食用菌接种箱如何灭菌
在食用菌制种和栽培上，因各种原因引起的杂菌污染屡见不鲜。各种杂菌（如霉菌和细菌）几乎无一例外地都是竞争性的，它们和食用菌生活在同一培养基上，争夺食用菌的营养和生活空间，影响食用菌的生长；许多杂菌还通过产生一些有毒物质来抑制食用菌菌丝的生长。从某种意义上来说，食用菌制种和栽培的中心工作就是如何来防止和控制各种杂菌的污染，以获得菌丝体或栽培体的纯培养。在生产上搞好杂菌污染的防止和控制，其中重要的一环就是接种工作。展坤公司郝俊，经过整理食用菌培育客户多年来从事食用菌工作的经验，对接种所引起的污染及防止措施分析。
如下，供同行参考。1接种箱滋生霉菌引起的污染也许有人会认为，接种箱是用于接种的设备，要经常消毒，而且每次使用前都要经过消毒处理，怎么也会生长霉菌呢？其实，这是一种误解。首先，接种箱多为木质结构，木材中含有丰富的木质纤维素，它是各种霉菌生活的良好营养成分；其次，接种箱的使用随生产而具有季节性，每年都有较长一段时间闲置未用，在这段时间内，就极有可能出现霉菌污染。那么，在什么情况下接种箱才会出现霉菌污染呢？接种箱被污染多是出现在接种箱闲置未使用的时候，但笔者认为，引起污染的直接原因往往并不在这段时间，而是在生产季节接种箱被使用的时候。在使用接种箱时，生产者操作不规范或使用不当都会使接种箱过于潮湿，比如让培养基或菌料等撒落箱内而没有及时清理，或者由于接种箱内外温差较大，引起箱内而没有及时清理，或者由于接种内外温差较大，引起箱内热空气遇冷凝结成水珠等。接种箱受潮后，如果没有及时通风排湿，这样在接种箱闲置不使用的时候，就很容易滋生霉菌。
针对上述引起接种箱污染的原因，要防止污染，在实际工作中，1.是要在接种箱使用时，尽量降低接种箱内的湿度。要避免培养基、菌料或酒精棉球等直接落入箱内，如不谨掉入箱则应尽快清理；要避免接种箱内外出现温差而引起受潮，具体应做到：（1）料袋或料瓶灭菌后应充分冷却再进入接种箱内进行消毒处理，以免引起接种箱内温度过高；（2）消毒剂的用量要严格按照规定使用。目前常见的消毒剂如气雾消毒剂、福尔马林等，在使用时都是利用这些物质发生氧化反应来产生烟雾或蒸汽，从而达到对空气消毒的目的。我们知道，氧化反应往往会产生大量的热量，因此，在保证消毒效果的前提下，消毒剂的使用不宜过量；（3）
提高接种速度，控制好接种时间。接种速度慢、时间长，不仅工作效率低、生产周期长，而且酒精灯长时间燃烧会产生大量的热量，使箱内温度过高。此外，接种时间长，也会延长培养基、菌种等在空气中暴露的时间，这样会增加杂菌污染的机会。二是在接种箱长期闲置不用时，应将接种箱箱盖、袖套口及时打开，以利通风排湿。
实际上，在生产上要完全避免接种箱受潮往往是很难做到的，但问题的关键是当生产季节结束以后，就应及时进行通风降湿，并将接种箱放置在通风干燥的地方。如果接种箱已经出现了霉菌污染，那么又如何处理呢？在实际工作中，有些生产者对这个问题往往重视不够，或者根本就没有意识到这个问题，在使用接种箱时仍按照常规的方法进行消毒处理（殊不知在消毒剂的使用浓度和消毒时间不延长的情况下，消毒剂的消毒效果与空气中的杂菌的数量是密切相关的），结果往往就会“不明”原因的大规模污染。接种箱出现霉菌污染以后，实现要用酒精棉球或蘸有福尔马林的棉球擦拭肉眼可见的霉菌，然后，再用福尔马林进行熏蒸或用气雾消毒剂消毒，这样连续处理2次-3次以后才能使用。2接种操作引起的污染接种在食用菌制种和栽培上是非常重要的环节，对控制好杂菌污染至关重要。接种时要求生产者应严格掌握微生物无菌操作规程，概括起来，主要有以下几点：2.1各种接种工具和用品等应随同料袋、料瓶、菌种等一并进行消毒处理，应当尽量避免在操作过程中向箱内传递物品。2.2进箱操作前，在箱外用清水洗净双手，进箱后再用酒精棉球擦拭双手和接种工具，并对接种工具用火焰灼烧灭菌，在接种过程中还要定期用火焰灭菌。2.3对于试管种的扩大培养，试管应平持，试管口不能朝上，同时试管口也不要离开酒精灯火焰，这样才能达到火焰“封口”的目的。2.4接种操作要做到“轻、快、准”。“轻”是指接种时动作幅度不要太大，以减少空气波动；“快”是指动作操作要快，避免菌种和培养基在空气中暴露时间过长；“准”指的是接种动作要准确到位，接种工具、菌种块等不要到处乱撞、乱放。2.5接种操作完毕，及时移走物品，并将箱内收拾干净。
3接种箱空气引起的污染接种箱内空气中杂菌孢子或微生物菌体数量直接影响到接种后培养物的纯菌率。引起箱内空气污染的原因是多方面的，如消毒不彻底、接种箱密封性能差等。其中，消毒不彻底是引起箱内空气污染的最常见原
因。消毒不彻底可能是由于消毒剂本身的原因引起的，比如，消毒剂效果差、用药量不够等，也有可能是由于长时间使用同一种消毒剂（长期使用同一种消毒剂引起消毒效果差，其原因如果能排除消毒剂本身的质量问题，从生物学的角度来说，往往是由于消毒剂对杂菌抗药性变异的定向选择作用，从而是杂菌抗药性种群不断增大。鉴于此，生产上应注意不同的消毒剂轮换使用）。此外，接种箱密封性能差也是造成空气消毒不彻底的原因之一。
（一）平板划线接种法（又称分离培养法）平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。平板分离划线的方法较多，其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。其目的都要使细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。 现只介绍分区划线法。 1、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，挑取大肠杆菌（或葡萄球菌）培养物少许。 2、左手斜持琼脂平板，皿盖留在桌上，于火焰近处将菌涂于琼脂平板上端，来回划线，涂成薄膜（约占平板总表面积的1/10），划线时接种环与平板表面成30~40o角，轻轻接触，以腕力在平板表面行轻快地滑移动作，接种环不应划破培养基表面。 3、烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从薄膜处取菌作连续平行划线，约占平板表面1/5左右，再次烧灼接种环，等三次平行划线……以同样方法作第四次，第五次划线，将平板表面划完。 4、划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置37℃孵育培养24小时后观察结果。 （二）纯培养细菌接种法（斜面培养基接种法：用于培养，保存菌种及其它实验用） 1、取一支斜面培养基及一支纯菌种管，并排倾斜放在左手四指中拇指压住并以手掌支住两试管底部。右手将白金环于火焰上灭菌、冷却。并拔起两试管的棉塞。（勿放置桌上，如棉塞太紧时应预先松动）。 2、试管口部于火焰上往返通过2~3次灭菌，将灭菌白金环伸入有菌试管中，取少量细菌（一般应从斜面底部沾取），然后小心移至准备接种的试管中。 3、接种方法是自管底向上连续平划线，若以保存菌为目的时可自管底上划一粗直线即可。 4、取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环灭菌后放回原处。 5、若自平皿培养物中取菌时，只应沾取一个单个菌落。 6、接种菌应作好标记，标明菌种名称，日期等，置37℃温箱中培养，次日观察结果。液体培养基接种法：用于增菌及鉴定细菌生长特点，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。操作技术基本与上法相同，只是接种时应将沾菌之接种环沿接近液体表面之管内壁轻轻摩擦（勿用力振荡）使细菌混入培养基内，置37℃温箱中培养，次日观察结果。 （三）半固体培养基穿刺培养法用于保存菌种及间接观察细菌之动力（无动力之细菌仅沿穿刺线生长，清晰可见；有动力的细菌使培养基呈现混浊样，穿刺线甚至难以看出）。用无菌操作技术，灭菌穿刺针沾取细菌后，垂直刺入半固体培养基中央直达近管底处，再沿原穿刺线抽出即可，置37℃温箱培养，次日观察结果。
食用菌接种室无菌操作及管理细则 为规范接操作,提高接种成活率，特制定此细则,本细则适用于接种室接种操作人员,菌种室及相关人员参照执行。 1、接种室接种操作人员应有强的无菌操作意识,任何不规范 或无意识的操作及行为都有可能给接种带来污染隐患，因此所有接种室操作及行为都应此细则为标准执行,细则之外的操作及行为经咨询主管人员并经同意后方可用于接种作业,同时我们将根据实际情况对本细则进行补充和完善。 2、接种室、缓冲间的消毒 接种室为高度无菌区，每天接种前2．５~３小时时段必须对接种室进行较为严格的消毒处理，消毒之前所有接种所需物件、菌种等必须一次性准备到位。 2．１菌种消毒 挑选好的菌种在接种室开始消毒之前应对菌袋表面进行药浴消毒,消毒所用药品为0．1％高锰酸钾溶液，消毒时将菌袋浸入溶液中,并用抹布进行擦试，袋壁、袋颈、袋口及棉塞露于空气中的部位都应擦到,将擦洗完毕的菌种马上放到接种室即可以进行接种室的空间消毒作业。 2.２接种消毒方法 接种室消毒时臭氧机开机时间为2小时,同时点3大包菇保一号辅导清毒;缓冲间5小包菇一号进行薰蒸。接种室消毒开始时间为每天早上的5:00~5:１5,下午为1１:１５~1１:30,接种时间上午不晚于8：
10,下午不晚于14:1０。臭氧机关时间将由时控开关自动控制，消毒人员不再进入缓种间手动关闭。 3、接种前准备 接种室、缓冲间均采用统进统出方式，严禁分批及无序进出，进入前所有操作人员必须将个人事情处理好,一旦进入直至接种完毕中途不得出入，进入缓种间后必须更换工作服、戴工作帽、穿专用鞋,换好后蘸取消毒液将双手洗净，然后同时进入接种室开始接种作业，进入缓冲间和接种室均应注意随手把门关好不留空隙。 4、接种操作 进入接种间先用75%酒精把手、接种铲、剪刀及工作台面、垫板擦拭一遍并将接种铲、剪刀在酒精灯火焰上进行灼烧,然后可进行以下操作。 4.1将菌种袋棉花塞、套环拔掉用灼烧后的接种铲将料上表面0.5ｃm左右的菌种刨掉弃之不用,所弃之菌种集中剩放于小桶内，做好后将菌袋倒置，并将袋口上折放于塑料筐内,注意袋口的密封,菌种不可暴露于空气中。 4.2碎化碎化操作推荐用完一袋处理一袋,也可以一次性将所有菌种碎化，但需注意碎化后的菌种必须密封好。碎化时可采用揉搓等手法,但注意不要弄破袋壁或揉搓过度造成菌丝损伤严重,影响后续发菌。菌种碎化粒度要求其直径不大于０.5cm。 ４.3每接完一袋菌种，接种铲必须重新在火焰上进行灼一次,特别是接触菌种的部位，灼烧时间应不短于2０秒,并有相应的冷却时间,
食用菌母种1级种培养基、 食用菌原种2级种培养基 简法生产与灭菌创新技术 湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场的科技人员经过多年探索实践，研究成功食用菌母种1级种试管培养基、食用菌原种2级种培养基简法灭菌创新技术。其技术涵盖了食用菌菌种母种1级种试管培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术和食用菌菌种原种2级种培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术。现将其技术要点介绍如下： 1. 食用菌菌种母种1级种试管培养基简法生产与复制创新技术 该技术采用湖1北3省8宜72都市52湾市33食用58菌天麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷物为原料，谷粒、麦粒、玉米粒均可，简称颗粒培养基（下同），又称天然无公害培养基。这种颗粒培养基制作方法特别简单，取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀后，就可以分装试管了。1支试管（18毫米×180毫米玻璃试管）装入颗粒培养基约10克，成本不足1角钱，棉花塞堵封试管口。一次可根据生产需要，制作分装试管500支～1000支。 2. 食用菌菌种原种2级种培养基简法生产与复制创新技术 该技术同样采用湖1北3省0宜85都市16湾市86食用16菌天
麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷粒、麦粒、玉米粒为原料。取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀即可。盛装原种2级种培养基的容器为250毫升输液瓶即生理盐水瓶。1瓶装入颗粒培养基约100克，成本不足5角钱，棉花塞堵封瓶口。一次可根据生产需要，制作分装100瓶～500瓶。 3. 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术 3.1 灭菌设备： 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术选用的灭菌设备为“苏泊尔”压力锅，即家庭做饭用的压力锅，又称家用高压锅。 3.2 灭菌操作： 向“苏泊尔”压力锅内注水5厘米深，将制备好的食用菌母种、原种培养基分别直立于压力锅内，盖上锅盖，生火灭菌40分钟～50分钟即可。 小结：该技术突破了传统方法需要用牛皮纸包扎试管口或瓶口棉花塞，全封闭高压灭菌却仍不能保证100%不湿棉花塞的难题，达到了不用专用高压灭菌锅，不用高档灭菌设备，不包扎棉花塞全裸露灭菌却100%不湿棉花塞的理想效果。其突出的特点是灭菌设备为家用炊具，可一锅多用，且价廉易购，灭菌方法简单实用，灭菌效果好。彻底解决了食用菌母种和原种制作难、消毒灭菌更难的技术难题，为食用菌种简法生产开拓出新天地。
