1 1 范围 本标准规定了绵羊的胚胎生产和移植的供体羊的选择和饲养管理、供体羊的超数排卵及人工授精、手术冲卵技术及胚胎质量鉴定、冻胚的解冻、受体羊的选择及饲养管理、胚胎手术移植技术和妊娠受体羊的饲养管理技术。 本标准适用于秦皇岛地区绵羊的胚胎生产和移植。 2 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 DB 1303/T 098-2000 羊的人工授精技术操作规程 3 3 供体羊的选择和饲养管理 3.1 3.1 供体羊的选择 a）a）体羊品种优良、生产性能好； b）b）传性稳定、谱系清楚； c）c）体质健壮。繁殖机能正常，无遗传和传染性疾病。年龄在2岁至7岁为宜； d）d）具有畜牧部门颁发的种畜禽鉴定合格证书。 3.2 3.2 供体羊的饲养管理 3.2.1 3.2.1 保持饲养环境稳定，饲养环境卫生、干燥、棚舍温度适宜。避免应激反应。 3.2.2 3.2.2 制定合理的供体羊日粮配方，保证正常的营养平衡。 3.2.3 3.2.3 满足供体羊清洁饮水的需要。 4 4 供体羊的超数排卵及人工授精 4.1 4.1 超数排卵 4.1.1 4.1.1 超数排卵的季节和发情周期：绵羊最适超数排卵季节为9月下旬至11月上旬。绵羊的发情周期在15d—17.5d。供体母羊在超数排卵前需观察1—2个完整的发情周期。 4.1.2 4.1.2 用于超数排卵的激素选择 FSH—P（垂体促滤泡素） LH—P（垂体促黄体生成素） ICI80996（氯前列烯醇） 4.1.3 4.1.3 激素剂量（注射总量/只） FSH—P剂量（肌注）：120IU—160IU LH—P剂量：根据FSH的注射剂量，肌注100—120IU。 ICI80996：肌注0.08mg/次，注射两次/d。 4.1.4 4.1.4 超数排卵方法 FSH—P 3天注射法 以母羊发情之日作为发情周期的0d，在母羊发情周期的第13d或13.5d（周期大于17.5d的羊在第13.5d）开始，每天早：（6：00—7：00）和晚（18：00—19：00）各注射1次FSH，连续3天，递减注射。 FSH、LH用生理盐水稀释。 在第5、6次注射FSH—P时，同时肌肉注射ICI80996。 确定供体羊发情后立即注射LH。如果FSH—P未注射完供体羊已发情，停止注射FSH—P，立即注射LH。
小鼠早期胚胎发育和胚胎移植 https://www.doczj.com/doc/df9700552.html,/4544.htm、 小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。 小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。一些发达国家已有经营奶牛和肉牛胚胎移植的企业公司，向国外销售胚胎。在我国，这一技术的研究起步较晚，1974年在绵羊上获得成功，1978年在奶牛上获得成功，80年代后期90年代初，奶牛、安哥拉山羊和绵羊的胚胎移植开始在生产上应用。胚胎移植术也是显微操作中最基本的实验技术，是从事其它显微操作如嵌合体动物、胚胎干细胞、转基因动物和细胞核移植等实验必不可少的步骤。下面以小鼠为例，介 绍哺乳动物的早期胚胎发育及胚胎移植的操作过程。 实验技术 一、人工催情和超数排卵 1. 小鼠的性别鉴定： 成年小鼠的性别较易鉴别。雌鼠可见有明显的阴道开口和明显的五对乳头，雄鼠可见明显的阴囊，仔鼠或幼鼠则主要以它们的外生殖器与肛门的距离来区别，距离近的为雌鼠，距离远的为雄鼠。 2. 人工催情： 成年小鼠在非妊娠和非哺乳期间，任何时间都可发情，性周期为4-5天。超数排卵一般选用体重在20-30g的雌鼠，注射孕马血清（PMSG）促使超排。每头雌鼠注射PMSG 5-10IU，注射时间可在第一天下午4时左右，注射部位为腹腔。在第三天的下午4时左右腹腔再注射绒毛膜促性腺激素（hCG）5IU，并和雄鼠合笼饲养让其自然交配。第四天上午8时左右检查雌鼠，如有阴道栓形成者，即可供采卵。阴道栓是雌鼠交配后精液与阴道分泌物及阴道上皮等凝结而成的，位于阴道口附近，一般在交配后数分钟即可出现 （图16.3）。最初阴栓湿润而软，随后逐渐变硬转为黄色，最后阴栓缩入阴道液化而消失，此过程需10余小时，有的在24-48小时后仍可见。在合笼后每天上午8-9 时，下午5-6时检查阴栓，出现阴栓即可认为是妊娠的第一天，即胚龄的第一天。 二、受精卵及囊胚的获得 1. 受精卵的获得： 将检查有阴栓的小鼠用脊椎脱臼法处死，70%酒精消毒腹部。在腹部中央横剪一小口（0.5cm 宽），将两边皮肤肌肉沿切口部剪开，暴露腹部器官；用剪刀和镊子除去卵巢、输卵管和子宫周围的脂肪组织，把输卵管取出（图16.4，16.5），置于盛有培养液的表面皿中。在解剖镜下找到输卵管膨胀的壶腹部，用镊子撕开一小口，卵子即自然流出（图16.6）。如受精卵已迁移到输卵管的狭窄部，则可用冲洗法收集受精卵。方法是：在解剖镜下找到输卵管喇叭口，可以用小玻璃探针帮助，将吸有冲卵液的注射器针头对准喇叭口，右手用小镊子轻轻将喇叭口套在针头上，套进约1mm即可，并用镊子把管
