血型鉴定微柱凝胶法 1.目的： 采用正反定型对受检者进行血型鉴定 2.职责： 严格按照血型鉴定试剂说明书操作 3.适用范围： 血库工作人员 4.原理： 凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起，当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应。 5.试剂、仪器及所需材料 ℃保存，主要成分：IgM性质抗-A单克隆试剂：细胞株HA4、ADD、HA5、HA3，来源于河北医科大学生物医学工程中心； IgM性质抗-B单克隆试剂：细胞株BAD、BDF、HB4，来源于河北医科大学生物医学工程中心；IgM性质抗-D单克隆试剂：细胞株RUM-1，来源于英国Millipore公司。 %-1%的A型和B型红细胞 %的生理盐水：安徽双鹤药业有限责任公司 LB-3000医用低速离心机一次性吸管一次性塑料试管 6.标准种类及收集要求 样本应符合《临床输血技术规范》要求，应无严重溶血、无脂血及无纤维蛋白存在，EDTA抗凝的血液标本。 7.检测环境条件： 18-25℃，湿度30%-70% 8.操作程序
血型卡有六个凝集管。其中第一管为抗A凝胶，第二管为抗B凝胶，第三管为抗D凝胶，第四至六管为中性胶。 用生理盐水将待检者的压积红细胞配置成%-1%浓度，分别加入第一至第三管和第六管微管中，每管50ul。 将A型、B型红细胞分别加入到第四和第五管中，每管50ul。
将待检者血浆分别加入到第四至第六管中。每管25ul。 混匀后置专用离心机离心5分钟。 离心结束后，取出观察结果并记录。 9.结果判定 10.注意事项 为了便于鉴别，抗A微管中内容物为蓝色，抗B微管中内容物为黄色，抗D微管中内容物为乳白色，其他三个中性胶中内容物为乳白色。 使用血型卡前重新离心后使用。 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时，不可使用。 撕开凝胶卡的封口膜时，不可用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉感染。 红细胞悬液的浓度为%-1%，浓度过高或过低会影响检测结果。血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白，否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀，呈现假阳性反应。 如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
卡式微柱凝胶试验与传统检验方法对临床输血检验的应用比较 发表时间：2018-03-02T13:14:45.873Z 来源：《医药前沿》2018年1月第3期作者：周文彪[导读] 以卡式微柱凝胶试验展开临床输血检验，可提升一次性检验正确率，为患者输血安全提供有力保障。 （云南省楚雄州人民医院输血科云南楚雄 675000）【摘要】目的：比较卡式微柱凝胶试验与传统检验方法对临床输血检验的应用价值。方法：为158例交叉配血的患者以盐水法、卡式微柱凝胶试验展开临床输血检验，比较检验结果。结果：卡式微柱凝胶试验正定型、反定型一次性检验符合率100.0%、99.4%明显高于盐水法的96.8%、91.8%（P＜0.05）。经交叉配血后，1例患者发生配血不符，占比0.6%。结论：以卡式微柱凝胶试验展开临床输血检验，可提升一次性检验正确率，为患者输血安全提供有力保障，值得推广。【关键词】输血检验；卡式微柱凝胶试验；传统检验【中图分类号】R457.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）03-0137-01 输血是重要的临床辅助治疗手段，要求安全、快速，而展开准确的交叉配血试验对患者用血安全性有重要影响[1]。现阶段临床应用较多的交叉配血检验方法为聚凝胺法、酶法、盐水介质法等，这些传统检验方法操作繁琐，用时较长，极易被外界因素影响，灵敏度较低，输血的安全性有待提高[2]。卡式微柱凝胶试验是新型输血检验方法，操作简便且准确性高。为分析卡式微柱凝胶试验的应用价值，笔者选取158例交叉配血试验患者展开临床研究，现报道如下。 1.资料与方法 1.1 临床资料 选取2016年1月至2017年2月在我院行交叉配血试验的158例患者，其中男95例，女63例，年龄13～71岁，平均（35.4±6.9）岁；所有患者临床资料均完整，其中54例有输血史，10例有妊娠史，1例短期内输血数次，3例有妊娠合并输血史。 1.2 方法 根据规范要求，采集患者肘静脉血3～5ml，以枸橼酸钠抗凝剂行抗凝处理，利用试管对158例患者展开盐水正向定型与反向定型试验。对卡式凝胶管并做标记，以生理盐水制作0.05%红细胞悬液，将待测血清50μl加入A、B两试管，分别加入20μl抗A血清与抗B血清和5%红细胞悬液50μl，将待测血清50μl和抗C血清加入试管C中。在A1与B1食管内加入待测血清、A型及B型血清、0.5%红细胞悬液。检测期间调整温度为37℃并孵化10min，向凝胶试管加入O型血50μl，以1000r/min的速度离心3min，之后展开测量。 