洁净区沉降菌采样培训记录
01.0目的 01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境 对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。 02.0适用范围 02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。 03.0人员职责 测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。 04.0内容 04.1术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。 04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常 用个数来表示。 04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专 门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。 04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/ 皿表示。 04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子 于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板 培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年 一次监控。 04.4测试方法： 04.4.1使用设备与材料 高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。 恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃ 恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好 的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。 清洁剂：75%酒精 04.4.2测试时间： （1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 （2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。 （3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上； 动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。 04.4.3采样点数及其布置 （1）最少采样点数目： （2）最少培养皿数
1 目的 确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。 2 范围 适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。 3 责任 QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。 4 内容 4.1 参考标准 中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。 中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。 4.2 监测程序 4.2.1 设备 高压消毒锅 恒温培养箱 培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 4.2.2 培养基及平皿制备 4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基 4.2.2.2 制备过程如下： ◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时； ◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 ◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。 ◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。 4.2.3 采样点和监测频次
4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。 4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。 4.2.4 测试规则 4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。 4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。 4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 4.2.4.4 测试时间： ◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 ◆对非单向流，如B级、C级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。 4.3 测试步骤 4.3.1 采样 将已制备好的培养皿按要求放置，使培养基表面暴露0.5小时。 4.3.2 培养 全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30～35℃培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿作对照培养。 4.3.3 菌落计数 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，并用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。 4.3.4 注意事项 测试时应注意如下事项： ◆防止人为对样本的污染。 ◆对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 ◆般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，应注意培养皿边缘生长的菌
