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抗体纯化大全教学资料

抗体纯化大全

抗体的纯化

第一节硫酸铵沉淀法

基本原理

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

试剂及仪器

·组织培养上清液、血清样品或腹水等

·硫酸铵（NH4）SO4

·饱和硫酸铵溶液（SAS）

·蒸馏水

· PBS(含0.2g/L叠氮钠) (见附录一)

·透析袋

·超速离心机

· pH计

·磁力搅拌器

实验步骤

以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。

一、配制饱和硫酸铵溶液（SAS）

将767g（NH4）2SO4 边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25°C）；

其它不同饱和度硫酸铵溶液的配制见表1；

二、沉淀

1、样品（如腹水）20 000′g 离心30 min，除去细胞碎片；

2、保留上清液并测量体积；

3、边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（v/v）；

4、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。

三、透析

1、蛋白质溶液10 000′g 离心30 min（4°C）。弃上清保留沉淀；

2、将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L 叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；

3、透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。

应用提示

一、先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。

1、边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v)；

2、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；

3、3000′g 离心30 min（4°C），保留上清液；

4、上清液再加SAS到0.5:1 (v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；

5、杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效的；

二、为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；

三、硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

参考文献

1、 Burd, R.S., Raymond, C.S., Ratz, C. A and Dunn, D.L (1993) A rapid procedure for purifying IgM monoclonal antibodies from murine ascites using a DEAE – disk. Hybridoma 12, 135.

2、 T.G.库珀着，徐晓利主译《生物化学工具》人民卫生出版社出版（1980），353。（夏泉）

表1.室温下硫酸氨饱和度由起始浓度（S1）提高到终浓度（S2）时需加硫酸氨的量

（g/L）

10%

20%

25%

30%

33%

35%

40%

45%

50%

55%

60%

65%

70%

75%

80%

90%

56 114 144 176 196 209 243 277 313 351 390 430 472 516 561 662 767

57 86 118 137 150 183 216 251 288 326 365 406 449 494 592 649

29 59 78 91 123 155 189 225 262 300 340 382 424 520 619

30 49 61 93 125 158 193 230 267 307 348 390 485 583

19 30 62 94 127 162 198 235 273 314 356 449 546

12 43 74 107 142 177 214 252 292 333 426 522

31 63 94 129 164 200 238 278 319 411 506

31 63 97 132 168 205 245 285 375 469

32 65 99 134 171 210 250 339 431

33 66 101 137 176 214 302 392

33 67 103 141 179 264 353

34 69 105 143 227 314

34 70 107 190 275

35 72 153 237

36 115 198

77 157

第二节 DEAE离子交换层析法

基本原理

离子交换层析是蛋白质纯化的常规方法，与硫酸氨沈淀法联合使用可以非常有效地纯化抗体。

DEAE是一种阴离子交换剂，当蛋白质溶液通过DEAE柱时，带负电荷的蛋白质可以被DEAE吸

附，带正电荷的蛋白质则不被吸附而随溶液流出。纯化抗体时可选择pH值大于待纯化抗体等电

点的缓冲液，此时抗体带负电荷可以通过电价键吸附于DEAE离子交换剂上，然后用增加盐浓度

的方法将抗体洗脱。可以用连续梯度法洗脱，也可以用不连续梯度（分段洗脱）法洗脱。本文以

腹水中mAb的纯化为例来介绍此方法。

试剂及仪器

·抗体样品（小鼠腹水或经硫酸氨沉淀的抗体）

· DEAE离子交换剂（阴离子交换剂）

·层析柱（2.5cm? ′ 20 cm）

·缓冲液 A：25mmol/L Tris-HCl pH 8.8 +35 mmol /L NaCl

·缓冲液 B：25mmol/L Tris-HCl pH 8.8 +70mmol /L NaCl

·缓冲液 C：25mmol/L Tris-HCl pH 8.8 +500 mmol /L NaCl

·缓冲液 D：25mmol/L Tris-HCl pH 8.8

· PBS (见附录一)

·透析袋 (MW CO 10 000)

·磁力搅拌器

·蠕动泵和部分收集器

·紫外检测仪

·梯度发生器

·电导仪

· pH计

·离心机

实验步骤

整个层析过程最好在4°C 进行,可在冷室操作；

1、抗体样品对缓冲液B 透析过夜（4°C）；

2、按说明处理DEAE离子交换剂。然后用缓冲液A 平衡。用20倍体积缓冲液A洗交换剂，可用过滤或离心法反复洗到流出液的电导率等于缓冲液A；

3、将处理好的DEAE离子交换剂悬浮在缓冲液A 中，装入层析柱。

4、用等体积的缓冲液D 稀释透析过的抗体样品，使之与缓冲液A 的离子强度一致；

5、稀释后的样品10 000′g 离心10 min（4°C），除去沉淀变性的蛋白质；

6、层析柱与蠕动泵、部分收集器及紫外检测仪连接；

7、抗体样品以1ml/min 流速上柱，然后用缓冲液A 洗柱1ml/min，将未吸附的蛋白质洗出。直到流出液在280 nm 的吸光度小于0.05；

8、吸附的蛋白质，用连续增加NaCl的浓度来洗脱。用线性梯度缓冲液（35-500 mmol/L NaCl）或分段缓冲液（35、70、140、280、500 mmol/L NaCl）洗脱。流速1ml/min ，分部收集洗脱液 2ml / 管（图2-4-1）；