1.3 判定标准 阳性：试管中的红细胞全部或部分结合柱内的凝胶；阴性：试管中的红细胞均沉淀至底。 1.4 统计学分析 用SPSS 20.0软件包分析数据，计数资料对比采用χ2检验。P＜0.05为差异显著。 2.结果 2.1 两种试验方法的检验结果 卡式微柱凝胶试验正定型、反定型一次性检验符合率明显高于盐水法（=5.08、10.76，P=0.024、0.001）见表1。 2.2 血型检测结果 158例患者中RhD阴性1例，占比0.6%；E阴性44例，占比27.8%；C阴性11例，占比7.0%；1例患者在交叉配血试验之后发生配血不符，占比0.6%。 3.讨论 在很多疾病治疗中，输血具有无可取代的重要地位，而输血检验是确保患者用血安全的重要环节。传统的输血检验方法如聚凝胺法、酶法及盐水法等最低检测限度较高，自动化程度不佳，且操作比较麻烦，难以标准化，若患者为危急重症，一旦输血延误将会导致患者疾病治疗受到影响，严重时可危及患者生命安全[3]；若配型不准则会导致抗凝现象，甚至可诱发血管内栓塞，导致残疾或死亡。因此输血前展开准确、快速的配对十分重要。 过去临床常用的传统检验方法在血清配对、血型配对方面的准确度有待提高，与此同时因配对不准引发的医疗事故也并不少见，这些给患者及医院均造成了不良影响[4]。近年来，卡式微柱凝胶试验在输血检验中的应用逐渐增多。卡式微柱凝胶试验属于血型血清配对的新型、迅捷检验方法，以抗人球蛋白为基础，展开血型鉴定和配血。其工作原理是借助细小凝胶颗粒构成滤网，与系统调控下的离心机器配合，可迅速将非凝结红细胞与凝结红细胞分离，于电脑显示器上反映出不同图谱，检验医师可结合标准解读方法对图谱进行分析，实现标准化输血检验，可在最大限度上降低人为因素给交叉配血检验造成的干扰。卡式微柱凝胶试验可避免传统检测方法的不足，能够快速、准确的实现血液配对，为患者输血安全与迅速的输血治疗提供更多保障。在本次研究中，卡式微柱凝胶试验正定型、反定型一次性检验符合率100.0%、99.4%明显高于盐水法的96.8%、91.8%（P＜0.05）。经交叉配血后，1例患者发生配血不符，占比0.6%。从中可见，卡式微柱凝胶试验的输血检验准确率较高。 本研究中有1例患者经卡式微柱凝胶试验结果并不正确，推断可能是因为患者自身疾病可能会影响到试验结果的准确性，如免疫性溶血性贫血、自身凝血功能障碍或恶性肿瘤等，因此在运用卡式微柱凝胶试验展开输血检验前，应先判断患者疾病。另外，在检验过程中，根据规范标准保存血液病适当处理，之后再展开血清血型检验十分重要，若血液样品的保存时间过长，会影响检测结果的准确性。卡式微柱凝胶试验可减少医护人员和血液样品的接触，能减少医护人员带来的污染，同时又能避免血液样品中可能存在的病原给医护人员健康造成损害。
ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展 来源：本站原创作者：陈琦1张嘉敏2李厚达1朱自严2（1．扬州大学医学院生理教研室，江苏扬 州 225001； 2．上…发布时间：2009-12-2 红细胞血型系统非常复杂，ABO血型之后，目前已发现了29个血型系统，700余种血型抗原。血型抗原的正确鉴别在保证输血安全、调查人种分布、建立稀有血型库及许多疾病的诊断、分型甚至治疗方面都有极其重要的作用［1］。抗原的鉴别有赖于相应抗体的获得。血型鉴定用抗体的制备也经历了多克隆、单克隆及基因工程抗体3个发展阶段。现将ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展综述如下。 1 ABO血型鉴定用抗体 1.1ABO抗血清人源抗血清即多克隆抗体是人体内天然存在的或免疫反应检测到的抗体，ABO血型抗血清属于天然抗体，于出生后2—8个月开始产生，8—10岁达高峰。将通过全血制备的抗血清用于ABO血型的鉴定，方法简单、血凝明显、特异性强，长期以来一直是国内外血型检测机构及医院使用的ABO定型试剂。但它们存在的突出问题是：需耗费大量血液、不能做到标准化、难以规模化生产［2］。基于以上原因，科学家们一直希望找到可代替人抗血清用于ABO血型鉴定的理想试剂。杂交瘤技术问世，使这一愿望成为现实。 1.2ABO mAbs 1975年杂交瘤技术发明以后，Voak(1980)和Sachs (1981)等先后建立了能分泌抗 A和抗 B mAbs的杂交瘤细胞株，并将其成功用于ABO系统的血型鉴定。此后，其发展十分迅速，各国均建成了多株能稳定分泌抗 A、抗 B mAbs的瘤株细胞，为保证不同来源的ABO血型mAbs定型试剂质量的稳定性、结果判断的统一性及使用有效性，1987年，国际输血协会(ISBT)在第一届“红细胞及相关抗原单克隆抗体国际专题会议”中，对ABO 血型mAbs制品的生产、使用提出了明确的质量标准和规范［3］。2000年，我国也出台了相应的政策法规，加强了质量管理与监督。目前高效价、质量稳定的ABO血型mAbs定型试剂，已完全取代抗血清，广泛用于ABO血型的临床鉴定［4］。值得注意的是：用mAbs 进行ABO血型鉴定时会有漏检、假阳性、假阴性现象的发生，对此，国内外文献均有报道。1996年，Garatty等［5］报道了1例使用mAbs定型试剂，误将含获得性B抗原的A型患者错定为AB型，导致患者因错输AB型血死亡的病例；国内孙爱农等［6］也有类似发现。