培养基的制备
培养基概念：
是指以液体、半固体或固体形式，包含天然或合成成分，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。
培养基的分类：
按功能分类：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。
按物理性状分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
液体培养基：所配制的培养基是液态的，这种培养基被用来微生物的增菌和生长状态观察。
固体培养基和半固体培养基：在液体培养基中加入适量的凝固剂制成成固体培养基和半固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂。固体培养基琼脂用量1.5-2%，半固体培养基琼脂用量在0.5～1%之间。固体培养基用作微生物的分离、鉴定、计数、保藏等。半固体培养基被用来观察微生物的动力和保藏菌种。
今天给大家展示一下各种培养基的制备。
培养基制备的基本过程：
调配成分、溶解、校正pH、分装、灭菌、质量检查和保存
所需物品：试剂、锥形瓶、天平、量筒、微波炉、高压蒸汽灭菌器、玻璃试管、玻璃平板、接种工具。
（1）调配成分：
在锥形瓶或大容量烧瓶中依次加入蒸馏水200ml，1％蛋白胨，0.5％NaCL，0.3％牛肉膏（g/v），准确称取各种成分，使其充分混合。[注意事项]
培养基调配溶解：
先在锥形瓶底加入少量的蒸馏水，再加入培养基成分，以防其粘在锥形瓶底部烧结。制备培养基时，除玻璃容器时，还可用铝锅，搪瓷桶，但不可用铁，铜等容器，以免铁和铜离子进入培养基（培养基中铁离子含量超过0.14mg/L时抑制细菌毒素的产生，含铜量超过0.3mg/L 时抑制细菌的生长）。培养基中若需加入染料，胆盐，指示剂等，应在校正pH后加入。
（2）溶解：
将配制好的混合物微波炉加热8min，使其完全溶解，补足失水。（3）校正PH：
不同的细菌需要在含不同pH培养基上生长，一般将培养基的pH调至7.2～7.6。商品化的试剂配制后可省略该步骤，无需校正PH。根据所需的培养基用途不同分别加入不同含量的琼脂，制成半固体培养基和固体培养基。
（4）分装：（液体培养基、半固体培养基和部分固体培养基的分装可在灭菌钱也可在灭菌后）
①基础培养基：一般分装于容量为500ml锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；
②琼脂斜面：通常在融化后分装于试管，量约为试管高度的
1/4~1/3
，灭菌后倾斜放置。
③半固体培养基：分装量为试管容量的1/4~1/3，灭菌后直立放置。
④液体培养基：分装量为管长的1/5，灭菌后直立放置。
（5）灭菌：
分装好的培养基常用高压蒸气灭菌，条件为103.43kPa，温度121℃15~20min；含糖培养基以68.95kPa，10~15min为宜，以免破坏糖类物质；不耐高热的物质配制成的培养基，常用流通蒸气灭菌或滤过除菌。琼脂平板制备：先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内（内径75mm的平皿约8-9ml），水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
营养平板制备：先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作加入10%无菌的脱纤维羊血（临用前置37℃水浴预温30min），轻轻摇匀（避免产生气泡），倾注于灭菌平皿内（内径75mm的平皿约8-9ml），水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。[注意事项]
平板的浇注：倾注培养基时，切勿将皿盖全部开启，以免空气中尘埃及细菌等微生物的落入。倾注时若培养基温度过高，则冷凝水过多，易致污染，不易分离到菌落；若温度过低，部分琼脂凝固，倾注平板表面高低不平。可在无菌室或接种罩内倾注培养基后，将皿盖稍开一缝隙，在紫外灯照射下待凝，这样利于蒸气散发，减少平板内冷凝水。倾注血液琼脂时，由于加血时琼脂表面容易产生气泡，倾注时适时转动锥形瓶，使气泡附于瓶壁，以减少血平板表面的气泡。
（6）质量检查：
需做无菌试验和效果试验。
①无菌试验：将灭菌后的培养基置37℃孵育24h，无任何微生物生长为合格。
②效果试验：将已知的标准参考菌株接种于待检的培养基中，检查细菌的生长繁殖状况和生化反应是否与预期的结果相符和。
（7）保存：
经过质量检查合格的培养基注明名称，制作日期存放于冷暗处或4℃冰箱（固体培养基应将平皿的底朝上，盖朝下或用保鲜袋包裹，以减少水分蒸发，液体培养基应直立放置，以免污染）。
微生物的分离培养和接种技术
接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。将微生物混和培养物通过一定的接种技术接种到人工培养基中得到纯培养的过程称为分离纯化。今天给大家展示一下各种培养基的分离培养的接种技术和细菌的生长状态。
1.接种所需物品：接种工具（接种环、接种针等）、酒精灯、待接种菌种。接种环用于固体和液体培养基的接种，接种针用于固体培养基和半固体培养基的接种。接种技术要求：用灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于
灭菌培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。
接种工具的灭菌方法：通常接种环或接种针在火焰上外焰灭菌。灭菌后的接种工具在接种微生物前需先冷却，可接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。接种后将接种工具再次灭菌才可放置。
2.接种环境：为避免接种过程中标本中的微生物污染环境及空气中的微生物污染培养物，微生物的接种应在特定环境内接种。常用的设备有接种罩、超净工作台或无菌室等。
3.接种方法：根据待检标本性质、培养目的和所用培养基的性质采用不同的接种方法。
（1）平板划线分离培养法：通过平板划线分离培养使混合细菌培养物在培养基表面分散生长，各自形成菌落，根据菌落的形态及特征，挑选单个菌落，经过移种而获得纯种细菌（纯培养）。平板划线分离培养法常用来分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。根据划线的方式不同有连续划线分离法、分区划线分离法、棋盘划线分离法等。
a.连续环线分离法：
先将接种环火焰灭菌,待冷后取培养物少许。左手拿起平板，并用拇指和食指将平板盖打开，右手迅速将取有培养物的接种环从打开的空间插入平板内，使接种环与培养基表面呈45℃角，先在平板上1/5处轻轻涂布，然后即可左右来回以曲线形式作连续划线接种，线与线间留有适当距离，将整个平板表面划满曲线。注明标识后，置
35℃培养箱中培养，一般在18~24小时后观察结果。
b.分区划线分离法：
用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线,再在2、3……区依次划线。每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域。每一区域的划线均接触上一区域的接种线1~2次，使接种量逐渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相同。
c.棋盘格线划线分离法：
将培养物涂布于平板上1/5处，接种环经火焰灭菌后，自1/5划线处作平行划线5~6条，将接种环灭菌后，划垂直线5~6条，使呈正方形格。其他操作同前。
（2）斜面接种培养法：