做试管婴儿的详细流程 试管婴儿的过程 1、夫妻双方在女方月经周期的第2-5天，带齐双方身份证、结婚证、计划生育证明空腹到 所选择的试管婴儿中心检查。此时检查为：抽血、查激素、做B超。（月经周期从月经来红那天开始算）。男方查精液及各项男性急前检查。北大医院各项检查男女双方都会有一个小的检查项目表,需按表全部检查完成不能漏项。 2、月经干净后，第一步的检查结果无异常，女方到试管婴儿中心查衣原体、支原体、白带 常规、宫颈刮片及专家让您做的各项检查。 3、月经周期第21-23天，开始进入IVF-ET治疗，应用GnRHa(降调针)。带上前面检查的所 有查结果,且没有问题, 带齐双方身份证、结婚证、计划生育证明原件，建立病历。 4、月经周期第25-28天，复查B超排除囊肿。 5、第2个月经周期第2-10天，查B超开始应用促排卵药(带回家用)。 6、定期复查B超，用药后4天做一次，随后则3-1天做一次。 7、卵泡足够大时，注射HCG(晚10小时)，用药后34-36小时女方取卵、男方取精。 8、取卵后3天是胚胎移植日。北大医院也要带双方身份证原件。 9、移植后第7天来医院查孕胴,雌二醇,14天查HCG和孕胴,雌二醇确定是否妊娠。 做试管婴儿的详细过程 1、控制性超排卵： 由于自然月经周期的长短因人而异，同一患者不同周期也存在差异，所以不易安排取卵时间，而且自然周期中只有一个优势卵泡发育，受精后只能形成一个胚胎，而移植一个胚胎的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵来增强与改善卵巢功能，以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵子的目的，提供多个胚胎移植，并尽可能使黄体发育与子宫内膜功能同步。控制性超排卵一般是先用GnRHa使体内FSH和LH降调，再施与HMG或FSH排卵药物，刺激卵巢中的卵泡成长，依据患者对药物的反应性调整药物使用剂量，患者的年龄及药物的使用剂量不同，所获得的卵子数亦不同。 2、监测卵泡： 为评价卵巢刺激效果与决定取卵时间，须利用阴道B超来监测卵泡大小，并配合抽血检
1、下列关于胚胎工程的叙述，错误的是( ) A．体外受精是指获能的精子和成熟的卵子在相应溶液中受精 B．受精卵发育到原肠胚阶段才能进行胚胎移植 C．早期胚胎培养与动物细胞培养的培养液通常都需加入血清 D．试管婴儿技术主要包括体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植技术 正确答案：B 知识点：胚胎工程 分析与思考：不同的动物胚胎移植时，胚胎的发育程度不同，一般受精卵需要发育到桑椹胚或囊胚，但是不能发育到原肠胚，故选B。 2、（11广东）华南虎是国家一级保护动物，可采用试管动物技术进行人工繁殖，该技术包括的环节有( ) ①转基因②核移植③体外受精④体细胞克隆⑤胚胎移植 A．①③B．①④C．②⑤D．③⑤ 正确答案：D 知识点：胚胎工程 分析与思考：试管技术首先是使精子和卵细胞在体外完成受精，然后把早期胚胎移植到母体的子宫内进行发育，故选D。 3、下列现代生物技术成果的获得必须通过胚胎移植的是（） A．转基因抗虫棉B．重组酵母乙肝疫苗C．单克隆抗体D．试管婴儿 正确答案：D 知识点：胚胎工程 分析与思考：转基因抗虫棉是植物细胞工程，需要使用组培技术；酵母菌是单细胞生物，不存在胚胎；单克隆抗体是B细胞与骨髓瘤细胞融合，所以四种技术中，只有试管婴儿需要使用胚胎移植技术，故选D。 4、中国自主完成的首批成年体细胞克隆牛有3个母亲，A牛提供细胞核即供体细胞，B牛提供去除细胞核的卵细胞即受体细胞，两种细胞在电脉冲的刺激下融合之后，通过细胞分裂形成早期胚胎，再将这个胚胎植入C牛子宫内。据此判断下列说法错误的是（） A．培育出的克隆牛几乎是A牛的复制品 B．克隆牛不仅具有A牛的遗传特征，也具有B牛的遗传特征 C．“克隆牛”就是“试管牛”
4．2体外受精和早期胚胎培养 1．试管动物技术运用的技术手段主要有体外受 精、早期胚胎培养和胚胎移植。 2．哺乳动物的体外受精主要包括卵母细胞的采 集、精子的获取和受精等几个主要步骤。 3．从卵巢采集的卵母细胞需在体外培养到MⅡ中 期才能与获能的精子受精。 4．收集精子常用的方法有假阴道法、手握法和电 刺激法。 5．精子体外获能的方法有培养法和化学诱导法两 种。 6．哺乳动物胚胎的培养液中，除一些无机盐和有 机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核 苷酸，以及血清等营养物质。 7．动物胚胎一般在桑椹胚或囊胚阶段进行移植。 一、试管动物技术 1．概念：试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。 2．主要技术手段：体外受精、早期胚胎的培养和胚胎移植。 3．应用：主要用于良种动物的快速大量繁殖。 二、体外受精 1．卵母细胞的采集和培养[连线] 2．精子的采集和获能 (1)精子的采集：[连线]
(2)精子的获能：[填表] 3．受精 获能的精子和培养成熟的卵子，一般情况下都可以在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。 三、胚胎的早期培养 1．培养液的成分 无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。 [巧学妙记]巧记早期胚胎培养的培养液成分 2．培养的目的 (1)检查受精状况和受精卵的发育能力。 (2)使胚胎发育到适宜的阶段向受体移植或冷冻保存。 3．胚胎移植的时间 (1)牛、羊一般在桑椹胚阶段或囊胚阶段进行移植。 (2)人的体外受精胚胎，可在8～16个细胞阶段移植。 1．采集卵母细胞常用的方法有() ①用促性腺激素处理后，从输卵管中冲取卵子②化学诱导法③电刺激法④从活体动物卵巢中吸取卵母细胞 A．①②B．②③