9、椐紫外检测结果，将抗体峰部分合并。装入透析袋对PBS(含0.2g/L叠氮钠)4°C 透析或冷冻（视抗体的稳定性而定）；

10、 DEAE离子交换剂可按照商品说明再生使用。

图2-4-1 DEAE离子交换柱层析纯化小鼠IgG

流速：1ml/min 样品：0.5ml腹水

检测方法

1、大部分小鼠的单克隆抗体IgG可在50—200mmol/L NaCl浓度之间洗脱。

2、可用SDS-PAGE 或定量免疫学方法（RIA、ELISA）检测各部分洗脱液的抗体存在及效价。

实验要点及说明

1、要得到满意的分离结果，每ml DEAE 离子交换剂所加样品中蛋白质总量最好不超过

10mg。

2、用经硫酸铵沉淀初步纯化的抗体代替小鼠腹水作为样品，可得到更好的纯化结果。

3、如抗体与DEAE离子交换剂不能有效的结合，可将起始缓冲液的pH提高0.1个单位,直到可以有效结合为止。

4、如果没有合用的蠕动泵和部分收集器，可用手工上样和收集。洗脱液每管收集0.5-2ml ,然后用分光光度计测定各管280nm波长的吸光度值。

5、该方法可按比例扩大。用适合于高流速的大柱和相应的交换剂来纯化大量的蛋白质样品。

参考文献

1. Corthier, G., Boschetti, E. and Charley-Poulain, J. (1984) Improved method for IgG purification from various animal species by ion exchange chromatography J. Immunol. Meth . 66, 75-79.

2、张保真编译西安医科大学出版（1986）《免疫组织化学理论与技术》 69-71。

（夏泉）

第三节羟磷灰石层析纯化抗体

基本原理

羟磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2]吸附蛋白质的机理，通常认为与其晶体表面的Ca2+ 和

PO43- 两种基团相关。因为带电基团紧密排列于晶体表面，可能通过偶极子之间的相互作

用来吸附蛋白质。样品被吸附剂吸附后，用适当的洗脱液（较高浓度的盐溶液）冲洗，可使之解析。解析下来的物质在流经层析柱的过程中向前移动，遇到前面新的吸附剂可再被吸附。在反复的吸附—解析—再吸附—再解析的过程中，由于待分离物质与吸附剂之间的吸附能力不同，它们沿洗脱液流动方向移动的速度也不相同，所以在洗脱过程中各组分便会由于移动速度不同而被分离。抗体与其它蛋白质一样可以用羟磷灰石吸附柱层析进行纯化。

试剂及仪器

·抗体样品（腹水或培养上清液）

·羟磷灰石（Hydroxylapatite 有售）

·层析柱（2.5cm? ′ 20 cm）

·吸附缓冲液：20mmol/L 磷酸钾缓冲液pH6.8 含30mmol /L NaCl

·洗脱缓冲液：500mmol/L 磷酸钾缓冲液pH6.8 含30mmol /L NaCl

· PBS (见附录1)

·透析袋 (MW CO 10 000)

·磁力搅拌器

·蠕动泵和部分收集器

·紫外检测仪

·梯度发生器

·离心机

实验步骤

1、羟磷灰石柱的准备：将羟磷灰石悬浮于吸附缓冲液中，使之充分水合后装柱。用10′ 柱体积的吸附缓冲液洗柱；

2、样品的预处理：含抗体的样品先在4°C对吸附缓冲液透析过夜或用该缓冲液10倍稀释，再将透析或稀释后的样品4 000′g 离心15min（4°C）；

3、仪器安装：将蠕动泵、紫外检测仪和部分收集器与层析柱连接；

4、上样：将样品上清液以1ml/min的流速加到柱上，然后用20′ 柱体积的吸附缓冲液洗柱；

5、抗体的洗脱：提高磷酸盐的浓度可以将抗体洗脱。常用的方法有两种：一种是用梯度发生器进行线性浓度梯度洗脱，浓度为20—500 mmol/L的磷酸钾缓冲液；另一种方法是用不连续浓度梯度洗脱，例如可以用35、70、140、280和500 mmol/L的磷酸钾缓冲液依次分段洗脱。收集洗脱液 2ml / 管（图2-4-2）；

6、合并洗脱液中含抗体的部分（见下面检测）对PBS透析。根据抗体的稳定性4°C或冷冻防腐（0.2g/L 叠氮钠）保存；

图2-4-2 羟磷灰石柱层析纯化单克隆抗体IgG

流速：1ml/min 样品：腹水1ml

检测方法

1、单克隆抗体IgG通常在200—400mmol/L磷酸钾浓度之间洗脱。

2、可用SDS-PAGE 或定量免疫学方法（RIA、ELISA），检测各部分洗脱液的抗体。

应用提示

1、每100ml 羟磷灰石可吸附大约500 ml细胞培养上清液或3 ml 的腹水或血清中所含的抗体。

2、使用羟磷灰石柱较适合的柱长/直径可以在5/1—15/1之间（典型尺寸：2.5cm ?′20 cm 柱长）。

3、在吸附过程中应避免有对钙的亲和力大于磷酸盐的物质（如EDTA和柠檬酸等）的存在，以免减少羟磷灰石的吸附容量。

4、用过的羟磷灰石柱可以用吸附缓冲液平衡再生后重复使用。或加入甲苯（0.03%， v/v)或叠氮钠（0.2g/L）储存。

5、如果没有合适的蠕动泵和部分收集器，可手工加样和收集洗脱液2ml / 管，并用分光光度计

测定各管在 280nm 波长的吸光度。

6、与本方法类似的吸附和洗脱过程也可用来纯化其它蛋白质。

参考文献

Bukovsky, J. and Kennett, R.H. (1987) Simple and rapid purification of monoclonal antibodies from cell culture supernatant and ascites fluids by hydroxylapatite chromatography on analytical and preparative scales. Hybridoma 6 ,219-228.

