗涤后再减压除去剩余甲苯。 对叔丁基苯甲酸的合成:在装有回流冷凝管和电动搅拌器的500mL三品烧瓶中
国家级一类新药，国家科委生命科学技术发展中心1035工程重大项目成果，国家自然科学基金重大项目成果绿色植物性药品，具有出色的安全性单一体结构，同时具有多种药理作用，全面治疗缺血性脑卒中明显减少梗塞后神经功能缺失、改善患者生活能力状态。 全面的药理作用缩小脑梗塞面积、改善神经功能缺失改善局部脑血流量，改善脑微循环改善脑缺血能量代谢耗竭减轻脑缺血所致脑水肿抗血栓形成和抗血小板的聚集改善脑缺血记忆障碍有针对性的适应症：急性缺血性脑卒中显著的临床疗效改善脑缺血区微循环，增加局部脑血流；明显减轻缺血性脑水肿；改善能量代谢；明显缩小脑缺血的梗塞面积；无需分期，全程安全应用。 【英文名】Butylphthalide Soft Capsules 【汉语拼音】Dingbentai Ruanjiaonang 【主要成分】本品成份为丁苯酞，其化学名称:消旋-3-正丁基苯酞(简称丁苯酞或记作NBP)。 【化学结构式】※[图片:5169.BMP]※ 【分子式】C12H14O2 【分子量】190.24 【性状】本品为软胶囊，内容物为淡黄色或黄色油状液体。 【药理毒理】药理作用: 丁苯酞为人工合成的消旋正丁基苯酞，与自芹菜籽中提取的左旋芹菜甲素的结构相同。临床研究结果显示，丁苯酞(与丹参注射液静脉滴注联合应用)对急性缺血性脑卒中患者中枢神经功能的损伤有改善作用，可促进患者功能恢复。动物药效学研究显示，丁苯酞可阻断缺血性脑卒中所致脑损伤的多个病理环节，具有较强的抗脑缺血作用，可明显缩小大鼠局部脑缺血的梗塞面积，减轻脑水肿，改善脑能量代谢和缺血脑区的微循环和血流量，抑制神经细胞凋亡，并具有抗脑血栓形成和抗血小板聚集的作用。丁苯酞可能通过降低花生四烯酸含量，提高脑血管内皮NO和PGI2的水平，抑制谷氨酸释放，降低细胞内钙浓度，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等机制发挥上述药效作用。毒理研究重复给药毒性:大鼠经口给药 120mg/kg、250mg/kg、500mg/kg，连续6个月，血糖(各剂量组)、胆固醇(高、中剂量组)明显高于对照组，停药后可恢复正常。犬经口连续给药6个月，剂量分别为80、500mg/kg/天，高剂量组动物体重增加缓慢，肝脏明显增大，肝细胞空泡样肿大，血液碱性磷酸酶活性明显增加，停药后上述表现恢复正常；小剂量组动物仅出现唾液分泌增加。遗传毒性:丁苯酞Ames试验、中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体畸变试验及小鼠微核试验结果均为阴性。生殖毒性:一般生殖毒性试验中，雌、雄动物经口给药(雌性动物为交配前给药二周，受孕后继续给药15天，雄性动物连续给药8周)80mg/kg、200mg/kg和500mg/kg，结果对亲代动物生育力无明显影响，未表现出明显胚胎毒性和致畸作用，仅高剂量组动物摄水量明显增加，给药后前几天出现流涎、爬伏症状。围产期生殖毒性试验中，经口给药80mg/kg、200mg/kg和500mg/kg，结果高剂量组动物出现妊娠期延长趋势，其中一只孕鼠难产(剖检为死胎)，少数动物无乳汁分泌，并出现仔鼠(４日龄)存活率下降，仔鼠(４日至3周龄)体重明显下降；高剂量组F1 代大鼠斜板试验和悬垂试验分数降低(反映协调平衡能力)，F2代仔鼠骨骼发育有一定延迟；中、低剂量组未见明显影响。 【药代动力学】１、人体药代动力学中国健康男性受试者单次口服不同剂量丁苯酞软胶囊的I期药代动力学研究: 受试者 分为3组，分别口服丁苯酞软胶囊100mg、200mg、400mg，于给药前(0小时)和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24采集血样进行血药浓度测定，结果:100mg、200mg剂量组中，均有一些受试者在末端的一个或多个采样点样品的血药浓度在检测限以下。在进行T1/2统计时，100mg组、200mg组、400mg组分别有3个、8个、12个完整受试者。丁苯酞血浆浓度平均达峰时间分别为0.88，1.25和1.25小时；平均峰浓度分别为78.7±115.8，204.7±149.0和 726.6±578.7ng/ml；平均消除半衰期分别为12.46±2.50，11.84±4.09，7.52±1.32小时；平均AUC0-t分别为93.2±114.0，323.8±201.0，1314.2±965.7ng·hr/ml。餐后给予200mg丁苯酞，达峰时间从约1小时推迟至约4小时；达峰浓度从204.7ng/ml 降至67.0ng/ml；平均AUC0-t和AUC0-∞分别从323.8ng·hr/ml和460.5ng·hr/ml减少到136.8ng·hr/ml和193.6ng·hr/ml。空 腹和餐后给予200mg丁苯酞在Tmax、Cmax、AUC0-∞均有统计学显著差异(P<0.05)，说明食物影响丁苯酞的吸收。中国健康男性受试者多次口服丁苯酞软胶囊的I期药代动力学研究: 每天口服四次丁苯酞软胶囊，每次200mg，共服药13次，结果显示:
