血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法
1.实验原理
脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。
尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。
脲酶
尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－
谷氨酸脱氢酶
NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD
＋+H
2O
2 标本：
2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。
2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存
试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的
叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品尿素氮校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。将尿素量乘以系数2.8可以换算成尿素氮量；将尿素氮量乘以系数0.357可以换算成尿素量。手工测定计算方法为：
Au
尿素氮浓度（mmol/L）＝×校准液浓度
As
12. 参考值范围
血清/血浆[1]
成人（mmol/L）
全球 2.8～7.2
女性<50岁 2.6～6.7
女性>50岁 3.5～7.5
男性<50岁 3.2～7.3
男性>50岁 3.0～9.2
儿童
1～3岁 1.8～6.0
4～13岁 2.5～6.0
14～19岁 2.9～7.5
尿素/肌酐比率[1]25～40[(mmol/L)/(mmol/L)] 尿液[2]0.43～0.72mol/d
（注：各实验室应有自己的参考范围。）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度较小。发生肾病时，肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200 g/天都会导致尿素浓度升高。
尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。
尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。
血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酐却不会。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。
14. 操作性能
14.1 线性范围：0.3～50mmol/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内不精密度小于3%，总不精密度小于5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规
则。
批内精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
天间精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
样品1 4.96 0.27 5.41 样品1 5.23 0.30 5.79 样品28.77 0.27 3.13 样品28.77 0.34 3.87 样品319.48 0.25 1.27 样品319.48 0.55 2.86 14.3 方法学比较：本公司的试剂(y)与某商品化试剂
(x)，同时对68个样品进行Urea检测，将检测结果作方
法学比较，其统计结果如下：y=0.99x+0.176mmol/L；
r=0.999。
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.3mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围：0.3～50mmol/L
15. 超出范围结果处理：本法线性上限血清/血浆为
50mmol/L、尿液为5mol/L。如样品测定值超过上限时，应
将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:2稀释，重新测定，结
果乘以3。
16. 病危报警值的处理：当尿素氮测定值>36mmol/L时，
在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17. 方法局限性
17.1 本法线性上限血清/血浆为50mmol/L、尿液为
5mol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%的
氯化钠溶液作1:2稀释，重新测定，结果乘以3。
17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，
胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油
三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。铵离子会影响
检测结果，因此收集血浆时勿用肝素铵抗凝！
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家
进行维修。
19. 参考文献
1.T homas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1s t ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.374-7.
2.B urtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3r d ed. Philadelphia: W. B.
Saunders Company; 1999.p.1838.