（夏泉）

第四节抗体的辛酸纯化法

基本原理

在人、羊或兔血清或含有IgG的培养上清中及小鼠的腹水中加入辛酸, 可与其中大部分蛋白质形成沉淀，而对IgG的性质没有影响，因此是纯化IgG的有效途径。沉淀后经离心即可获得IgG。辛酸沉淀法与硫酸铵沉淀法比较其主要优点为可减少聚合物的形成，但与其相同，所得的抗体纯度不够，还需用其它方法以进一步提高其纯度。

试剂及仪器

s 腹水或细胞培养上清

s 0.06 mol/L醋酸钠缓冲液（pH4.0）（见附录1）

s 1N HCl

s 辛酸（正-八碳酸，n-octanoic acid）

s 1N NaOH

s PBS（见附录）

s 透析袋（MWCO 10,000）

s 电磁搅拌器

s 离心机

操作步骤

1．用烧杯加20ml 0.06 mol/L醋酸钠缓冲液（pH4.0）到10ml腹水或细胞培养上清中；2．用1N HCl调节pH到4.8，后滴加辛酸同时用力搅拌，具体用量参见表1；

3．在室温下继续搅拌30分；

4． 5，000 ×g 室温离心30分，保留上清；

5．用1N NaOH 调节pH到5.7；

6．含有IgG的上清对PBS透析，然后分装、置-20℃保存。

表1 沉淀不同来源IgG的辛酸参考用量

IgG来源辛酸用量（每10ml腹水或上清）

小鼠400μl

人700μl

羊700μl

兔750μl

质量检察

上清中IgG的纯度可用SDS-PAGE分析及合适的酶标免疫测试法测定其免疫活性来确定。上清中可能存在少量杂质，可通过DEAE离子交换层析除去。

参考文献

1. Russo,C., Callegaro,L.,Lanza,E., and Ferrone,S. (1983) Purification of IgG monoclonal antibody by caprylic acid precipitation. J. Immunol. Meth. 65,269-271

2. Steianbuch,M. and Audran,R. (1969) The isolation of IgG from mammalian sera with the aid of caprylic acid. Arch.Biochem.Biophys. 134, 279-284

（朱正美）

第五节 Sephadex凝胶过滤纯化抗体

基本原理

凝胶过滤又称分子筛层析。是一种借助分子筛效应将分子大小不同的混合物进行分离的方法。交联葡聚糖凝胶Sephadex是常用的层析介质。它是一种含有许多网眼的球形小颗粒，网眼大小分布均一。当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，其中较大的分子不能进入凝胶网眼，将毫无阻力或阻力很小地随洗脱液流出，而小分子物则能扩散进入网眼，被阻滞在层析柱上，分子量越小，扩散出来所耗时间就越长。因此分子大小不同的MoAb可

以借助分子筛效应进行分离提纯。本文以IgM的纯化为例介绍此方法。IgM因分子特别大（900 kd）而不能进入凝胶颗粒的网孔，可首先被洗脱达到初步纯化的目的。

试剂和器材

· Sephadex G 100 或G 200

·粗制IgM-MoAb培养物或抗血清，腹水等

·洗脱缓冲液：0.01mol/L Tris-HCl缓冲液pH 8.0 含0 .5mol /L NaCl

·层析柱（1.0 cm? ′ 30 cm或1.5cm? ′ 40 cm）

·透析袋 (MW CO 10 000)

·磁力搅拌器

·部分收集器

·紫外检测仪

·离心机

步骤

1、样品处理：将腹水、抗血清或培养上清液离心4000′g 20分钟，以除去细胞碎片。较稠的腹水和血清需适当稀释；

2、装柱：根据样品量选择合适的层析柱，将0.01mol/L pH 8.0 含0 .5mol /L NaCl的Tris-HCl缓冲液加到柱长的1/4处，然后将漂洗溶涨的Sephadex G 100 或G 200 倾入柱中，自然沉降30分钟，再用同样的缓冲液平衡柱1小时，流速0.5ml/min；

3、仪器连接：将紫外检测仪和部分收集器与层析柱连接；

4、上样和洗脱：待柱上平衡缓冲溶液接近凝胶上表面时，缓慢加入样品溶液

0.5ml/min。当样品液面接近凝胶上表面时，加少量缓冲液清洗柱壁，然后接上缓冲液洗脱并收集1-2 ml/管。280nm 检测的第一蛋白峰即为IgM-MoAb。

5、浓缩与保存：将280nm检测的第一蛋白峰合并，移入透析袋在磁力搅拌器上4°C对PBS流动透析过夜。透析后的溶液可经聚乙二醇或五氧化二磷真空干燥浓缩后，分装封管，-20°C保存备用。

检测

建筑工程竣工验收全套技术资料

编号建筑工程竣工验收技术资料工程名称： XXXX 建设单位： XXXX 施工单位： XXXX 监理单位： XXXX 设计单位： XXXX 质量监督部门： XXXX

施工现场质量管理检查记录开工日期：工程名称开工报告 (施工许可证) 有开工报告建设单位项目负责人设计单位项目负责人监理单位总监理工程师施工单位项目经理项目技术负责人序号项目内容 1现场质量管理制度现场质量管理制度 2质量责任制岗位责任制 3主要专业工种操作上岗证书电工、电焊工等证件 4分包方资质与对分包单位的管理制度有分包方资质与管理制度 5施工图审查情况审查报告及审查批准2003-145-1、2003-145-2 6地质勘察情况地质报告书 7施工组织设计、施工方案及审批施工组织设计、编制、审核、批准齐全 8施工技术标准有混凝土、钢筋、模板等多种 9搅拌站及计量检验制度有原材料及施工检验制度、试验计划 10搅拌站及计量设置计量设施精确 11现场材料、设备存放与管理钢材、砂石、水泥等材料有管理办法 12 检查结论：总监理工程师（建设单位项目负责人）年月日