4-叔丁基苯氯磺酸酯的合成试验报告 一、目的 在实验室验证、优化4-叔丁基苯氯磺酸酯的合成工艺路线。 二、原理 主反应： OH NaOH ONa 2 OSO 2CL SO 2CL ONa 付反应： OH OH SO 22 CL 三、物化数据 四、合成步骤及反应现象 1． 在500ml 的四口烧瓶中加入96%的氢氧化钠10.5克（0.25mol ），40ml 的水，37.6克叔 丁基对苯酚（0.25mol ），搅拌加热至100℃直至酚溶解。 实验现象：酚盐的的制备时，注意反应液是否完全溶解于水溶液中，保证酚完全生成钠盐。反应液应为黄绿色透明状，并有泡沫产生。 2． 溶解后等温度稍降，加入正辛烷200ml 并加装分水器，搅拌下加热至回流，分水3小时。 3． 将水分完全除尽，大约蒸去10ml 的正辛烷，剩余物降温至室温备用。 实验现象：分水时一定将水分完全除尽，约为3~4小时，分完水后反应液呈乳白色泡沫状固体。 4． 将剩余物预冷至- 40℃以下，然后在滴液漏斗中加入33.75克磺酰氯（0.25mol ），搅拌下 缓慢滴加，并控制温度在- 35℃以下，反应约4小时。 实验现象：成酯反应的反应温度尽可能在-35℃以下，温度高易反应生成付产物，反应完成后升温到室温反应液呈黄色粘稠液体，内有白色沉淀。 5． 反应完成后升温至室温，反应液进行减压抽滤（抽滤过程很慢），滤液先蒸去正辛烷后
再进行减压蒸馏并收集100~130℃/1mmHg的馏分。 实验现象：馏出液为淡黄色透明油状物，4℃静止过夜有白色针状晶体产生。6．馏出液4℃静止过夜，析出白色固体，过滤，取样分析。 7．滤液再进行减压蒸馏，并收集114~116℃/1mmHg的馏分，取样分析。 实验现象：产品为淡黄色透明油状物。 由于反应1、4反应温度较高，致使反应收率较低。 在-35℃以下反应，收率可以达到60%。 六、检测结果： 实验1取样进行HNMR检测，结果附后。 七、小试工艺流程图
文献综述 3-烃基苯酞类成分的研究进展 专业年级07应用化学学院环生学院学生姓名胡艳学号2007124135 指导教师汪程远职称博士 日期2011年3月3日
3-烃基苯酞类成分的研究进展 摘要：苯酞(Phthalide)类小分子化合物广泛存在于传统中药及天然植物中，并且很多具有很好的生理活性，是一种极具开发价值的化合物。特别是3-烃基苯酞类成分，其典型代表是3-正丁基苯酞( 3-n-butylphthalide , 简称丁苯酞或记NBP)，又名芹菜甲素，其结构见（I），是芹菜及其籽中的主要有效成分，在当归、川芎、藁本、茶芎等活血中药中也大量存在。以下是对一些特别的苯酞类化合物的化学成分、来源、药理成分及其产品的应用作的一些概括。 关键词：苯酞，丁苯酞，化学成分，来源，药理，产品应用； 1.化学成分 苯酞类成分（Phthalides）是指具有苯酞母核的结构的一类化合物，又系内酯类化合物。 苯酞类成分大致分为三类——简单苯酞类、烃基苯酞类、二聚苯酞类 简单苯酞类：油状物，个别为晶状，熔点较低【1】; 烃基苯酞类：油状物，少数有晶形【2-3】，如C12H12+2n O3（n=0,1,2）; 二聚苯酞类：结晶性，多为藁本内酯的二聚物; 3-丁烯基苯酞是从当归等药用植物中分离得到的化合物，系苯酞类似物，具有五元环内酯结构。3-丁烯基苯酚及其类似物3-乙烯基苯酞、3-丙烯基苯酞、3-异丁烯基苯酞和3-正丁基苯酞对动物气管平滑肌均具有显著的松弛作用，3-丁烯基苯酞的带羟基的类似物也有明显的生物活性【17】。由于在现实生活中合成分离得到丁苯酞较其它3-烃基苯酞容易，故我们接触到3-正丁基苯酞（丁苯酞）较为常见一些。 3-正丁基苯酞（丁苯酞）与藁本内酯的理化性质较相似【4】，稳定性也比较差，特别是在室温下放置极易发生异构化。丁苯酞和藁本内酯（Ligustilide）一典型代表3-烃基苯酞[结构见（II）]结构相似，，3-烃基苯酞是当归、川芎等两种传统活血中药的主要指标成分，其含量高达1%以上。 O O O