食用菌接种箱如何灭菌 在食用菌制种和栽培上，因各种原因引起的杂菌污染屡见不鲜。各种杂菌（如霉菌和细菌）几乎无一例外地都是竞争性的，它们和食用菌生活在同一培养基上，争夺食用菌的营养和生活空间，影响食用菌的生长；许多杂菌还通过产生一些有毒物质来抑制食用菌菌丝的生长。从某种意义上来说，食用菌制种和栽培的中心工作就是如何来防止和控制各种杂菌的污染，以获得菌丝体或栽培体的纯培养。在生产上搞好杂菌污染的防止和控制，其中重要的一环就是接种工作。展坤公司郝俊，经过整理食用菌培育客户多年来从事食用菌工作的经验，对接种所引起的污染及防止措施分析。 如下，供同行参考。1接种箱滋生霉菌引起的污染也许有人会认为，接种箱是用于接种的设备，要经常消毒，而且每次使用前都要经过消毒处理，怎么也会生长霉菌呢？其实，这是一种误解。首先，接种箱多为木质结构，木材中含有丰富的木质纤维素，它是各种霉菌生活的良好营养成分；其次，接种箱的使用随生产而具有季节性，每年都有较长一段时间闲置未用，在这段时间内，就极有可能出现霉菌污染。那么，在什么情况下接种箱才会出现霉菌污染呢？接种箱被污染多是出现在接种箱闲置未使用的时候，但笔者认为，引起污染的直接原因往往并不在这段时间，而是在生产季节接种箱被使用的时候。在使用接种箱时，生产者操作不规范或使用不当都会使接种箱过于潮湿，比如让培养基或菌料等撒落箱内而没有及时清理，或者由于接种箱内外温差较大，引起箱内而没有及时清理，或者由于接种内外温差较大，引起箱内热空气遇冷凝结成水珠等。接种箱受潮后，如果没有及时通风排湿，这样在接种箱闲置不使用的时候，就很容易滋生霉菌。 针对上述引起接种箱污染的原因，要防止污染，在实际工作中，1.是要在接种箱使用时，尽量降低接种箱内的湿度。要避免培养基、菌料或酒精棉球等直接落入箱内，如不谨掉入箱则应尽快清理；要避免接种箱内外出现温差而引起受潮，具体应做到：（1）料袋或料瓶灭菌后应充分冷却再进入接种箱内进行消毒处理，以免引起接种箱内温度过高；（2）消毒剂的用量要严格按照规定使用。目前常见的消毒剂如气雾消毒剂、福尔马林等，在使用时都是利用这些物质发生氧化反应来产生烟雾或蒸汽，从而达到对空气消毒的目的。我们知道，氧化反应往往会产生大量的热量，因此，在保证消毒效果的前提下，消毒剂的使用不宜过量；（3）
食用菌厂房设计方案 建设一个食用菌工厂化厂房，必须要采用封闭式厂房。并且附近的环境要求：没有工业废气、畜禽养殖场、垃圾场及其他污染源。生产水源最好使用管网的自来水。 1.1根据食用菌厂房布局可以大致分为五个区： Ⅰ区为无菌区，包括冷却室和接种室，是厂区洁净度最高的区域； Ⅱ区为培养区，对洁净度有着严格的要求； Ⅲ区为搔菌、栽培、包装区，对环境的整体要求较高； Ⅳ区为操作区，包括装瓶和灭菌区域，对环境无特殊要求； Ⅴ区为挖瓶区和原料堆场，是灰尘和杂菌较多的区域。根据日生产量和不同品种，合理布局各区域面积，对各个区域制订不同管理要求和人员流动要求。 2.2、净化 2.2.1空气净化新风由高压离心风机送入，经过初、中效过滤后，再由冷却室和接种室的高效过滤风口送入，连续循环，达到室内净化，冷却室和接种室要求达到1万级洁净度，并形成正压，防止外气倒流。 2.2.2风淋对进入冷却和接种区域的人员达到洁净要求，减少外面灰尘和杂菌随着人员进入而带入。 2.2.3层流罩在接种机的上方安装层流罩，使接种局部区域达到100级洁净度，保证接种区域充分洁净，提高接种成品率。 2.2.4自净器在冷却室和接种室安装带高效过滤器的净化设备，室内空气经自净器的高效过滤装置的连续循环，达到室内的净化。
2.3、制冷 加热不同食用菌品种有各自适宜的培养温度和出菇温度，食用菌工厂化生产就是创造一个最适宜的环境条件，满足培养和出菇需要。制冷（加热）和通风设备是食用菌工厂化生产中关键设备，投入大，对技术要求高。目前许多企业开发了智能化控制系统，实时采集、监控培养和栽培期间参数的变化，并及时预警，为食用菌创造优化的生长条件。 2.3.1制冷负荷设计 负荷计算=泄漏热+瓶子发热+机械发热+照明发热+换气负荷 泄漏热=墙面面积×内外温差×导热系数瓶子发热=瓶子数量×每瓶发热量 机械发热=室内冷却器发热+加湿器水温差产生热量+换气扇产生热量 照明发热=灯管数量×每台单位时间发热量×开启时间 换气负荷=室内容积×每小时换气次数×内外温差×热回收率 同时考虑其他热损耗，制冷效率衰减等因数，在选用制冷机时，制冷机负荷=计算负荷×1.2 在负荷计算中，瓶子发热和换气所产生的负荷最大；而选择保温性能好的建筑材料，减少导热系数和热回收装置的使用可有效减少负荷，同时根据不同培养阶段呼吸作用的强弱，以CO2浓度为指标，自动启动送排风装置，起到节能降耗的目的。 2.3.2电加热在室内机的出风口安装电加热管，通过室内机风机