究其原因，主要是因为不同个体的红细胞A、B抗原，尤其是亚型决定簇的结构和数量存在不均一性，1个mAb只识别1个抗原结合位点，因此用单一mAb制品进行复杂血型鉴定时，可能导致误判。因此专家建议：可将抗原结合部位不同的mAbs混合组成检测试剂盒，进行复杂血型的鉴定，以确保输血治疗的安全性。 1.3基因工程抗体近年来，基因工程抗体的制备成为抗体工程的重要发展方向。Siegel 等［7］用噬菌体抗体库技术获得了针对ABO血型抗原的Fab和ScFv抗体，国内王长军等［8］也制备出A抗原的ScFv抗体。与mAbs相比，这些基因工程抗 A、抗 B在反应亲合力和效价等方面均未达到临床使用的要求，因此，有关这方面的研究进展不大。 2 Rh血型鉴定用抗体 在Rh血型系统中，常见的有D、C、E、c、e5种抗原，其中D抗原性最强，因此，一般制备的Rh抗体以抗 D为主。 2.1Rh抗血清与ABO血型系统不同，Rh阴性个体血清中没有天然的Rh抗体。只有在接受了Rh阳性血后，Rh抗体才能产生。传统的Rh抗体以Rh阴性志愿者为主要来源，即
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
交叉配血试验标准操作规程 （微柱凝胶抗人球蛋白法） 1.目的 为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。 2.适用范围 适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。 3.职责 医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。 4.原理 红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。 5.所需设备和试剂 普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡 6.检测环境条件 室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。 7.操作步骤 7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。 7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者0.5% 红细胞LIM悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。 7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min。 结果，表示受（供）血者血浆或血清中含供（受）血者红细胞血 型抗原相应的抗体（不完全抗体IgG或完全抗体IgM），供 受血者血液不相容。
阴性结果，表示供受血者血液相容。 8.质量控制 8.1微柱凝胶试剂卡在有效期内使用，每批试剂卡在使用前用已知阴、阳性对照确认其有效性。 8.1试剂质量控制方法 8.1.1即作阴、阳性对照试验：撕开检测卡的封膜，于2个反应腔中分别加入已致敏IgG抗D的1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl、健康者1%O型RhD(+)红细胞LIM悬液50μl。 8.1.2将检测卡于离心机1800r/min离心1min,2500r/min离心1min。 8.1.3取出，结果判定同7.3 9.注意事项 9.1检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室平衡至室温。 9.2检测卡试验前，应3000r/min离心1min，正立放置待用。 9.3如因运输过程产生的气泡，可将检测卡放置在漩涡震荡器上震荡，使气泡漂移至胶面为止，3000r/min离心2min。 9.4细菌污染、纤维蛋白析出、抗凝不佳的血，可产生假阳性。 9.5离心速度过快，时间过长，试剂失效等因素均可导致假阴性。 10.相关文件 山东科博试剂仪器有限公司《抗人球蛋白检测卡说明书》
血型检查化验单怎么看 在了解血型检查化验单之前，让我们先了解下抗原与抗体的关系。 抗原是指病原体等异物侵入人体之后，引起人体产生抗体的物质（即病原体等异物）。 抗体指的是病原体侵入人体之后，刺激了淋巴细胞，淋巴细胞产生一种抵抗该病原体的特殊蛋白质，是一种可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 圆规正传，接着就来了解下血型检查化验单到底应该怎么看吧！ 血型检查化验单上会出现孕妇及其配偶的血型，如，孕妇血型为O型，丈夫血型为A型，化验单上显示IgG抗A效价是1：4，大于1：64的参考值，也就是说ABO溶血检查结果正常，不会发生溶血现象；分母如果大于64，则表示有溶血的可能。 如报告单上显示，Rh（D）+也就是说孕妈妈的血型中含有Rh因子为阳性，绝大部分人的都是这样的数据；如果显示为RH（D）-，那么就有可能发生Rh溶血病，需做密切的观察和检查。 溶血化验单怎么看 关于溶血化验单主要分为两部分： 1、Rh血型不合 首先要知道Rh阴性血型在不同人群和种族中存在差异，在我国汉族中仅为0.34%，少数民族中则在5%以上。