3. Talk H, Schubert GE. Enzymatische Harstoff bestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg (Enzymatic determination of urea in blood and serum with the optical test according to Warburg). Klin Wschr 1965;43:174-5.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书 1.实验原理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶 尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用
无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml） 6.1.1 试剂组成 试剂1： Tris缓冲液pH7.8 120mmol/L α-酮戊二酸7mmol/L ADP 0.6mmol/L 谷氨酸脱氢酶≥1000U/L
脲酶≥6000U/L 试剂2： NADH 0.25mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品
实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法） 一、实验目的与要求 1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。 2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。 二、实验原理 尿素在脲酶作用下分解生成氨。在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2 氨 NH3+OCl-NH2Cl+OH- 次氯酸氨胺催化剂 NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2 苯酚P胺基苯酚 HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O 酚靛三、实验仪器与试剂 1 仪器 （1） AT648半自动生化分析仪1台； （2） 4孔恒温水浴锅1个； （3）振动摇床1台。 2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括： （1）试管架1个； （2） 2ml试管10个； （3） 20μl微量加样器1个； （4） 1ml移液管1个； （5） 5ml移液管2个； （6）吸耳球1个； （7）搪瓷盘1个； （8）微量加样滴头； （9）吸水纸。 3 本试剂盒内含5种试剂： （1）脲酶（冻干） 2瓶 （2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml （3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml （4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml （5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml 四、实验步骤 1 血清 （1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。 （2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。表131系列反应管中所加溶液的量 空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。 （4）再于37℃水浴中保温20min，取出冷却至室温，于721分光光度计/ AT648半自动生
血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法 1.实验原理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。 尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶 尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD ＋+H 2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的
实验十七 实验名称：尿素的测定 实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理 实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒 实验原理： 尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。 操作方法： 1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液 2、按下列顺序加入各试剂 单位ml 空白标准样本 蒸馏水0.01 —— 样本－－0.01 标准液－0.01 － 工作液 1.0 1.0 1.0 3、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA 实验现象与数据：记录ΔA 结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l） 参考范围：1.7-8.3mmol/l 临床意义： 实验十八 实验名称：血清尿酸的测定 实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理 实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计 实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。 操作方法： 按以下步骤操作 单位ml 标准测定空白 样本－0.025 － 标准液0.025 －－ 蒸馏水－－0.025 酶试剂 1.0 1.0 1.0 混匀37℃温浴5min，以空白管调零。546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A 结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L