主要用于纯菌移种，以进一步鉴定或保存菌种。接种方法是以灭菌的接种环挑取细菌后伸入斜面培养基管，在斜面底部向上划一条直线，然后从底部起向上作曲折连续划线，直至斜面上方顶端。取出接种环，火焰灭菌管口，加塞；最后将接种环经火焰灭菌放好。做好标识，置35℃培养箱中培养18~24小时。
（3）液体接种法：
主要用于微生物的增菌和生长状态观察。接种方法是以灭菌的接种环挑取细菌后伸入培养基管中，在接近液面的管壁上方轻轻研磨，并沾取少许培养基液体调和，使细菌混合于培养基的液体中。取出接种环，火焰灭菌管口，加塞；最后将接种环经火焰灭菌放好。做好标识，置
35℃培养箱中培养18~24小时。
（4）半固体培养基穿刺接种法：
多用于保存菌种、观察动力及厌氧培养等也可以用于观察细菌的某些生化反应。以灭菌接种针挑取细菌后，垂直刺入培养基的中心（半固体或一般琼脂高层）直达近管底部（但不能完全刺到管底），接种针应沿原路退出。
细菌的生长现象
细菌在不同的培养基上接种后，在一定的培养条件下（通常为35℃培养箱中培养18~24小时），可表现不同的生长现象。
（1）固体培养基：细菌在固体培养上生长后可表现出2种生长情况：菌落和菌苔。
菌落：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。菌苔：多个细菌分类繁殖后形成密集一片的细菌集团。
（2）液体培养基：细菌在液体培养基中生长后可表现3种生长情况：表面生长、均匀浑浊、沉淀生长。
（3）半固体培养基：细菌在液体培养基中生长后可表现2种生长情况：沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊生长和沿穿刺线呈线性生长。
常用染色液配制
实验室观察微生物的形态结构主要通过一定的染色方法后在显微镜下，常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色等。
革兰染色液配制
（1）结晶紫染液：
称取结晶紫4～8g，溶于100ml 95%乙醇中制成饱和液。取20ml饱和液与80ml 10g/L草酸钾溶液混合即成，用滤纸过滤备用。
（2）卢氏碘液：
先将2g碘化钾溶于10ml蒸馏水中，再加1g碘，待碘全部溶解后再加蒸馏水至300ml即成。
（3）95％乙醇或丙醇乙醇溶液（95％乙醇70ml＋丙醇30ml）
（4）稀释石炭酸复红液：
称取4g碱性复红溶解于100ml 95％乙醇，即成碱性复红乙醇饱和液，吸取10ml饱和液和90ml 50mgL石炭酸水溶液，混匀，即成石炭酸复红饱和液，再量取10ml石炭酸复红饱和液加90ml蒸馏水混匀即成。抗酸染色液配制
（1）石炭酸复红液：碱性复红8g溶于100ml 95%乙醇制备成碱性复红饱和液，取10ml饱和液与90ml 5%石炭酸水溶液混匀。
（2）盐酸酒精：5%盐酸乙醇液（5ml浓盐酸+95ml 95%乙醇），使用时10倍稀释即可。
（3）亚甲兰液：0.3g亚甲蓝+50ml 95%乙醇，待溶后，加蒸馏水100ml，混匀，使用时10倍稀释。
细菌涂片制作、染色观察和细菌基本形态观察
所需物品：细菌培养物、革兰染色液、细菌接种工具、载玻片、生理盐水、光学显微镜。
1.细菌涂片标本的制作
细菌进行染色检查前首先要制备细菌涂片，制作细菌涂片一般包括涂片、干燥、固定三步。
（1）涂片：用灭菌的接种环挑取1-2环生理盐水涂于洁净的载玻片上，将接种环灭菌后挑取固体培养基上细菌培养物少许于生理盐水中磨匀，呈轻度混浊。涂好菌膜大小一般以1cm2左右为宜。
注意事项：
1)细菌涂片制作每次挑取细菌培养物前后都要注意无菌操作。
2)若是细菌培养物在液体培养基（如肉汤、浓汁、痰液、咽拭子）
中，可用灭菌接种环直接挑取1-2环液体培养物涂布于洁净的载玻片上，不需要另外添加生理盐水。
3)若多个标本同时进行同样染色，可用蜡笔在玻片上画出数格，做
好标记再分别涂片，以免混淆。
4)用火焰烧灼沾有菌液的接种环时，为防止菌液受热溅散污染环境，
接种环灭菌前，须先将接种环靠近火焰或放内焰中烤干，然后再在外焰中烧红灭菌，杀死残留的细菌。
（2）干燥：涂片最好在室温下自然干燥，或将标本面向上，置于酒精灯火焰半尺高处慢慢烘干，切不可在火焰上烧干。
（3）固定：细菌的固定常用火焰加热法，即将上述已干的涂片在酒精灯火焰中通过3次。固定的目的在于杀死细菌，并使细菌菌体与玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉，同时固定可凝固细胞质，改变细菌对染料的通透性。
2.革兰染色法
（1）原理：
1)革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇
不易透入，不易被脱色；而革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易透入，易被脱色。
2)革兰阳性菌等电点叫阴性菌低（PI2-3、PI4-5），在相同条件下，
革兰阳性菌所带负电荷较阴性菌多，与带正电荷的染料（结晶紫）结合较牢固且不易脱色。
3)革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固
地结合成大分子复合物，不被乙醇脱色；而革兰阴性菌细胞内含有极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较少，易被乙醇脱色。
（2）方法：
1)初染：将结晶紫染液加于制好的涂片的菌膜上，染色1min，用细
水流冲洗，甩去积水。
2)煤染：加卢戈碘液作用1min，用细水流冲洗，甩去积水。
3)脱色：滴加95%乙醇数滴，摇动玻片数秒钟，使均匀脱色，然后
斜持玻片，再滴加酒精，直至流下酒精无色为止（约0.5min），用
细水流冲洗，甩去积水。
4)复染：加稀释石炭酸复红染0.5min，用细水流冲洗，甩去积水，
用吸水纸吸干后，在涂片菌膜上滴加香柏油，置油镜下检查。
注意事项：
操作因素：涂片太厚或太薄，固定菌体过分受热或脱色时间长短，染液冲洗方法不同，都会影响染色结果。
细菌因素：细菌的菌龄不同，染色结果也有所差异。
染液因素：所有染液应防止染液蒸发而改变浓度，特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去煤染作用，涂片积水过多会改变染液浓度，影响染色效果。
抗酸染色法
1.细菌制片：同革兰染色（但需厚涂片）。
2.抗酸染色
初染：将固定好的涂片置于染色架上，滴加饱和石炭酸复红染液，并于载玻片下方以弱火加热至出现蒸汽（勿煮沸或煮干）随时补充染液以防止干枯，持续5min, 水洗。
脱色：3%盐酸酒精脱色，直至涂片无红色染液脱下为止，然后水洗。复染：美蓝染液复染1min，水洗，印干（印干用的滤纸只能使用一次，以防止假阳性）。印干后，在涂片菌膜上滴加香柏油，置油镜下检查。
3.细菌基本形态观察
革兰染色后的细菌涂片可在普通光学显微镜的油镜下观察细菌具体形态。
普通光学显微镜由光学方法系统和机械装置两部分组成，光学放大系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等，机械装置一般包括底座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒等。
普通光学显微镜油镜使用方法
普通光学显微镜的接物镜一般有3种，即低倍镜、高倍镜和油镜。检查微生物形态时常用的是油镜。油镜的标志是：①透镜直径最小；②油镜长度大于低倍镜和高倍镜；③油镜头的下缘有一圈黑线或白线
④有放大倍数100X的标记。当接目镜倍数为10X，接物镜用油镜时，显微镜放大倍数为1000倍，可观察到细菌的形态。
油镜观察的原理：油镜的透镜很小，自标本片透过的光线，因玻片和空气介质密度不同，而使部分光线经载玻片和空气折射后而不能进入接物镜，致使射入光线较少，物象不清晰。在油镜和标本之间滴加与玻璃折光率相近的香柏油，则使进入油镜的光线增多，视野光亮度增强，物象清晰。