丁基苯酞对双孔钾离子通道TREK-1的作用及在低灌注脑缺血中 相关药理学研究 双孔钾离子通道(Tandem-Pore-Domain Potassium Channels, K2P)是近年发现的一类新型钾离子通道超家族。它们在结构上与传统的钾离子通道不同,具有独特的4次跨膜片段(M1～M4)和两个孔道结构域(P1和P2),即4TMS/2P结构。 目前发现的双孔钾通道共包括17个成员,根据结构和调节方式的不同可分为TWIK、THIK、TASK、TALK、TREK和TRESK六大类。TREK-1是双孔钾离子通道中研究最为广泛的一类离子通道。 该钾通道电流具有自发性、无电压和时间依赖性、无失活并且对于经典的钾通道阻断剂(如4-AP、TEA、Cs+)不敏感等特性。既往研究发现,TREK-1通道在中枢神经系统的神经元上具有特异性的分布。 它既可以被许多种物理和化学因素调节,还可以被多种神经保护剂所调节,在脑缺血、癫痫、疼痛和抑郁等多种疾病状态中发挥着重要的作用。丁基苯酞(或丁苯酞,3-n-butylphathlide, NBP)是中国医学科学院药物研究所开发的一类新型神经保护药物,可以通过作用于脑损伤病理生理过程中的多个靶点而发挥脑保护作用。 本研究组以往研究也已表明TREK-1双孔钾通道在急性和慢性脑缺血中都发挥着重要作用。然而抗脑缺血药物丁基苯酞是否能够调节TREK-1双孔钾通道,双孔钾通道TREK-1是否是丁基苯酞抗脑缺血中一个新的作用靶点,目前都还未见报道。 本研究中我们首先研究了丁基苯酞三种旋光异构体对TREK-1双孔钾离子通道电流的调节作用,并探讨了相关机制,然后建立了急性大鼠低灌注脑缺血损伤
专业方向实验 分子筛气相催化甲苯与叔丁醇合成叔丁基甲苯 一、实验目的：1、了解气固相催化反应原理 2、掌握积分反应仪器的使用 3、学会操作气相色谱进行样品分析 二、实验原理： 叔丁基甲苯作为一类重要的化工中间体，其临、间、对三种同分异构体均具有重要用途，特别是对叔丁基甲苯，其氧化后得到的对叔丁基苯甲酸，是一种重要的有机合成中间体；工业上，合成叔丁基甲苯的生产工艺多采用甲苯和异丁烯作为反应的原料，采用间歇反应，液体酸作催化剂如浓硫酸、HF ，但此类催化剂存在对环境污染严重且催化剂回收效率不高等缺点。近年来，随着人们环保意识的不断提高，利用率高、对环境污染小且具有可灵活调变的酸性质、特殊的孔道结构的固体酸催化剂逐渐被研究者关注。分子筛催化剂因具有很多优点而被广泛研究。 反应方程式： 主反应： H 3C + C CH 3 CH 3 CH 3 OH H 3C C(CH 3)3 + H 2O 副反应：甲苯歧化反应 H 3C H 3C CH 3 H 3C CH 3 CH 3CH 3 H 3C +H 3C H 3C + H 3C H 3C + 叔丁醇分子间脱水反应 C CH 3 H 3C CH 3 O H C CH 3 CH 3 CH 3 OH + C CH 3 H 3C CH 3 C CH 3CH 3 CH 3 O 三、反应机理：烷基化试剂首先在酸催化剂的作用下生成活泼的有机中间体—正碳离子，然
后正碳离子通过亲电取代反应进攻甲苯苯环，最终形成烷基化产物对叔丁基甲苯。四、实验内容： 催化剂：（写上你所使用的催化剂） 1、考察不同（反应温度、进料体积空速、甲苯与叔丁醇摩尔比）【在三个条件中选取一个】对催化剂的催化性能的影响。主要考察指标有：反应温度选150℃、170℃、190℃、甲苯与叔丁醇摩尔配比选1:1、4:1、6:1、进料体积空速选1ml/g·h、4ml/g·h、6ml/g·h 【三个条件中选取对应的一个】注意：一共九个小条件，每个小组选择一个小条件，每个班级是一种催化剂。 2、通过气相色谱进行成分分析。 五、实验流程图： 1-原料瓶、2-真空泵、3-预热器、4-保温带、5-反应管、6-冷凝管、7-冷阱 六、实验步骤： 1. 使用电子天平称取4g催化剂，催化剂事先过40目筛网。 2. 清洗积分管式反应器，将催化剂转入反应管中（保证催化剂位于反应管最佳恒温段）。 3. 打开控温表，按事先定好的反应条件调节反应管温度，预热器温度（其温度要高于原料和反应物所有物质的沸点，便于是混合物中所有组分充分气化后经过催化剂）。 4. 打开氮气钢瓶，吹扫10分钟，使得氮气经过反应管道，以便吹扫出存留的原料及空气杂质。 5. 打开微量进样泵，按照一定比例把原料甲苯和叔丁醇混合起来，放入原料罐中。按一定进料体积空速调节进样泵数值。
关键词丁苯酞软胶囊药理作用药动学研究临床评价 丁苯酞软胶囊（butylphathlide soft capsules），商品名恩必普（nbp），又称丁基苯酞，其化学名称为消旋-3-正丁基苯酞（3-n-butylphathlide），分子式c12h14o2，相对分子质量190.24。dl-3-正丁基苯酞最初是由杨峻山从芹菜籽中提取出来的左旋体，故又名芹菜甲素（apium graveolens linn）。后经人工合成为消旋体。临床主要用于治疗轻、中度急性缺血性脑卒中。2002年取得国家新药证书，经过临床试验由石药集团开始生产应用与临床。 药理作用 20世纪90年代，著名神经药理学家冯亦璞对丁基苯酞进行了一系列深入研究，发现其多种脑保护作用与机制，同时也有其他学者对其进行研究试验，具体如下。 