Rh血型共有六种抗原，即C和c，D和d，E和e，D抗原是最早发现的，所以临床上凡是D抗原阳性者称为Rh阳性，无D抗原者称为Rh阴性。Rh血型的抗原中以D抗原的抗原性最强，而Rh血型抗原的抗原性决定了溶血的严重程度。 Rh-血型的准妈妈，所怀第一胎为Rh+血型，那么胎儿则含有D抗原，准妈妈体内无D 抗原，因而准妈妈体内对抗D抗原的抗体还不够多，因此在第一胎时发生溶血病的可能性比较小。而在第二胎时，准妈妈因为在第一胎分娩时接触到了胎儿的D抗原，所以体内也产生了更多的D抗体，如果在第二胎所怀胎儿为Rh+血型的话，那么D抗体会增加，会与胎儿体内的抗原发生反应，抗体会透过胎盘把第二个婴儿的血液溶解，这样就会导致第二胎发生溶血病。
(一)、概述 食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。 （二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下： 1、活细胞计数的改进方法 （1）、旋转平皿计数方法 （2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method） （3）、血膜系统（Pertrifilm） （4）、酶底物技术（ColiComplete） （5）、直接外荧光滤过技术（DEFT） （6）、“即用胶”系统（SimPlate） 2、用于估计微生物数量的新方法 （1）、阻抗法 （2）、A TP生物发光技术 3、其他方法 （1）、微量量热法 （2）、接触酶测定仪 （3）、放射测定法 （三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法 1、沙门氏菌显色培养基法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 4、自动传导法 （四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法 大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。利用其生化特征、免疫原性建立的方法以及现代分子生物学技术的应用，可以从多方面对E.coli O157：H7进行检测。 1、E.coli O157：H7鉴别培养基及显色培养基 2、免疫学检测方法 3、分子生物学方法 （五）、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈普通串状排列无芽孢，无鞭毛，不能运动。该菌在自然界中分布广泛，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，是最常见的化脓性球菌之一，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是其肠毒引起的，目前已确认的肠毒素至少有A,B,C1,C2,C3,D,E和F8个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒爆发事件，近年来
微柱凝胶抗人球蛋白法 1. 目的 为规范微柱凝胶抗人球蛋白法在交叉配血试验中的应用，保证检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》的要求制定本规程。 2. 适用范围 适用于医疗机构输血科作交叉配血试验。 3. 职责 医疗机构输血科技术人员负责对交叉配血的试验。 4. 原理 红细胞血型抗原与不完全抗体（IgG），在抗人球蛋白的桥梁作用下，经一定的离心力，产生特异性免疫凝集复合物或红细胞血型抗原与完全抗体（IgM）直接产生的特异性免疫凝集复合物，被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或凝胶颗粒间隙之中，判为阳性结果，表示待检血标本中含有相应红细胞血型抗原抗体；红细胞全部沉积于凝胶孔腔底部，即判断为阴性反应，表示待检血标本中无相应的红细胞血型抗原抗体。 5. 所需设备和试剂 普通离心机、微注凝胶卡专用离心机、微柱凝胶卡专用孵育器、微量移液器、抗人球蛋白微柱凝胶卡 6. 检测环境条件 室湿应控制在18~27℃，湿度应保持30%~70%。 7. 操作步骤 7.1先将供（受）血标本制备0.5%红细胞低离子介质（LIM）悬液。 7.2撕开卡的封膜，于反应胶中主（次）侧管加供（受）者 0.5% 红细胞LIM悬液100μl，加入受（供）血者血浆或血清25μl（或50μl）。 7.3将检测卡37℃孵育15min取出，置离心机1800r/min离心1min或2500r/min 离心1min。 7.4取出，判定结果，结果判定标准按下： 阳性 4+ 表示RBC绝大部份凝聚于凝胶表层 3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层 2+ 表示部份RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中