1)显微镜在使用时应平放在实验台适宜的位置。用油镜时，勿使镜
臂和载物台倾斜，以免镜油流出，影响观察。
2)油镜检查染色标本时，光线宜强，可将聚光器上升到最高位置，
将光圈全部打开，以获得最佳光度。
3)将染色后待检查的标本置于载物台上，用标本推进器固定，将待
检标本的菌膜移于接物镜下。
4)标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换成油镜，缓慢转动粗调节
器，使油镜头浸没在油滴中，当油镜头几乎接触玻片时停止转动。
观察接物镜，缓慢调节粗调节器，使镜筒上升（不能下降，以免压碎标本片和损伤油镜），待看到模糊物象使，再调节细调节器，直至清晰看到细菌。调节过程中若油镜末端已离开油面，应按上述过程重复操作。
5)观察标本时应两眼同时睁开，以减少眼睛疲劳，同时调节两个目
镜之间的距离直至获得最佳视觉效果。
注意事项
1)显微镜是精密的光学仪器，使用时应注意爱护，各部分结构不得
随意拆卸，以免损坏。
2)取送搬移显微镜时，要一手持镜臂，一手托镜底，平端在胸前，
轻拿轻放。
3)避免强酸、强碱、氯仿、乙醇、乙醚等化学药品与显微镜接触。
显微镜光学部分必须保持清洁，避免阳关直接照射。细调节器是显微镜精细而脆弱的部分，不要向同一方向连续转动数周，应轻微地来回旋转。
4)镜头必须保持清洁，只能用软且无毛的擦镜纸擦拭。油镜使用后
应立即用擦镜纸拭去镜油，若油镜头的油迹未擦干净，应先将二甲苯滴在擦镜纸上擦拭镜头，再用干净擦镜纸擦去镜头上残留的
二甲苯。
5)显微镜擦净后，接物镜转成“品”字形，下降聚光器，套上显微
镜套，放入实验柜中。
细菌的基本形态观察
经革兰染色后油镜观察：细菌染色可分为两种：革兰阳性（紫色）、革兰阴性（红色）；细菌形态可分为3种：球形、杆形、螺形。
经抗酸染色后油镜观察：在淡蓝色背景下可见染成红色细长或略带弯曲的杆菌，并有分枝生长趋向，此为抗酸染色阳性菌。其他细菌和细胞均被染成蓝色。
细菌的生化反应
不同的细菌具有不同的酶系统，对底物的分解能力及代谢产物都不同。这些代谢产物具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌，称为细菌的生化反应。
生化反应的分类：1.碳水化合物的代谢试验（糖、苷、醇类发酵试验；氧化-发酵试验；七叶苷水解试验；甲基红试验；V-P试验）2.蛋白质和氨基酸的代谢试验（吲哚试验；硫化氢试验；尿素分解试验；苯丙氨酸脱羧酶试验；氨基酸脱羧试验）3.碳源和氮源利用试验（枸橼酸盐利用试验）4.细菌酶试验（凝固酶试验、过氧化氢酶试验、氧化酶试验、硝酸盐还原试验、CAMP试验、胆汁溶菌试验）5.抑菌试验（杆菌肽试验、0/129试验）。今天示教一下细菌常见的生化反应接种方法和结果。
1.糖发酵试验
组成：培养基+糖（苷、醇）+指示剂（溴甲酚紫）
原理：各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解仅产酸，有的分解产酸又产气，故可用来鉴别细菌。
方法：将待检菌接种糖发酵管（液体培养基接种法），35℃培养箱中培养18~24小时，观察结果。
结果：见示教管。
2.甲基红试验
组成：葡萄糖蛋白胨水培养基+指示剂（甲基红）
临床实验室各专业的具体要求 临床化学 室内质空: 质控品：至少一个浓度水平， 测定频度：每天至少测定一次 质控规则：至少1-2S, 1-3S，2-2S 实验室内不同仪器（系统）间的比对： 样本：每个项目应该选择至少5份不同浓度水平的新鲜病人血清。 结果判断：不同仪器测定的结果之间的相对偏差不能大于2倍RCV，但不能超过1/2PT可接受范围。 频度：每年至少一次。 项目：实验室内在不同仪器上重复测定的项目 系统的完整性和有效性 配套试剂和校准品可接受； 非配套试剂和校准品：提供准确性的实验证明 利用室间质量评价结果进行评估 （建议修改为：应要求厂家提供有关检测系统完整性和有效性的证明，其内容应包括：《1》准确性（含校准品的朔源程序及不确定度）；《2》精密度（瓶间、批间）；《3》线性范围和可报告范围；《4》特异性；〈5〉抗干扰能力；〈6〉参考范围等。如厂家不能提供，则实验室应参照EP-9A文件与有证明的检测系统进行比对。同时利用室间质量评价结果进行评估。）
免疫 定性测定室内质控：除了试剂盒附带的阴阳性对照以外，实验室还应该选择至少2个室内质控品，其中一个质控品应为弱阳性，接近Cutoff值，S/Co应该为2-4；一个是阴性质控品。每次检测都应该有，ELISA 测定每块板都应该有。 定量：每个项目每次至少有一个水平的质控物。 质控方法： 定性：可以采用弱阳性样本的S/CO作质控图，判断标准为弱阳性的样本不能测定为阴性，反之亦然，重复性的判断规则：1-2S,1-3S, 2-2S。 定量测定：同生化 胶体金、胶体硒等试纸条快速检测可不做室内质控品测定。 凝集试验：血凝及乳胶凝集试验的室内质控可为试剂盒带的阴阳性对照。 仪器设备： 酶标仪、全自动酶免分析系统、全自动加样系统、全自动免疫分析仪、PCR仪、加样器、温箱（包括水浴箱）、温度计需维护、比对/校准程序，每年至少一次。对于无法校准的仪器、可以用年维护记录来替代，但是必须有相应的实验数据。
实验室技术操作规范 一、无菌操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5. 在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 1．灭菌前准备 （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。
化学实验员工作职责 一、化学实验员应认真学习业务，熟悉化学教学大纲及各项演示实验。 二、做好仪器的保管工作，仪器、药品必须分类、编号、并贴上标签，分门别类上橱存放、陈列有序。 三、根据仪器和药品的特点做好防潮、防磁、防震、防腐、防毒等各项防护措施。 四、熟悉本实验室仪器设备的性质、构造及保养等专业知识，平时做好仪器的维修工作，保证其正常使用。 五、及时检查落实实验室通风、急救、防火、防盗等安全措施，仪器室应保持整洁，每日应做好清洁卫生工作。 六、每学期初应根据各教师的教学计划，相应订出学生分组实验进度表。 七、认真及时做好申购、采运、领用、报损等手续，建立严格的规章制度。 八、应对学生进行化学药品防爆、防毒的宣传教育，保障化学实验安全进行。 九、协助任课教师安排好演示及分组实验的课前准备工作，并办理好借还手续，及时填报实验记录单。 十、学生实验完毕，及时清理，做好善后工作。
生物实验员工作职责 1、生物实验员应认真学习业务，熟悉生物教学大纲及各项演示实验。 2、做好仪器的保管工作。仪器、药品必须分类、编号、并贴上标签，分门别类上橱存放、陈列有序。 3、根据仪器和药品的特点做好防潮、防磁、防震、防腐、防毒等各项防护措施。 4、熟悉本实验室仪器设备的性质、构造及保养等专业知识。平时做好仪器的维修工作，保证其正常使用。 5、及时检查落实实验室通风、急救、防火、防盗等安全措施。仪器室应保持整洁，每日应做好清洁卫生工作。 6、每学期初应根据各年段教师的教学计划，相应订出学生分组实验进度表。 7、认真及时做好申购、采运、领用、报损等手续，建立严格的规章制度。 8、协助任课教师安排好演示及分组实验的课前准备工作，并办理好借还手续，及时填报实验记录单。 9、学生实验完毕，及时清理，做好善后工作，药品、仪器归还原处，及时填写好实验记录和通知单，每学期上报一次给教务处。
实验室设置及管理制度