食用菌常见消毒灭菌方法 食用菌的消毒灭菌 在物品及空气中分布着大量微生物。进行食用菌生产必须树立严格的无菌观念，掌握和运用消毒、灭菌技术，严防杂菌污染，保证菌种优良纯正,使食用菌顺利生长发育，以获得较好的经济效益。消毒灭菌是排除杂菌干扰，为食用菌创造洁净生长环境的重要保证。也是食用菌生产中的一项基本技术。 几个重要概念： 灭菌：是指在一定的范围内用物质物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的一部分微生物，即只能杀死微生物的营养体，不能杀死微生物的休眠体。 防腐：是指用物理学或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械的方法（如过滤、离心分离、静电吸附等）除去液体或气体中微生物的方法。 1.灭菌 杀死一定环境、物品中的一切微生物（包括芽孢），使一定范围内的微生物永远丧失生长繁殖能力，使之达到无菌程度，是灭菌的目的。经过灭菌的物品称“无菌物品”。灭菌可分为杀菌和溶菌。 杀菌是指菌体失活，但菌形尚存。溶菌是指菌体死亡后发生溶解、消失的现象。 2.消毒：杀死环境、物品中的病原菌（杀不死芽孢）,而对被消毒物品基本无害的方法为消毒。 3.防腐：暂时抑制其生长。使微生物暂时处于不生长、不繁殖、但又未死亡的状态，称为防腐。属于一种抑菌作用。 4.除菌用冲洗、过滤、离心、静电吸附等机械手段，除去微生物的方法为除菌。 消毒灭菌主要利用物理或化学因素。各种理化因子究竟能起到灭菌、消毒、防腐中的哪种效果，主要取决于本身的强度或浓度、作用时间、微生物对理化因子的敏感性及菌龄等综合因素的影响。任何消毒灭菌法的使用，必须达到既杀灭物品中的微生物，又不破坏其固有性质的目的。 物理消毒灭菌 食用菌生产中常用的物理消毒灭菌法是热力灭菌及紫外线灭菌,两者都属于强杀伤力因素。 一、热力灭菌 原理： 高温使菌体蛋白质、核酸、酶等重要细胞物质发生凝固或变性失活。日常生活中的炒、烧、烤、蒸、煮等对微生物都有一种短平快的效果。根据加热方式的不同，可分为干热灭菌和湿热灭菌两类。在实践中，可根据灭菌物品的性质和具体条件选用。 （一）干热灭菌利用火焰、热空气杀死微生物(适于耐烧、耐烤物品),干热灭菌以其快速在灭菌领域占有一席之地，干热灭菌器灭菌范围较窄。 (1)酒精灯烧接种工具、管口、瓶口→烧至红热(冷却用)简、快、彻底 (2)烘烤法(热空气) 适于体积较大的玻璃、金属器皿，试管、培养皿、三角瓶、烧杯、吸管等包装放入烘箱→160-170℃、2h断电→70℃以下取物。注意：升降温勿急；勿超180℃；用时随用随开包。干热灭菌简便易行，能保持物品干燥，但使用范围有限，只适用
一、灭菌（Sterilization） 是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 杀灭或者消除传播媒介上的一切微生物，包括致病微生物和非致病微生物，也包括细菌芽胞和真菌孢子。同时，灭菌可以看成是一个过程。 灭菌 sterilization 用来使产品无存活微生物的过程 二、微生物 微生抵抗力取物对灭菌剂的决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。将培养基、发酵设备或其他目标物中所有微生物的营养细胞及其芽胞（或孢子）杀灭或去除，从而达到无菌的过程。 三、灭菌原则 1.基本要求 重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应先清洁，再进行消毒或灭菌。 被朊病毒、气性坏疽及突发不明原因的传染病病原体污染的诊疗器械、器具和物品，应执行WS/T 367第11章的规定。 耐热、耐湿的手术器械，应首选压力蒸汽灭菌，不应采取化学消毒剂浸泡灭菌。环境与物体表面，一般情况下先清洁，再消毒；当受到患者血液、体液等污染时，先去除污染物，再清洁与消毒。 医疗机构消毒工作中使用的消毒产品应经卫生行政部门批准或符合相应标准技术规范，并应遵循批准使用的范围、方法和注意事项。 2.方法的选择 根据物品污染后导致感染的风险高低选择相应的消毒或灭菌方法： 1）高危险度物品，应采用灭菌的方法处理； 2）中危险度物品，应采用达到中水平消毒以上效果的消毒方法； 3）低危险度物品，宜采用低水平消毒方法，或做清洁处理；遇有病原微生物污染时，针对所污染的病原微生物种类选择有效的消毒方法 根据物品上污染微生物的种类、数量选择消毒或灭菌的方法： 1) 对收到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和经学传播病原体污染的物品，应采用高水平消毒或灭菌； 2）对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体等病原微生物污染的物品，应采取中水平以上的消毒方法； 3）对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品，应采用达到中水平或低水平的消毒方法； 4）杀灭被有机物保护的微生物时，应加大消毒剂的使用剂量和/或延长消毒时间；5）消毒物品上微生物污染特别严重时，应加大消毒剂的使用剂量和/或延长消毒时间；[2]
食用菌栽培技术——香菇 一、概述 香菇又名香蕈、香信、香菰、椎茸，属担子菌纲伞菌目侧耳科香菇属。香菇的人工栽培在我国已有800多年的历史，长期以来栽培香菇都用“砍花法”，是一种自然接种的段木栽培法。一直到了60年代中期才开始培育纯菌种，改用人工接种的段木栽培法。70年代中期出现了代料压块栽培法，后又发展为塑料袋栽培法，产量显著增加。我国目前已是世界上香菇 生产的第一大国。 香菇是著名的食药兼用菌，其香味浓郁，营养丰富，含有18种氨基酸，7种为人体所必需。所含麦角甾醇，可转变为维生素D，有增强人体抗疾病和预防感冒的功效；香菇多糖有抗肿瘤作用；腺嘌呤和胆碱可预防肝硬化和血管硬化；酪氨酸氧化酶有降低血压的功效；双链核糖核酸可诱导干扰素产生，有抗病毒作用。民间将香菇用于解毒，益胃气和治风破血。 香菇是我国传统的出口特产品之一，其一级品为花菇。 二、生物学特性 1.形态特征 香菇菌丝白色，绒毛状，具横隔和分枝，多锁状联合，成熟后扭结成网状，老化后形成褐色菌膜。子实体中等大至稍大。菌盖直径5～12厘米，扁半球形，边缘内卷，成熟后渐平展，深褐色至深肉桂色，有深色鳞片。菌肉厚，白色。菌褶白色，密，弯生，不等长。菌柄中生至偏生，白色，内实，常弯曲，长3～8厘米，粗0.5～1.5厘米；中部着生菌环，窄，易 破碎消失；环以下有纤维状白色鳞片。孢子椭圆形，无色，光滑。 2.生活条件 (1)营养 香菇是木生菌，以纤维素、半纤维素、木质素、果胶质、淀粉等作为生长发育的碳源，但要经过相应的酶分解为单糖后才能吸收利用。香菇以多种有机氮和无机氮作为氮源，小分子的氨基酸、尿素、铵等可以直接吸收，大分子的蛋白质、蛋白胨就需降解后吸收。香菇菌丝生长还需要多种矿质元素，以磷、钾、镁最为重要。香菇也需要生长素，包括多种维生素、核酸和激素，这些多数能自我满足，只有维生素B1需补充。 (2)温度 香菇菌丝生长的最适温度为23～25℃，低于10℃或高于30℃则有碍其生长。子实体形成的适宜温度为10～20℃，并要求有大于10℃的昼夜温差。