科普一下：临床医学检验中“尿素”与“尿素氮”的正确使用！ 发表时间：2019-12-04T11:09:47.143Z 来源：《健康世期界》2019年15期作者：徐登波 [导读] 四川省成都市武侯区人民医院 610041 我国经济建设以来，医疗行业得到较快发展，其中医学检验技术在此过程中得到不断优化，成为临床诊断中较为重要的一种检测方法，能够有效提升临床诊断准确性，不但能够使临床工作顺利开展，而且对患者疾病情况实施全面的测定，为采取针对性治疗方案奠定良好的基础。随着人们生活质量的不断提高，生活与工作压力逐渐增加，肾病发生率逐年提升，主要是受一些因素的影响，比如饮食习惯、生活习惯以及环境等，对患者生活质量造成不同程度的影响，这就需要采用科学、有效的检验方法对疾病实施有效评价，以此能够提升临床诊断准确性，从而提高患者治疗的效果，为提升患者生活质量奠定良好的基础。本文以尿素与尿素氮为例，首先阐述尿素氮与尿素的临床检验与尿素氮临床检验意义，而后对尿素氮检验使用与常见问题进行探究，最后着重探讨尿素在临床中的使用与两者之间检验方法的正确选择，分析在临床治疗过程中检验方法的正确使用，这对选择正确的治疗方法具有加大促进作用。 一、尿素氮与尿素的临床检验 在对患者肾功能医学检验的过程中，尿素临床检验在其中较为重要，但是因传统书籍中把尿素编写为尿素氮，导致临床医生在对两者检验区别与分析的过程中，很难对两者有全面的理解，致使无法深入分析尿素氮与尿素检验之间存在的差异性，这对临床科学判定产生不同程度的影响，所以为了提高肾功能患者诊断正确性，需要对尿素氮与尿素临床检验进行深入分析与应用，这提供患者治疗效果，恢复肾功能具有较大促进作用。 二、尿素氮临床检验意义 在对尿素氮进行临床检验的过程中，会出现数值增高的情况，这在较大程度上与肾前性少尿、肾功能损伤以及摄入过多等因素有关。此外，在对尿素氮进行临床检验期间，能够有效提升临床诊断准确率，但是在一些情况下检验报告很难对患者具体病情进行准确反应，这就需要通过化验单实施针对性判断，以此对患者实际病情与病情发展得出有效结论。除此之外，还需要采用科学的临床检验方法，能够为尿素氮数值的有效控制奠定良好的基础，并且在此基础上也是提高治疗方法疗效的重要标准。尿素氮数值降低在检验的过程中也时有发生，主要是与患者怀孕、肝脏功能等因素有较大关系，若出现数值降低的情况，应当对肝功能进行全面检查，并在此基础上对此进行全面分析，以此采取针对性治疗措施，这对疾病治疗具有较大的促进作用，为患者生活质量的提升意义重大。 三、尿素氮检验使用分析 1、尿素氮检验使用 目前我国临床在对尿素氮检验的过程中，一般情况下正常值为3.3 mmol/L-6.0mmol/L之间为正常，其检验的主要目的是对患者肾功能情况进行准确判断，由此可以看出尿素氮在使用的过程中，对患者疾病诊断与治疗尤为重要。此外，在一些情况下对患者进行痛风检验实施评定的过程中，主要使用血尿素氮检测方法，在检验的过程中首先需要对患者近期饮食情况、身体状况以及服用药物类型等进行全面了解，以此为提升检验结果的准确性奠定良好的基础，能够有效提高检验结果分析的准确性，与此同时对检验结果产生的不良影响的有效降低具有较大促进作用。在对尿素氮临床检验的过程中，对检验结果进行评定分析，能够为患者临床诊断与针对性治疗提供有利的数据依据。 2、尿素氮临床检验常见问题 我国尿素氮在进行临床检验的过程中存在一些问题，比如抗凝剂使用不当、稳定性差以及NADH不足等问题，所以需要对患者临床实际检验中存在的问题进行深入分析，并在此基础上采取针对性解决方法，不但能够避免问题的发生，而且还可为检验准确性的提高奠定良好的基础，这对提高患者生活质量尤为重要。但是，因尿素氮中NADH稳定性相对较差，并且易被氧化，根据目前医疗技术很难对此问题进行解决，这就需要在检验期间应采取有效措施，最大程度降低环境因素的影响，并且在此基础上还需要对检测偏差进行纠正，以此确保将偏差降至最低，可有效提升检验结果的准确性，从而使尿素氮临床医学检验具有较高的科学性与可靠性。 四、尿素在临床医学检验中的使用 尿素与尿素氮之间能够相互转换，并且有固定的转换公式：mg/dL尿素氮0.0357=mmol/L尿素。尿素在临床医学检验的过程中，与尿素氮之间需要进行转换，在转换的过程职工能够通过计算来完成，但是在实际检验的过程中，不能只通过简单计算对尿素实施有效检验，其中与尿素氮检验相比较为全面，并且在此基础上具有较高的准确性，能够针对患者疾病情况收集评价信息。目前，尿素医学临床检验一般情况下采用尿素酶方法与直接方法实施有效测定，其中直接方法是通过尿素与相关试剂之间的有效作用，而对肾功能测定的方法主要使用二乙酰胯方法，尿素酶在医学检验的过程中，主要是将尿素转换成氨，再实施测定的一种方法，两者方法相比，直接方法在检测的过程中相对简单，并且在此基础上具有较高的灵活性，但是在检验期间加热环节会出现不同程度的异味，对检验过程产生一定影响，随着医学技术的不断发展逐渐被尿素酶替代。尿素酶所采用的方法具有较高的特异性，并且反应专一，不受外界因素的影响，具有较高的准确率，其缺点是检测过程需要花费大量时间来完成，并且会受到氨的影响。这就需要在临床实际应用的过程中，根据患者实际情况针对性选择检测方法。在检测的过程中，还应采取有效措施降低外部因素与内部因素造成的影响，从而为检测准确率的提升奠定良好的基础，也为临床医师进行准确诊断提供有利依据。 五、正确选择尿素与尿素临床检验方法 尿素氮与尿素两种临床检验方法在检验期间会受到较多因素的影响，这就需要在检测期间对影响因素与实际检测情况进行深入分析，以此选择科学合理的检验方法。此外，检验工作人员需要认识到检验方法选择的重要性，并且检验方法选择完成后需要对患者实际疾病情况进行全面了解，同时此基础上对医院医疗技术进行分析，针对性选择制备检测过程中所使用到的材料与试剂，能够确保检验结果的正确性，以此避免因一些材料与试剂存放不正确导致检验结果出现偏差。除此之外，检验工作人员还应采取有效措施对检验结果产生的偏差与