微柱凝胶法血型鉴定操 作规程 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
微柱凝胶法 1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml 2原理： 2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）； 2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶； 2.3凝胶间隙具有分子筛作用。凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部； 2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。 3操作： 3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。 3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul 3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟 3.4离心结束后在白色背景前观察结果 4结果判断： A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
5.注意事项 5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。 5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。 5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。 5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。 5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。 5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。 6.方法评价 卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。
卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的应用分析 发表时间：2012-02-02T15:17:07.463Z 来源：《中外健康文摘》2011年第39期供稿作者：张迎明[导读] 卡式微柱凝胶法可提高血型鉴定的检验质量。 张迎明（辽宁省葫芦岛市中心医院 125001） 【中图分类号】R472【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）39-0201-01 【摘要】目的分析卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的应用。方法将800名病人同时采用卡式微柱凝胶法和传统的手工操作法作血型鉴定。结果卡式微柱凝胶法正确率为100%，手工正定型法为97.65%，正定型+反定型为100%，但在操作标准化、特异性、灵敏度、客观性方面，前者明显优于后两者。结论卡式微柱凝胶法可提高血型鉴定的检验质量。【关键词】微柱凝胶法血型鉴定 近年来，卡式微柱凝胶检验法（以下简称“卡式法”）已在全国各级医院中，普遍运用，用来作血型鉴定的检验方法，相对于从前国内各级医院用手工操作作血型鉴定来说，卡式法结果准确，操作简单，试剂用量小；环境污染因此下降。我院自2005年7月开始用卡式法来作血型鉴定的检测工作。并对800名住院病人作了卡式法与手工操作的平行实验，并对结果进行了比较及分析。 1 材料和方法 1.1仪器孵育器：Diana(戴安娜）lncubador专用孵育器。离心机: Diannafuge专用离心机。 1.2试剂 1.2.1卡式法试剂DG Gel ABO-CDE卡，A1红细胞、B红细胞、O红细胞。 1.2.2手工试剂抗A、抗B血清为长春生物制品研究所生产。单克隆抗D为上海血液生物医药有限责任公司生产。 1.3标本来源 我院2005年10月至2006年7月外科住院病人800名，其中男522人，女278名。年龄11～86岁。抽取左肘静脉2ml，肝素抗凝，同时分别用卡式法和手工操型作鉴定血型。 1.4方法 1.4.1卡式检测法按戴安娜公司卡氏血型鉴定手册进行。取DG Gel ABO-CDE血型鉴定卡一个，标记病人的姓名病历号等，撕去卡上的锡纸膜,在A、B、D、C、E五孔各加入病人红细胞悬液50ul,在ctl、A1、B孔分别加入O、A1、B红细胞，离心后按说明书提示标准判读结果。 1.4.2手工操作按《全国临床检验操作规程》[1] 规定，正向定型和反向定型用试管法进行。 2 结果 将上述两种方法的鉴定结果进行比较，凡正反定型和卡式检测法检验相关血型不符合者，将血液红细胞用生理盐水洗涤3次，再用两种方法重复测定，作正确率比较。 3 讨论 卡式微柱凝胶法是抗原，抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。