施工组织设计（方案）报审表工程名称：郑州市四十七中办公楼、连廊、报告厅编号：致：河南省海华监理公司（监理单位）我方已根据施工合同的有着规定完成了厅工程施工组织设计（方案）的编制，并经我单位上级技术负责人审查批准，请予以审查。附：施工组织设计（方案）承包单位（章）：项目经理：日期：专业监理工程师审查意见：专业监理工程师：日期：总监理工程师审核意见：项目监理机构：总监理工程师：日期：

抗体纯化的方法有哪些

抗体纯化的方法有哪些？抗体制备出来之后，需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗，既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料是腹水和细胞培养上清，而通常经过免疫制备的硫酸铵沉淀法：基本原理：高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜，降低球蛋白的溶解性，是分离免疫球蛋白的常用方法，而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别，一般用来分离抗体的硫酸铵饱和度在33~50%。适用于：鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA 基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.加入饱和硫酸铵至终浓度45%，静置沉淀蛋白； 3.沉淀蛋白用最小体积PBS或硼酸盐缓冲液溶解，用PBS或硼酸盐缓冲液透析除盐； 4.过聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱，PBS或硼酸盐（含0.02%叠氮钠）缓冲液洗脱； 5.电泳检测分子量大小，分光光度法测定抗体浓度； 6.抗体保存浓度在0.1-30 mg/mL适宜，-20℃保存不超过一个月，避免反复冻融。亲和层析法基本原理：基因工程改造的protein A和protein G能特异性结合哺乳动物IgG的Fc区段，将protein A和protein G结合到柱料上，通过亲和层析的方式，可将IgG及其亚类与片段纯化出来。成员介绍：protein A分离自Staphylococcus aureus的细胞壁，分子量42 kDa，由spa 基因编码，具有五个同型的免疫球蛋白结合结构域，每个结构域由三个α螺旋构成。 protein A的B结构域

protein A的各个结构域 protein A可结合多数免疫球蛋白的Fc段（尤其是人的IgG1、IgG2、IgG4，豚鼠，猕猴，鼠类IgG2a、兔）以及人VH3家族的Fab段。基因工程改造的protein A通常使用大肠杆菌作为表达宿主，表达产物仍含有五个Fc结合结构域。对其结构上的改造主要是为了增加与多孔性材料的偶联性能，也有的改造protein A含有四个或六个同型Fc结合结构域，另外结构域数目较少的protein A能得到更好的抗体纯化效果。 protein G分离自G Streptococcus的细胞壁，分子量65 kDa，由spg基因编码，可结合抗体的Fc段、Fab段以及血清中的白蛋白。基因工程改造的protein G去掉了与白蛋白的结合位点仅仅保留Fc结合结构域，其结合力较protein A更强。 protein G的B结构域 protein G的各个结构域还有一种protein A/G蛋白，是基因工程改造产物，是将protein A的4个Fc结合结构域与protein G的2个Fc结合结构域融合表达得到的。protein A/G结合了二者的特性，能结合人和鼠的IgG所有亚型，不结合鼠的IgA、IgM。 ①proteinA亲和层析适用于：人（IgG3除外）、兔、豚鼠、猪的抗体；基本操作： 1.过滤、离心腹水或者培养上清得上清； 2.调节pH到8.0：腹水以10倍体积pH8.0 PBS稀释、培养上清用pH8.0 PBS透析或强氧化钠调节； 3.过proteinA琼脂糖凝胶柱，pH8.0 PBS洗杂； 4.柠檬酸缓冲液洗脱抗体（小鼠IgG1用pH6.5，IgG2a用pH4.5，IgG2b和IgG3用pH3.0），并注意收集管内需加入Tris缓冲液中和滴下的抗体溶液； 5.用PBS透析；

抗体ProteinA纯化方法

抗体ProteinA纯化一．P roteinA柱子的制备 1.配制溶液；结合／洗涤缓冲液：NaCl，0.5M ；Na2HPO4，20mM ；PH8.0。配制500ml的方法：称取NaCl 4.383g，Na2HPO43.5814g溶解于450ml的双蒸水中。调节PH为8.0,补加双蒸水至总体积500ml。 2. 制备空柱子（1）先打开用过的PD-10上盖，拿掉上面的盖膜。盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用PBS清洗3次。（2）用胶带固定好PD-10空柱子，要求垂直放置。（3）在PD-10空柱子里加入2ml的Binding Wash buffer.结合缓冲液。（4）ProteinA填料混匀，（10ml包装一小瓶）。（5）加入5ml的ProteinA到柱子中。（6）（7）（8）二．纯化步骤 1.样品准备；将兔血清与结合缓冲液1：1混合，过滤（防止堵塞柱子）。 2.平衡柱子：用5-10倍体积的结合缓冲液过Protein A柱。 3.上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。 4.洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。 5.收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约3-4ml/管），直至漏出液中不含蛋白。测定各收集管中的蛋白含量，合并蛋白管。（注意：收集管中需事先加入约150ul的1M PH9.0 Tris-HCl缓冲液，防止抗体在过酸的环境下失活） 6.柱子再生：用5-10倍体积的再生液再生柱子。 7.PBS透析收集的抗体。三．试剂的制备 1. 结合缓冲液1000ml 500ml 甘氨酸112.6g 56.3g 氯化钠175.2g 87.6g 氢氧化钠调PH至9.0 2. 洗脱缓冲液500ml