实验室设置及管理制度1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理， 防止实验污染，保证检测结果的可靠性。 2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、 工作流程和日常管理等。 3. 责任人:科主任及PCR工作人员 4. 总则： 4．1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室， 从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工 作。 4．2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为试 剂准备区、样品制备区、扩增及产物分析 区三区。各工作区的实验物品（含加样器、 试管架、吸头、记录纸、笔等），不得混用， 须贴上不同颜色标志予以区别，试剂准备 区为白色标志，样品制备区为蓝色标志， 扩增及产物分析区为粉色标志。 4.3 禁止非本室工作人员进入实验室，参观实 验室等特殊情况须经实验室负责人批准后
方可进入。 4.4 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。 4.5 进入实验室，必须更换本室有颜色标志的工 作服，每周换洗工作服。 4.6 实验室工作人员必须必须严格遵守实验室 各项规章制度并按照PCR实验室操作程序 进行，操作。 4.7实验开始前必须先做好室内及工作台的清 洁消毒，离心管、吸头等一次性用品均需高 压灭菌处理。 4.8 每年校准PCR仪、加样器、温度计、恒温设备、离心机和生物安全柜等仪器、设备。 4.9 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼睛、化妆及储存食物。 4.10产物分析区排风扇应昼夜工作。 4.11每日工作结束后，认真执行《清洁、废弃物处理的标准操作程序》, 彻底清洁、洗消剂消毒地面和实验台面；将废弃物品放置在指定位置。 4.12离开实验室时，应打开紫外灯,关好水、 电、门、窗。 5. 试剂准备室管理制度
微生物实验室的安全操作规程 1 实验室安全 1.1 微生物实验室的生物安全性 1.2 科室安全文档 （a）生物危害防护：实际操作规程见（《实验室生物安全通用要求》，中华人民共和国国家标准GB19489-2004。2004-01-05发布，2004-10-01实施。） （b）实验室安全：原则和措施见（《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》，中华人民共和国卫生行业标准WS 233-2002。2002-12-03发布，2003-08-01实施。）1.3 应用： 以上的操作规程应用于微生物科室的所有部门。工作人员或访问人员必须遵守各项规定。 1.4 关于新规定或现行规定的修改案： 任何新规定或现行规定的修改案必须通知负责科室安全的人员及相关人员，他们将建议科室主任考虑实施。 1.5 生物性危害 1.5.1 与各种操作有关的生物危害水平取决于： a.处理的传染性物质的本身： 按照传染性物质对个人和社区的潜在危险性以及经空气传播的可能性，其划分成不同等级。所采用的等级划分详见＂《实验室生物安全通用要求》＂；原则和措施（见《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》）。 b.使用的设备和设施： 处理不同等级的传染性物质的要求在＂实验室安全＂中已规定。这些符合要求的设备都要承担重要临床工作，科室负责人必须保证中应污染物水平。 c.培训，特别是员工的安全性培训和安全性经验积累。所有员工应该接受一定训练，能安全处理任何实验室可能碰到的物质，避免将实验不能处理或规定之外的传染性物质暴露在实验室，即使暴露事故在实验室，即使暴露事故发生也要会正确处理。 1.5.2 传染性物质的分类 1.5. 2.1分类系统
稀土学院实验室管理规章制度实验室是进行日常实验教学和科研的场所。在使用过程中，要严格遵守实验室的各项规章制度和操作规程。 1、实验室内要保持安静、整洁，严禁在实验室内吸烟、大声喧哗、乱丢 纸屑等一切不利于实验室安全和卫生的行为；严禁在实验台、桌、柜子上涂写乱画。 2、不得随意乱动与实验无关的设备、仪器。尤其是自己不清楚其用途的 设备，更要严禁乱碰、挪动，以免对实验室以及人身安全造成威胁。 3、自觉爱护实验室的任何公用设施。实验完毕后，及时断电、关水，将 使用过的仪器、药品放回原处，台面整理复原，工作台面、地面卫生打扫干净后经相关负责人检查无误后 、--- 宀、-, 方可离开。 4、严禁学生私自配制实验室房门钥匙，进实验室做实验的学生需要事先 向管理人员申请，并由管理人员给开门后方可进实验室，管理人员做好登记，期间实验室的卫生、安全等等都由学生负责。做完实验后要向管理人员说明，检查没问题后方可离开。 5、实验室钥匙的保管 1) 由专人保管实验室房门钥匙，室内药品柜钥匙由各自老师自己保 管 2) 任何人(包括老师)不得私自配置实验室钥匙 3) 在非工作日期间，房门钥匙只能转借给本学院老师使用，到工作
日及时将钥匙归还，严禁借给学生或其他院系的人，以防伺机复 制。 4) 教师借用钥匙期间实验室的安全状况 (包括水电、卫生、仪器) 都由借用教师负责。借用时要登记借用和归还钥匙的时间，以便 出现状况时责任到人。 5) 导师原则上不能将钥匙借给自己学生(包括研究生在内)。如遇学 生需要进入实验室的，负责保管该实验室钥匙的老师亲自打开房 门。 6) 如果情况特殊需将钥匙交给学生的，必须签订书面协议 (1、不准 配钥匙。2、此期间负责实验的一切) 。否则一经发现指导老师 负全部责任，并禁止该学生再进实验室。导师有义务交代学生拿 钥匙期间负责实验室安全以及仪器的安全。 6、实验管理人员的职责 1) 实验室各种记录本的保管和监督记录工作。 2) 实验药品的选购和保管 3) 仪器说明书的保管 4) 实验室卫生的监督。有权利让学生实验结束后打扫卫生。 5) 实验室房门以及药品柜钥匙的保管 7、对于做毕业论文的本科生和日常实验的研究生实行导师管 理制度。 1) 每个导师名下的学生由导师对其负责和监督。进实验室之前对其 认真讲解需要注意事项，出现问题导师负责。 2) 对于实验仪器的使用，导师有义务向学生讲解仪器的使用及保养
实验室安全管理制度 1.临床实验室安全管理的目的是按照国家颁布的法令、法规，保障工作人员、病人和进入临床实验室人员的安全，保证仪器设备、有毒和易燃、易爆试剂的安全使用，使工作人员在安全的环境和条件下完成日常工作。 2.工作人员须穿工作服，必要时穿隔离衣、胶鞋，戴口罩、手套。 3. 使用合格的一次性检验用品，用后进行无害化处理。 4. 严格执行无菌技术操作规程，静脉采血必须一人一针一管一巾一带；微量采血应做到一人一针一管一片；对病人操作前洗手或手消毒。5 .无菌物品如棉签、棉球、纱布等及其容器应在有效期内使用，开启后使用时间不得超过24小时。6. 各种器具应及时消毒、清洗；各种废弃标本应按医疗垃圾处理。7 .检验人员结束操作后应及时洗手。8 .保持室内清洁卫生，每天对空气、各种物体表面及地面进行常规消毒。在进行各种检验时，应避免污染；在进行特殊传染病检验后，应及时进行消毒，遇有场地、工作服或体表污染时，应立即消毒处理，防止扩散。９．菌种、毒种按《传染病防治法》进行管理。10.对剧毒化学药品，压力设备和贵重仪器责任到人。进行安全教育和安全督查。 11.保证实验室电、水使用的安全，防止超负荷用电。使用电炉时一定要有人看守。使用电高压消毒锅时，一定要遵守操作程
序，以防爆炸。下班前一定要检查水、电开关，关好门窗，注 意防盗。 12.使用强酸、强碱、腐蚀、有害、易燃、易爆品时，应在适当 的环境中正确操作，防止腐蚀、灼伤、中毒、水灾和爆炸等事 件的发生。 13.对工作中可能发生的以外事故，如发生医疗暴露等事件，要 严格按照医院制订的应急处理方法处理，不得延误。 14.保护好防火设施，保持走廊通道畅通，便于火警时人员安全撤离。