它是通过葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小，使分子筛只让游离分子通过，从而达到分离凝聚红细胞和游离红细胞的目的。戴安娜公司生产的ABO/CDE卡既可以应用于ABO血型系统正反定型的同时检验，又可以进行Rh血型系统中抗C、抗D、抗E的检验，符合《全国临床检验操作规抗程》对血型鉴定要求，且操作简单，敏感性特异性都高于手工正定型法。且正反定型相结合，弥补了正定型的不足。 卡式法的优点是采用标准化定量工作，减少了操作人员的随意性，且重复性好。由于用了凝胶分子筛技术，将凝集的，游离的红细胞分开，使结果一目了然。避免了操作上的主观影响[2]，所要标本量少，操作容易，省去了繁锁的洗涤过程，不再耽心抗人球蛋白抗体被中和，而产生假阳性。也便于保存，一般而言，在冰箱中可保存半年至一年。还可进行拍照供永久记录，以备发生血型鉴定错误时查对原始资料。塑料卡易销毁，不污染环境。 总之，卡式微柱凝胶法即使对无经验的操作者而言，结果判读，要比试管法更可靠，加上操作简单，省时，用试剂少，成本低，污染环境少，是一个值得推广的血型鉴定好方法。 参考文献 [1] 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程 [M] 南京：东南大学出版社，1997：89-91. [2] 彭道波，兰炯采，王梁平，等.用微柱凝试验进行交叉配血[J].中国输血
微柱凝胶卡交叉配血试验常见问题及处理苯露露论坛 微柱凝胶卡交叉配血试验的原理:在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，利用凝胶的空间位阻，经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部(管底尖部)。 微柱凝胶卡交叉配血试验的优点:微柱凝胶实验(又名微柱凝胶血型卡法)有结果清楚明确、结果稳定可保存、灵敏度高、特异性强、可标准化操作、自动化程度高、可检出IgG抗体、标本用量少、降低错误发生率的优点。微柱凝胶卡交叉配血试验常见问题: 1主侧不凝集，次侧凝集 1.1微柱凝胶卡交叉配血试验如果主侧不凝集，而次侧凝集，原因有:?患者的红细胞已经包被了抗体(自身抗体，直接抗人球蛋白试验即DAT阳性反应)。最常见的原因是患者有免疫系统疾病、肿瘤以及骨科患者。?供血者血浆中存在针对患者红细胞的抗体。?患者与供血者的ABO血型不合。 1.2处理 1.2.1患者红细胞直接抗人球蛋白试验:患者05%红细胞悬液50ul加入合血卡主侧或次侧，立即离心5min(900rpm2min;1500rpm3min。程序已设置好。)，取出肉眼判定结果。如果为阳性结果，则说明患者自身红细胞问题，即患者红细胞已被致敏，此袋血可以发出，但报告写清楚:主侧不凝集，次侧凝集，患者红细胞直接抗人球蛋白试验阳性，请缓慢输注。 1.2.2如果患者红细胞直接抗人球蛋白试验为阴性结果，则查找献血员血浆中是否存在不完全抗体。用献血员血浆作不完全抗体筛查试验:08%标准红细胞悬液?、?、?各50ul(1滴)加入相应凝胶管中，再加献血员血浆50ul，37?孵育
15min，离心5min(900rpm2min;1500rpm3min。程序已设置好。)，取出肉眼判断结果。如果为阳性结果，则说明献血员血浆中存在不完全抗体，此袋血不能发出，必须换一袋血再重新合血 1.2.3如果还查找不出原因，则请临床重新抽取血液标本，用新标本重新合血。 2主侧凝集，次侧不凝集 2.1微柱凝胶卡交叉配血试验如果主侧凝集，次侧不凝集，原因有:?患者或供血者ABO定型不正确，或二者的ABO血型不配合。?某些亚型的特异性非常强。?患者血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原发生了反应。?供血者红细胞上已经包被了抗体。?患者血清不正常，患者刚输注大分子药物如右旋糖酐。 2.2处理?重新鉴定血型，如属血型错误，则重新用同型血合血。?如属亚型，则此袋血不可以发出，必须换一袋血重新合血。?如果患者刚输注大分子药物如右旋糖酐，则立即停止输注大分子药物，2h后重新抽取血液标本，重新合血。 3主次侧均凝集 3.1微柱凝胶卡交叉配血试验如果主次侧均凝集，原因主要是ABO血型的错误。 3.2处理重新检测受血者和献血者的ABO血型(正反定型)，必须用ABO、RHD血型定型试剂卡(单克隆抗体)(微柱凝胶卡)作血型鉴定，如果正反定型不符，要按相应方法处理，直到结果能做出合理解释为止。 注意事项:?抗人球蛋白凝胶合血卡必须标注患者姓名和献血员血袋号(后4位)，一卡可以合三袋血。?微柱凝胶卡的准备:合血前首先观察微柱凝胶卡的外观如有干胶、杂质、 气泡不可使用，然后用专用离心机离心3~4min。?红细胞悬液浓度不可太浓或太淡，应以0.5%~0.8%为宜。?冬天可将生理盐水37?孵育后配红细胞悬液，遇疑难