目前生产中使用的香菇品种有高温型、中温型、低温型三种温度类型，其出菇适温高温型为15～25℃，中温型为7～20℃，低温型为5～15℃。 (3)水分 香菇所需的水分包括两方面，一是培养基内的含水量，二是空气湿度，其适宜量因代料栽培与段木栽培方式的不同而有所区别。 ①代料栽培。长菌丝阶段培养料含水量为55%～60%，空气相对湿度为60%～70%；出菇阶段培养料含水量为40%～68%，空气相对湿度85%～90%。 ②段木栽培。长菌丝阶段培养料含水量为45%～50%，空气相对湿度为60%～70%；出菇阶段培养料含水量为50%～60%，空气相对湿度80%～90%。 (4)空气 香菇是好气性菌类。在香菇生长环境中，由于通气不良、二氧化碳积累过多、氧气不足，菌丝生长和子实体发育都会受到明显的抑制，这就加速了菌丝的老化，子实体易产生畸形， 也有利于杂菌的滋生。新鲜的空气是保证香菇正常生长发育的必要条件。 (5)光照 香菇菌丝的生长不需要光线，在完全黑暗的条件下菌丝生长良好，强光能抑制菌丝生长。子实体生长阶段要散射光，光线太弱，出菇少，朵小，柄细长，质量次，但直射光又对香菇
食用菌生产应选择适宜本地生长的优质、高产、高抗的优良菌株，严禁使用有杂质菌污染和虫害迹象以及退化、老化的劣质菌种。严格接种程序，确保接种成功率。接种室要求干净、干燥、密闭、远离污染源。灭好的菌袋或菌瓶进入接种室内。接种室内事先应经过消毒。接种工具、接种人员的双手要用2%过氧化氢银离子或75％酒精消毒。接种要迅速准确，接种量不宜太小。 在食用菌生产中，一旦杂菌污染将直接造成培植失败，所以严格控制各个生产环节的微生物。虽然消毒工作十分重要，但大多数的食用菌生产者并不十分清楚消毒灭菌的科学原理和各种消毒方式的优缺点，所以无法制订行之有效的消毒制度，导致日常消毒工作比较随意，消毒效果不理想。 食用菌生产消毒需要先了解各个环节的消毒要求和消毒方式的优势，然后选择最合适的方案。 一、组培实验室 食用菌培养实验室和接种间是最关键环节，无菌接种工作室和无菌超净工作台是必需的，它可以很大程度的降低组培操作和无菌培养过程中的污染几率。实验室和接种间每1-2周进行一次杀孢子工作，均匀喷洒杀孢子剂杀灭空间内的霉菌等杂菌，控制整理菌落水平。 臭氧和紫外线是比较常见的微生物控制方式，是日常控制微生物的有效方式，但需要注意这两种方式主要是控制，其对孢子的杀灭效率有效，应每1-2周采用专用杀孢子剂处理一次。 关于甲醛熏蒸。甲醛熏蒸是常用的空间消毒方式，但甲醛属于剧毒，对人体有强致癌效应，应谨慎使用。生态灭菌方法为3%过氧化氢银离子溶液，均匀喷洒，10ml/m3。可以达到彻底杀孢子剂的效果，过氧化氢银离子无色无味，生态型孢子剂，对人体和植物没有任何危害。 二、操作台与器具灭菌 无菌操作台、接种机、接种枪等器具需要严格消毒灭菌。目前常用的是75%酒精，浸泡或擦拭方式消毒。酒精的具有较好的杀菌效力且没有残留，是目前最常用的消毒方式，但酒精只有在75%浓度下才具有较好的消毒效果，酒精易挥发，浓度下降后杀菌效力急剧降低，所以酒精的实际使用效果不太理想，存储和成本也较高。 与75%酒精对比，使用2%过氧化氢银离子溶液的杀菌效力更高，对真菌、霉菌、细菌等杂菌均具有高效杀灭作用。过氧化氢银离子持久稳定，成分下降对杀菌效力几乎没影响，也是生态无残留的，可以完全代替酒精。 过氧化氢银离子可以通过浸泡、喷雾、擦拭等多种方法消毒，在杀菌效力、存储和使用成本上比酒精更具优势。 三、预冷车间（冷却室）消毒 灭菌后的料瓶或料袋应采用高压灭菌，然后进入冷却室内冷却。料袋在冷却过程
食用菌接种室无菌操作及管理细则为规范接操作,提高接种成活率,特制定此细则，本细则适用于接种室接种操作人员,菌种室及相关人员参照执行。 1、接种室接种操作人员应有强得无菌操作意识,任何不规范或无意识得操作及行为都有可能给接种带来污染隐患，因此所有接种室操作及行为都应此细则为标准执行,细则之外得操作及行为经咨询主管人员并经同意后方可用于接种作业,同时我们将根据实际情况对本细则进行补充与完善。 2、接种室、缓冲间得消毒 接种室为高度无菌区，每天接种前2、5～3小时时段必须对接种室进行较为严格得消毒处理，消毒之前所有接种所需物件、菌种等必须一次性准备到位。 2、1菌种消毒 挑选好得菌种在接种室开始消毒之前应对菌袋表面进行药浴消毒，消毒所用药品为0、１％高锰酸钾溶液，消毒时将菌袋浸入溶液中，并用抹布进行擦试,袋壁、袋颈、袋口及棉塞露于空气中得部位都应擦到，将擦洗完毕得菌种马上放到接种室即可以进行接种室得空间消毒作业。 2、2接种消毒方法 接种室消毒时臭氧机开机时间为2小时,同时点3大包菇保一号辅导清毒；缓冲间5小包菇一号进行薰蒸。接种室消毒开始时间为每天早上得5：00～5:15,下午为１1：1５～11：30,接种时间上午不晚于
8:10，下午不晚于14:1０.臭氧机关时间将由时控开关自动控制，消毒人员不再进入缓种间手动关闭。 3、接种前准备 接种室、缓冲间均采用统进统出方式,严禁分批及无序进出，进入前所有操作人员必须将个人事情处理好，一旦进入直至接种完毕中途不得出入，进入缓种间后必须更换工作服、戴工作帽、穿专用鞋，换好后蘸取消毒液将双手洗净,然后同时进入接种室开始接种作业,进入缓冲间与接种室均应注意随手把门关好不留空隙。 4、接种操作 进入接种间先用７5％酒精把手、接种铲、剪刀及工作台面、垫板擦拭一遍并将接种铲、剪刀在酒精灯火焰上进行灼烧，然后可进行以下操作. 4、1将菌种袋棉花塞、套环拔掉用灼烧后得接种铲将料上表面０.５cｍ左右得菌种刨掉弃之不用，所弃之菌种集中剩放于小桶内，做好后将菌袋倒置，并将袋口上折放于塑料筐内,注意袋口得密封,菌种不可暴露于空气中。 4、2碎化碎化操作推荐用完一袋处理一袋，也可以一次性将所有菌种碎化,但需注意碎化后得菌种必须密封好。碎化时可采用揉搓等手法，但注意不要弄破袋壁或揉搓过度造成菌丝损伤严重,影响后续发菌。菌种碎化粒度要求其直径不大于０.5cm。 4、3每接完一袋菌种，接种铲必须重新在火焰上进行灼一次,特别就是接触菌种得部位,灼烧时间应不短于20秒,并有相应得冷却时