实验室规范化管理制度 1. 总则 1.1. 为进一步加强实验室建设和管理，促进实验室规范化管理，提高实验室的综合能力和检测数据的准确性，充分发挥实验室在质量控制中的作用，本规定进一步规范实验室仪器、药品使用及储存管理，加强实验室危险化学品的安全管理，规范各类仪器、设备的维护和保养，建立起标准化、规范化的实验室，特制定本规定。 1.2. 本规定适用于四川光亚聚合物化工有限公司质管部实验室内部管理。 2、实验室规范化管理基本要求 2.1. 实验室是进行检测、检定、校验工作的场所，应保持清洁、整齐、安静，检测室 温度、湿度符合相关项目检测环境条件需要。 2.2. 与试验检测工作无关的人员及物品不得入各检测室，实验人员不得做与检测和质 量改进实验无关的事情。工作期间严禁离岗、聊天、嬉戏、打闹、吸烟 2.3. 严格遵守安全生产的规章制度，工作时应戴相关的手套，严禁用手触摸带电器柜， 遵守安全用电规定。 2.4. 相互产生交叉污染或干扰的项目必须分室进行，不同项目的台面和物品不准混用。 2.5. 严格遵守本行业的有关法律、法规和规章，每次实验必须有详尽的实验记录，原 始实验记录、数据按规范和要求必须严格管理。 2.6. 工作完备后清理试验场地，关闭电源，水龙头和门窗，做好防水、防火、防盗等 工作。 2.7. 必须遵守危险品的有关规程，对于使用的易燃、易爆、剧毒和有腐蚀性物品，从 进场、领取、使用、废弃等环节上严格按操作程序和细则进行管理。 2.8. 实验室钥匙管理应严格遵守实验室有关钥匙管理的要求，严禁任何人以任何借口 私自配制或转借他人。 2.9. 建立卫生值日制度，实验室清洁卫生落实到人，定期打扫室内外环境卫生， 疏通排水沟
医疗机构临床实验室管理办法 第一章总则 第一条为加强对医疗机构临床实验室的管理，提高临床检验水平，保证医疗质量和医疗安全，根据《执业医师法》、《医疗机构管理条例》和《病原微生物实验室生物安全管理条例》等有关法律、法规制定本办法。 第二条本办法所称医疗机构临床实验室是指对取自人体的各种标本进行生物学、微生物学、免疫学、化学、血液免疫学、血液学、生物物理学、细胞学等检验，并为临床提供医学检验服务的实验室。 第三条开展临床检验工作的医疗机构适用本办法。 第四条卫生部负责全国医疗机构临床实验室的监督管理工作。 县级以上地方卫生行政部门负责辖区内医疗机构临床实验室的监督 管理工作。 第五条医疗机构应当加强临床实验室建设和管理，规范临床实验室执业行为，保证临床实验室按照安全、准确、及时、有效、经济、便民和保护患者隐私的原则开展临床检验工作。 第二章医疗机构临床实验室管理的一般规定 第六条卫生行政部门在核准医疗机构的医学检验科诊疗科目登记 时，应当明确医学检验科下设专业。 医疗机构应当按照卫生行政部门核准登记的医学检验科下设专业诊疗科目设定临床检验项目，提供临床检验服务。新增医学检验科下设专业或超出已登记的专业范围开展临床检验项目，应当按照《医疗机构管理条例》的有关规定办理
变更登记手续。 第七条医疗机构临床实验室提供的临床检验服务应当满足临床工作 的需要。 第八条医疗机构应当保证临床检验工作客观、公正，不受任何部门、 经济利益等影响。 第九条医疗机构临床实验室应当集中设置，统一管理，资源共享。 第十条医疗机构应当保证临床实验室具备与其临床检验工作相适应的专业技术人员、场所、设施、设备等条件。 第十一条医疗机构临床实验室应当建立健全并严格执行各项规章制度，严格遵守相关技术规范和标准，保证临床检验质量。 第十二条医疗机构临床实验室专业技术人员应当具有相应的专业学历，并取得相应专业技术职务任职资格。 二级以上医疗机构临床实验室负责人应当经过省级以上卫生行政部门组织的相关培训。 第十三条医疗机构临床实验室应当有专（兼）职人员负责临床检验质量和临床实验室安全管理。 第十四条医疗机构临床实验室应当按照卫生部规定的临床检验项目和临床检验方法开展临床检验工作。 医疗机构不得使用卫生部公布的停止临床应用的临床检验项目和临 床检验方法开展临床检验工作。 临床检验项目和停止临床应用的临床检验项目由卫生部另行公布。 卫生部定期发布新的临床检验项目和临床检验方法。
微生物实验室的基本要求 实验室总体面积应在70平米以上，要求水、电供应充足，畅通，排污设施与安全措施齐备。 一、选址： 1. 实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道； 2. 实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离； 3. 实验室应选择在方便取样与检验，距离车间较近的工作场所。 二、结构和布局： 应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。 1. 办公室 2. 理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并） ①理化分析室（兼作感观检验室） ②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器） 3．细菌实验室： ①细菌检验操作室； ②无菌室； ③培养基制作室； ④洗涮消毒室； 一般布局要求如下： 1. 办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。 2. 细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。 对实验台的要求： a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜； f. 实验室围护结构采用彩钢板材料，表面光滑、耐腐蚀、防水，所有缝隙可靠密封，便于清洁消毒，且防震、防火； g. 墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜。 3. 无菌室：无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局： a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有工作台（中心与边台皆可），紫外灯距工作台面要小于1.5m； e. 微生物室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮，地面应光滑，并应有缓冲间，设双层传递窗传递物件； f.门窗应是不锈钢的； g．室内温度18～26℃，相对湿度为45～65%，室内必须保持整洁； h．墙面、吊顶：彩钢板：钢板厚度0.426，15克覆膜； i. 地面采用PVC材料，防渗漏、无接缝、光洁、防滑。 4. 培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品橱。 a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药橱分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品用。 5. 洗涮消毒室：洗涮消毒室用以消毒洗涮待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物，其面积应大于10平米。 为满足洗涮消毒的功能，洗涮消毒室应设有： a.1-2个洗涮池，洗涮池上下水网要畅通；
实验室管理规章制度 (汇编) 物理科学与电子技术学院 2007年9月
前言 高校实验室是高素质复合型人才培养的重要基地，是高校开展教学、科研的主要平台。实验室管理是发挥实验室作用的重要方面。为了更好地管理和规范实验室教学与管理，我们在学校有关规章制度的基础上制定了适合我院实际情况的相关措施和制度。如与学校规章制度冲突的，以学校的规章制度为准。 注：所有制度中提及的“学院”是指物理科学与电子技术学院，“学校“是指盐城师范学院。 物理科学与电子技术学院 2007年9月