抑制血小板、血栓形成方面：缺血性脑病发生后，血液处于高黏、高凝、高聚状态，血栓形成是脑缺血性疾病的主要原因之一。因此，抗血栓治疗在防治脑血管疾病中有重要意义。冯亦璞等［4］用半血栓形成术及比浊法，观察左旋、右旋和消旋丁［6］基苯酞（l-nbp，d-nbp，dl-nbp）及阿司匹林，ticlopidine对大鼠血栓湿重和血小板聚集的影响，结果显示：nbp 3种结构形式均有抑制血小板聚集和抗血栓形成的作用。其中：l-nbp作用最强，d-nbp作用较弱，dl-nbp介于l-nbp和d-nbp之间。nbp，asp和ticlopidine对不同类型的血小板聚集诱导剂的作用强度有区别，表明其可能作用于不同的途径［1］。徐少峰等［2］研究了l-nbp、d-nbp和dl-nbp在小鼠急性肺栓塞实验中的作用。结果显示：l-nbp，dl-nbp均明显增加肺栓塞小鼠的生存率，作用强度为阿司匹林的65%，但d-nbp没有明显作用。另外，徐皓亮等［3］也进行了大鼠体内抗栓试验和体外抑制血小板功能，结果显示：3种nbp旋光异构体中，l-nbp的作用强度最为显著，对其机制初步分析，认为l-nbp有抑制血小板5-ht释放，升高血小板内camp水平的作用，其抗血栓机制于其他抗血栓药不同。 抑制神经细胞的凋亡：脑缺血过程中存在神经元凋亡，某些药物可使神经细胞凋亡过程减弱或停止，阻止梗死面积的扩大。董高翔等［4］研究了丁基苯酞对低氧低糖诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的作用，用流式细胞术检测dna含量及凋亡细胞百分率，dna琼脂糖凝胶电泳和原位末端标记（tunel）检测dna断裂，透射电镜观察细胞形态学变化。结果表明，丁基苯酞能降低神经细胞凋亡百分率与形态学改变，抑制dna在核小体间的断裂，从而把维持正常功能的神经元从凋亡中拯救出来。雄杰等［5］研究了丁基苯酞对低氧低糖引起神经细胞内钙升高的作用，结果显示：1-nbp和dl-nbp均能完全抑制有低氧低糖引起的神经细胞ca2+ 升高。而大量文献的已有研究表明，在脑缺血和低糖低氧过程中，线粒体的结构和功能都受到很大损伤，对钙离子的摄取和储存能力下降。而nbp可能大大增强线粒体对ga2+的摄取存储能力，从而降低ca2+ 水平。因而减少由于ca2+ 升高造成的细胞损伤。 对局部脑缺血引起行为改变的改善作用：刘小光等［6］观察了丁基苯酞对大鼠右侧大脑中动脉阻断（mcao）后行为和脑梗死面积的影响，结果显示：丁基苯酞口服或者静注均能降低局灶型脑缺血大鼠的梗死面积和改善各种神经症状，疗效优于尼莫地平（1.0mg/kg，口服）。胡盾等［7］观察了丁基苯酞对局部脑缺血大鼠记忆障碍的影响，结果表明：nbp 10～100mg/kg 静滴，可以有效的逆转或改善局部脑缺血引起的大鼠学习记忆障碍。这一作用可能是继发产生的，通过显著增加mcao侧纹状体的局部血流量，明显减小缺血区的梗死面积以及改善全脑缺血引起的能量代谢耗竭，从而改善中脑动脉分布区域的神经细胞功能，使因mcao引起的记忆障碍得到改善。 其他作用：丁基苯酞的药理作用十分复杂，它能通过多个环节作用与改善局部循环，缩小梗死面积，减轻脑组织损伤，最终最大程度的恢复神经功能［8～10］。
颅内动脉瘤简介与治疗 简介 被查出患有颅内动脉瘤是一件令人恐惧和绝望的事情。其实颅内动脉瘤并没有人们之前想象的那么罕见。在美国，每50个人当中就有一个被查出患有颅内动脉瘤。每年大约有十万分之八到十（差不多三万）的患者会出现动脉瘤破裂而导致蛛网膜下腔出血。迄今为止，已有一部分新兴的治疗手段给患者带来了希望。这本小册子提供了一些关于颅内动脉瘤的基本知识，同时就患者及其家属关心的一系列常见问题给予解答。 什么是颅内动脉瘤？ 颅内动脉壁局部的薄弱膨出就形成了所谓的颅内动脉瘤，好比是用久了的自行车内胎上鼓起的小包。囊状或是浆果状动脉瘤（因其形状长得像浆果）是其中最常见的类型，这类动脉瘤有一个瘤颈将瘤体、瘤顶与主血管腔连接起来，他们只膨出于动脉壁的一侧。与囊状动脉瘤相比，梭形动脉瘤是比较少见的一种类型，它由局部动脉壁双侧扩张而成，形如梭子，因而不存在明显的瘤颈。 颅内动脉瘤是如何形成的？ 动脉瘤的起病比较隐匿，不易被察觉。遗传性的动脉壁薄弱可能是导致动脉瘤产生一个因素。然而儿童当中动脉瘤的发病率很低，大部分动脉瘤可能是随着年龄增长动脉管壁不断损耗引起的。有时，严重的头部创伤或感染也会导致动脉瘤的形成。目前有许多潜在的危险因素促使动脉瘤的形成，吸烟和高血压是最重要的两个因素。 动脉瘤有什么征兆吗？ 动脉瘤大都很小而且没有任何症状。一部分动脉瘤是在破裂出血引起剧烈头痛或昏迷时被查出，另一部分则是在瘤体变大后压迫神经引起一系列症状（如复视）时被发现。