抗体纯化

一、抗体纯化部分 1、腹水/血清的亚型测定完成后，IgG亚型的腹水/血清使用Protein G 抗体纯化柱纯化；IgM 亚型的腹水/血清则使用饱和硫酸铵沉淀法沉淀。 1.1 Protein G 抗体纯化步骤：（1）新柱子先用DDW 5ml过柱；（2）10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱；（3）抗体过柱，过程中要求缓慢过柱，以求抗体蛋白更好的结合在结合位点上；（4）继续10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱；（5）5倍柱体积甘氨酸-盐酸缓冲液（pH 2.7）洗脱结合位点上的抗体，并加入Tris-HCI(pH 9.0)中和甘氨酸，使pH保持为适合抗体保存的中性；（6）10倍柱体积的Binding Buffer (pH 7.0) 平衡纯化小柱；（7）5倍柱体积20%乙醇溶液过柱，于4℃条件下保存纯化小柱；（8）将洗脱的抗体用聚乙二醇浓缩并透析，以彻底去除不相干离子。其中所用试剂配方： DDW：超纯水 Binding Buffer（100ml）：A液，0.2M磷酸氢二钠61ml B液，0.2M磷酸二氢钠39ml 磷酸氢二钠4.37g 磷酸二氢钠1.22g 甘氨酸-盐酸缓冲液：0.1M甘氨酸溶液加浓盐酸调pH 2.7 Tris-HCL缓冲液：1M Tris溶液加浓盐酸调pH 9.0 1.2 饱和硫酸铵沉淀法步骤：（1）配制饱和硫酸铵溶液，再用氨水调节pH至8.5 （2）沉淀：a、腹水/血清离心去除细胞碎片，保留上清液并测定体积； b、边搅拌边逐滴滴入等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀； c、上述蛋白质溶液经过离心弃上清取沉淀，并用PBS溶液（pH 7.0）溶解； d、继续向上一步蛋白溶液中滴入1/2体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀； e、继续离心沉淀弃上清去沉淀，用PBS溶液（pH 7.0）溶解；（3）透析：每隔3-6小时换一次透析液，以彻底去除硫酸铵。其中所用试剂配方： PBS缓冲液（1L pH 7.0）：氯化钾0.2g 磷酸二氢钾0.2g 磷酸氢二钠3.35g 氯化钠8g

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建筑消防工程竣工验收资料大全

目录 1安全消防施工管理资料表格目录 2消防工程竣工验收资料样表大全（含施工） 3消防工程竣工验收资料表格大全 4消防工程竣工验收备案流程和消防验收内容大全

安全消防施工管理资料表格目录A施工准备阶段 A-1安全技术交底 A-1-1新工人安全生产须知交底 A-1-2安全生产六大纪律交底 A-1-3气割、电焊“十不烧”规定交底 A-1-4施工现场防火要求技术交底 A-1-5 管道施工安全技术交底 A-1-6冲击电钻、电锤安全操作规程技术交底 A-1-7套丝切管机安全操作规程技术交底 A-1-8交流电焊机安全操作规程技术交底 A-2分包单位资质报审表 A-3开工复工报审表 A-3-1开工报告 A-4施工组织设计方案报审表 A-4-1施工组织设计 A-4-2施工组织设计审批表 A-5施工界面说明 A-6开工前材料计划表(内部) A-7工程款支付申请表 B施工阶段 B-1安全控制 B-1-1外来劳务人员管理登记表 B-1-2安全生产检查记录表 B-1-3安全生产检查整改通知

B-2-1工程材料报审表 B-2-2室内给水管道及配件安装工程检验批质量验收记录 B-2-3室内消火栓系统安装工程检验批质量验收记录 B-2-4喷洒设备及附件安装工程质量检查评定表 B-2-5消防喷洒管道工程质量检查评定表 B-2-6室外给水管道安装工程检验批质量验收记录 B-2-7消防水泵接合器及消火栓安装工程检验批质量验收记录表B-2-8给水设备安装工程检验批质量验收记录表 B-2-9风管系统安装检验批质量验收记录表 B-2-10隐蔽工程验收记录表 B-2-11喷淋冲洗 B-2-12消火栓冲洗 B-2-13喷淋试压 B-2-14消火栓试压 B-2-15火灾自动报警设备安装质量评定表 B-2-16火灾自动报警配管、穿线工程质量评定表 B-2-17绝缘电阻测试记录表 B-2-18报警编码地址表 B-2-18-1报警主机标签 B-2-19报验申请表 B-3成本控制成本核算(内部保密) B-3-1工程变更签证单 B-3-2批价请示单 B-3-3月工程结算报量审核表

建筑工程验收学习资料全套.docx

. 建筑工程资料第一章工程管理资料工程概况表工程开工报告工程竣工报告工程停工报告工程复工报告施工进度计划分析项目大事记施工日志不合格项处置记录建设工程质量事故报告书第二章工程技术资料工程技术文件报审表技术交底记录图纸会审记录设计交底记录设计变更洽商记录第三章工程测量记录工程定位测量记录地基验槽记录楼层放线记录

单位工程垂直度观测记录第四章工程施工记录隐蔽工程记录表预检工程记录表施工通用记录表中间检查交接记录表地基处理记录地基钎探记录桩基施工记录混凝土施工记录混凝土养护测温记录砂浆配合比申请单混凝土配合比申请单混凝土开盘鉴定预应力张拉记录预应力筋张拉记录有粘接应力结构灌浆记录建筑烟 (风 )道检查记录自动扶梯自动人行道安装调试记录第五章工程试验记录施工试验记录 (通用 )混凝土试块强度统计评定记录

砂浆试块强度统计评定记录防水工程试验检查记录设备单机试运转记录调试报告电气接地电阻测试记录电气器具通电安全检查记录电气照明、动力试运行记录综合布线测试记录电气绝缘电阻测试记录光纤损耗测试记录视频系统末端测试记录管道灌水试验记录管道强度严密性试验记录管道通水记录管道吹（冲0 洗（）脱脂试验记录室内排水管道通球试验记录伸缩器安装记录表现场组装除尘器、空调机漏风检测记录风管漏风检测记录各房间室内风量测量记录管网风量平衡记录电梯主要功能检查记录表第六章施工验收记录