食用菌灭菌参数 目录 1 灭菌质量标准 (1) 2 灭菌操作规程 (1) 1 灭菌质量标准 1.1安全使用灭菌锅。 1.2 彻底杀死菌袋内所有生物体。 1.3 袋子无破损，不进空气。 1.4 灭菌后‘闻得香”“摸着软”“看到紫”达到灭菌效果。 2 灭菌操作规程 2.1 工作人员要勤剪指甲，全部戴手套，手套每天要洗净。 2.2 生产前检查压力锅或常压柜的密封性及安全性，各种阀门、仪表灵敏度。有故障要及时汇报，请专业人员修理，时刻注意安全使用灭菌锅。 2.3 装锅时，要把周转筐码整齐，不得倒塌。无周转筐时，运输车要用编织袋垫好，轻拿轻放，不得造成袋子破损；要把锅内壁全部垫上麻袋或编织袋，防止菌袋磨损，装锅时每袋要压紧，防止倒塌。装完锅要及时清点数量。 2.4 盖上锅盖时要检查密封性，高压灭菌不得漏气；常压灭菌漏气要小。
2.5 高压灭菌时，通入蒸气时速度要慢，不要太急，从零压力升到0.5公斤压力时间为1小时，然后放尽压力锅内冷空气，继续升压1小时到标准1.5公斤压力（128℃），保持3小时，中间不得降温；或在110℃保持12小时，中间不得降温。 2.6 常压灭菌时，要先打开灭菌柜排气阀，再慢慢通入蒸汽，用3—5小时使灭菌柜温度达到100℃，进行保温15小时以上，中间不得降温。 2.7 灭菌过程中一定要严格按锅炉安全操作规程和灭菌柜安全操作规程进行操作，不得有任何马虎，否则造成损失后果不堪设想；违规操作一切后果由操作者承担。灭菌时，压力和温度太高，要通过减少蒸汽进入来控制，不得随意开大放气阀；通过实践，掌握进汽和出汽的平衡点，进行保温。 2.8 灭菌时间到后，停止向灭菌锅供应蒸汽，让灭菌锅自然冷却，待压力为零，温度80℃以下时，方可慢慢打开锅盖，让蒸汽出尽，再出锅。压力锅内有压力和温度超过80℃，严禁开锅盖。 2.9 出锅时，运输灭菌后的菌袋要轻拿轻放，防止破袋，运输车要垫好，保持车内洁净，袋子外有脏物时要擦拭干净，防止二次污染。运到接种室后，要清点数量，装好一间后要填写接种卡并签名。 2.10 若用周转筐灭菌，一定要先把周转筐全部检查一遍，所有铁刺要磨平，底部垫上编织袋，不使周转筐把菌袋磨损。 2.11 每天灭菌结束，班长要及时填写工作记录表，交车间主任签字后，交生产办公室。
接种操作规程 1 杂菌无处不在，接种是一个严格无菌操作的过程，是一个与杂菌作斗争的过程，所有接种操作人员都必须要竖立严格的无菌操作意识，按规程要求进行接种作业。 2 熟练的接种操作技术对接种成功率有着直接影响，所有操作人员都必须尽力提高自己的接种操作技术水平。 3 接种室开放式接种的接种量对接种成功率有着较大的影响，接种量大，菌种覆盖均匀成品率相对较高，接种人员不得贪图简便少接或接入不均。 4 接种室是一个与外界环境相对隔离的区域，人员要同进同出，尽量减少与外界空气的交换。 5 进入缓冲间后更换工作服、鞋、帽，戴口罩。在自动净手器下喷洒酒精对双手进行消毒后，一同进入无菌操作间开始接种作业。 6 进入无菌操作间应先开启电子净机对空间进行净化作业，人员操作需在净化机无菌区域内进行。 7 使用预先配制好的消毒溶液对菌包进行外表消毒，一次性处理完毕待用。消毒时要注意观察菌种有无污染或长势异常。 8 使用75%酒精对双手、接种工具进行擦拭消毒，接种工具擦拭后在酒精灯火焰上来回转动灼烧3~4圈，稍冷却。 9 将菌种拔除棉花塞，并刨去料面上0.5厘米左右的菌种，然后用接种勺将菌种刨碎（小麦粒大小）即打开菌包接入菌种。菌种必须用完一袋处理一袋，每袋菌种使用完毕后接种工具和手都必须重新消毒
一次。 10 每袋菌包接入菌种三勺，大约25克。菌包接种孔必须接入菌种，如接种孔有堵塞的可用接种勺向下捅入。接入料面的菌种一定要注意分布均匀，不均匀的可适当摇动使其均匀。 11 接种中，待接种菌包的棉花塞要用右手小指和手掌将其夹住，不得放置于操作台面上。塞回时要在酒精灯火焰上转动一圈后塞入。12 接好一筐种后，端上架子车前套环棉塞要侧向压倒，切忌压倒时棉花塞触碰到料面，棉花在携带杂菌，常压灭菌很难将其杀灭干净，触碰料面易引起菌包污染。 13 接种操作要力求快速敏捷，尽量减少开袋后菌包在空间的暴露时间。 14 接种时如发现有菌种被污染的要将菌种袋拧紧密封，单独放置，并重新对手和工具进行严格的消毒。 15 接种作业完毕后按《接种室使用规程》要求做好清洁工作。 接种室使用规程 1 接种室分为缓冲间和无菌操作间，均为洁净区域，凡进入此区域者均需遵守本规程。 2 接种室控制温度为18~22℃,湿度≤90%。 3 无菌操作间无新风过滤系统，操作人员及酒精灯燃烧所需氧气由门缝等处进入，携带杂菌较多，因此与无菌操作间相邻的冷却间、缓冲间、过道都必须保持干净整洁，并定期进行消毒作业。 4 无菌操作间及缓冲间每月应进行一次洁净度的检测，检测方法为：
食用菌接种室洁净度的确定 （固体菌种金针菇） 关于食用菌接种室洁净级别的标准大多数认为以应不超过 10000级为宜即直径90mrrn—— 30min<=3个，洁净级别高，空间杂菌数量少，肯定能提高接种的成功率，但相应的投资成本和管理维护成本也会上升，而在实际生产中却很少有人能做到达一万级的洁净度（接种箱可达到，除外），本人根据通过对开放式接种室洁净度进行近200次的检测和对接种后污染情况的调查表明：以接种污染率最高不超过2%为设计标准，接种室洁净度级别根据实际需要确定在10万级至30万级较为适宜。 \ 当然，接种室的洁净级别能达到一万级那是更好了，但适不适宜作为行业标准，还需根据行业发展水平和实际需要而定。 一万级接种室需要根据洁净室的设计理念和标准进行设计、施工、管理、维护保养，还应配备相应的管理人员和设备维护人员，不是现有小工厂随随便便就可以搞好的，重要的是相对于30万级 的接种室一万级接种室建设管理维护的成本消耗所带来的成品率提高效益远高于其增加的投资成本。 通过检测表明，在对接种室进行规范消毒后很容易达到一万 级，但我们需要的环境无菌度是在接种过程能保持这种级别状
态，即使工作人员进行非常规范的更换无菌工作服、风淋后进入 接种室，其洁净状态也将在短短几分种之内急剧恶化（在无净化设备对室内空气进行处理的情况下），一万级状态在5分钟之后将变为十万级，10分钟即可达30万级，随着作业时间的延长空间杂菌数还将增加。即使在室内有一定净化设备的条件下，要想一直保持十万级也将非常困难。曾检测过工作人员进入接种室后工作30分钟在不开净化设备时的洁净度，每个培养皿平均菌落数达12个 /5min以上，已远超过中国1998GM规定的最低标准，无级了，但即使在这样的条件下接种至二小时，最后的接种污染率却也仅在％左右。 食用菌接种室的设计一般参照微生物实验室的标准，但物种的抗性和生产特性毕竟不完全相同，食用菌需要的是纯培养，但并不一定代表需要我们接入的菌物或培养基自身一点杂菌没有，真正能做到这样毕竟好，但在实际生产中却很难做到都这样，因此我们可把标准降一降，只要能保持正常生产，在成品能得到保证的情况下以实际需要出发来制定标准，来指导生产，不需要一 味的去求好，求高。是的，也许在这样的低环境条件下接种菌包被带入了杂菌，但这不代表我们的菌包就污染了，不能用了，需 知任何菌物都有其一定的抗性，且杂菌也并不是落地就生根，造成危害，它也需要在适合它生长的条件下才能生长发育，。其实在生产中有很多这样的例子，比如毛木耳、平菇的开放式接种，普通的接种账随便熏熏就接种它们的接种成品率也很高，而那样