目录 1 实验中心工作条例1 2 实验室管理制度3 3 实验室安全管理制度4 4 实验室档案管理及信息收集制度5 5 开放实验室工作规程6 6 低值耐用品、低值易耗品管理办法7 7 学生实验守则8 8 实验器材赔偿制度9 9 实验室工作人员考核办法10 10 实验中心主任职责11 11 实验室仪器设备管理制度12 12 实验室保管员工作职责13 13 实验室规则15 14 实验教师工作职责16 15 首次上实验课教师试讲规定17 16 实验室工作人员管理制度18 17 实验考试评分细则19 18 大型精密仪器设备管理制度20 19 仪器设备报修报废管理条例23 20 课程设计报告规范细则24 21 实验报告规范（暂行）33
实验中心工作条例 1、实验室是进行教学，科研活动的重要场所。实验室工作是教学、科研工作的重要组成部分。为了加强我院实验中心的建设和管理，保障教学质量和科研水平，全面推进素质教育，培养学生创新能力，结合我院实际情况，特制定本条例。 2、实验中心工作必须认真贯彻党的教育方针，保证完成各项实验教学任务，不断提高工作和管理水平。根据需要和可能，积极开展科研，生产试验，技术开发与对外技术服务。非我院计划内教学、科研及对外服务，必须经实验中心主任后报学院，学院根据学校有关规定，同意后方可进行。 3、实验中心实行校、院二级管理，由一位院长主管实验中心工作，实验中心主任全面负责实验中心的日常工作。实验中心主任由学院推荐经学校批准聘任或任命。 4、实验中心建设与撤销，由学院报学校批准后实施。实验中心用房、实验仪器、设备及辅助设施由学院按学校有关规定进行分配、调整、购置、使用，任何人、任何实验室不能私自利用实验中心财产从事非本院教学、科研活动。 5、实验中心工作人员的管理依据《实验中心工作人员管理制度》执行，其职责依据《实验中心主任职责》、《实验教师工作职责》、《实验室保管员工作职责》等履行，其工作业绩考核依据《实验人员考核办法》执行。 6、实验中心专职技术人员是实验中心的管理责任人。实验中心财产的购置、管理、依据《固定资产管理条例》、《低值物品管理办法》、《精密仪器、大型设备使用管理办法》执行，其损坏赔偿依据《仪器设备损坏、丢
医院实验室规章制 度 1
医院实验室规章制度 【篇一：医院检验科管理制度】 安全管理制度 生效日期： 医院检验科 目录 实验室安全管理制度 1. 禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入。 2. 禁止非工作人员使用实验室仪器、设备及其它物品。未经允许，非工作人员禁止翻阅实验室任何资 料。 3. 实验室各类测试数据、病人资料、记录和文件等均按保密规定进行保管和使用，任何人不得擅自对 外提供。如发现泄密事故，应立即采取补救办法，并对泄密人员进行严肃处理。 4. 实验室的电、水、气设施必须按规定安装，禁止超负荷用电，不得乱拉、乱接临时线路。有接地要
求的仪器必须按规定接地。 5. 各类在用仪器设备和防护装置必须保持完好状态，不准随意改动安全装置。精密贵重仪器和大型设 备应由专人操作和管理，未经批准不得擅自操作和拆卸。稀缺贵重材料和剧毒、易燃、易爆、放射性等危险物品必须分类、分柜存放，专人管理。注意防水、防高温、防电火花、防晒，通风良好。 6. 每天下班前，工作人员应关好水电、空调、电脑、仪器、火种、门窗等，确认无隐患后方可离去。 节假日前各室负责人应统一检查，落实值班人员和责任，消除不安全隐患。 7. 电炉、煤气炉使用时，工作人员不得离开现场。 8. 实验室内配有灭火器材，消防器材要放置在明显、便于取拿的位置。工作人员都要熟悉消防器材的 使用方法。消防器材要妥善保管，不得随意挪动。定期检查消防器材是否合格。 9. 贵重物品妥善保管，做好安全防盗措施。 10. 作好消毒隔离工作，注意自身防护，防止传染病发生。 11. 实验室要把安全知识、安全制度、操作规程等列为培训的内容之一，新进实验室的人员（包括外协 人员）必须先经过安全教育培训，在掌握了安全操作技能和具有自我保护能力后，才能动手操作。实习和进修人员必须在带教人员的指导
微生物实验室安全及操作规定 1目的：为规范微生物实验操作，确保操作安全有效，制定本规定。 2.适用范围：化验室的微生物检测。 3.要求： 3.1无菌室的门要随手关闭，以防外界微生物的进入。 3.2微生物室内应保持清洁，不得存放与实验室无关的物品。 3.3进入无菌室前要更换经过灭菌的专用工作衣.帽.鞋。 3.4无菌室内应备有体积分数为0.1%的新吉尔灭溶液.体积分数为70~75%的酒精棉球，以便样品表面及意外污染消毒。 3.5无菌室内应备有镊子.剪刀.接种针.接种环，每次使用前后应在酒精灯火焰上灼烧至无菌。 3.6检验人员在操作过程中需严格按照要求进行操作，不得随意减少工序。 3.7无菌室禁止交谈，操作过程中不得用手触摸其它未消毒.灭菌的区域，与该工作无关人员不得随便出入无菌室。 3.8微生物（无菌室.缓冲间）每次使用前，用紫外灯照射30min，要每周检测一次室内空气清洁度，确保其符合实验条件。每周对微生物室进行至少一次2h以上紫外灯消毒。微生物室内的的菌种总数>5cfu/平皿时，需要对无菌室.缓冲间用85~95%乳酸熏蒸1h，熏蒸结束后（必要时可以将空间密闭整晚），用体积分数为0.1%的新吉尔灭溶液或体积分数为70~75%的酒精棉彻底对洁净室.缓冲间及其内所有设备.物品进行清洗；后对无菌室.缓冲间进行半小时以上紫外线消毒，结束后，验证室内空气清洁度是否合格，仍不合格，则可加大乳酸熏蒸时间及紫外线灭菌时间。 3.9每次微生物试验紫外灯灭菌前，需将所用的吸头.剪刀.纱布等物品浸泡于消毒剂中。 3.10接种前所用的试管.平皿及培养基必须经消毒灭菌，打开包装未使用完毕的器皿，不能再继续使用，金属用具应高压灭菌或用酒精灯过火三次后方可使用。 3.11切忌用手直接接触标本及已灭菌的器材内部，打开瓶塞或管塞时，应夹持在手中适当位置，避免污染。使用完毕的吸管.三角瓶.样品等应及时撤离，不可随意放在洁净工作台内。 3.12微生物检验每批必须做空白.对照试验（菌落总数做1个盐水对照.1个琼脂对照，大肠菌群做单料.双料各1个琼脂空白培养，整个检验过程超净台内的环境空白），同时记录。当有菌生长时必须保留样品及时汇报，分析原因再做处理，如果空白试验不符合要求，微生物结果不能出具。 3.13每次微生物实验结束后，所有物品及时撤离无菌室，并用体积分数为0.1%的新洁尔灭溶液将超净台内清理干净，酒精灯、剪刀等物品上的样品擦拭干净，用体积分数为0.1%的新洁尔灭溶液浸手或以肥皂洗手，再用清水冲洗干净。 3.14凡要丢弃的培养物，必须进行妥善处理，培养霉菌的培养物和玻璃器皿要先高压灭菌、再洗刷干净，然后再进行灭菌处理。 3.15严格控制培养箱温度以及培养时间，对培养箱的温度每个班至少监控两次。 3.16每周进行消毒剂擦拭一次培养箱内金属孔架及内壁，再有平皿破碎的情况时必须马上进行清理消毒，防止污染。
微生物实验室操作规程【SOP 】?细菌室工作守则（微生物室SOP 之一） ?细菌室消毒隔离措施（微生物室SOP 之二） ?微生物实验室安全与防护（微生物室SOP 之三） ?细菌室内质控制度（微生物室SOP 之四） ?细菌室操作技术规范（微生物室SOP 之五） ?无菌间规章制度（微生物室SOP 之六） ?菌（毒种）管理办法（微生物室SOP 之七） ?细菌室仪器维护保养及质控措施（微生物室SOP 之八）?标准菌株保存及使用（微生物室SOP 之九） ?细菌室内务管理规定（微生物室SOP 之十） ?标本采集及保存要求（微生物室SOP 之十一） ?室内质控失控处理程序（微生物室SOP 之十二） ?标本拒收标准（微生物室SOP 之十三） ?温度失控处理措施（微生物室SOP 之十四） ?超净工作台作业指导（微生物室SOP 之十五） ?标本的接种和移种法（微生物室SOP 之十六）