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒（α-酮戊二酸底物法） 适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中谷氨酸脱氢酶的含量。 1.1 包装规格 包装规格见表1。 表1 包装规格
1.2 主要组成成分
主要组成成分见表2。 表2 主要组成成分 注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异，具体赋值详见靶值单。 2. 性能指标
2.1 外观 试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂2为无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 校准品为黄色粉末状物质，复溶后为淡黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 质控品为黄色粉末状物质，复溶后为淡黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。 2.2 净含量 试剂的净含量应不少于标称量。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 A340nm下测定空白吸光度应≥ 0.8000。 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 A340nm下测定的空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0200。 2.4 准确度 与已上市产品进行比对试验：在[1，120] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[1，20] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±2U/L，在（20，120] U/L区间内测定的相对偏差应不超过±10%。 2.5 分析灵敏度 样本浓度为30 U/L时，其吸光度变化率在0.0050～0.0300之间。 2.6 线性区间
在[1，120] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[1，20]U/L区间内绝对偏差应不超过±2 U/L，在（20，120] U/L区间内相对偏差应不超过±10%。 2.7 测量精密度 2.7.1 重复性 对高、低浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。 2.7.2 批间差 随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。 2.8 瓶间精密度 校准品、质控品的瓶间精密度应≤10%。 2.9 稳定性 2.9.1 试剂稳定性 试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为18个月。在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。 2.9.2 校准品复溶稳定性 复溶后校准品在2℃～8℃保存7天，在生化分析仪上同时测试保存期末的校准品和新鲜的校准品，测试结果间的相对偏差应≤10%。 2.9.3 质控品复溶稳定性 复溶后质控品在2℃～8℃保存7天，在生化分析仪上同时测试保存期末的质控品和新鲜的质控品，测试结果间的相对偏差应≤10%。 2.10校准品溯源性
血清谷氨酸脱氢酶活力检测在肝胆疾病中的临床价值（摘要） 赵元明刘凌云 （济宁医学院附属医院检验科山东济宁 272029）谷氨酸脱氢酶(GLDH)为一种含锌线粒体酶，主要分布于肝脏、心肌和肾细胞线粒体的基质及内膜中,而以肝组织活性最高[1]。分布于肝细胞线粒体内的GLDH在肝细胞受损害时会明显升高[2]。天门冬氨酸氨基转移酶(AST)则主要存在于心、肝和骨骼肌中，其中肝中的AST 大部分存在于线粒体中，所以AST的检测也可作为肝细胞损害的辅助性指标[3]。本文利用全自动生化分析仪测定各种肝病患者GLDH、AST和ALT活性，并与健康体检者比较，以分析评价其临床应用价值。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂仪器：日立7600-120全自动生化分析仪；试剂：GLDH试剂为罗氏公司提供，AST、ALT试剂均为德国CENTRONIC，质控品为英国RANDOX公司提供。并采用试剂公司推荐的参数进行相关测定。 1.2研究对象健康对照组为73例，为2011年1月-8月期间在我院做健康体检的人群，各种理化指标均正常，并且排除心、脑、骨、肾及肝胆等系统的疾病。肝细胞损伤疾病组109例，均以临床症状结合血清病毒学标志及其他临床辅助综合判断的患者，其中急性肝炎12、肝癌28例、肝硬化13例、胆道肿瘤14例、胆结石17例、其它肝胆疾病15例(包括肝脓肿、胆结石及胆囊炎等)，亦为同期在我院住院的患者。所测标本均合格。 1.3测定方法 GLDH、AST和ALT测定均采用酶速率法，并分别采用低、中、高值进行精密度检测，严格按照试剂盒说明书进行操作和结果判定。 1.4统计学处理计量数据以均数±标准差
GLDH检测方法 (Glutamate Dehydrogenase) SDZ500140 1. 目的 本程序是为了建立谷氨酸脱氢酶（Glutamate Dehydrogenase）的活性检测方法，适用于GLDH成品的活性检测。 2. 检测 2.1原理 α-Ketoglutarate + NH3 + NADH + H+L-Glutamate+ NAD+ +H2O NADH的消耗可以通过340nm的光吸收进行检测。 2.2试剂： A 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 B 1.5M NH4Cl溶液 C 0.225M α-酮戊二酸溶液(pH 7.0-9.0) D 7.5mM NADH溶液 E 酶稀释液: 0.1 M Tris-HCl 缓冲液, pH 8.3 试剂的配制方法详见各试剂配制记录,配制人员需完整填写配制记录。 3 操作规程： 3.1仪器参数设定 若仪器中无已保存参数，按以下参数设定。若已有相关参数，调取后确认。 