破裂性动脉瘤 破裂出血的动脉瘤称之为破裂性动脉瘤。当动脉瘤破裂时，血液流入脑组织周围的脑脊液中，这种类型的出血叫做蛛网膜下腔出血。动脉瘤破裂往往会引起突发的剧烈头痛，常被描述成“一生当中最严重的头痛”，还有如严重的恶心和呕吐，颈项强直甚至昏迷等表现。 虽然动脉瘤破裂出血的过程仅仅持续数秒钟，但却能带来一系列严重的后果。出血会损伤脑细胞，压迫脑组织或引起血管狭窄（又称为血管痉挛）。当动脉痉挛引起脑组织缺血时就导致了中风。脑脊液中出现大量血液时会引起脑脊液流速减慢甚至停滞，从而引起脑积水。 未破裂性动脉瘤 大部分动脉瘤都比较小，除非破裂一般不会引起任何症状。未破裂性动脉瘤会因为其他病变如头痛或颈动脉疾病体检时偶然发现。有时，未破裂性动脉瘤会变大压迫颅神经引起一系列症状如复视，眼睑下垂，眼球后疼痛等，但很少引起慢性头痛。未破裂性动脉瘤还会因为伴随有破裂性动脉瘤而被发现，但这种情况不是很常见，因为只有五分之一的患者有多发性动脉瘤。 动脉瘤如何被诊断？ 当怀疑有破裂性动脉瘤时，可以行头颅CT检查，头颅CT可以发现是否有颅内出血，缺点是无法明确出血的原因。在血管中注入对比造影剂后，脑血管显影增强，再通过特殊的成像技术就可以使动脉瘤显形。这种技术叫做CTA（计算机断层扫描血管造影）。 CTA用于诊断破裂性动脉瘤或许已经足够，但是有时血管造影可以更好的显示动脉瘤和颅内血管。在进行血管造影时，首先对腹股沟特定区域进行局部麻醉，然后将一根微导管插入股动脉，之后导管上行通过腹主动脉等大动脉后到达脑部的动脉血管。此时影像师将造影剂通过导管注入脑动脉，使其显影增强，再通过X线透射获取图片。对于未破裂性动脉瘤，同样可以使用CTA和血管造影技术进行诊断。核磁共振成像（MRI）联合核磁共振血管造影（MRA）也可
第49卷 第6期2010年 11月 中山大学学报(自然科学版) ACTA SCIENT IARUM NATU RA L I UM UN I V ERSITAT IS SUNYAT SEN I V o l 49 N o 6 N ov 2010 叔丁基苯咔唑衍生物发光材料的合成与性能研究*池振国,黎小芳,周 林,李海银,许炳佳, 周 炜,张 艺,许家瑞 (中山大学化学与化学工程学院 聚合物复合材料及功能材料教育部重点实验室 广东省教育厅高分子化学与物理重点实验室 光电材料与技术国家重点实验室,广东广州510275) 摘 要:采用W i tti g H orner反应合成了叔丁基苯咔唑衍生物。核磁共振氢谱、红外光谱、质谱和元素分析等表征手段对产物的化学结构进行了确认。利用紫外吸收光谱仪、荧光发射光谱仪、热重分析仪、示差扫描量热仪和电化学工作站对这些化合物的光物理性能、热性能和电化学性能进行了初步表征。实验结果表明:所合成的化合物无论在溶液状态还是固体状态均能发射强烈荧光;化合物具有较高的溶液荧光量子产率(77%~54%);它们的能隙较窄,约为2 9eV;在紫外吸收光谱和荧光发射光谱上,化合物的最大吸收和发射波长与连接基团 有明显的关系;合成的产物均具有非常高的热稳定性,热失重5%的温度(T d )超过470,玻璃化温度(T g ) 超过220。所合成的化合物可望成为高性能发光材料应用于发光器件。 关键词:有机发光材料;叔丁基苯咔唑衍生物;热稳定性;荧光量子产率 中图分类号:O621 3 文献标志码:A 文章编号:0529-6579(2010)06-0068-06 Synthesis and Properties of tert Butyl phenyl Carbazole D erivatives w ith H igh Thermal Stabilities and H igh Fluorescent Q uantu m Y iel ds C H I Zhenguo,L I X iaofang,Z HOU L in,L IH aiy in,X U B ingjia, Z HOU W ei,Z HANG Yi,X U J iarui (PCF M and DSAP M Lab FC M Institute State Key Laborator y of Opt o electr on i c M ateri a ls and Technol o g ies The Sc hool of Che m istry a nd Che m icalEng i n eeri n g,Sun Yat sen Uni v ersit y,Guangzhou510275,Ch i n a) Abst ract:The nove l tert butylpheny l carbazo le derivatives w ere synthesized by W itti g H orner reactions. The che m ica l struct u res o f the derivati