胚胎移植注意事项 胚胎移植是一项操作严谨，要求高的技术。胚胎移植每个操作环节都十分重要，都直接影响胚胎移植成败。因此作为手术人员，我们应该有很强的责任意识，正规的操作理念，严格的无菌操作观念。 为了使胚胎移植技术严谨、规范，提高胚胎移植成功率，现将胚胎移植中的注意事项归纳如下： 一、同期发情及超排处理 1、供体超排处理 ①供体放栓（撤栓）时间：19﹕00； ②超排处理的时间为早7﹕00，晚19﹕00； ③第一次试情时间为撤栓后第二天早5﹕00，配种时，每间隔6h配1 次。 2、受体同期发情处理 ①“ PG”法，注射时间为处理当天下午16﹕00； ②“海绵栓+PG”法，撤栓和PG处理时间为处理当天下午16﹕00； ③受体试情时间为PG处理后的第二天早8﹕00，下午16﹕00，晚20﹕00；④试情时，记录具体的发情时间，认真做好发情记录，按照《受体羊发情记录表》的要求填写。 二、超排的具体要求 1、严格遵守超排时间，按照超排方案的剂量要求注射，做到剂量准确，注射完全； 2、超排所用的注射器，用于PMSG的注射器要求1批换1次，用于FSH的注射器，每天要求换1 次； 3、超排所用的注射器、CIDR栓、药瓶统一收回，统一处理，严禁乱扔，乱放； 4、超排时人员安排，要求每批由专人负责，即注射PMSG1 人，注射FSH 1 人； 5、符《胚胎移植所用药品跟踪单》； 6、符《胚胎移植人员安排表》； 7、符《受体羊发情记录表》。
三、手术前的准备工作 1、羊只手术部位的消毒 ①用肥皂温水将手术部位剃干净，擦干； ②清水冲洗干净； ③0.1%新洁尔灭消毒手术部位，擦干； ④5%的碘酊消毒和75%酒精脱碘。 2、手术器械的准备 ①手术器械在使用之前在0.1%新洁尔灭溶液中浸泡30min，并打开器械开关；②使用时浸泡在生理盐水中（注意及时更换）； ③与PBS液接触的注射器及冲卵管在使用之前，用PBS液清洗1 次。 3、手术人员手臂的消毒 ①手臂要严格消毒，先剪短磨光指甲，用肥皂水清洗手臂； ②在0.1%新洁尔灭消毒盆中浸泡5min；③在生理盐水盆中清洗干净； ④注意消毒液和生理盐水的及时更换。 4、手术后手术器械及器械盘的清洗与灭菌①手术后，手术器械需认真、彻底的清洗，以便下次使用；②用清水及洗涤液将手术器械和器械盘上的污垢或斑点清洗干净； ③用流水冲洗5 次； ④用蒸馏水冲洗5 次； ⑤放入恒温干燥箱，将干燥箱的温度调至160℃，处理1.5h 。 四、手术时操作要求 1、手术时，必须戴医用手套； 2、手术要求仔细、规范、准确、迅速、手法轻柔、配合默契，及时喷洒生理盐水，尽可能的缩短冲胚时间、移植时间； 3、手术缝合要仔细、认真、保证缝合质量，促进伤口愈合。
试管婴儿胚胎移植需要知道的ABC区别 胚胎质量很大程度上决定了试管婴儿成功率，而胚胎质量通过胚胎等级的体现，等级越高提示胚胎质量越好，成功率相对也越高。实验室通常使用数字和字母等级向患者提供其胚胎质量的报告。从1到6的等级描述了胚胎发育的阶段。另一方面，字母表示细胞的质量，在试管婴儿治疗中的分级系统有助于我们确定要转移和/或冷冻的胚胎。在试管婴儿胚胎移植前，你需要知道胚胎ABC的区别。 鲜胚等级 对鲜胚（第三天的胚胎）的评分，通常会注重卵裂球细胞数目、卵裂是否均一以及碎片这三个方面。正常情况下，胚胎生长到第3天应该具有8个细胞。但在实际培养过程中，胚胎发育快慢不一，一般认为具有7-9个细胞的胚胎才会考虑评为优胚。 I级胚胎：胚胎卵裂球连接良好、均匀、规则、有中等折光性，透明带完整，碎片0%-5%；II级胚胎：卵裂球形态规则或轻度不规则，均匀或稍欠均匀，折光度有轻微变化，碎片≤20%； III级胚胎：胚胎内碎片＜50%，碎片外卵裂球形态同II级，具有一定折光性，透明带完整；IV级胚胎：胚胎内碎片≥50%，碎片外卵裂球具有生存活力。 囊胚等级 在第5天，胚胎继续分裂，细胞数量继续增加。在胚泡期，细胞开始分化为两组。一种细胞类型形成内部细胞团（ICM），这个细胞最终将长成婴儿。另一类细胞是滋养外层上皮细胞（TE），这些细胞将长成胎盘。TE细胞位于胚胎的外部，ICM位于胚胎的内部。要建立健康的怀孕，TE细胞和ICM细胞都是必需的。对于每种细胞类型，使用字母等级以及表示胚胎膨胀的等级。 囊胚内细胞团(ICM)分级 A级：细胞数目多，排列紧密； B级：细胞数目少，排列松散； C级：细胞数目很少。 囊胚滋养层细胞(TE)分级 A级：上皮细胞层由较多的细胞组成,结构致密； B级：上皮细胞层由不多的细胞组成,结构松散； C级：上皮细胞层由稀疏的细胞组成。 囊胚孵化程度分级 1期：早期囊胚，囊胚腔＜胚胎总体积的1/2； 2期：囊胚腔体积＞胚胎总体积的1/2； 3期：完全扩张囊胚,囊胚腔完全占据了整个囊胚； 4期：扩张后囊胚,囊胚腔体积较早期囊胚明显扩大，透明带变薄； 5期：正在孵出的囊胚,囊胚正在从透明带破裂口孵出； 6期：孵出的囊胚,囊胚完全从透明带中脱出。 从以上这些数字结合起来就能够大致知道囊胚的形态，比如说评分为“4AB”的囊胚，“4”表示囊胚处于4期，“A”表示囊胚的内细胞团评级，“B”表示囊胚的滋养细胞层评级。一般对分期4～6、内细胞团评级≥B、滋养细胞层评级≥C，即评分一般为4BC及以上的囊胚进行冷冻或移植。