1.目的：建立沉降菌、浮游菌检测的标准操作程序，用以规范检测操作。 2.范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌、浮游菌检测工作 3.责任：中心检验室主任、检验员对本规程的执行负责。 4.内容： 浮游菌检测 4.1.1 检测前的准备 4.1.1.1按照药典规定制作平皿培养基。 4.1.1.2领出检测仪器，去掉防尘护罩。 4.1.1.3先用喷洒方法对仪器及采样管进行消毒，无法喷洒的地方应用擦拭或 浸泡办法进行消毒，消毒后置放十分钟使仪器基本干燥。 4.1.1.4将采样器放在采样工作台面上，拧下采样盖，使整个缝隙完全暴露在 空气中，便于直接采样。 4.1.1.5当在较高位置取样时，可把仪器采样盖拧紧，插上采样塑料管，把管 子延伸到所要采样的空间。 4.1.1.6打开采样器透明外罩，迅速将准备好的平皿放入采样托盘内，拿去平 皿上盖，立即拧上透明外罩密封。 4.1.1.7拧松外罩顶部装有指针的螺母，让指针自然下落或使指针底部刚接触 到培养基为止。 4.1.1.8调节狭缝螺母，使狭缝上升直至到头，再反方向调节使狭缝面下降， 将齐狭缝大螺母侧面的色标线与指针于水平线上。（保持狭缝的底平面与培养基表面相距1-3mm）。 4.1.1.9将指针向上轻轻拔起，使其底部离开培养基表面，并拧紧螺母，使之 固定不动。
4.1.2 采样操作 4.1.2.1将采样器后面板上的电源插上，按下仪器面板上的电源开关，指示灯亮， 时间显示窗内的数码应为“P”。 4.1.2.2根据采样现场环境的洁净度，选择采样时间中的某一档，并按下相应按 钮，指示灯亮，数码由“P”显示为“Y”，约经10分钟后气泵自动开启进 行采样。当采样时间达到时，气泵自动停止运行，数码显示终点采样时间。 4.1.2.3关掉电源开关，打下仪器的活动透明外罩，迅速把平皿上盖盖上并从仪 器中取出。 4.1.2.4按照上述方法，再放入新的平皿，进行第二次采样，直到采样完毕。4.1.2.5采集样品的平皿应置入培养箱，在培养48小时后，按检验规程检查菌 落数。 4.1.2.6采样工作结束，关断仪器电源，将程序： 4.2沉降菌检测 4.2.1消毒φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 4.2.2称取普通肉汤琼脂培养基31克，加蒸馏水1000ml，加热溶解分装，经 116℃30分钟灭菌备用。 4.2.3在无菌条件下将消毒的培养基注入培养皿中备用。 4.2.4放平板前应先洗手，穿消毒好的无菌衣、裤、帽、口罩。 4.2.5将已制备好的培养皿按净化级别要求选择放置位置和平皿块数。 4.2.6到车间打开培养皿盖，使培养基表面暴露，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.2.7全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。（温度30℃~35℃， 时间不少于48h）。 4.2.8每批培养基应有对照试验，可选2~3只培养皿作对照培养，以检验培养 基本身是否污染。 4.2.9将培养好的平皿进行菌落计数。 4.2.10认真详细写好检测记录，并发放检测报告书。
保健食品车间洁净区沉降菌监测标准操作程序 一、目的：建立洁净区中沉降菌的标准操作程序，保证产品在规定的洁净级别内生产。 二、适用范围：适用于洁净区的沉降菌的监测。 三、职责：质量监督员、质量检验人员 四、正文： 1 定义： 1.1洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。 1.2洁净工作台：处在垂直层流洁净罩下的工作台。 1.3洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子 的允许统计数在规定范围内。 1.4菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。 用个数表示。 2测试方法： 2.1方法概述：利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子 于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的 菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区） 的洁净度。 2.2 所用的仪器和设备： 2.2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 2.2.2恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 2.2.3培养皿： 2.2. 3.1一般采用￠90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。 2.2. 3.2使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 2.3 培养基：普通营养琼脂培养基。 2.3.1将培养基加热熔化，冷却至约45℃，在无菌操作条件下将培养基注入 培养皿，每皿约15ml。 2.3.2待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿在2-8℃的环境中存放。 测试步骤：2.4.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，
1 （一）目的 建立洁净度（沉降菌）的检验操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的操作方法。 2 范围 适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全过程。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 概述：本对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、 装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.2 测试方法 4.2.1 方法提要： 本按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》，采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2.2 仪器 仪器包括：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。 4.2.2.1 培养皿 一般采用 90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2.2 培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。 