v es w ere deter m i n ed by1H NMR,I R,M S and EA ana lyses,and their properties w ere i n vesti g ated by UV,PL,TGA,DSC and CV m ethods.The results sho w ed tha t !the synthesized co m pounds cou l d e m it strong fluorescence e ither i n so lutions or i n solid states and t h e ir fl u o rescent quantum y i e l d s ranged fro m77%to54%;?the co m pounds possessed h i g h ther m a l stab ili ties,and their ther m al deco m positi o n te m peratures and g lass transiti o n te m peratures w ere h i g her than 470and220,respectively;#their m ax i m um absorption and fl u orescence e m issi o n w ave lengths w ere related to the link i n g groups. K ey w ords:o r gan ic l u m inescentm ateri a ls;tert bu tylpheny l carbazo le deri v ati v es;h i g h ther m al stab ili ties;h igh fluorescent quantum y ields 有机发光材料是有机电致发光二极管(OLED)器件的重要组成部分[1-4],它的性能直接影响到器件的性能,如发光效率和使用寿命等,是OLED器件能否真正大规模产业化的关键因素之 *收稿日期:2010-04-15 基金项目:国家自然科学基金资助项目(50773096,51073177);广东省发展平板显示产业财政扶持资金资助项目; 广东省科技计划盗用项目(2007A010500001-2);中山大学引进人才启动基金资助项目;光电材料与技 术国家重点实验室开放基金资助项目 作者简介:池振国(1968年生),男,副教授;E m a i:l chizhg@m a il sysu edu cn
发现-辨识-优化——中药新药设计的核心与关键 （来源：丁香园） 新药的创制是一项系统工程，无论中药还是西药，均包括研究与开发两个阶段。候选药物的确定是区分两个阶段的标志，即在确定候选药物之前为研究阶段，确定之后的工作为开发阶段。所谓候选药物是指拟进行系统的临床前试验并有可能进入临床研究的化学实体（西药）或中药提取物（中药）。研究阶段在新药创制流程中占有重要地位，能否找到合适的候选药物，则决定着该药后期开发的风险和最终是否能成为上市新药。 就西药而言，为了寻求候选药物，提出了以“构效关系”为核心的药物设计（Drug design），其研究的内容是药物发现的中心环节——先导物的发现途径（衍生与优化）以及所涉及的理论、技术和方法。计算机辅助药物设计（Computer-aided Drug Design CADD）在先导化合物的发现和优化方面，已取得了极大的成功[1]。 单一化合物是基于“构效关系”进行设计的，与之相对应，多成分的复方中药除了“构效关系”外，更多侧重基于“组效关系”进行研究设计。所谓中药“组效关系”Combination-Activity Relationship，CAR）是指在不同层次上的中药物质组合与药效活性之间的关联性，系统建模是分析“组效关系”的基本方法。为此，我们认为中药新药设计（Design of New Drug of Chinese Medicine DNDCM）以“组效关系”为核心，围绕饮片层次上的中药新药处方发现，主要有效成分的辨识，提取物（组分或成分层次）的组方优化三个关键环节，以确定高效低毒候选药物为目标，中药新药设计流程，见图1。 综上，就化药而言，研究阶段主要包括：靶标的确定，活性筛选发现先导化合物，先导化合物结构优化等3个环节，其中以上环节中先导化合物的发现和优 化为新药设计，以“构效关系” “组效关系”与“构效关系”是中西药新药研究的主要区别。中药与西药新药研究流程对比，见图2。