分项工程质量验收记录分部（子分部）工程质量验收记录单位（子单位）工程质量控制资料核查记录单位（子单位）工程安全和功能检验资料核查及主要功能抽查记录单位（子单位）工程观感质量检查记录施工现场质量管理检查记录工程检验质量检查记录表（通用）分部分项工程共划分为：一、地基与基础工程；二、主体结构；三、建筑装饰装修；四、建筑屋面；五、建筑给水、排水及采暖；六、建筑电气；七、智能建筑；八、通风与空调；九、电梯序分部子分部工程分项工程检验批号工程地基无支护土方土方开挖、土方回填 1与有支护土方排桩，降水、排水、地下联续墙、水泥土桩、沉井与沉基础箱，钢及混凝土支撑

安装工程竣工验收表格大全

竣工验收表格大全（共98种表格）目录 1.建筑给水排水及采暖工程概况表 (3) 2.建筑给水排水及采暖工程施工现场质量管理记录 (4) 3.建筑给水排水及采暖分部工程质量验收记录 (6) 4.建筑给水排水及采暖工程质量控制资料核查记录 (8) 5.建筑给排水及采暖工程安全和功能检验资料核查及主要功能抽查记录 (10) 6.建筑给排水及采暖观感质量检查记录 (12) 7.设备进场验收记录 (14) 8.材料（设备）合格证明文件汇总表 (16) 9.管道工程隐蔽验收记录 (18) 10.管道支、吊架安装记录 (20) 11.管道焊接检验记录 (22) 12.楼板（屋面）立管洞盛水试验记录 (24) 13.钢管伸缩器预拉伸安装记录 (26) 14.塑料排水管伸缩器安装预留伸缩量记录 (28) 15.设备基础交接验收记录 (30) 16.管道保温记录 (32) 17.设备单机试运转记录 (34) 18.锅炉烘炉记录 (36) 19.锅炉煮炉记录 (38) 20.阀门、散热器安装前水压试验记录 (40) 21.承压管道系统（设备）强度和严密性水压试验记录 (42) 22.给水、热水及采暖管道系统冲洗记录 (45) 23.卫生器具满水试验记录 (47) 24.地漏排水试验记录 (49) 25.室内排水管道通球试验记录 (51) 26.给水、排水系统及卫生器具交付使用前通水试验记录 (53) 27.敞开水箱满水试验记录 (55) 28.消火栓系统试射试验记录 (57) 29.采暖系统试运行和调试 (59) 30.安全阀及报警联动系统动作测试记录 (61) 31.室内给水系统子分部工程质量验收记录 (63) 32.给水管道及配件安装分项工程质量验收记录 (65) 33.给水管道及配件安装工程检验批质量验收记录 (67) 34.室内消火栓系统安装分项工程质量验收记录 (69) 35.室内消火栓系统安装检验批质量验收记录 (71) 36.给水设备安装分项工程质量验收记录 (73) 37.给水设备安装分项工程质量验收记录 (75) 38.室内排水系统安装子分部工程质量验收记录 (77) 39.室内排水管道及配件安装分项工程质量验收记录 (79) 40.室内内排水管道及配件安装工程检验批质量验收记录 (81) 41.室内雨水管道及配件安装分项工程质量验收表 (84) 42.室内雨水管道及配件安装 (86) 43.室内热水供应系统安装子分部工程质量验收记录 (89) 44.管道及配件安装分项工程质量验收记录 (91) 45.室内热水管道及配件安装分项工程检验批质量验收记录 (93) 46.室内热水系统辅助设计安装分项工程质量验收表 (95) 47.室内热水辅助设备安装分项工程检验批质量验收记录 (97)

项目工程竣工验收全套材料资料

工程竣工验收是指建设工程依照国家有关法律、法规及工程建设规范、标准的规定完成工程设计文件要求和合同约定的各项内容，建设单位已取得政府有关主管部门（或其委托机构）出具的工程施工质量、消防、规划、环保、城建等验收文件或准许使用文件后，组织工程竣工验收并编制完成《建设工程竣工验收报告》。验收备案表（封面）由建设单位在提交备案文件资料前按实填写。备案目录（表一）由备案部门填写。工程概况（表二） 1.其中备案日期：由备案部门填写。 2.竣工验收日期：与《竣工验收证明书》竣工验收日期一致。建设工程规划许可证（复印件）（原件提交验证）建设工程施工许可证（复印件）（原件提交验证）建筑工程施工图设计审查报告单位工程验收通知书（表三）由建设单位加盖公章，市建设工程质量监督站项目主监员签名，并要求详细填写参建各方验收人员名单，其中包括建设（监理）单位、施工单位、勘察设计单位人员。单位工程竣工验收证明书（表四） 1.由建设单位交施工单位填写，并经各负责主体（建设、监理、勘测、设计、施工单位）签字加盖法人单位公章后，送质监站审核通过后，提交一份至备案部门。 2.验收意见一栏，须说明内容包括：该工程是否已按设计和合同要求施工完毕，各系统的使用功能是否已运行正常，并符合有关规定的要求；施工过程中出现的质量问题是否均已处理完毕，现场是否发现结构和使用功能方面的隐患，参验人员是否一致同意验收，工程技术档案、资料是否齐全等情况进行简明扼要的阐述。整改通知书（表五）上面要求记录质量监督站责令整改问题的书面整改记录，系指工程是否存有不涉及结构安全和主要使用功能的其他一般质量问题，是否已整改完毕。整改完成报告书（表六）要求详细记录整改完成情况，并由建设方签字加盖公章、主监员确认整改完成情况，若在工程验收过程中，未有整改内容，也需要业主（监理）单位、签字盖章确认。工程质量监理评估报告（表七） 1.监理单位在工程竣工预验收后，施工单位整改完毕，由总监理工程师填写。 2.质量评估意见一栏： (a).项目监理部是否已严格按照《建设工程监理规范》、监理合同、监理规划及监理实施细则对该工程进行了全面监理。 (b).地基及基础工程施工质量是否符合设计及规范要求； (c).主体工程（含网架、幕墙、干挂石材、地下结构、钢结构等）施工质量是否符合设计及相关规范要求； (d).水、电、暖通等安装工程施工质量是否符合设计及规范要求是否满足使用功能要求。 3.明确评定工程质量等级。质量站出具的工程竣工验收内部函件