4.3测试前的规则： 4.3.1 测试状态； 4.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、 换气次数、空气流速必须控制在规定值内。洁净室（区）的温度和相对湿度 应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿 度在45%～65%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。 4.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 4.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报 告中注明测试状态。 4.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间 为不大于4h。 4.3.2 测试人员： 4.3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
洁净区微生物知识培训 微生物培训 《药品生产质量管理规范》附录中明确药品生产质量管理规范》规定：规定：洁净室区内的人员数量应严格控制。其工作人员(包括维修、控制。其工作人员(包括维修、辅助人员)应定期进行卫生和微生物学卫生和微生 物学基人员)应定期进行卫生和微生物学基础知识、础知识、洁净作业等 方面的培训及考核；对进入洁净室区的临时外来人员应进行指导和监督。 应进行指导和监督。 医药工业洁净室(医药工业洁净室(区)必须以尘粒和微生物为环境控 制对象。物为环境控制对象。二者相比，二者相比，微生物更难以控制存 在范围广。1、存在范围广。生长速度快。2、生长速度快。生存能力强。3、生存能力强。 微生物是什么？微生物是什么？一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物。小生物。形体微小、形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、单 的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物。低等生物。是生物的一大类，形 体微小、是生物的一大类，形体微小、构造简单、繁殖迅速，造简单、繁 殖迅速，广泛分布在自然界中，自然界中，是一群在化学显微镜或电子显 微镜下放大几千倍，或电子显微镜下放大几千倍，甚至上万倍才能看得到 的微小生物。至上万倍才能看得到的微小生物。 微生物分类-微生物分类-八大类真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌(湿疹)真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌(湿疹)细菌：肺炎球菌、大肠 杆菌、细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌放线菌：放线菌：支原体： 肺炎支原体支原体：衣原体：衣原体：沙眼立克次体：斑疹伤寒立克次体：
螺旋体：螺旋体：梅毒病毒：乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流感病毒。流感病毒。 微生物五大共性体积小，面积大；体积小，面积大；吸收多，转化快；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异； 适应强，易变异；分布广，种类多。分布广，种类多。 常见污染药物制剂的微生物1.葡萄球菌：1.葡萄球菌：可引起局部 感染葡萄球菌大肠杆菌：2.大肠杆菌：胆道及尿道感染绿脓杆菌：化脓性 感染、中耳炎、3.绿脓杆菌：化脓性感染、中耳炎、肺炎枯草杆菌：4.枯 草杆菌：结膜炎酵母菌：使糖分解，5.酵母菌：使糖分解，药液产生有机 酸霉菌：使制剂霉坏、6.霉菌：使制剂霉坏、酸败变质 洁净车间内微生物在哪里？洁净车间内微生物在哪里？ 空气水人员器具 1.空气中的微生物灰尘——“微生物的飞行 器”。微生物的飞行器”灰尘微生物的飞行器微生物不是凭空存在的，99%的微生微生物不是凭空存在的，99%的微生物都附在颗粒上。物都附在 颗粒上。控制空气中的微粒就是控制了微生物数量。数，就是控制了微生 物数量。灰尘、微粒具有沉降和粘附的趋势，灰尘、微粒具有沉降和粘附 的趋势，所以同一区域内，所以同一区域内，地面是微粒相对集中的地方，中的地方，也是微生物相对较多的地墙壁也容易粘附灰尘。方，墙壁也容 易粘附灰尘。 98版98版GMP尘粒最大允许数/尘粒最大允许数/立方米洁净度级别 ≥0.5μm3,500350,0003,500,000≥5μm02,00020,000微生物最大允许数 浮游菌/浮游菌/立方米5100500沉降菌/沉降菌/皿1310
洁净区、卫生知识培训 一、洁净作业基础知识 1.洁净室（区）：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均 具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。其他有关参数如温度、湿度、压力等按要求进行控制。 2.净化：为了得到必要的洁净度而去除污染物质的过程。 3.空气净化：去除空气中的污染物质，使空气洁净的过程。 4.全室空气净化：通过空气净化等技术措施，使室内工作区的空气含尘浓度达到规定的洁净度等级的方式。 5.局部空气净化：仅使室内工作区特定的局部空间的空气含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别的方 式。 6.粒子:尺寸为0.001~1000um的固态和液态物质。 7.悬浮粒子：用于空气洁净度分级的空气悬浮粒子，尺寸范围在0.1～5um的固体和液体粒子。 8.洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。按单位容积空气 中某粒子的数量来区分的洁净程度. 9.单向流(层流）：沿单一方向呈平行流线并且横截面上风速一致的气流。分垂直单向流和水平单向流. 10.非单向流（乱流）：具有多个通路循环特性或气流方向不平行，不满足单向流定义的气流。 11.静态测试：洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装,洁净室(区）内没有 生产人员的情况下进行的测试。 12.动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。 13.无菌：不存在活动生物。 14.灭菌:使达到无菌状态的方法。 15.无菌原料药：不存在活的微生物的原料药. 16.非无菌原料药:所含活的微生物量符合卫生学标准的原料药. 二、空气净化系统的空气处理措施
洁净室(区)沉降菌检测标准操作规程
1.1.1.