二苯醚的制备工艺 由氯苯与苯酚在苛性碱溶液中，以铜为催化剂缩合而得。氢氧化钾、苯酚、氯苯按摩尔比配比1：1.4：1.06混合，加入铜粉，搅拌加热进行缩合反应。反应结束后，用酸处理，分出二苯醚油层，经减压蒸馏得到二苯醚成品。也可将氯苯和苯酚在氢氧化钠溶液中反应。二苯醚的另一工业来源是作为氯苯水解制苯酚时的副产品。用氢氧化钠进行氯苯水解的过程中，约有10%的氯苯转化成二苯醚，有些工艺这个比例可达20%。通过萃取精制即得二苯醚产品。 对叔丁基苯甲酸的制备工艺 一种对叔丁基苯甲酸的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：（１）、将甲苯、异丁烯和浓硫酸加入到反应釜中进行烷基化反应，得到粗品对叔丁基甲苯，烷基化反应的温度为２０－２４℃，时间为１０－１２小时，然后将粗品对叔丁基甲苯进行精馏得到对叔丁基甲苯；（２）、将制得的对叔丁基甲苯和复合催化剂加入到反应釜中通入氧气进行氧化反应，得到对叔丁基苯甲酸粗品，反应温度为１１０－１８０℃，时间为１２－２４小时，所述的复合催化剂由醋酸钴和溴化物组成，分别加入反应釜中；（３）、将对叔丁基苯甲酸粗品降温结晶、离心甩干，用对叔丁基甲苯进行清洗，然后将对叔丁基苯甲酸粗品加入甲苯中，升温溶解，再加入活性炭、硅藻土进行脱色，然后降温、结晶、离心，得对叔丁基苯甲酸精品；（４）、将对叔丁基苯甲酸精品经水洗后，用甲苯浇洗、离心、干燥，得对叔丁基苯甲酸成品。
一种合成对异丙基苯酚的新方法研究 采用5%Pd/C作为转移氢催化剂,4-异丙基环己烯酮为氢给予剂,工业双戊烯为氢接受剂和溶剂进行反应,合成了对异丙基苯酚.考察了催化剂用量、反应时间和反应温度对反应的影响,确定了合成对异丙基苯酚的最佳反应条件:原料与5%Pd/C的配比为10∶0.7(质量比)、反应时间为30 min,在174℃回流温度下,对异丙基苯酚的产率可达87%.对催化剂的重复使用次数进行了考察,使用5次后催化剂活性是原来的89.7%. 更多还原 在HZSM-5分子筛上,考察了温度,原料配比,催化剂的装填量,空速及不同硅铝比等对苯酚与异丙醇烷基化反应的影响。在适宜的条件下:T=280℃,WHSV=3.0h-1,Catalyst Loading=0.5g,n(IPA)/n(Phenol)=0.8,苯酚的转化率可达30%以上,邻异丙基苯酚和对异丙基苯酚的选择性分别可达15%和80%。
2.2. 3.4现有对叔丁基苯丙醛生产线生产线 （1）现有对叔丁基苯丙醛生产线工艺流程 ①丙烯醛二脂的制备 在加成反应釜中加入99%的醋酸酐，温度控制为0-10℃滴加99%的丙烯醛，保温反应10个小时，加水和适量碳酸钠将物料洗至中性，本工序有以下反应： 本工序，丙烯醛∶醋酸酐的摩尔比约为1∶1.1；按丙烯醛计，其反应收率大于99%。 本反应在水洗的过程中，加入适量的碳酸钠， 主要就是为了中和未能参加反应的醋酸酐。水洗后的水分离后污水经管线排入污水池待处理，为废水W13。在经过蒸馏结束后有残渣产生，为固废S18。 ②对叔丁基苯丙酯的制备 在傅克反应釜中加入叔丁苯和四氯化钛，在控制温度为-5℃-0℃，加入产品（1）保温5～6小时。静止2 小时放出下层的四氯化钛，用水洗至中性。该工序有以下反应： 本工序，叔丁苯：四氯化钛：产品（1）的摩尔比为 2.5∶0.5∶1；按产品（1）计，其反应收率为97%以上，过量的叔丁苯经过回收作为下次合成时套用。 本工序，水洗时加入适量的碳酸钠，为了洗去和中和残留的醋酸和四氯化钛。该洗物料的水分离后先经过沉淀分去沉淀物（氯化钛）为固废S19，卖给生产四氯化钛厂家，作为再生产之用。污水经管线排入污水池待处理，为废水W14。蒸馏结束后有残渣产生，为固废S20。 CH 2＝CHCHO ＋ CH 3 C O C O O CH 3 CH 2＝CHCH CH 3 C C O O CH 3 O O ＋ TiCl 4 ＋ CH 2＝CHCH CH 3 C C O O CH 3 O O CH 3COOH 2CH ＝CH CH 3 C O O
③对叔丁基苯丙醛的制备 在水解釜中加入甲苯、甲醇（78%）、碳酸钾和产品（2），在控制温度50℃～70℃，搅拌保温4～5小时，用水洗至中性，分馏得对叔丁基苯丙醛。本工序有以下反应； 本工序，产品（2）、甲苯、甲醇和碳酸钾的摩尔比为 1∶3∶2∶0.1 ；按产品计，其反应收率为100%。甲苯不参加反应，回收后套用，在回收的过程中有所损耗。甲醇和产品（2 ）中的(CH 3COO)2醋酸分子结合成醋酸甲酯，经分馏收集作副产物销售。 本工序，水洗几次至中性，其所洗之水收集可作为前两次水洗时套同，以减少碳酸钠的用量，也可减少废水的排放量。为废水W3。 ④蒸馏 经过水洗至中性的物料投入蒸馏釜中，在回流比为1∶1 的条件下，在常压50-75℃收集馏分为甲醇和醋酸甲酯，之后减压55-60℃/20mmHg 收集馏分为甲苯，再收集135-150℃/5mmHg 收集馏分为成品—对叔丁基苯丙醛。放出残渣，蒸馏结束后有残渣产生，为固废S21。 （2）现有对叔丁基苯丙醛生产线物料平衡 新建对叔丁基苯丙醛生产线按每天2批次，年生产600批次，其物料平衡情况详见图2-4和表2-9。 ＋ CH 3OH ＋ 2322CH ＝CH CH 3 C O O 2CH 2CHO CH 3COOCH 3
