编号：BSMP-QC-120-1-1-
分析号：
检测人：复核人：
编号：RSMP-QC-120-1-1-
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微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序 一、目的：为规定微生物限度检查室沉降菌测试方法和要求，特制定本操作规程。 二、适用范围：适用于公司微生物限度检查室沉降菌测试。 三、责任者：质量监督员、质量检验人员。 四、正文： 2 仪器和设备： a、高压消毒锅 b、恒温培养箱 c、培养皿（φ90mm×15mm） d、培养基（营养琼脂培养基） 3 测试方法： 3.1 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 3.2 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中 30~35℃培养 48h。 3.3 每批培养基可选定 3 只培养皿作对照试验，检验培养基本身是否污 染。 3.4 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 5~10 放大镜 检查，有否遗漏，若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分 辨时，仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。 3.5 注意事项： 3.5.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 3.5.2 采取一切措施防止人为对样品的污染。 3.5.3 对培养基培养条件及其他参数作详细的记录。 3.5.4 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的 应剔除。 4测试规则： 4.1 测试状态： 4.1.1 沉降菌测试前，微生物限度检查室的温湿度须达到规定的要求；换
气次数，空气流速必须控制在规定值内。 4.1.2 测试前，微生物限度检查室应已经消毒过。 4.1.3 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。 4.2 测试人员： 4.2.1 测试人员必须穿戴符合洁净室级别的工作服。 4.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 4.3 测试时间：对单向流，如 100 级净化工作台，测试应在净化空调系 统正常运行不少于10min 后开始。 采样点布置见“质检微生物限度检查室悬浮粒子测试操作规程”。 4.4.1 采样点的布置： 采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。 4.4.1.1 工作区采样点的位置离地 0.8m~1.5m 左右（略高于工作面）。 4.4.1.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 4.5 记录： 测试报告中应记录房间温度、相对湿度及测试状态。 4.6 结果计算： 4.6.1 用计算方法得出各个培养皿的菌落数。 4.6.2 平均菌落数的计算 平均菌落数M= M1+M2+ +Mn N 式中：M：平均菌落数； M1：1 号培养皿菌落数； M2：2 号培养皿菌落数； Mn：n 号培养皿菌落数； N：培养皿总数 5 结果评定： 用平均菌落数判断微生物限度检查空气中的微生物。 5.1 微生物限度检查室内的菌落数必须低于所选定的评定标准。 5.2 若某区域的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域进行消毒，然后采样两次，测试结果均须合格。
医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法(txt格式-已校验)
ISC 13.040.30 C 30 中华人民共和国国家标准 GB/T 16294—2010 代替GB/T 16294—1996 医药工业洁净室（区） 沉降菌的测试方法 Test method for settling microbe in clean room (zone) of the pharmaceutical industry 2011-02-01实施 发布
前言 本标准参考了ISO 14698-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：微生物控制》，ISO/TS 11133-1：2000（英文版）《食品和动物饲料的微生物学培养基制备和生产指南第1部分：实验室培养基制备的质量保证通用指南》。 本标准代替GB/T 16294-1996《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。 本标准与GB/T 16294-1996的主要区别为： —增加了确定最少采样点数目的方法； —修改了原标准 4.8.3.2，改为“4.10.2 采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d，采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20℃~25℃培养箱中培养，时间不少于5d。”； —本标准增加了5.8“日常监控”的内容，增加了洁净室（区）空气微生物浓度控制的纠偏限度和警戒限度的设立和如何确定取样频次的内容。 本标准的附录A、附录B是规范性附录。 本标准的附录C是资料性附录。 本标准由国家食品药品监督管理局提出并归口。 本标准起草单位：上海市食品药品包装材料测试所、中国食品药品检定研究院医疗器械检验中心。 本标准主要起草人：陆维怡、徐敏凤、冯晓明、王志敏。 本标准所代替标准的历次标本发布情况为：GB/T 16294-1996。
沉降菌检测国标16294 沉降菌检测是一项重要的微生物检测技术，其标准化方法在国内被统一为国家标准GB 16294。本文将介绍沉降菌检测的国家标准GB 16294的内容和要求。 沉降菌检测是通过培养沉降菌样品，统计并计算其数量以评估样品的微生物质量。其主要适用于食品、药品、化妆品、环境监测等领域，有助于保障产品质量和公共卫生安全。 国家标准GB 16294对沉降菌检测的方法和要求做了详细规定。首先，标准明确了沉降菌检测的范围和定义，包括了菌落计数法和膜过滤法两种常用的检测方法。 接着，标准规定了样品的取样方法和容器的选择。样品的取样应遵循卫生规范，避免外界污染，确保取样的代表性。容器的选择应符合国家相关标准，以保证样品在取样和运输过程中的完整性和稳定性。 标准还规定了菌落计数法和膜过滤法的具体操作步骤和技术要求。菌落计数法要求使用含有适宜的富营养培养基的平板或倒置杯进行培养，培养时间、温度和湿度等要求也有详细规定。膜过滤法则要求使用合适的膜过滤器和培养基，控制过滤速度和培养条件，以确保准确可靠地检测出沉降菌。