高二生物选修三导学案使用时间: 2014年3月25日编制:高海乐杨建磊张双双 审核: 包科领导: 班级：小组：姓名：评价： 专题三胚胎工程 3．2体内受精、早期胚胎培养和胚胎移植 【学习目标】 1.熟练掌握体外受精、胚胎移植的过程，能正确理解胚胎移植的生理学基础。 2.自主学习，合作探究，学会应用试管动物技术解决实际问题。 3.全力以赴，感受生物科技发展带给人类的贡献。 【学习重难点】 重点：1.体外受精的主要步骤 2.胚胎移植的过程和生理学基础 难点：1.精卵的采集与培养 2.胚胎移植的生理学基础 【使用说明及学法指导】 1.先通读教材，划出重点，然后再完成导学案，并把不明白的问题标出来，再翻阅课本，解决问题。 有些问题需要认真思考和总结，切忌抄课本和资料。 2.A层完成掌握学案，并完成课后题的相关内容。B层掌握好学案的内容，C层完成好学案。 预习案 1.勾画并记忆试管动物技术的概念，写出体外受精的三步聚？ 2.结合课本，写出收集卵母细胞和精子的方法各有哪些？ 3.在体外使精子获能的主要方法有哪两种?受精时的外界培养液有哪两种？ 4．早期胚胎培养的目的及培养液的成分？ 5.勾画并记忆胚胎移植的概念及进行胚胎移植的原因；写出胚胎工程的最后一道工序？ 6. 在课本中勾画并记忆胚胎移植中供体牛和受体牛各自的作用。写出胚胎移植的意义是什么？ 7.胚胎移植的生理学基础是什么？ 8.同期发情处理、超数排卵采用的激素分别是什么？冲卵指的是什么？
巩固训练 （A/B/C层）1．下列关于精子的说法，不正确的是( ) A．精子的发生从初情期开始 B．它与卵细胞的受精发生在子宫内 C．精细胞变形为精子时保留的细胞器主要是线粒体 D．精细胞变形为精子时细胞内的一些物质最后脱落 （A/B/C层）2．下列有关卵子的产生说法中，正确的是（） A．哺乳动物卵泡的形成是在初情期 B．排出成熟卵子细胞的过程即为排卵 C．卵子形成时的分裂过程均在卵巢内完成 D．卵子产生中的减数第二次分裂是在精子和卵子的结合过程中完成的 （A/B/C层）3．在受精作用过程中，体现受精实质的是（） A．同类生物的精子和卵细胞互相识别B．精子的头部进入卵细胞 C．卵细胞膜增厚形成受精卵膜D．雄原核与雌原核互相融合 （A/B/C层）4．2009年2月2日，山东省干细胞工程技术研究中心的科学家宣布成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚。该课题首席专家称他们掌握此项技术不是为了制造克隆人，而是进行人类治疗性克隆研究。下列有关囊胚和桑椹胚的说法中，不正确的是（） A．桑椹胚的各细胞结构功能基本相同 B．囊胚期细胞出现了细胞分化，但遗传物质未发生改变 C．囊胚期细胞分化是由遗传物质突变引起的 D．囊胚期内细胞团和滋养层细胞差异不是复制水平上的差异，而是转录水平上的差异引起的 （A/B层）5.下图是某种动物发育的几个阶段，下列有关叙述不正确的是（） A．在由2～11的过程中，可能发生细胞的增殖和衰亡 B．在1～11的过程中细胞的全能性逐渐减小 C．图示细胞的增殖方式是有丝分裂 D．细胞分化过程从2开始
以下文章来自：童梦无忧论坛；不孕不育试管婴儿患者所写，情况属实，未经版权允许请勿转载；如有试管婴儿专业知识不明，请进童梦无忧论坛！一个不孕不育试管婴儿患者交流的平台！ 《试管婴儿成功过程》 我今年30周岁结婚2年体形偏胖，今年3月份做输卵管造影发现双侧都堵了，虽然这些年也隐约感觉自己可能妇科不太好但是从没有想过会不孕，出了手术室就开始止不住的哭，在家昏天暗地的哭了很多次。中间也纠结徘徊在通水还是手术或者试管，每次去医院回来都是大哭一场，感谢我的老公一直很贴心，给我支持让我能够一直顺利的走到现在。后来经过几家医院的对比还有医生的建议就放弃了保守治疗，第一我年纪不小了害怕在蹉跎几年回头做试管的时候延误了最好的年纪。第二不管什么治疗都是有创的，对身体也有伤害。不如直接试管还有一个好的卵巢和子宫环境。 4月就开始了一系列的检查，因为不知道流程，第一次去只检查了一些常规项目，等到月经第二天的时候又去检查了内分泌。然后隔几天又去观察卵泡。我老公也检查了身体，精子成活率59%，还算不错一切都很顺利。 5月正式进周，开了14天的达菲琳降调，在此期间加入试管群，浏览试管贴吧，通过各种渠道尽可能的多了解这个原来对我如此陌生的名字。自己在家打针，开始的时候很不顺利，我是打针不
敢看针头的选手，这次要自己在家打针手都是发抖的。因为紧张也是因为怕疼第一针只打进了表皮，肚子被我打起来一个小包。我紧张的不行马上给医生打电话医生说下次打针的时候捏起来肚皮一点在打深一点就行了。我在家把空瓶子里打进水用针管反复练习抽药，最后可以把瓶子里的药抽到一点不剩的时候在把面巾纸叠起来用针头打进去找感觉，第二天的时候就好多了，但是我拿药的时候不小心打碎了一瓶粉，这个心疼啊，一百多块呀。但是功夫不负有心人，通过几天的练习，我自己打的针不浪费药而且一点不疼，还学会了把药抽进针管以后轻轻的把药弹到针头这一边，后面留一点点空气在针管的尾部保证最后一滴药都打进肚子里。15天的降调期过去以后进入促排期，我是打的普利康每天两支800多块钱。这个时候认识了一个很好的姐姐她的性格很开朗，我们是在看病等待的时候聊天认识的她比我早一步，我刚促排她就取卵了，她告诉我这个时候要开始吃高蛋白的东西了，我也在网上看到了喝蛋白粉豆浆吃大虾，所以我每天一杯蛋白粉，半斤大虾。很不喜欢喝牛奶也是硬着头皮喝进去，想想我一天800多的药费呀，卵宝宝长的快一些吧。促排第四天的时候去医院有拉丝白带了，医生说很好，让我准备在过3天后可以准备取卵了，很高兴回家，不成想啊居然热伤风了本身我就有鼻炎痛不欲生啊，两天晚上睡的非常不好，在去医院的时候医生说还得在打几天，我估计就是因为生病的原因，中间还喝了一盒三精双黄连也不见好就硬挺着了。到第九天的时候加了一针尿促隔天