食用菌消毒灭菌 引言：微生物在自然界中的分布很广，食用菌生产中所涉及到的原料、用水、设备、空气等都着大量的真菌、细菌、放线菌、病毒等微生物和虫害，它们无时无刻在与食用菌争夺养料和侵害食用菌。这些杂菌和病虫害给食用菌生产造成很大为害和损失。在食用菌制务虚和栽培中，消灭和抑制有害微生物的活动，对食用攻进行纯培养是很有必要的，故消毒灭菌是食用菌生产过程中很重要的一环。 几个重要概念： 灭菌：是指在一定的范围内用物质物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的一部分微生物，即只能杀死微生物的营养体，不能杀死微生物的休眠体。 防腐：是指用物理学或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械的方法（如过滤、离心分离、静电吸附等）除去液体或气体中微生物的方法。 第一节培养基质的消毒灭菌 基质消毒灭菌包括对培养基、培养料的微生物进行杀灭，它是对食用菌纯培养的必要条件。一般采用热力灭菌、拌药消毒等方法。 一、热力灭菌：是利用高温使菌体蛋白变性，从而失去活性，达到灭菌的目的。常采用湿热灭菌的方法对培养基质进行灭菌，因为热蒸气的穿透力强，蛋白质的凝固点随含水量的增加而降低。又根据采用不同的仪器、温度、时间及压力指标分为高压蒸气灭菌、常压灭菌、常压间歇灭菌、发酵杀菌（巴氏消毒）等方法。 1、高压蒸气灭菌：将灭菌物置于密封的高压锅内，利用加压高温蒸气在较短的时间内达到彻底灭菌的方法。常用的高压锅类型有：手提式，立式，卧式；（1）液体培养基在1公斤/平方厘米下，处理20~30分钟，温度约为121℃。（2）固体培养基在1.5kg/平方厘米下，处理1~2小时，温度为128℃ 高压蒸气灭菌的使用步骤：加水至水位线—→装物—→加盖—→加热温—→放冷气—→升压保压—→降压排气—→出锅 注意：（1）装锅不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。 （2）加盖，对角线旋紧螺旋。 （3）压力未降至0时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。 2、常压灭菌：将灭菌物置于灭菌锅内，以自然压力的蒸气进行灭菌的方法。100℃保持8个小时。灭菌灶使用方法：100℃开始计时，维持8～10h。 注意：温度要尽快升至100℃，中途不能停火，经常补充热水。 优点：建灶成本低，容量大。 缺点：灭菌时间长、能源消耗量大。 3、常压间歇灭菌：在没有高压灭菌设备的条件下，或对一些不宜用100℃以上温度而又须杀灭其中的细菌芽孢的物质的灭菌，可采用此法。具体做法：将培养
食用菌菌种的制作与培养 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 一、母种制作 （一）母种培养基制作 1.母种培养基的种类 母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种： （1）马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基 马铃薯（去皮）200克琼脂20克葡萄糖（或蔗 糖）20克水1000毫升 （2）麦芽汁—葡萄糖—琼脂培养基 干麦芽250克琼脂15～20克葡萄糖（或蔗糖）10克水1000毫升 （3）胡萝卜—葡萄糖—琼脂培养基 胡萝卜100克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升 （4）蘑菇汁—葡萄糖一琼脂培养基（适用于蘑菇） 鲜蘑菇250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20 克水1000毫升 （5）蛋白胨—葡萄糖—琼脂培养基 蛋白胨2克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克维生素B1（硫胺素）0.5毫克磷酸二氢钾0.5克琼脂18克硫酸镁0.5克水l000毫升 2.母种培养基的制法 以最常用的马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基的制法为例介绍如下： 先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块加水1000毫升，煮沸15～20分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。试管口塞上大小合适的棉花塞，塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。塞好棉塞后，每10
第三章食用菌消毒灭菌 引言：微生物在自然界中的分布很广，食用菌生产中所涉及到的原料、用水、设备、空气等都着大量的真菌、细菌、放线菌、病毒等微生物和虫害，它们无时无刻在与食用菌争夺养料和侵害食用菌。这些杂菌和病虫害给食用菌生产造成很大为害和损失。在食用菌制务虚和栽培中，消灭和抑制有害微生物的活动，对食用攻进行纯培养是很有必要的，故消毒灭菌是食用菌生产过程中很重要的一环。 几个重要概念： 灭菌：是指在一定的范围内用物质物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的一部分微生物，即只能杀死微生物的营养体，不能杀死微生物的休眠体。 防腐：是指用物理学或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械的方法（如过滤、离心分离、静电吸附等）除去液体或气体中微生物的方法。 5 ※<标题二> 第一节培养基质的消毒灭菌 基质消毒灭菌包括对培养基、培养料的微生物进行杀灭，它是对食用菌纯培养的必要条件。一般采用热力灭菌、拌药消毒等方法。 