检测方法：动力学扫描 测量波长：340nm 测量时间：180s 延迟时间：60s 积分时间：120s 系数/因子：6.776 测量温度：30±1℃ 3.2 样品准备 若待测样品为固体，可以按10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。溶解后于2-8度放置30min。 3.3 检测方法 3.3.1 在石英比色皿中加入2.5ml 试剂A, 200ul试剂B,100ul 试剂C, 100ul D于30度孵育 2min。 3.3.2 加入50ul 样品后, 温和混匀后开始测定。 3.3.3 测定结束后，记录相应数值：起始读数、△A/min test、活性值（U/ml）。 3.3.4 活性值（U/ml）范围为0.1-0.3U/ml，若超出范围，待测样品需经试剂D稀释后再 次进行检测。 3.3.5测定样品前需检测空白反应值，即其他操作不变，用500ul E代替样品加入比色皿后 进行反应,测定△A/min blank。 3.3.6计算公式活性(U/ml) =(△A/min test-△A/min blank)×6.776×df （稀释倍数）
检查肾功能的各项指标，可诊断有无肾脏疾病、疾病的程度以及评估临床治疗效果和预后，并要以此决定下一步治疗时使用药物的剂量以及选择透析、手术等治疗方案。下面简单介绍临床最常用的几项肾功能检查项目。 血清尿素氮：尿素几乎全部由蛋白质分解代谢而形成，主要经肾脏排泄。肾脏病变如急慢性肾炎、肾动脉硬化、肾结核、肾肿瘤、严重肾盂肾炎等均可引起血清尿素氮增高。 正常人尿素氮一般在5.36微摩尔/升(15毫克/分升)以下，不超过7.14微摩尔/升(20毫克/分升)。如果尿素氮超过8.9微摩尔/升(25毫克/分升)，临床上称为氮质血症，提示肾小球功能受损;如果超过28.6微摩尔/升(80毫克/分升)，患者可出现各种尿毒症症状。 血清尿素氮的浓度受食物蛋白质的影响，因此必须空腹抽血。引起体内蛋白质分解代谢增强的疾病，如急性传染病、大面积烧伤、高热、甲状腺机能门进等也可使尿素氮增高;上消化道出血患者因蛋白质吸收增多，也常见尿素氮增高。因此，仅以尿素氮评估肾功能损害程度还不准确，还要做血清肌酐检查。肾病时尿素氮改变比血清肌酐早而且显著。 血清肌酐：肌酐主要由肌肉代谢产生，极小部分来自食物。血清肌酐浓度实际上取决于肾的的排泄功能的好坏。 健康男性血清肌酐值为70-106微摩尔/升(0.8-1.2毫克/分升)，女性53-80微摩尔/升(0.6.0.9毫克/分升)。根据血汪豳酐浓度可将肾功能损害分为：(1)轻度损害132.6-221微摩尔/升(1.5-2.5毫克/分升);(2)中度损害229.8-397.8微摩尔/升(2.6-4.5毫克/分升);(3)重度损害大于397.8微摩尔/升。 由于肾的代偿能力很大，在肾疾病的初期，血肌酐浓度一般不升高，只有当肾小球滤过能力下降一半或更多时，血肌酐浓度才见增高，所以其灵敏性较差。一旦出现肌酐增高，常提示预后严重。 需要指出，血清肌酐和尿素氮正常值并不随年龄改变。由于老年人体内的脂肪增国，肌肉养活，蛋白质分解减少，尿素氮、肌酐亦随之减少。所以当老年人的尿素氮或肌酐增高时，说明肾脏损害已比较明显，应进一步检查发病原因。
第26卷第1期2004年3月 大连医科大学学报 Journal of Dalian Medical University Vol.26No.1 Mar.2004 血清谷氨酸脱氢酶的检测及对肝病诊断的临床应用 肖晓光1,孙国华1,王 华2 (1.大连医科大学第一临床学院检验科,辽宁大连 116011;2.大连医科大学检验医学院,辽宁大连 116027) 摘要:[目的]通过观察血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)在肝细胞损害性疾病中酶活性的变化情况,来指导临床治疗,并对预后进行判断。[方法]采用德国临床化学学会推荐的α-酮戊二酸法检测谷氨酸脱氢酶,同时检测AST、ALT、TBA及γ-GT等常规生化项目,并作相关性分析,统计有关指标。[结果]对于肝细胞损伤性疾病患者,血清中谷氨酸脱氢酶的活性明显高于健康者和其他疾病患者(P<0.05)。其中急性坏死性肝病患者GLDH阳性率可达100%,急性病毒性肝炎为75.2%,慢性活动性肝炎为59.4%,酒精性肝硬化为66.2%,肝硬化为66%,原发性肝癌为42.1%。[结论]谷氨酸脱氢酶作为肝细胞病变,特别是急性缺血性肝炎和酒精性肝炎的诊断指标 具有重要临床价值,并对指导临床治疗和预后判定具有重要意义。 关键词:谷氨酸脱氢酶;肝损伤;临床应用 中图分类号:R446.1 文献标识码:B 文章编号:1671-7295(2004)01-0048-03 谷氨酸脱氢酶(GLDH)为一种含锌线粒体酶,主要分布于肝脏、心肌和肾细胞线粒体的基质及内膜中,而以肝组织活性最高[1]。它催化谷氨酸脱氢、脱氨最终生成α-酮戊二酸之间的可逆反应[2]。此反应是体内大多数氨基酸经脱氢联脱氨基的关键步骤,也是体内非必需氨基酸由联合脱氨逆向反应生成的重要反应,还是连接氨基酸代谢,三羧酸循环的中心环节,故主要分布于肝细胞线粒体内的GLDH只有在肝细胞受损害时才明显升高[3]。本文利用生化自动分析仪测定了各种肝病患者,相关心、肾等疾病及健康体检者的G LDH活性,并与常规肝功能指标对比,以分析评价其临床应用意义。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 原理:α-酮戊二酸+NADH+NH4+GLDH 谷氨酸+NAD++H2O。在上述反应中,NADH被氧化生成NAD+的速率与GLDH的活性呈正比。在340nm波长下测定NADH的下降速率,即可计算出GLDH的活性。 1.1.2 研究对象:健康对照组为60例各项理化指标正常的体检者。疾病组218例,系大连医科大学第一临床学院各科确诊的住院病人。其中急性缺血性肝炎20例,急性病毒性肝炎25例,慢性活动性肝炎32例,酒精性肝炎12例,肝硬化48例,原发性肝癌24例,胆系疾病15例,脑出血10例,心肌梗塞20例,肾衰12例。 1.1.3 仪器:日立7170S型生化自动分析仪。 1.1.4 试剂:北京世诊中拓生物技术有限公司生产R1(三乙醇胺缓冲液、醋酸铵、EDTA);R1a (ADP、NADH、LD);R2(α-酮戊二酸)。以R1复溶后的R1a与R26:0.24混合作为工作试剂。 1.2 方法 1.2.1 德国临床化学学会推荐优化标准法:血清样品20μL,混合工作试剂250μL,温度37℃,波长340nm,反应时间4min;同时采用临床常规方法测定血清AST、ALT、TBA、γ-GT。 1.2.2 统计方法:单侧95%水平确定参考值范围,进行t检验及相关性分析。 作者简介:肖晓光(1971-),女,大连人,主管检验师。收稿日期:2002-11-21;修回日期:2002-12-10。