1.1. 2.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要 求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。 1.1.3.风速、压差应在合格范围内。 1.1.4.动态测试。 1.2.测试方法 1.2.1.将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。将采样 台面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。 1.2.2.在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在QC 微生物室进行培养观察。 1.3.培养观察计数 1.3.1.全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱 中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。 1.3. 2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。可每次选定2 只培养皿作对照培养。 1.4.计算 1.4.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MN N M1＝1号培养皿菌落数 M2＝2号培养皿菌落数 Mn＝n号培养皿菌落数 n＝培养皿总数 1.4. 2.结果判定 1.4. 2.1.最终结果采用平均值。但每个碟的菌落数亦不得多于标准规定。 1.4. 2.2.如有一个碟的菌落数超过标准规定，平均却符合规定，也以不合格论。 1.4. 2. 3.静态测试时，若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区 域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
1.5.注意事项 1.5.1.若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以 上菌落计数。 1.5. 2.采取一切措施防止人为因素对样本的污染。 1.5.3.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正 面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培 养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 1.5.4.采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔 除。 1.5.5.对于沉降菌测试，符合最少采样点数时，还必须符合最小培养皿数。最 少采样点数与最少培养皿见附表。 1.6.日常监控 1.6.1.对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限和警戒限，以保证洁净室（区）的 微生物浓度受到控制。应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效 力，并做趋势分析。静态动态监控都可以采用此方法。 1.6. 2.对于沉降菌的取样频次。如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情 况后，也应确定其他项目的检测频次： 1.6. 2.1.连续超过纠偏限和警戒限 1.6. 2.2.停工时间比预计长 1.6. 2. 3.关键区域内发现污染存在 1.6. 2.4.在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修 1.6. 2.5.日常操作记录反映出倾向性的数据 1.6. 2.6.消毒规程的改变 1.6. 2.7.引起生物污染的事故等 1.6. 2.8.当生产设备有重大维修或增加设备时 1.6. 2.9.当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时 1.7.洁净车间采样点分布图详见《洁净区洁净度监控管理规程》。 1.8.微生物实验室采样点分布图详见《微生物实验室环境测试规程》。
1 目的之宇文皓月创作 建立洁净度（沉降菌）的检验尺度操纵规程，为沉降菌检查人员提供正确的尺度操纵方法。 2 范围 适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全过程。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 概述：本尺度对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或 区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、发生和滞留的功能。 4.2 测试方法 4.2.1 方法提要： 本尺度按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》，采取沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2.2 仪器 仪器包含：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。 4.2.2.1 培养皿 一般采取f90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2.2 培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。 4.3测试前的规则： 4.3.1 测试状态； 4.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的 要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。洁 净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应 （无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65% 之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。 4.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 4.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产 的要求，并在陈述中注明测试状态。
静脉用药调配中心沉降菌监测项目操作规程 Ⅰ目的 规范沉降菌检测，保障检测结果正确性及有效性。 Ⅱ范围 适用于静脉用药调配中心沉降菌监测操作。 Ⅲ规程 一、十万级洁净区清洁消毒后进行沉降菌测试。 二、每次测试前按照相关标准操作规程提前30min打开净化空调系统，使温度、湿度及压差达到规定要求，并进行记录。 三、如进行生物安全柜或水平层流洁净台沉降菌检测应提前30min打开紫外线灯、风机。 四、由专人从医学检验科微生物室取回制备好的培养皿。 五、制备好的培养皿由药品物品传递窗送至洁净区内，测试人员按照更衣标准操作规程穿戴进入洁净区。 六、按事先制定的采样布点图放置，逐个放置，逐个打开培养皿上盖，使培养基暴露在环境空气中。打开时，用一手的大拇指和食指轻轻移开上盖，人体任何部位应尽量远离培养皿上部，防止产生假阳性。 七、检测生物安全柜或水平层流洁净台时，按最少培养