一、热力灭菌：是利用高温使菌体蛋白变性，从而失去活性，达到灭菌的目的。常采用湿热灭菌的方法对培养基质进行灭菌，因为热蒸气的穿透力强，蛋白质的凝固点随含水量的增加而降低。又根据采用不同的仪器、温度、时间及压力指标分为高压蒸气灭菌、常压灭菌、常压间歇灭菌、发酵杀菌（巴氏消毒）等方法。 1、高压蒸气灭菌：将灭菌物置于密封的高压锅内，利用加压高温蒸气在较短的时间内达到彻底灭菌的方法。常用的高压锅类型有：手提式，立式，卧式；（1）液体培养基在1公斤/平方厘米下，处理20~30分钟，温度约为121℃。（2）固体培养基在1.5kg/平方厘米下，处理1~2小时，温度为128℃ 高压蒸气灭菌的使用步骤：加水至水位线—→装物—→加盖—→加热温—→放冷气—→升压保压—→降压排气—→出锅 注意：（1）装锅不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。 （2）加盖，对角线旋紧螺旋。 （3）压力未降至0时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。 2、常压灭菌：将灭菌物置于灭菌锅内，以自然压力的蒸气进行灭菌的方法。100℃保持8个小时。灭菌灶使用方法：100℃开始计时，维持8～10h。 注意：温度要尽快升至100℃，中途不能停火，经常补充热水。 优点：建灶成本低，容量大。 缺点：灭菌时间长、能源消耗量大。 3、常压间歇灭菌：在没有高压灭菌设备的条件下，或对一些不宜用100℃以上
食用菌栽培过程及心得 本次栽培的食用菌为平菇和金针菇，基本流程为配料-拌料-装袋-灭菌-冷却-接种-培养-出菇-采收。具体过程如下： 1.培养料配制 1.1 培养料配方（12袋的用量） 棉籽壳3900g，麸皮1000g，蔗糖50g，CaCO350g，NaOH5g，水5000ml。调节PH至6.5，并拌匀。 1.2装袋 装料用袋是一端开口的塑料袋，装袋时应尽量把料压实对菌丝生长造成一定 的压力，使其粗壮有力，生活力强。大致装到袋子的三分之二处即可，然后在开 口处挖出一个半鸡蛋大小的凹槽，用橡胶圈套口封膜并用橡皮筋固定。 1.3灭菌 在实验室高压灭菌锅中120o C灭菌3h 后出锅，放置在室温中冷却。 2.接种 2.1 接种 接种在无菌室的超净工作台上完成。在操作之前用紫外灯对无菌室进行消毒 灭菌，接种之前用酒精棉球将双手、接种夹、菌瓶消毒灭菌。然后用接种夹夹取 菌种放于培养料的凹槽中，并封口做好标注。整个接种过程在火焰旁完成，确保 无杂菌的侵入。 3.培养 接菌后将培养袋放于培养架上培养，要多次检查，加强通风降温，注意料温 变化。料温要保持在20~25 ℃，如超过30 ℃，则会因受热产生杂菌而感染病 害。养菌要求无光，经20 d 左右菌丝长满后用散光照射，刺激出菇。 4.出菇管理 平菇现蕾后，应注意通风、增湿工作。出菇要求有微弱的散射光、温度 10~15 ℃、相对湿度80%~90%。增加空气中的相对湿度，可向地面、墙壁、空间喷水，切忌直接向幼蕾喷水，一般正常天气每天喷水 2 次，而且浇水时要注意大通风，谨防平菇在厌氧高温的情况下感病而长出畸形菇。随着菇体的长大，应增加湿度，每天要轻喷、勤喷，以保持空气新鲜、湿润。 4.1 开袋 当菌袋变软、出现大量白色菌丝时，打开菌袋。去除菌袋料面上的老菌块、 小菇蕾，促使新原基成丛地形成，达到整齐出菇的目的。 4.1.1温度、湿度 在原基形成期，菇房最适温度为10~15 ℃，相对湿度为80%~85%。在菇蕾
液体菌种的几种接种方法 刘益清(415900) 湖南忠食农业有限公司 液体菌种具有方便快捷菌龄短而一致纯度高活力强等优点，越来越受科研工作者和广大食用菌生产者的重视，但如何正确使用液体菌种尚未见系统报道．液体菌种培养好后接种方法直接影响液体菌种优势的发挥，甚至关系到生产的成败．我们在规模应用液体菌种接种中使用过多种接种方法，各有特点，下面就几种成功的方法介绍给大家． 一料表面接种法：这是目前采用比较多的方法,采用这种接种方法时多为瓶装或袋装培养料，上端有一定的空间，如生产金针菇茶薪菇黑木耳杏鲍菇菌包以及生产香菇鸡腿菇平菇等各种菌种，接种时尽量将料表面喷淋上菌种，液种萌发生长快，封面早杂菌污染的机会很小，除破袋外菌袋污染的机会极低，甚至以万袋计算可以达到零污染．这种方法的菌球处于氧气充足的条件下生长很好． 二表面加枪头插入式接种法：因表面接种法接种时菌球易被培养料的过滤作用阻滞在料的上半部分，菌丝生长需要从上往下生长，不能在料内上下同时生长．如果将接种枪枪头做成管状插入料内接种，菌球在料内同时生长，可以缩短发菌时间一半左右，甚至更多．这种方法一要注意料内氧气的供应（不适应扎口袋），二要注意接种环境的无菌要求，避免菌种不萌发或枪头带入杂菌造成污染，成品率在98-100%,比固体菌种袋口接种缩短时间一半以上. 三袋表面扎孔接种法：长菌棒从两端接种不能缩短养菌时间，从袋的表面一面或两面）用枪头扎入３－５cm深并同时接种，扎孔间隔根据需要确定，如香菇每棒扎３－５个孔，这种方法调节接种量和孔间距离可以达到缩短养菌时间和减少杂菌污染的目的，缺点是用种量大，每个孔的接种量不少于１０ml,接种后不封口的应达到每孔２０ml以上．这种方法2007年大量生产香菇出菇菌棒,成品率高达99%以上 四袋壁内喷射接种法：长菌棒还可以采取从两端一则用枪头分别扎入到袋薄膜内，从料与塑料薄膜之间喷射菌种（要求液体压力达到１kg/cm２以上），喷射后用手按压分散菌种，使菌棒一则布满菌种，待菌丝生长１－３cm后可以扎孔增氧．这种方法可以覆盖较大的料表面，发菌快袋面微孔污染小，缺点是用种量大，每喷射一次用种多在１００ml左右．而且在配料时就要注意减少培养料的含水量．这种方法在香菇生产上应用比较成功．是我们在第三种方法的基础上改进的方法,期望今后适应开放接种的需要. 五接种后摇动接种法：颗粒菌种培养基接液体菌种最能发挥快速发菌的优势，液体菌种接入玻璃瓶后旋转或摇动使液体流动粘到每粒颗粒上，在适合温度下三天即可长满菌丝，继续培养几天让菌丝深入颗粒内部后即可用于生产．这种方法可以在急需用种时使用．六接种机接种法：食用菌瓶栽工厂化企业使用的方法，接种速度一般7000-8000 瓶／小时，菌液喷射在料面及孔洞中。 液体菌种对不良环境的抵抗力不如固体菌种（如耐缺氧能力不强），采用发酵料，生料栽培或塑料袋熟料开放式拌料栽培往往不易成功.液体菌种生产技术与食用菌栽培技术的很好结合才能发挥液体菌种的优势