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页 1 目的 指导工作人员进行ABO血型实验。 2 适用范围 血型检验岗位工作人员 3 职责 负责送检标本ABO血型的检测工作。 4 【原理】 ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。 【标本】 1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。 【器材】 载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。 【试剂】 1.1 抗-A、抗-B试剂 1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液 1.3 受检者血清 1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液 1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管 【操作步骤】 2.1 试管法 2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A 和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。 2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。 2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。 2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
微生物检测手段及注意事项
微生物检测手段及注意事项 微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文对生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而
测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 1. 微生物计量法 1.1 体积测量法 又称测菌丝浓度法，通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10 mL）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5 min）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10~20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1~5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40 ℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（Activity Dry Yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
血型检测方法 一、血凝试验 指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应。根据操作方法的不同,主要可以分为以下3 种方法: ①玻片法:根据标准抗体血清与待测红细胞(或标准红细胞与待测血清) 在干燥玻片上是否发生凝集反应来确定待测红细胞(待测血清) 血型。它仍然是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法,具有操作简便,节省材料的优点。但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。 ②试管法:是交叉配血试验中最基础的实验方法之一,其与玻片法原理相同,只是借助试管更大的反应空间,并对待测红细胞予以一定浓度的稀释(通常是用生理盐水稀释红细胞至2 %～5 %) 或加入更多的待测血清,通过低速离心后根据有无肉眼可见的凝集反应来判定结果。由于待测红细胞经过稀释,在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度,从而提高了试验的敏感性。相比玻片法具有更加准确可靠的优点。 ③全自动微板法:检测技术产生于全自动血液样品系统以及用于凝聚实验的扫描酶标仪问世之后。通过标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止以及反应前后吸光度值增加数值的计算,从而达到对血型进行定型与反定型的目的。应用ABO 血型自动化检测方法进行正反定型试验,一次判读正确率在99.8%以上,且能提高检测灵敏度,使弱凝集样本更易显现。全自动微板法检测ABO血型改变了传统的手工操作,肉眼判读结果的检测方法,具有快速、准确、自动化程度高等优点,适合批量操作。并且血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点, 目前在各大采供血机构已得到广泛应用。 二、微柱凝胶试验 采用凝胶技术进行抗球蛋白试验可提高试验的灵敏度及特异性。目前微柱凝胶试验(MGT) 在国外输血领域已逐渐作为常规应用于ABO及Rh血型定型,未知血型抗体筛查以及直接抗球蛋白试验。