药品器材清单 PMSG 孕马血清促性腺激素 hCG 人绒毛膜促性腺激素 DPBS 杜氏磷酸缓冲液 M16 体外培养液 EG 乙二醇 蔗糖 塑料细管 1ml注射器 35mm培养皿若干 二氧化碳培养箱 小鼠胚胎的获取 控光（14h光照，10h黑暗）饲养1-2周后的4-6周龄小白雌鼠，腹腔注射10 IU/只PMSG，48h后腹腔注射10 IU/只hCG。注射hCG后（计时为0h）当晚与雄鼠（≥8周龄）合笼（雌：雄=2:1或1:1）。次日早晨检查阴道栓，见栓雌鼠于72-82h颈椎脱臼处死，采集桑椹胚。在DPBS中洗净后移入M16培养基，置于5 %CO2,95 %空气,相对湿度100 %的二氧化碳培养箱中待用。 小鼠胚胎的玻璃化冷冻 平衡液EG10，见附录溶液的配制。 玻璃化溶液EFS40 ，见附表2。或者EG40，亦见附录溶液的配制。 解冻稀释液用DPBS稀释而成的0. 5mol/L蔗糖溶液。 将室温调至25℃,经1～2小时将溶液及用具充分平衡后，用0. 25ml的塑料细管(Flance) 按顺序吸入解冻稀释液5cm———空气1㎝——1.5cm玻璃化溶液。 用吸管将胚胎移入平衡液平衡5分钟,而后导入细管内的玻璃化溶液中平衡30秒。这30秒接着吸入空气1cm——吸满解冻稀释液，封口后直接投入液氮中保存。 小鼠冷冻胚胎的解冻 将冻好保存于液氮中的细管,取出后直接投入25℃水中快速解冻。当解冻稀释液部分由乳白变为透明时取出,用吸水纸将细管水珠拭净,剪断细管两端的栓塞后,用含有解冻稀释液(0. 8ml)的注射器(带16号针头),将细管内容物冲洗于表面皿中，轻轻摇匀,置于实体显微镜下回收胚胎。回收的胚胎于解冻稀释液中平衡5分钟,以便脱出细胞内部乙二醇,再用PBS洗净后,移入M16溶液中于5 %CO2,95 %空气,相对湿度100 %的二氧化碳培养箱中培养。 小鼠胚胎的发育能力判定 体外培养回收的胚胎在M16中培养48小时以内恢复到囊胚或继续发育的胚胎视为有发育能力胚胎。 胚胎移植解冻后的胚胎,约经3小时培养,选择外形良好的胚胎移植于与结扎输精管的公鼠交配后即假妊娠第3天受体鼠的子宫中,一侧5～7枚,每只受体10～14枚胚胎为宜。妊娠19～22天观察产仔情况。
《动物遗传育种与繁殖专论》 课程作业 胚胎移植技术在畜牧业中的应用 姓名： 学号：
胚胎移植技术在畜牧业中的应用 畜牧业发展水平占农业的比重是衡量一个国家和地区现代化水平的重要标志，近年来，畜牧业已成为我国农业发展的重心．胚胎移植技术也称受精卵移植技术，就是将良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体，所以该项技术又被称为“借腹怀胎”。胚胎工程技术是胚胎移植技术发展到一定程度而出现的名词, 是由发育工程演变而来的。由于胚胎移植技术可最大限度的发挥优秀母畜在品种改良和育种中的作用，同时它又是体外受精、转基因、体细胞核移植等胚胎工程的基础性环节，因此，胚胎移植技术被誉为家畜繁殖技术的第二次革命。 胚胎工程技术根据其发展现状包括以下9类:胚胎移植技术;胚胎冷冻保存技术;胚胎分割技术;试管动物技术(体外受精技术);性别控制技术,即XY精子分离和胚胎性别鉴定技术;转基因动物技术;动物克隆技术(细胞核移植技术);胚胎干细胞技术;胚胎嵌合技术。目前, 前5种技术已在生产实践中得到不同程度的应用,但应用较多的是前2种技术, 其他几种技术由于设备投入成本较大、成功率较低, 尚处于实验室向生产转化阶段。 胚胎移植技术可使引进的种畜在较短时间内快速纯种繁殖，成为大群体，满足牛羊业迅猛发展的需要。同时，牛、羊业的快速发展和这种市场化发展的需求，使胚胎移植技术受到更多研究者和生产者的
高度重视，进而促进了胚胎移植技术快速发展和商业化。20世纪90年代后期，胚胎移植技术在畜牧生产中得到应用推广，同时胚胎移植技术又解决了畜牧业发展中的一些难点问题。 胚胎移植技术是继人工授精之后发展起来的繁殖高新技术, 目前已成为扩大优秀家畜遗传资源的主要手段, 有的称作MOET技术( 超数排卵与胚胎移植技术)。作为家畜育种的重要手段之一, 自20 世纪50年代初第一头胚胎移植牛在美国诞生以来, 胚胎移植技术飞速发展。据不完全统计, 全世界目前年产胚胎移植牛超过35万头, 美国、法国等发达国家每年参加后裔测定的青年公牛的80%来自胚胎移植所产的后代。20世纪80年代后期, 我国在生产中开始应用牛、羊胚胎移植技术, 近几年该技术在全国得到迅速发展。本实验室1990年奶牛新鲜胚移植妊娠率达62.2%, 达76%。在6省区规模化生产中, 绵羊和山羊的移植妊娠率在60%左右, 达76.8%。根据国际胚胎协会的统计, 20多年来,进行胚胎移植的动物数量和种类每年都在增加, 胚胎移植已经成为畜牧业中最活跃的产业。 胚胎移植技术在畜牧业发展中的作用主要体现在促进家畜的遗传改良，充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率．优良后代的增加，既取决于种公畜，也有赖于优良母畜。尤其是生产性能取决于父母双方，如果说人工授精技术的出现使公畜的繁殖潜力得到最大限度地发挥的话，那么胚移技术的出现可以使母畜的繁殖潜力得以充分发挥，从而有效促进家畜的遗传改良。更为重要的是，如果超数排卵时利用优良公畜冻精配种优良母畜(供体)，然后利用采出的胚胎进行