皿数要求，把14个培养皿均匀放在工作台上，然后从里往外逐个打开，使其培养基暴露在空气中。 八、培养基在空气中暴露30分钟后，从外往里逐个盖好上盖并反扣培养基。收集完毕，从成品输液传递窗出口送出。测试人员按照更衣标准操作要求离开洁净区。 九、送医学检验科微生物室。 十、待医学检验科出具沉降菌检测报告，查看结果是否符合规定要求，如符合存档。如不符合重新进行消毒后，再进行两次沉降菌检测，结果必须合格。如不合格，对问题进行排除，如更换高效过滤器等。 十一、注意事项 （一）采样前培养皿表面必须严格消毒； （二）静态测试时，室内测试人员不得多于2人； （三）采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染应剔除； （四）采样点尽量离地面0.8-1.5米，尽量避开尘粒较集中的回风口； （五）沉降菌检测定义：通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净区环境内的活生物数，以此来评定洁净区的洁净度。
目的：阐述洁净室（区）中沉降菌测试的方法，以作出正确的环境评价。 范围：洁净室。 职责：检验科主管、检验员。 规程： 1沉降菌是用暴露法收集降落在培养皿中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。其沉降浓度用CFU/皿表示。 2所用仪器和设备 高压消毒锅、恒温培养箱、φ90mm培养皿和普通肉汤琼脂培养基。 3测试状态 3.1静态测试时，洁净厂房的空气净化调节系统的风机启动30-60分钟后开始测试；对100级层流洁净工作台，应在净化空调系统正常运行后不少于15分钟后测试。 3.2测试前，被测试洁净室已经消毒过。 3.3沉降菌测定的培养皿应布置在有代表性的地方和气流扰动最少的地方。 4测试人员 4.1测试人员必须穿戴符合该洁净区洁净度级别的工作服。 4.2静态测试时，室内测试人员不得多于2人。 5采样点数目及布置 5.1采样点数目 5.2 在满足最少测点数的同时，还要满足最少培养皿数，如下表。不论面积大小，作为一个被测对象，都应满足这个要求： 6. 采样方法及培养 将培养皿按要求放置后, 打开平皿盖, 使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖上，倒置于恒温培养箱中，在30-35℃的条件下，培养48小时后计数。每批可选定3只培养皿作对照培养（阴性）。 7.结果计算 7.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏，若培养皿上有2个或者2个以上菌落重叠，在分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 7.2计算公式
ΣMi M= —————— n 式中M –平均菌落数(CFU) Mi—表示1,2,3……n号平皿菌落数； n—平皿总数。 标准 8. 结果评定: 8.1 用平均菌落数判断洁净室(区)空气中的微生物数。 8.2 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。 8.3 若洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
1 目的 建立洁净度（沉降菌）的检验标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法. 2 范围 适用于本公司洁净度(沉降菌）检查的全过程. 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任,QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 概述：本标准对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、 装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4。2 测试方法 4.2.1 方法提要： 本标准按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》，采用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度. 4.2.2 仪器 仪器包括：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。 4.2.2。1 培养皿 一般采用 90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2.2 培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA）或沙氏培养基（SDA)或用户认可并经验证了的培养基。 4。3 测试前的规则： 4。3.1 测试状态; 4。3。1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。洁净室（区）的温度和相对湿度应与 其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃~26℃,相对湿度在45%～ 65％之间为宜）,同时应满足测试仪器的使用范围。 4.3。1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区)已经过消毒。 4.3。1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报 告中注明测试状态。 4.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时,培养皿暴露时间为 不大于4h。 4.3.2 测试人员： 4.3.2。1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