细菌室工作守则 （微生物室SOP之一） 1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用1:1000 高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 8.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。 10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、
实验室管理规章制度 一、实验室管理制度 1、实验人员应严格掌握，认真执行本室相关安全制度、仪器管理、药品管理、玻璃器皿管理制度等相关要求。 2、进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋、戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3、实验室内要经常保持清洁卫生，每天上下班应进行清扫整理，桌柜等表面应每天用消毒液擦拭，保持无尘，杜绝污染。 4、实验室应井然有序，物品摆放整齐、合理，并有固定位置。禁止在实验室吸烟、进餐、会客、喧哗，或作为学习娱乐场所，不得存放实验室外个人用品、仪器等。严禁在冰箱、温箱、烘箱、微波炉内存放和加工私人食品。 5、随时保持实验室卫生，不得乱扔纸屑等杂物，测试用过的废弃物要倒在固定的箱桶内，并及时处理。 6、试剂应定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修。各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器填写使用记录，破损遗失应填写报告，药品、器材等不经批准不得擅自外借或转让，更不得私自拿出。 7、进行高压、干烤、消毒等工作时，工作人员不得擅离现场，认真观察温度、时间、压力等。 8、严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作时，如发生菌液
等溅出时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方可离开现场。 9、实验完毕，即时清理现场和实验用具，对于有毒、有害、易燃、腐蚀的物品和废弃物应按有关要求执行，两手用清水肥皂洗净，必要时用消毒液泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。 10、离开实验室前，尤其节假日应认真检查水、电、气、汽和正在使用的仪器设备，关好门窗方可离去。 11、部门负责人督促本制度严格执行，根据情况给予奖惩，出现问题应立即处理、上报。 二、检验员岗位职责 1、检验人员应系统掌握检验方法和检验所依据的标准，了解检验过程。 2、做好检验的一切准备工作（包括仪器，设备，试剂，药品，标本等），并保证达到检验要求。 3、对所领用的精密贵重仪器要加强管理，经常检查，精密贵重仪器要记录档案，明确责任。要熟悉实验室有关仪器，设备的功能，特点和操作方法，要具备维护，保养的知识，并能进行简单维修，因违反操作规程而损坏仪器者，应酌情处理。 4、遵守实验室制度，按时上、下班，工作时要坚守岗位，配合主管加强对实验室的安全管理工作。
实验室质量管理制度 一、科室必须成立质量控制小组并设质量监督员一人，质量监督员必须做好有关质量管理日常工作记录，科主任全面负责质量控制管理工作。 二、质量控制小组由科主任、质量监督员、质量管理员组成，监督实验室整个质量管理体系的有效进行。 三、由科主任或质量监督员组织质控小组每月召开一次“质量控制监督会”，并作好记录。四、质量监督员负责执行检验过程的各项指标的质量控制程序和对本科室室内质量控制、室间质量评价进行分析和处理。 五、各专业实验室质量管理员负责本室室内质控是否按照实验室内部质量控制程序文件和作业指导书有关要求进行工作。 六、室内质量控制:对检验科开展的检验项目检验程序进行质量控制，以保证 检验结果的准确性。 (一)技术负责人负责批准室内质控规则和检验过程的质量控制程序; (二)各组组长负责制定本组室内质控规则和检验过程的质量控制程序; (三)检测人员负责执行检验过程的质量控制程序和对本岗位室内质控进行分析和处理; (四)质量监督员监督本组内是否按照程序文件和作业指导书有关要求进行。 (五)检验人员严格按照有关规定对样本进行验收和不合格样本处理;样本接收人员收到样本后，要及时分发样本至相应专业组，相应专业组及时对样本进行处理，并采取合适的方式进行保存;检测人员对所有的样本进行规范化的编号，防止检测过程中或检测后出现错号;在血液样本分离过程中要正确选择离心速度和时间，尽可能避免样本溶血。样本采集后要在规定的时间内完成检测。 (六)对所用检测方法、校准品、试剂、质控品及仪器等进行选择和评价。 (七)检验人员的资格和经历必须能够满足相应岗位的要求。
(八)检测人员根据检验项目及对质控的要求，选用合适的质控物，与常规样本在相同条件下进行测定，分析质控结果。若失控，则不能发出该分析批次的病人结果。纠正失控状态，重新分析当批次的病人样本。 (九)室内质控结果失控后由具体操作人员分析原因，总结经验，编写室内质控小结、质控报告，以及制定不合格项目处理措施一并交技术负责人签字确认后交文档管理员存档，并在《归档记录控制清单》上记录。 九、室间质量评价:参加省级检验中心组织的临床检验室间质量评价，按照常规临床检验方法与临床样本同时进行。对检验科参加室间质量的全过程，包括室间质评计划的制定、质评项目的确定;质控样本的接收、分发、检测、结果报送、结果回报后质评结果的分析以及不合格项的处理等进行控制，以保证检验结果的可比性和准确性。 (一)检验科主任批准质评计划和质评项目。 (二)技术负责人负责质评计划的制定和质评项目的确定。 (三)各专业组组长负责组织本专业组质评样本的接收、分发、检测、结果报送和质评报告总结。 (四)质量监督员监督本专业组质评过程。 (五)各专业组组长根据本组工作情况，选择参加室间质评的项目;技术负责人根据各组计划，确定本科参加质评的项目，制定质评计划，并报检验科主任批准。 (六)各专业组组长协助检测人员按常规样本完成室间质评项目的检测，填写报告并签名。然后，交技术负责人审核，经科主任签字后送报结果。原始结果由各专业组负责保存。 (七)室间质评结果回报后由组长分析原因，总结经验，编写室间质评小结、质控报告，以及制定不合格项目处理措施一并交技术负责人签字确认后交文档管理员存档，并在《归档记录控制清单》上记录。
微生物实验室操作规程 1.工作人员加强有菌观念，无菌操作。 2.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 3.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 4.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 5.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 6.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 7.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 8.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于 3%来苏儿溶液中 5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用 1:1000高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 9.