标准还对培养基的配制、存储和质量控制等方面进行了要求。在配制培养基时，要确保成分的准确性和质量的稳定性。培养基的存储应遵循相关规范，防止污染和变质。质量控制方面，要求进行质量控制实验和质量控制记录，以确保检测结果的准确性和可靠性。 标准还对实验室设施、仪器设备、人员要求和实验操作等方面进行了规定。实验室应具备适当的防护设施和消毒设备，仪器设备要求准确、灵敏、可靠，并按照相关标准进行校准和维护。实验人员要求具备相关专业知识和技能，并严格遵守实验操作规程，以确保检测结果的准确性和可靠性。 标准还对检测结果的判定和报告进行了规定。标准要求根据检测结果进行统计分析，并根据相关标准和规定进行判定。检测结果的报告应包括样品信息、检测方法、操作过程、结果分析和判定等内容，确保结果的可追溯性和可信度。 国家标准GB 16294对沉降菌检测的方法和要求进行了详细规定，涵盖了样品取样、实验操作、质量控制、设备要求、结果判定和报告等方面。遵循国家标准进行沉降菌检测，有助于确保检测结果的准确性和可靠性，保障产品质量和公共卫生安全。
1.目的： 规范对洁净区沉降菌检查的方法，以做出洁净状况的正确评价。 2.范围： 各生产车间洁净区 3.职责： 空气沉降菌检测操作人员负责本规程的实施，品保部经理监督执行 4.内容 4.1本测试方法是接受沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培育皿中， 经若干时间，在适宜条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培育皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。 4.2所用设备、试剂 高压消毒锅、恒温培育箱、φ90mm 养分琼脂培育基培育皿。 4.3测试状态 4.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空 气流速必需把握在规定值内。 4.3.2测试前，被测试洁净室已经过消毒。 4.3.3洁净厂房的空气净化调整系统的风机已启动至少30分钟。 4.3.4测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必需符合生产的要求，并在报告中注 明测试状态。 4.4测试人员 4.4.1测试人员必需穿戴符合环境洁净度级别的工作服，培育基按物料进入规定传入。 4.4.2静态测试时，室内测试人员不得多于2人。 4.5采样点数目及布置 注:表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于乱流洁净室是指房间的面积 4.5.2在满足最少测点数的同时，还要满足最少培育皿数，如下表。不论面积大小，作为
4.5.3采样点的布置： 1)采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。 2)可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 4.6采样方法及培育 4.6.1将培育皿按要求放置后，打开平皿盖，使培育皿表面暴露30分钟后，将培育皿盖 上后倒置，全部采样结束后将培育皿倒置于恒温培育箱中培育，在30～35℃的条件下，培育48小时后计数。每批可选定3只培育皿作对比培育。 4.7结果计算 4.7.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗 漏若。 4.7.2培育皿上有2个或者2个以上菌落重叠，可辨别时仍以2个或2个以上菌落计数。 4.7.3计算公式： M= ΣMi / n 注：公式中M为平均菌数 Mi表示1，2，3…….n号平皿菌落数；n—平皿总数。 洁净区平均菌落数应低于规定的沉降菌测定标准。若某洁净区内的平均菌落数超过评定标准,则必需对此区域进行消毒灭菌,然后重新采样2次,检测结果达到标准后方能合格。 4.9留意事项 4.9.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的牢靠性和正解性。 4.9.2实行一切措施防止人为对样本的污染。 4.9.3实行样应认真检查每个培育皿的质量，如发觉变质、破损或污染的应剔除。、 4.9.4对于细菌种类繁多，差别大，计数时一般用透射光于培育皿背面或正面认真，不要 漏计培育皿边缘生长的菌落，并须留意菌落与培育基沉淀物的区分，必要时用显微镜鉴别。 5.记录 《沉降菌检测报告》FSD-QR-035
沉降菌测试 沉降菌测试 1.目的 本程序规定了洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。 2.范围 本程序适用于洁净室和洁净区、无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。 3.引用文件 3.1.GB/T 16294－1996医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 3.2.YY/T 0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分：药品生物测定法 3.3.药品生产质量管理规范（1998年修订） 3.4.中国药典2000年版 4.职责 质保室中控人员。 5.测试方法 5.1.方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养 基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌能进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 5.2.所用的仪器和设备 5.2.1.高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。 5.2.2.恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定。 5.2.3.培养皿一般采用?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 5.2.4.培养基营养肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A。 5.3.测试步骤 5.3.1.采样方法：将已制备好的培养皿按