3通讯作者 丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠海马中p 2CRE B 、 CRE B mRNA 表达的影响 康 康1 ,滕军放23 ,王书霞1 ,邓文静 1 (1信阳市中心医院,河南信阳464000;2郑州大学第一附属医院) [摘要] 采用手术结扎大鼠双侧颈总动脉制作慢性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分成对照组(A 组)、单纯缺血组(B 组)、缺血低剂量治疗组(C 组)、缺血高剂量治疗组(D )。采用免疫组化法检测各组大鼠海马中p 2CRE B 的含量,RT 2PCR 方法检测海马组织中CRE B mRNA 的表达。结果B 组海马CRE B mRNA 、p 2CRE B 蛋白的表达较A 组显著减少;C 、D 组较B 组显著增高,D 组增高更为明显(P <0.05)。认为丁基苯酞可能通过增加海马p 2CRE B 、 CRE B mRNA 的表达,对慢性脑缺血损伤起保护作用。 [关键词] 脑缺血,慢性;环腺苷酸反应元件结合蛋白;丁基苯酞;海马 [中图分类号] R743.3 [文献标识码] B [文章编号] 10022266X (2008)4220028202 环腺苷酸反应元件结合蛋白(CRE B )是细胞内环腺苷酸(c AMP )变化的转录转导因子,具有调节基因转录和蛋白质的合成的作用。磷酸化CRE B (p 2CRE B )是CRE B 的活性状态。近年研究表明,p 2CREB 在缺血性脑损伤中对神经元有重要的保护作 用 [1] 。丁基苯酞(NBP )是从芹菜籽中提取的左旋体,经人工合成为消旋体,是治疗脑缺血的新药。目前关于NBP 治疗急性脑缺血的研究较多,治疗慢性脑缺血的研究较少。2006年7月～2007年7月,我们对慢性脑缺血大鼠海马中p 2CREB 和CREB mR 2NA 的表达情况进行检测,进一步观察NBP 对其表 达的影响,探讨NBP 治疗慢性脑缺血的分子机制。1 材料与方法 1.1 动物与试剂 健康W istar 大鼠80只,雌雄不 拘,12～14月龄,体质量450～550g,由郑州大学实验动物中心提供。p 2CRE B 为兔抗大鼠多克隆抗体 (北京博奥森公司),SP 免疫组化试剂盒、DAB 显色试剂盒(北京中杉试剂公司);柱式Triz ol 总RNA 抽提试剂盒(上海生物工程公司)。1.2 方法 1.2.1 慢性脑缺血模型的制作 采用永久性结扎 双侧颈总动脉制作慢性脑缺血模型。将大鼠随机分成假手术组(A 组)、单纯缺血组(B 组)、缺血低剂量治疗组(C 组)、缺血高剂量治疗组(D 组)各20只。模型成功标准:大鼠在继续饲养过程中,行动活泼,正常吃食饮水,眼部无分泌物,毛色光洁,体质量 增加。排除实验期间死亡的大鼠。造模2个月后,A 、B 组每日给予花生油2m l,C 、D 组每日分别给予60、120mg/kg NBP (用花生油稀释至2m l )灌胃,连 续1个月。 1.2.2 标本采集 术后3个月,以10%水合氯醛 腹腔麻醉,迅速开胸暴露心脏,用生理盐水经左心室快速冲洗,断头后取左侧脑,随后部分置入4%多聚 甲醛(4℃)固定24h,常规脱水,透明,石蜡包埋,制作冠状面切片,用于免疫组化染色;部分放入超低温冰箱,用于RT 2PCR 检测。 1.2.3 检测方法 ①p 2CRE B 检测:采用免疫组化 法,按试剂盒说明书操作,DAB 显色,苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。应用病理图文分析系统进行结果分析,计数海马CA1、CA3及DG 区p 2CRE B 阳性细胞数及检测灰度值。②CREB mRNA 检测:采用RT 2PCR 方法,按试剂盒说明书提取海马总RNA,逆转录合成c DNA 。根据文献报道的CREB 序列,设计合成扩增CREB c DNA 引物,扩增长度385bp 。反应结束后,取PCR 反应液行琼脂糖凝胶电泳,凝胶图像分析仪检测目标带的光密度OD 值。1.2.4 统计学方法 应用SPSS13.0软件进行数据 处理,结果以x ±s 表示,多组间比较采用单因素方差分析,用LS D 法进行两两比较。P ≤0.05为有统计学差异。2 结果 2.1 免疫组化结果 A 组p 2CRE B 阳性反应物分 布在海马结构的各区,以齿状回的颗粒细胞层着色最深,呈棕黄色,CA3区次之,CA1区着色最淡;p 2 8 2 山东医药2008年第48卷第42期