洁净区沉降菌监测标准操作规程 目的：建立洁净区中沉降菌的监测规程，保证药品在规定的洁净级别内生产。 适用范围：适用于洁净区沉降菌检测的操作。 责任：QA洁净度监测人员、QC微生物检验员对本标准的实施负责。 内容： 1.方法概述： 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判断洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 2.所用的仪器和设备 2.1高压消毒锅 使用时应严格按照仪器说明书操作。 2.2恒温培养箱 必须定期对培养箱的温度计进行定检。 2.3培养皿 一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿；使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌 20min。 2.3.1将培养基加热熔化，冷至45℃时，自无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。 2.3.2 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃—35℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿宜在2℃—8℃的环境中存放。2.4 培养基 普通营养琼脂培养基。具体见培养基配置方法。 3.测试步骤 3.1采样方法 将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后倒置。 3.2培养 3.2.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.2.2在30℃—35℃培养箱中培养，时间不少于48h。 3.2.3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对 照培养。 3.3菌落计数 3.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点记，然后用5—10倍放大镜检查，是否 遗漏。 3.3.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 4.注意事项 4.1测试用具要作灭菌处理，已确保测试的可靠性，准确性。 4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察, 不漏计培养皿边缘生长的菌落，并注意细菌菌落与培养沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5.1 测试规则 5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。 5.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 5.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 5.2 测试人员 5.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 5.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 5.3 测试时间 5.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统运行不少于10min 后开始。
1.目的：建立沉降菌监测标准操作程序，以确保洁净室（区）洁净度满足生产/检验需要。 2.范围:适用于洁净区沉降菌指标监测。 3. 职责:洁净区沉降菌监测人员对本规程实施负责，质量部负责人对本规程的有效执行承担监督检查责任。 4. 内容 4.1 检测依据: 4.1.1 GB/T 16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》 4.1.2 YY0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》 4.2 仪器设备：培养皿、培养基、恒温恒湿培养箱、高压蒸汽灭菌器 4.2.1 培养皿：一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿；121℃高压蒸汽灭菌30min 后使用。 4.2.2 培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基，其配置方法见《培养基配制操作规程》。 4.2.3 恒温恒湿培养箱：按《恒温恒湿培养箱操作及维护保养操作规程》进行操作。 4.2.4 高压蒸汽灭菌器：按《高压灭菌器操作及维护保养操作规程》进行操作。 4.3 检测周期：日常环境监测应每周一次，如长时间未生产，恢复生产前需检测沉降菌。 4.4采样点：采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最小采样点数目，在满足最少测定数的同时，还宜满足最少培养皿数。
4.4.2 最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表。 4.4.3采样点的位置 4.4.3.1 洁净室（区）采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于稀疏。可参考下图。 平面采样点布置图 4.4.3.2 100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式参考下图。
建立车间洁净区悬浮粒子和沉降菌的检验标准操作规程，为检验人员提供正确的标准操作 方法。 本规程合用于车间洁净区悬浮粒子和沉降菌检查项的检测操作。 化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程 微生物室检验员：负责对本规程的实施。 1、悬浮粒子 1.1、测定目标 车间洁净区悬浮粒子 1.1.1 悬浮粒子 可悬浮在空气中的尺寸普通在 0.001~1000um 之间的固态和液态或者两者的混合物质 1.1.2 洁净度 洁净环境内单位体积空气中含大于或者等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。 1.2、测定方式：静态测试 洁净区(室)净化空气调节系统已处于正常运行状态，洁净区(室)内没有工作人员的情况下进 行的测试。 1.3、测试方法： 本测试方法采用计数浓度法， 即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或者等于某粒径的 悬浮粒子数，来评定洁净区(室)的悬浮粒子洁净度等级。 1.3.1 仪器：悬浮粒子计数器 1.3.2 工作原理 本仪器根据悬浮粒子的光散射原理， 即空气中的尘埃粒子在一定强度的光束照射下， 向其周 围空间散射出与其粒径成一定比例关系的光通量的原理而设计的。 1.3.3 使用要点：使用仪器时应严格按照仪器说明书操作。 1.3.3.1 仪器开机，预热至稳定后，方可按说明书的规定对仪器进行校正。 1.3.3.2 采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。 1.3.3.3 采样管必须干净，严禁渗漏。 1.3.3.4 采样管的长度应根据仪器的允许长度。 1.3.3.5 计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。 1.3.3.6 必须按照仪器的检定周期，定期对仪器作校准，以保证测试数据的可靠性。 1.3.4 测试条件 1.3.4.1 温度和相对湿度 洁净区(室)的温度控制在 18~26℃，相对湿度控制在45％~65％之间为宜。 部门/姓名 部门/姓名 部门/姓名 部门/姓名 颁发部门 签收/日期： 编写/修订人/日期 第一审核人/日期 第二审核人/日期 批准人/日期 执行日期 分发部门 品质部 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 2022 年 04 月 15 日 品质部/ 品质部/ 品质部/ 品质部/ 品质部