试管移植后0--14天，你需要知道的！！ 做完胚胎移植后的两周，你会感到不安与烦躁，问题在心头萦绕：头两天我是否需要卧床休息？胚胎会不会掉出来？该吃什么，不该吃什么？在这两周我的运动量应该是怎样的？出血多少是正常的？咱们来一步步分析移植后的每个阶段。 移植后六十分钟胚胎移植完成后，你将平卧在手术床上被推到休息室，大多数诊所（译者注：这里指的是美加的诊所）要求患者至少平卧30至60分钟。几乎所有的胚胎移植术都是在腹部B超下进行的，生殖科医生会将一根软管插入你的子宫，另一位医护人员则通过腹部超声监测移植情况，以便医生判断放置胚胎最合适的位置。 由于超声波在液体中比在空气或器官组织中传播得更好，医生可能会让你实现憋尿。经过移植术开始前的等候（你见过哪个医生是严格守时的吗？）和在移植过程中被医生用冰凉的手和B超用
具按压肚皮，你会觉得自己要爆炸了。 很多病人常常说她们最受不了的，是移植后想上厕所，又不敢或不好意思。其实排尿不会降低成功率，所以你不用忍得太辛苦也不要感到害臊，移植术结束后可以使用尿盆在床上解决。（译者注：中国好像没这待遇，都是自己下床去厕所的，但既然医生没说不可以，应该也问题不大哈。） 移植后头两天离开医院前，你会收到移植后的注意事项。医生会根据病人状况和偏好的不同给出不同的意见，但通常包括如下几条： ? 48小时不要搬动重物（译者注：我在别的地方看到，对重物的定义是超过五磅，即四斤半） ? 48小时不可进行激烈体力活动，如跑步、健身操等 ? 48小时不可盆浴或游泳（译者注：西方医生没有建议不淋浴的，我的医生也没这么说过） ? 不要冲洗阴道，使用置卫生棉条或有自动冲洗装置的马桶
试管婴儿是一种先进的辅助生殖技术，自诞生以来已经成功为为无数不孕不育患者解除了烦恼，很多患者都想知道试管婴儿的过程是什么样的，下面我们跟随生殖专家进行详细的了解。 在很多患者看来，试管婴儿是一项非常复杂的技术，的确是这样，但是如果患者选择硬件技术尖端、专家业务素质过硬的医院做试管婴儿，那么试管婴儿的成功率和患者的人身安全都能得到保障。试管婴儿的具体过程如下： 检查准备 做试管婴儿技术前，要做详细的检查准备工作，临床专家要分析患者具体情况，诊断是否适合做试管婴儿技术。需做的检查包括有：女方(妇科检查、诊刮、输卵管通透试验、抗精子抗体等)、男方精液化验等。 技术实施 临床上实施试管婴儿技术，具体步骤为：控制性超排卵→监测卵泡→取卵→取精→体外受精→胚胎体外培养→胚胎移植→胚胎移植后补充黄体酮→胚胎移植后第14天验晨尿确定是否妊娠→妊娠后14天后B超检查。详细介绍如下： 1、控制性超排卵 由于自然月经周期的长短因人而异，同一患者不同周期也存在差异，所以不易安排取卵时间，而且自然周期中只有一个优势卵泡发育，受精后只能形成一个胚胎，而移植一个胚胎的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵来增强与改善卵巢功能，以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵子的目的，提供多个胚胎移植，并尽可能使黄体发育与子宫内膜功能同步。控制性超排卵一般是先用GnRHa使体内FSH和LH降调，再施与HMG或FSH 排卵药物，刺激卵巢中的卵泡成长，依据患者对药物的反应性调整药物使用剂量，患者的年龄及药物的使用剂量不同，所获得的卵子数亦不同。 2、监测卵泡
为评价卵巢刺激效果与决定取卵时间，须利用阴道B超来监测卵泡大小，并配合抽血检查E2值(雌激素)，调整用药量。当二至三个以上的卵泡直径大于1.8cm，且1.4cm以上的卵泡数与E2值相当，便可注射人绒毛促性腺激素(hCG)，促使卵泡成熟。在注射hCG后34~36小时取卵。 3、取卵 最常用的取卵方式是在的局部麻醉下，经阴道B超引导，将取卵针穿过阴道穹窿，直达卵巢吸取卵子，并立即在显微镜下将卵子移到含胚胎培养液的培养皿中，置37 °C的培养箱中培养。 4、取精 精子取出的时间与取卵的日子为同一天。取精前洗净双手，用手淫法留取精液。所给的小杯是无菌的，留取时不要触摸杯缘及杯内。取出的精液采用上游法或密度梯度离心法处理，获取活动力好的精子。 5、体外受精 取卵后4~5小时将处理后的精子与卵子放在同一个培养皿中，共同培养18小时后，可在显微镜下观察受精情况。若精子质量太差，无法自然受精，则必须以显微注射法强迫受精。 6、胚胎移植 阴道及宫颈用生理盐水清洁再用培养液擦洗，将金属或塑料导管置入颈管内。另一助手在显微镜下用1.3mm的聚四氟乙烯管从培养液内吸出胚胎细胞加吸0.03～0.05ml 培养液或0.03～0.05ml受试者血清，将此管插入宫颈管导管内放至距宫底0.5cm处，送胚胎入宫腔。胚胎移植后需卧床24小时，限制活动3～4天，接受黄体酮治疗。移植后2周作β-GCG测定，如无妊娠情况，停用黄体酮。移植成功的妊娠属高危妊娠予以监护。 临床评估 在试管婴儿技术成功实施后，2个月左右可判断试管婴儿是否成功。
小鼠胚胎培养方法的研究 摘要 目的：探讨小鼠早期胚胎在不同的体外培养液中生长发育的状况，从而寻找胚胎培养的最佳培养体系，为人类胚胎培养方法的改善提供理论依据，以提高临床体外受精一胚胎移植（ＩＶＦ．ＥＴ）的成功率。 方法：配制不同的培养液，对１００例小鼠超排卵共取卵子１６７８枚，分别在不同的培养液中进行体外授精，并将２一细胞鼠胚放入各组培养液中进行培养，其中，血清组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清：卵泡液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加ｌＯ％人卵泡液；蜕膜细胞条件培养液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加ｌＯ％条件培养液：血清加卵泡液组的培养液为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清和５％人卵泡液：血清加条件培养液组为Ｅａｒｌｅ培养液加１０％人血清和５％条件培养液。每日在显微镜下观察小鼠胚胎的发育情况，分析受精率、卵