抗体纯化大全资料

抗体的纯化第一节硫酸铵沉淀法基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。试剂及仪器 ·组织培养上清液、血清样品或腹水等 ·硫酸铵（NH4）SO4 ·饱和硫酸铵溶液（SAS） ·蒸馏水 · PBS(含0.2g/L叠氮钠) (见附录一) ·透析袋 ·超速离心机 · pH计 ·磁力搅拌器实验步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。一、配制饱和硫酸铵溶液（SAS）将767g（NH4）2SO4 边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25°C）；其它不同饱和度硫酸铵溶液的配制见表1；

二、沉淀 1、样品（如腹水）20 000′g 离心30 min，除去细胞碎片； 2、保留上清液并测量体积； 3、边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（v/v）； 4、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。三、透析 1、蛋白质溶液10 000′g 离心30 min（4°C）。弃上清保留沉淀； 2、将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L 叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3、透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。应用提示一、先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1、边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v)； 2、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）； 3、3000′g 离心30 min（4°C），保留上清液； 4、上清液再加SAS到0.5:1 (v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨； 5、杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效的；二、为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；三、硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。参考文献 1、Burd, R.S., Raymond, C.S., Ratz, C. A and Dunn, D.L (1993) A rapid procedure for purifying IgM monoclonal antibodies from murine ascites using a DEAE – disk. Hybridoma

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工程竣工验收全套资料

工程竣工验收工程竣工验收是指建设工程依照国家有关法律、法规及工程建设规、标准的规定完成工程设计文件要求和合同约定的各项容，建设单位已取得政府有关主管部门（或其委托机构）出具的工程施工质量、消防、规划、环保、城建等验收文件或准许使用文件后，组织工程竣工验收并编制完成《建设工程竣工验收报告》。验收备案表（封面）由建设单位在提交备案文件资料前按实填写。备案目录（表一）由备案部门填写。工程概况（表二） 1.其中备案日期：由备案部门填写。 2.竣工验收日期：与《竣工验收证明书》竣工验收日期一致。建设工程规划许可证（复印件）（原件提交验证）建设工程施工许可证（复印件）（原件提交验证）建筑工程施工图设计审查报告单位工程验收通知书（表三）由建设单位加盖公章，市建设工程质量监督站项目主监员签名，并要求详细填写参建各方验收人员，其中包括建设（监理）单位、施工单位、勘察设计单位人员。单位工程竣工验收证明书（表四） 1.由建设单位交施工单位填写，并经各负责主体（建设、监理、勘测、设计、施工单位）签字加盖法人单位公章后，送质监站审核通过后，提交一份至备案部门。 2.验收意见一栏，须说明容包括：该工程是否已按设计和合同要求施工完毕，各系统的使用功能是否已运行正常，并符合有关规定的要求；施工过程中出现的质量问题是否均已处理完毕，现场是否发现结构和使用功能方面的隐患，参验人员是否一致同意验收，工程技术档案、资料是否齐全等情况进行简明扼要的阐述。整改通知书（表五）上面要求记录质量监督站责令整改问题的书面整改记录，系指工程是否存有不涉及结构安全和主要使用功能的其他一般质量问题，是否已整改完毕。整改完成报告书（表六）要求详细记录整改完成情况，并由建设方签字加盖公章、主监员确认整改完成情况，若在工程验收过程中，未有整改容，也需要业主（监理）单位、签字盖章确认。工程质量监理评估报告（表七） 1.监理单位在工程竣工预验收后，施工单位整改完毕，由总监理工程师填写。 2.质量评估意见一栏： (a).项目监理部是否已严格按照《建设工程监理规》、监理合同、监理规划及监理实施细则对该工程进行了全面监理。 (b).地基及基础工程施工质量是否符合设计及规要求； (c).主体工程（含网架、幕墙、干挂石材、地下结构、钢结构等）施工质量是否符合设计及相关规要求； (d).水、电、暖通等安装工程施工质量是否符合设计及规要否满足使用功能要求。 3.明确评定工程质量等级。质量站出具的工程竣工验收部函件