6.4.1.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴 露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 5.3.2.培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30~35℃培养不少于48h；每 批培养基应选定3只培养皿作对照试验，以检验培养基本身是否污染。 5.3.3.菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查， 有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 5.4.注意事项 5.4.1.测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.4.2.采取一切措施防止人为对样本的污染。 5.4.3.对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 5.4.4.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不 要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5.4.5.采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 6.测试规则 6.1.测试状态 6.1.1.沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、 空气流速必须控制在规定值内。 6.1.2.沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 6.1.3.测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测 试状态。 6.2.测试人员
ICS 13.040.30 C 10 中华人民共和国国家标准 GB/T 16292~16294—1996 医药工业洁净室（区）悬浮粒子、 浮游菌和沉降菌的测试方法 Test method for airborne particles, airborne microbe and settling microbe in clean room(area) of the pharmaceutical industry 1996-04-10发布1996-10-01实施 国家技术监督局发布 目次 GB/T 16292—1996 医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法 GB/T 16293—1996 医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法 GB/T 16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 GB/T 16292—1996 前言 本标准等效采用美国联邦标准FS-209E—1992《洁净室和洁净区内空气浮游粒子洁净等级》，并参考JGJ 71—90《洁净室施工及验收规范》制定的。 悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室（区）空气洁净度的主要指标。本标准用悬浮粒子的测试来评价洁净室（区）空气中的尘粒数。 医药工业洁净室（区）的悬浮粒子测试方法，应采用本标准。 本标准从生效之日起，废止YY/T 0141—93。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准的附录B是提示的附录。 本标准由国家医药管理局提出并归口。
本标准起草单位：上海医药管理局药品测试所。 本标准主要起草人：纪炜、徐进庆、沈建华。 中华人民共和国国家标准 医药工业洁净室（区）悬浮粒子的 测 试 方 法 Test method for airborne particles in clean room (area) of the pharmaceutical industry 1 范围 本标准规定了医药工业洁净室（区）中悬浮粒子的测试方法和悬浮粒子而言的空气洁净度的评定。 本标准适用于医药工业洁净（区）中悬浮粒子洁净度的监测和洁净度等级的验证。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 JGJ 71—90 洁净室施工及验收规范 3 定义 本标准采用下列定义。 3.1 洁净室（区） clean room （area ） 对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 3.2 局部空气净化 localized air purification 仅使室内工作区域特定的局部空间的空气含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别，这种方式称局部空气净化。 3.3 粒子 particle 一般尺寸为0.001~1000μm 的固态和液态物质。 3.4 洁净度 cleanliness
沉降菌碟暴露时间验证文件
目录 一、验证方案起草、审批 (1) 二、验证报告起草审查及会审 (1) 三、验证证书的批准 (1) 四、引言 (2) 五、菌种及培养基 (2) 六、菌液制备 (2) 七、验证方法 (2) 八、回收率计算 (3) 九、结果判断 (3) 十、验证结果和记录（附后） (3) 十一、验证报告（附后） (3) 十二、验证证书（附后） (3)
沉降碟暴露时间验证方案一、验证方案起草、审批 二、验证报告起草审查及会审 三、验证证书的批准
四、引言 1、验证目的：验证我公司沉降碟的暴露时间为4小时，依据《中国药典》2010年版附录无菌检查法和微生物限度检查法下灵敏度检查项进行验证，以证明沉降碟中培养基在空气暴露时间可以达到4小时。 2、概述：我公司沉降碟为普通的培养皿（φ90mm×15mm），所采用的培养基为大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA），每个培养皿含培养基20ml，根据培养基特性制订检验方法，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。 3、验证组织 组长：彭伟添 组员：陈杰辉，黄玉妍 五、菌种及培养基 1、菌种 金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、生孢梭菌【CMCC（B）64941】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】。 2、培养基 营养肉汤培养基、改良马丁培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基 3、无菌检验仪器及相关设备 无菌室、净化工作台、恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（23～28℃）、高压蒸汽灭菌器、电子天平、电冰箱、电热干燥箱、玻璃器皿。 六、菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中培养18～24小时；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24～48小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。 七、验证方法 1、取配制好的沉降碟32个，同时灭菌后，取16个沉降碟，每3个分别接种小于100 cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌，另一个不接种作为空白对照，置30℃～35℃培养3天，逐日观察结果。