血清尿素氮的测定 一.实验原理 血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色。即可求得血清中尿素的含量。 由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。 在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定．加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。 二.实验操作 取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作 540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。 三.计算
血清尿素氮（mmol / L ）=——————— X 17.85 测定管吸光度标准管吸光度 正常值参考范围3．57～14．28mmol ／L 四.临床意义 血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、 胆红素及氨等。其中尿素含量约占l ／3～1／2。尿素是蛋白质代谢的产物．通过肾脏排出，故测血清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行关系。 五.试剂 1.尿素氮试剂：蒸馏水lOOml ，浓硫酸44ml ，85％磷酸66ml ，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg ，硫酸镉(3CdSO ４·8H 2O)2g ，溶解后稀释至1000ml 。 2.20g ／L 二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g ，加入蒸馏水约900ml ，溶解后稀释至1000ml. ３.尿素氮标准贮存液(357mmol ／L)：称取尿素1.072g 溶解于蒸馏水中定容至1000ml 。 ４.尿素氮标准应用液(17.85mmol ／L)；取贮存液5ml ，加蒸馏水至100ml 。
人谷氨酸脱氢酶(GDH)酶联免疫分析 （ELISA）试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人谷氨酸脱氢酶(GDH) 含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷氨酸脱氢酶(GDH)水平。用纯化的人谷氨酸脱氢酶(GDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷氨酸脱氢酶(GDH)，再与HRP 标记的谷氨酸脱氢酶(GDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸脱氢酶(GDH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人谷氨酸脱氢酶(GDH)浓度。 试剂盒组成： 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右
谷氨酸脱氢酶（GLDH）测定试剂盒(α-酮戊二酸底物法) 适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中谷氨酸脱氢酶的活性。 1.1 产品规格 试剂1:60mL×2，试剂2:20mL×2 ； 试剂1:60mL×1，试剂2:20mL×1； 试剂1:45mL×2，试剂2:15mL×2； 试剂1:45mL×1，试剂2:15mL×1； 试剂1:30mL×1，试剂2:10mL×3； 试剂1:30mL×2，试剂2:10mL×6； 试剂1:300mL×1，试剂2:100mL×1； 试剂1:15mL×1，试剂2:5mL×1； 试剂1:3000mL×1，试剂2:1000mL×1； 192人份(试剂1:51mL，试剂2:17mL)； 1.2组成成分
2.1 外观 试剂R1为无色澄清液体； 试剂R2为无色或淡黄色澄清液体. 2.2 净含量 液体试剂的净含量应不少于标称量。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 空白吸光度应≥0.8000。 2.3.2 空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤0.02。 2.4 分析灵敏度 浓度为30 U/L时，其吸光度变化率应≥0.0050 2.5线性 在[1,120] U/L范围内，线性相关系数r≥0.990，在[1,40] U/L范围内绝对偏差应不超过4 U/L，在(40,120] U/L范围内相对偏差应不超过±10%。 2.6精密度 变异系数（CV％）应≤8％。 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8准确度
回收试验：回收率90%-110%。 2.9稳定性 原包装试剂，在2℃～8℃下有效期为12个月，取失效期的试剂盒检测其试剂空白、分析灵敏度、线性、精密度、准确度应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。
谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒使用说明 产品简介： GDH和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容： 提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体20mL×3瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×3支，4℃保存； 试剂三：粉剂×3支，4℃保存； 试剂四：粉剂×3支，-20℃保存。 工作液的配制：临用前取试剂一、试剂二、试剂三和试剂四各一支，将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解。分三批配制工作液并且进行测定，以防止工作液失效。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400
μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 二、测定步骤： 预先用蒸馏水调零，工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中保温。依次在比色皿中加入0.05mL粗酶液和 1.0mL工作液，迅速混匀，在340nm波长下记录吸光度A1；然后迅速将比色皿转移到37℃或25℃水浴中，准确反应5分钟；迅速取出比色皿并擦干，在340nm下比色，记录吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。 注意事项： 1、用蒸馏水调零。 2、测定期间粗酶液在冰上放置，以免变性失活。 3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种），取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。 4、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。 GDH活性计算： 1、组织中GDH活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol/L的NADH定义为一个酶活力单位。
ICS 11．020 C 50 VS 中华人民共禾口国卫,--l=行业标准 WS／T 345—20 11 血清尿素测定参考方法 Reference procedure of the measurement of urea in serum 201 1-09-30发布2012—04—01实施 中华人民共和国卫生部发布
目次 前言 1范围· ·Ⅲ， 2规范性引用文件● 3术语和缩略语·● 4测定原理·· ··0 5测定样品 0 6测定试剂.0 6．1警示与安全注意事项.0 6．2试剂原料- 0 6．3试剂眭能要求.0 6．4试剂制备 0 6．5标准液的制备·0 7测定条件·，7．1仪器· 7．2最终反应混合液的浓度 7．3血清尿素测定条件，如7．4校准的扩展不确定度u 8测定······u 8．1无蛋白滤液的制备··· 8．2试剂准备 8．3标准曲线制作··· 8．4测定方法······ 8．5测定范围u他挖地n 8．6误差的来源 8．7测定样品要求 9结果计算·····- 9．1计算实际吸光度值···n¨¨n 9．2标准曲线的制作·一n 9．3样品测定结果的计算·-‘H 9i 4卓岔换算·····- M 附录A(规范性附录)L一谷氨酸脱氢酶催化活性浓度测定 附录B(规范性附录)脲酶催化活性浓度测定···¨n
前言 本标准修改采用由国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)批准的《CDC人血清尿素参考方法(分光光度法)》，并参考ISO 15193：2009《体外诊断器具生物源样品中量的测定参考测定程序的表述》适当增加内容。 本标准按照GB／T 1．1—2009给出的规则起草。本标准由卫 生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位：卫生部 临床检验中心。本标准主要起草人：杨振华、陈宝荣、邵燕、陈 琦、孙慧颖、胡滨。 Ⅲ
谷氨酸脱氢酶测定试剂盒（α-酮戊二酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中谷氨酸脱氢酶的含量。1.1 规格 1.2 组成：
2.1 外观 2.1.1试剂1：无色液体，无浑浊，无不溶物。 2.1.2试剂2：无色至淡黄色液体。 2.1.3包装外观应整洁，标签字迹清晰，不易脱落。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不低于标示体积。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 试剂空白吸光度≥0.8。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率（ΔA/分）≤0.02。 2.4 分析灵敏度 样本浓度为30U/L时，吸光度变化率（ΔA/分）≥0.0030。
2.5 线性 在[4，120] U/L的范围内，线性相关系数r≥0.990。测试浓度在[4，40] U/L时，绝对偏差应不超过±4 U/L；测试浓度在（40，120] U/L时，相对偏差应不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1重复性 用高、低2个浓度的样本测试试剂盒，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。 2.6.2批间差 用样本分别测试3个不同批次的试剂盒，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。 2.7 准确度 与已上市产品进行对比试验，在[4，120] U/L的范围内，线性相关系数r≥0.975。测试浓度在[4，40] U/L时，绝对偏差应不超过±4 U/L；测试浓度在（40，120] U/L时，相对偏差应不超过±10%。 2.8 效期稳定性 原包装试剂盒在2℃～8℃密封避光保存条件下有效期为12个月。有效期满后3个月内测试，应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
血清尿素氮的测定 【目的要求】 1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。 2.复习尿素的生成机理及其意义。 【实验原理】 血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。 【实验材料】 1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计 2.试剂 （1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液 【操作步骤】 取试管三支按下表操作 1：4稀释血清（或0.1