建筑竣工验收表格资料大全

建筑竣工验收表格大全（共98 种表格）目录 1.建筑给水排水及采暖工程概况表 (1) 2.建筑给水排水及采暖工程施工现场质量管理记录 (2) 3.建筑给水排水及采暖分部工程质量验收记录 (3) 4.建筑给水排水及采暖工程质量控制资料核查记录 (4) 5.建筑给排水及采暖工程安全和功能检验资料核查及主要功能抽查记录 5 6.建筑给排水及采暖观感质量检查记录 (7) 7.设备进场验收记录 (8) 8.材料（设备）合格证明文件汇总表 (9) 9.管道工程隐蔽验收记录............................................................................ 1 0 10.管道支、吊架安装记录 (11) 11.管道焊接检验记录 (12) 12.楼板（屋面）立管洞盛水试验记录 (13) 13.钢管伸缩器预拉伸安装记录 (14) 14.塑料排水管伸缩器安装预留伸缩量记录 (15) 15.设备基础交接验收记录.............................................................................. 1 6 16.管道保温记录 (17) 17.设备单机试运转记录 (18) 18.锅炉烘炉记录 (19) 19.锅炉煮炉记录 (20) 20.阀门、散热器安装前水压试验记录 (21) 21.承压管道系统（设备）强度和严密性水压试验记录 (22) 22.给水、热水及采暖管道系统冲洗记录 (24) 23.卫生器具满水试验记录 (25) 24.地漏排水试验记录 (26) 25.室内排水管道通球试验记录 (27) 26.给水、排水系统及卫生器具交付使用前通水试验记录 (28) 27.敞开水箱满水试验记录 (30) 28.消火栓系统试射试验记录 (32) 29.采暖系统试运行和调试 (34) 30.安全阀及报警联动系统动作测试记录 (35) 31.室内给水系统子分部工程质量验收记录 (36) 32.给水管道及配件安装分项工程质量验收记录 (37) 33.给水管道及配件安装工程检验批质量验收记录 (39) 34.室内消火栓系统安装分项工程质量验收记录 (41) 35.室内消火栓系统安装检验批质量验收记录 (42) 36.给水设备安装分项工程质量验收记录 (43) 37.给水设备安装分项工程质量验收记录 (44) 38.室内排水系统安装子分部工程质量验收记录 (45) 39.室内排水管道及配件安装分项工程质量验收记录 (46) 40.室内内排水管道及配件安装工程检验批质量验收记录 (47) 41.室内雨水管道及配件安装分项工程质量验收表 (50) 42.室内雨水管道及配件安装 (51) 43.室内热水供应系统安装子分部工程质量验收记录....................................................... 5 4 44.管道及配件安装分项工程质量验收记录 (55) 45.室内热水管道及配件安装分项工程检验批质量验收记录 (56) 46.室内热水系统辅助设计安装分项工程质量验收表....................................................... 5 7 47.室内热水辅助设备安装分项工程检验批质量验收记录 (58) 48.卫生器具安装子分部工程质量验收记录 (59) 49.卫生器具安装分项工程质量验收记录 (60)

抗体纯化的方法有哪些

抗体纯化的方法有哪些？抗体制备出来之后,需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗,既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料就是腹水与细胞培养上清,而通常经过免疫制备 : 抗体非还原型PAGE/kDa 还原型PAGE/kDa IgG 150 50,25 IgM 900 65,25 IgM单体180 65,25 硫酸铵沉淀法: 基本原理:高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜,降低球蛋白的溶解性,就是分离免疫球蛋白的常用方法,而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别,一般用来分离抗体的硫酸铵饱与度在33~50%。适用于:鼠抗所有亚类、其她种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA 基本操作: 1、过滤、离心腹水或者培养上清得上清; 2、加入饱与硫酸铵至终浓度45%,静置沉淀蛋白; 3、沉淀蛋白用最小体积PBS或硼酸盐缓冲液溶解,用PBS或硼酸盐缓冲液透析除盐; 4、过聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱,PBS或硼酸盐(含0、02%叠氮钠)缓冲液洗脱; 5、电泳检测分子量大小,分光光度法测定抗体浓度; 6、抗体保存浓度在0、1-30 mg/mL适宜,-20 ℃保存不超过一个月,避免反复冻融。亲与层析法基本原理:基因工程改造的protein A与protein G能特异性结合哺乳动物IgG的Fc区段,将protein A与protein G结合到柱料上,通过亲与层析的方式,可将IgG及其亚类与片段纯化出来。成员介绍:protein A分离自Staphylococcus aureus的细胞壁,分子量42 kDa,由spa基因编码,具有五个同型的免疫球蛋白结合结构域,每个结构域由三个α螺旋构成。 protein A的B结构域

全套工程施工资料表格(完整版)

第一章建筑工程施工质量验收规范检验批检查用表填写说明建设部膜布的新版《(建筑工程施工质最验收规范》定于2003年1月1日起执行。为确保新版规范在省全面贯彻实施，使于实际操作，报据新版规范的条文和建设部有关规定，我站组织专家编制了“建筑程工质量验收检验批检查用表江编”。它是与《建筑工程施工质量验收规范》配套使用的全省统一格式，工程建设各方主体在施工.质量验收过程中都应严格遵照执行。填飞检查用表时，除应符合省建设厅(关于执行建筑工程施工质量验收规范有关事项的通知》(浙建发[2002]193号) 文件的规定外，尚应符合以下要求 1、当合的定采用的企业标准规定的检查内容多于国家规范规定的检查内容时，应按企业标准的规定补充检查内容，井按此检森验收: 2、当合的定采用的企业标准规定的质最要求高于国家规范的规定时，应按企业标准的规定修改检查表内相应的质量要求指标，井按此检查验收; 3、当检责表中菜检查项目的版量要求指标写明按“设计要求”时应按本工程施工图设计文什的规定，明确填写本工程设计规定的具体的质量要求，并按此检查验收: 4、当检企表中某检查项有多种检在内容时(仅限定量检在项目)，应按相关专业规范成合同的定采用的企业标准规定的检查内容进行检直并另行形成“检查记录表”作为本表的附件。填写本表时，按所附“检直记录表”中的合格检查结果，在本表相应栏内填与“符合要求”成“抽样检验合格”等合适的结论性自定用调: 5、当同检自表内的检查项目不能(成不应) 在某时间次性检办验收时，工、监理(建设) 单位应按实际情况在过程前、过程中进行检查、擦制、验收，并填写相应的检查(验收) 栏1，但“验收结论”应在表列检直内容个部检查并填写完整后填了，日期以填写“脸收结论”的日期为准: 6、当检查表所列某一检直项目的检查(验收) 记录栏分为10 个小格时，井不表示只需抽查10 个点，现场实际抽自点最应按施组织设计中划分的检骑批人小和相关专业规范(企

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