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用 3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 10.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。 11.所有微生物培养物，不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。 12.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。 13.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。 14.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。 15.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。 16.爱护仪器设备，遵守仪器使用规范，经常清洁，注意防尘和防潮。每天观察培养箱、冰箱、干燥箱的温度，并做好记录。 17.发出的微生物报告应认真复审，分析报告、评价报告。
微生物检验的基本操作技术 一、无菌操作技术 1、定义 是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法； 无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。 2、内容 无菌操作技术主要包括两方面： 1）创造无菌的培养环境。包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等； 2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。 3、无菌操作原则 1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净； 2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等； 3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边； 4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒； 5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处； 6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。 二、无菌操作的环境要求 1、无菌室 （1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；
临床检验实验室一般规则 1、实验室工作区内绝对禁止吸烟。 2、实验工作区内不得有食物、饮料及存在“手-口”接触可能的其它物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。专用存放食物的冰箱应放置在允许进食、喝水的休息区内。实验室应制定禁止在同一个冰箱内存放食物和标本的专项 制度。 3、实验工作区内禁止使用化妆品进行化妆，但允许并建议经常洗手的实验人员使用护手霜。 4、处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜、面罩或其它保护眼睛和面部的防护用品。工作人员在实验室的危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的情况时，必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。 5、除要求符合实验室工作需要的着装外，工作服应干净、整洁。所有人员在实验区内必须穿着遮盖前身的长袖隔离服或长袖长身的工作服。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。 6、在工作区内，应穿舒适、防滑、并能保护整个脚面的鞋。
7、留长发的工作人员应将头发盘在脑后，以防止头发接触到被污染物和避免人体脱屑落入工作区。 8、蓄有胡须的男性工作人员必须遵守上项（7）的规定。 9、实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触患者前后、以及在进食或吸烟前都应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立即洗手。 10、任何使用酸、苛性碱或腐蚀剂的地方应设有冲洗眼睛的设施。冲洗设施可以是一种固定装置或是一种较简单的通过软管与水源相接的喷啉型装置。 11、在使用苛性碱及腐蚀性化学品的地方，应设有急救淋浴装置，并定期做性能检查。 12、在没有有效的硬件控制的实验室或实验室不能有效地控制危险因素时，应向工作人员提供合适的呼吸防护器具，以防止吸入被有害粉尘、气体、烟雾、蒸气污染的空气。 13、所有实验室操作禁止用口液移，应使用助吸器具. 14、谨慎处理针头、解剖刀、和碎玻璃等锐利物品。使用后的针具不要折断、弯曲、破损、重复使用或用手重装在针管上。一次性注射器上的针头用后不要取下。锐利物品应立即放置在不易刺破的容器内，在完全装满之前就应及时丢弃。 15、接触患者时，实验室工作人员应遵守医院的隔离措施。
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1.0目的 确保微生物室有一个良好的环境，以便准确完成常规微生物分析实验，以对生产环境、设备的清洗消毒和人员卫生进行有效的监控。 2.0围 适合微生物实验室人员，环境卫生，设备，试剂、培养基及常规操作的各项要求及管理 3.0职责 3.1微生物品控员负责具体工作的执行。
3.2QA主任负责监督本文件的有效执行。 4.0程序 4.1人员 4.1.1微生物操作人员需要有相关的工作经验，并且具备微生物操作的基本技能，如铺平板，菌落计数，无菌操作等 4.1.2应确保微生物操作人员接受足够的微生物操作专业的培训，以保证其能独立的进行操作，准确的完成测试，并保持好记录 4.2环境 4.2.1微生物操作室配置超净工作台 4.2.2微生物操作室的墙壁，地板，天花板光滑平整无缝隙，易于清洁消毒 4.2.3工作区域里有方便使用电源，抽滤系统，便于取用培养基和实验用品 4.2.4有适当的通风条件，在空调处安装空气过滤器，确保空气质量达到10.000级，平时关闭门窗，尽量减少空气对流引起的扬尘 4.2.5微生物操作辅助区域有足够的空间处理样品，存放培养基，玻璃器皿和小型仪器设备；有空间安装固定的仪器设备（如培养箱，冰箱）等。工作区域要有充足的灯光，光强不小于3001um。实验室应保持整洁 4.2.6在进行实验前必须打开无菌室和超净工作台紫外线消毒30分钟，并且让超净工作台进入工作状态。实验室完成后及时整理和清洗台面 4.2.7实验室必须考虑实验室外环境污染的可能性，并进行有效的监控，监控的方法如下： 1.每周做一次空气的微生物测试或视实验室使用状况相应地增加测试频率。测试 方法参见空气的微生物测试 2.每天用粒子记数仪测定微生物室空气的尘埃粒子数，应达到10,000级，超过 标准时则需更换过滤器 3.每半年更换紫外线灯管，以确保紫外灯的杀菌效果 4.3卫生 4.3.1配备实验室专用服装、鞋，实验室工作服避免在实验室以外区域穿着，要定期更换，清洗，杀菌 4.3.2实验室人员要注意个人卫生，应形成经常洗手的习惯，手指甲要剪短，实验前用70%酒精消毒双手 4.3.3不得在微生物测试区域吸烟，吃，喝食品，不得在微生物室做与微生物实验无关的事情和实验