山西医科大掌 裂率、卵裂速度及桑椹胚与囊胚形成率，采用ｘ２分割检验进行统计分析。 结果： 一、１、小鼠胚胎在蜕膜细胞条件培养液中有７２．９％发育到８．细胞期，６６．０％发育到桑椹胚，６１．６％形成囊胚，３２．１％胚胎孵化。而对照组有４３．６％发育到８．细胞期，３０．９％发育到桑椹胚，１９．１％到初级囊胚，５５％孵化的胚胎。两组比较有显著性差异。２、卵泡液的胚胎有７１．３％到８．细胞期，５８８％发育到桑椹胚，５０．Ｏ％形成囊胚，２５７％孵化。与对照组比较有差显著性异。３、血清组有５３，４％发育到８．细胞期，４０．５％到桑椹胚，２９．３％形成囊胚，仅有７．８％孵化。与对照组无显著性差异。 二、鼠卵在不同培养液中受精率无显著性差别，而对于卵裂率和优质胚胎的形成率，鼠卯在蜕膜细胞条件培养液组和卵泡液组中均与对照组有显著性差异，而血清组与对照组比较无差异。鼠胚在蜕膜细胞条件培养液和卵泡液中培养发育速度快，碎片率明显低于对照者。 三、小鼠早期胚胎在卵泡液组、蜕膜细胞条件培养液组
试管婴儿详细过程 第一阶段:准备阶段 1. 拟作试管婴儿的患者,月经干净后不同房,到医院完善各种检查： 女方检查项目: (1) 子宫输卵管碘油造影,必要时作腹腔镜或宫腔镜(均在月经干净3-7天，检查前禁同房); (2) 不孕不育免疫检查:包括抗精子抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体; (3) 染色体(有反复流产史、胎儿畸形史、死胎等病史的患者需查此项目); (4) 月经见红第2-3天空腹抽血查基础内分泌，包括E2、P、FSH、LH、T、PRL; (5) Torch:包括风疹病毒、弓形虫、疱疹病毒、巨细胞病毒筛查; (6) 宫颈分泌物CT、UU即(衣原体、支原体)筛查; (7) 白带常规; (8) 传染病检查: 包括乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒筛查; (9) 血、尿常规,凝血功能(PT、APTT),肝肾功能，空腹血糖，心电图、胸部X光检查; 注：性激素全套、肝肾功能，空腹血糖为空腹血。 男方检查项目:: (1) 精液常规分析，抗精子抗体，精子顶体反应、形态学检查(检查前禁同房2-7天); (2) 染色体(严重少弱精、无精症患者，夫妇双方有反复流产史、胎儿畸形史、死胎等病史的患者需查此项目); (3) 传染病: 包括乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒筛查。 (4) 血型。 (5) 前列腺液CT，UU，淋球菌。 2. 以上检查结果若有问题，需进行治疗康复后才能进入下一阶段。 3. 准备双方证件(包括身份证、结婚证、有效期内的计划生育证明，如准生证)，并准备复印件交医院保存。留下电话号码，随时保持联系。 第二阶段：促排卵阶段 1. 历时约20天。双方注意休息、营养及卫生，禁同房。 2. 治疗方案分为长、短两种，长方案从月经前一周开始用药，短方案从月经见红的第2-3天开始用药。用药当日夫妇双方到中心签署知情同意书, 医生查阅身份证、结婚证、计划生育证明原件，收取复印件。 3. 使用长方案的患者，在用药后月经一旦来潮，或用药后10天仍未来月经，请及时与医生联系。 4. 用药开始后遵医嘱来院监测卵泡(阴道B超)和抽血化验激素水平，医生根据卵泡生长情况调整促排卵药物使用情况。 5. 一般于周期第12-14天卵泡成熟，卵泡成熟后即停止用促排卵药，并于停药当晚9时左右(具体遵医嘱)肌注绒毛膜促性腺激素(HCG)。 6. 丈夫遵医嘱适时手淫排精一次(一般在预计取卵前2-7天)。 第三阶段:取卵及移植 1. 注射HCG后36小时左右经阴道取卵，取卵当日请准时到达医院，超过医生预约的时间太久可能会发生自发排卵，导致取到的卵子减少甚至无卵可取。取卵可能会有疼痛等不适，一般会使用适量的镇静、止痛药物。事先最好洗澡，但不得使用香水、唇膏等化妆品。 2. 取卵当日丈夫取精液，请带上双方身份证、结婚证、有效生育证明到医院，医生要进行核对，丈夫事先最好洗澡或清洗生殖器。
移植后吃西柚，每天一个 移植后的48小时，尽量多躺，我还尽量保持平躺。起身时先侧身用手支撑身体再起来，以后就没管什么姿势，爱怎么睡怎么睡。移植后48小时没洗澡，以后也是一改每日洗澡洗头的习惯，隔天进行或间隔更长，但用水是一定要的。 不吃麻油，这是从台湾网站上看来的。 每天吃一顿长江豆，可炒，也可煮熟后凉拌，克制吃辣。吃豆对我非常有用，保持大便通畅。也吃过牛奶蜂蜜，有文章说儿童吃了可以治贫血。 不能吃的水果及食物（寒凉的食物）如下： 水梨、瓜类、柑橘、柳橙、甘蔗、蕃茄、火龙果、柚子、硬柿子、菠萝、梨子、奇异果、桑椹、山竹、木瓜 芥菜、白菜、芹菜、苦瓜、冬瓜、莲藕....等可退火的食物都不可吃。 以下三种会破坏内膜的食物，也不能吃 苹果、柠檬、蕃茄 可以吃的水果及食物 葡萄、樱桃、水蜜桃、红毛丹、红枣、金桔、龙眼、荔枝、板粟 山药、黄豆、波菜、牛奶、鸡蛋、鱼 移植后经验分享（转） 移植后不宜吃的食物 1. 活血的，热性的药物及补品，比如红糖水，人参，鹿茸，鹿角胶，核桃仁，桂圆。 2. 祛湿排毒，凉性的：藕，香蕉，木瓜 3. 辛辣刺激的食物：花椒，大蒜，辣椒 4. 致流产的食物：桃子，桃仁，山楂，甲鱼，螃蟹 5. 不宜受,孕的食物：茄子 6. 烟酒，咖啡，茶叶，冷饮，冰冻的东西 7. 还有一些我不知道归类的：麻油，绿豆，黑木耳，韭菜，空心菜，玉米，苡仁，薏米，海带，红旱菜，马齿苋，西洋菜。