在微柱凝胶介质中,红细胞与相应的抗体结合,经过低速离心,凝集的红细胞悬浮于凝胶中,而未与相应抗体结合的红细胞沉到管底。凝胶试验分为中性胶,特异性胶和抗球蛋白胶,分别用于血型血清学不同的试验:在中性胶试验中,凝胶不含抗体,可用于细胞筛选,抗体检测和ABO血型反定型;在特异性胶试验中,凝胶含有血型抗体,可用于血型抗原检测;在抗球蛋白胶实验中,凝胶中含球蛋白抗体,可用于血型不完全抗体检测。 MGT与经典盐水法相比,操作简单,省略了洗涤细胞及结果确认等过程,结果明确可靠、易于判读,反应灵敏,工作程序和结果判定易于标准化、自动化、重复性好,对需大量或反复输血的患者配血既安全又快速。所需样本量少,对样本不易抽取的患者(如新生儿、大面积烧伤患者等) 可节约样本。另外,对于不规则红细胞血型抗体的检测,MGT 法要优于经典的试管法。目前,MGT 已经通过全新的液
5 血型检测 5.1 红细胞血型检测 5.1.1红细胞血型血清学检测技术规范 5.1.1.1对标本的一般要求 5.1.1.1.1实验室所检测标本须有清晰的惟一性标识。 5.1.1.1.2标本须和血液、血液成分制品来自于同一献血者。 5.1.1.1.3所检测的标本可为抗凝的或不抗凝的标本。抗凝剂推荐使用乙二胺四乙酸（EDTA）。 5.1.1.1.4须遵守试剂/仪器使用说明书中所限定的标本制备和保存步骤；当说明书内容不能涵盖相关要求时，可用经确认的标本制备和保存步骤。 5.1.1.1.5肉眼判定标本是否存在影响检测结果的因素,如溶血、脂血等。 5.1.1.2仪器设备的要求 5.1.1.2.1仪器设备在安装后，需校准方可使用，校准周期至少一年一次，仪器设备需有维护程序。所有的校准、维护须有记录。 5.1.1.2.2仪器设备所使用的软件和实验室的信息系统须经过确认。 5.1.1.3记录的要求 5.1.1.3.1所有检测标本具有可追溯性。 5.1.1.3.2核对当前ABO/RhD定型结果与既往的血型记录是否一致，结果不一致必须查找原因。 5.1.1.4 ABO/RhD定型 5.1.1.4.1原理 5.1.1.4.1.1根据红细胞上和血清（或血浆）中有或无A抗原或/和B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型是用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B 抗原；反定型是用已知A型细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。 5.1.1.4.1.2利用红细胞凝集试验，通过抗-D定型试剂，测定红细胞上是否存在RhD抗原。红细胞上有RhD抗原称RhD阳性，无RhD抗原为RhD阴性。 5.1.1.4.2试剂与材料 5.1.1.4.2.1所有用于检测与确认的ABO血型定型试剂都必须符合国家相关规定。
微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程 1、目的 为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。 2、适用范围 本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。 3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。 4、试验方法及原理 4.1试验方法：凝胶测试法 4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。 5、样本采集和处理 受血者血样为EDTA-K2抗凝血。抽取受血者静脉血3~4ml于专用管（紫色头管）内，分离出血浆。红细胞配成0.8%的悬液，供血者血样以同样方法分离血浆，并配制0.8%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。
6、试剂： 6.1 0.9%的生理盐水； 6.2戴安娜合血卡； 7、仪器： 7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机； 7.2DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器； 7.3DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ 8、操作程序： 8.1工作准备： 8.1.1生理盐水室温平衡。准备样本。标记合血卡。 8.1.2 0.8%-1%样本红细胞制备：加25μl样本压积红细胞 悬浮液于2ml戴安娜2号稀释液中。 8.1.3于1号管中（主侧）加入50μl献血者红细胞（0.8%）。25μl受血者血浆或血清。 8.1.4 2号管中（次侧）加入50μl受血者红细胞（0.8%）。25μl献血者血浆或血清。 8.1.5 37℃孵育15分钟。 8.1.6 离心10分钟。判断结果，并作好记录。 9、结果判断：1+至4+为抗人球配血不相容；—（0）为配 血相容，可以输注。 10、医学解释： ABO交叉配血试验是检查供、受血者血液中是否含有不相合