血浆） 尿素氮标准液 0.1 （0.02mg/ml） 蒸馏水0.1 二乙酰-肟0.5 0.5 0.5 尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。 计算及结果分析Array 尿素（mg%） ×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml) 【注意事项】 1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即 可）。本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取 0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5” 2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色 泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。 3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮 化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。 4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务 必准确。
高等植物中的谷氨酸脱氢酶及其生理作用 ① 黄国存 田 波 (中国科学院微生物研究所 北京 100080)摘要 谷氨酸脱氨酶普遍存在于植物体内,它虽然不是植物吸收利用氮素的主要成员,但在植物氮代谢中起着重要作用。高等植物的谷氨酸脱氢酶主要存在于线粒体内,以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH )为辅酶。该酶分子量为255～258kD ,由六个亚基组成,亚基包括α和β两种类型,存在七种同工酶形式。它在植物的衰老过程及逆境如高温和水份胁迫等状况下行使其铵同化功能,但在黑暗或碳胁条件下又能氧化脱铵从而为三羧酸循环提供碳骨架。 关键词 NAD (H )-谷氨酸脱氢酶,高等植物,固铵,脱铵 The Physiological Role of Glutamate Dehydrogenase in Higher Plants HUANG Guo _Cun TIAN Bo (Ins titute of Micr obiology ,T he C hines e Acade my of Scienc es ,Beijing 100080) A bstract Glutamate dehydrogenase (GDH )is present mainly in mitochondria in higher plants and catalyses both the amination of α-oxoglutamate ,with NADH as the electron donor ,and the dea mination of glutamate to ammonia and α-oxoglutamate ,with NAD +as the electron recepter .The NAD (H )-GDH ,with a molecular weight of 255～258kD ,is composed of six subunits of αand βin different ratios to form seven isoenzymes .The enzyme seems to function in assimilation of ammonia under stress conditions such as high temperature ,in senesc ence and other abnormalities .It also functions in higher plants to direct carbon skeletons into the citric acid c ycle under conditions of carbon stress . Key words NAD (H )-glutamate dehydrogenase ,Higher plants ,Amination , Deamination ①作者简介:黄国存,1967年出生,男,博士,植物生物技术专业,现在中科院微生物研究所博士后流动站工作。收稿日期:2000-06-26 接受日期:2001-05-07 责任编辑:刘 晖 植物学通报 2001,18(4):396～401 Chinese Bulletin of Botany
血清尿素UREA测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。 尿素酶 尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－ 谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O 3 标本： 3.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子
的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）：α-酮戊二 酸 7.5mmol/ L 谷氨酸脱氢 酶 ＞800U/L NADH 0.35mmol /L 二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液
115mmol/L 试剂2（R2）： Tris缓冲液115mmol/ L 尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。 4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的UREA校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。