整理了下我的成功经验： 1、躺真的是关键，虽然仍然有一些姐妹没怎么躺还是成功了，但我总结了下身边的病友，发现凡是 躺得好的姐妹，成功率还是要高些。胚胎3-5天著床，6-8天扎根，所以前8天一定要注意。还有， 我这次移植后的7小时没睡枕头，完全平躺的。（是一个成功了的妹妹告诉我的，她说要2小时不睡 枕头，她妹妹也是这样成了的，我这次试了下也成了，还多了几个小时，也许没什么科学依据，但我 发现这样躺腰好像没那么酸，不妨一试）。移植后的前6个小时很重要，我当时除了上2次厕所，其 余时侯全当自己胸以下半身不遂样躺的。2、多喝鱼汤，牛奶，多吃高蛋白食物。3、要调整心态，首先自己要有信心，每天试试和肚子里的宝宝说话，宝宝是有灵性的，他们会感应到 妈妈的坚持，所以他们也会留下来的。一般来讲，9天-14天是最难熬的，尽可能分散自己注意力，记住：坚持就是胜利！4、动作不要太大，不起提重物，从床上起身时，先侧身用手肘支住再起来，躺下时也这样。5、不要太执著地找感觉，个体差异真的很大：测体温吧，我们打了黄体酮不准的；乳房也不是每个人都有反应的；肚子涨、分泌物、腹水情况因人而异；呕吐我觉得和心理因素有关；还有，来月经的感觉很明显，但这种感觉好像成功失败的人都有。 这次采卵、受.精、植入的效果很好,我总结了下面一些经验，供姐妹们参考，希望大家都能当上幸福妈妈！
第18卷 第1期2001年3月实验动物科学与管理 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINSTRATION Vol .18 No .1Mar .2001 小鼠胚胎移植技术方法比较 管 彤,王凤山,王 静,王晓军,于国德,杨梦礼 (天津市劳动卫生职业病研究所,天津 300204) 摘要:以近交系小鼠C 57BL 6J 、BDF 1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植 中图分类号:S865.13 文献标识码:A 文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03 收稿日期:2000-07-07 第一作者简介:管彤(1968-),女,助理研究员,主要从事野生小鼠资源开发及实验小鼠胚胎毒理学研究。 自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎的采集技术之后,很快就完成了早期胚向代母体内 输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研究[1] 。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育生物学研究,包括胚胎的发生、发育、突变基因的研究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究,均需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发 生的阶段不同,移植部位也不同[2] 。1～2个细胞期胚胎进行输卵管口移植,8细胞期至桑椹期胚进行 子宫移植。1992年,日本学者Nakagata [3] 又报道了经由输卵管壁进行输卵管移植的技术,以解决移植中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。 本文主要是将此三种移植方法引入,使之在本实验室成为常规后,将其应用于实验小鼠并进行了方法上的比较,重点比较了方法上的难易程度、产仔率、方法选择的前提因素。 1 材料与方法 1.1 实验动物 实验动物作为参比对照的成年近交系C 57BL 6J 小鼠、B DF 1小鼠(♀C 57BL 6J ×♂DBA 2)和作为代母的昆明种封闭群小鼠。 1.2 试剂 PMSG (pregnant mare serum gonadotropin )、HC G (human chorionic gonadotropin )、胚胎移植用Injection Medium 培养液、M 2培养基等。1.3 假孕代母的准备 1.3.1 昆明种雄性小鼠的结扎 为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎手术,以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术,术后备用。1.3.2 制备假孕代母 胚胎移植前一日(子宫移植,前三日)将已施行输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1∶2与其雌性小鼠进行同笼交配,次日检查阴道栓有无,以阴道栓形成者作为移植用代母。1.4 卵的采集 1.4.1 超排卵 [4] 取出生后8～10周的C 57BL 6J 及B DF 1雌性小鼠进行PMSG 处理(腹腔注射,5IU 只),48h 后进行HC G 超排卵处理,方法、剂量相同,HC G 处理14～17h 后可进行受精卵的采集(子宫移植,为HC G 处理后第三日)。 1.4.2 交配 取已注射PMS 、HCG 后的C 57BL 6J 、B DF 1雌性小鼠与其相应的C 57B L 6J 、BDF 1雌性小鼠进行同笼