高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨
酸钾含量
HPLC in soy sauce and vingar sodium benzoate potassium sorber content
学生姓名：XXXX 学号：XXXX 班级：XXXX 指导老师：XXXXXX
摘要：[目的]用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。【方法】采用RP-HPLC法以Hyperclone BDS C18 柱（150×4.60 nm,5um,phenomenex）为色谱柱；流动相：甲醇：0.02mol/l 乙醇胺（20 :80）；柱温25℃，流速0.8mol/min ，检测波长230nm，进样量(标准进样量：2.5 ，5 ，7.5 ，10 ，15 ul ；样品进样量:5 ul)。【结果】：酱油中的苯甲酸钠含浓度为0.0794ug/ul；山梨酸钾为
0.2798ug/ul；醋中未出现山梨酸钾、苯甲酸钠
Abstract: [purpose] with high-performance liquid chromatography (HPLC) in soy sauce and vinegar and sodium benzoate sorbic acid potassium content.【 methods 】 the
RP-HPLC method with Hyperclone BDS using C18 column (150 x 4.60 nm, 5 um, phenomenex) for chromatographic column; Mobile phase: methanol: 0.02 mol/l ethanol amine (20:80); The column temperature 25 ℃, velocity 0.8 mol/min, detected wavelength 230 nm, into the sample weight (standard sample quantity: 2.5, 5, 10, 15, 7.5; the samples into the sample weight ul: 5 ul). 【 results 】 :Sodium benzoate in soy sauce with the concentration of 0.0794ug/ul was 0.2798ug/ul; potassium
sorbate; sorbic acid potassium, no sodium benzoate in vinegar 结论：高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点，所以数据准确，用外标法计算结果操作简单，计算方便，得出样品中苯甲酸钠的含量。
Conclusion: high performance liquid chromatography with speed, high efficiency, high sensitivity of advantage, so exact data, with external standard method calculation results simple operation, easy calculation, concluded that the content of sodium benzoate samples.
关键词：高效液相色谱法外标法苯甲酸钠山梨酸钾Keywords: high performance liquid chromatography external standard method sodium benzoate potassium sorbet
前言：苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。本实验采用RP-HPLC 法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
1实验部分
1.1实验目的：
了解高效液相色谱仪基本结构和使用原理，以及初步掌握其操作技能。学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线测定方法。学习RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量的测定方
法。
1.2.1实验仪器：
仪器：高效液相色谱仪【高压输液泵LC-6A，检测器SPD-10A，保温箱CPD-10AS，进样阀7725I】；电子天平【Sartoriou cp225D】；纯水仪【MILLI-Q超纯水纯化系统】；超声波清洗机【KH-50B】。
1.2.2实验试剂：
1)色谱甲醇经滤膜0.45um过滤；
2)（1+1）氨水：氨水与水等体积混合；
3)乙酸铵溶液0.02mol/L：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并定容至
1000ml,经滤膜0.45um过滤；
4)碳酸氢钠溶液20g/L:称取2g碳酸氢钠，加水至100ml，振荡溶解；
5)苯甲酸钠标准储备液1mg/ml：准确称取0.10000g苯甲酸钠，加
20g/L的碳酸氢钠5ml，加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容之刻度线，作为储备液；
6)山梨酸钾标准储备液1mg/ml：准确称取0.10000g山梨酸钾，加
20g/L的碳酸氢钠5ml，加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容之刻度线，作为储备液；
7)苯甲酸钠、山梨酸钾标准混合使用液：取苯甲酸钠、山梨酸钾标
准储备液各1.0ml，移入100ml容量瓶，加水定容之刻度线。此溶液中含苯甲酸钠、山梨酸钾各0.01mg/ml。经滤膜0.45um过滤。
1.3高效液相色谱条件
1)色谱柱：C-18
2)不锈钢柱 150mm；
3)流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）=5:95；
4)流速：1.0ml/min；
5)柱温：30℃；
6)波长：230nm;
7)进样量：2.5-5.0ul
1.4样品预处理：
量取10ml的待测样品，放入小烧杯中，温热，搅拌去除二氧化碳。加（1+1）的氨水调价PH值约为7,加水定容至50ml。使用前取1-2ml 于小离心管中12000rpm离心，上清液经滤膜（0.45）过滤后进样，准备上机分析。
1.5实验过程及操作：
开泵20分钟，开检测器，进样分析（进样顺序：先洗针，用有机水洗6次以上，再用水洗6次以上，吸样时针内不可有气泡，Load 位置注入，Inject进样，保持针不动一分钟），取标准样量分别为：2.5,5,7.5,10,15ul，酱油、醋各5ul，一次加入高效液相色谱仪，记录色谱图，分析实验数据。操作过后关检测器，冲洗仪器，关输液泵。
2结果与讨论
2.1实验数据及处理：
2.1.1实验数据
表一混标2.5ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的数据
名称峰号保留时间峰面积
苯甲酸钠 1 5.048 64942.6
山梨酸钾 2 6.982 105669.2
图一混标2.5ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的色谱图
表二混标5.0ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的数据
名称峰号保留时间峰面积苯甲酸钠 1 5.048 125686.3 山梨酸钾 2 6.998 204252.2
图二混标5.0ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的色谱图
表三混标7.5ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的数据
名称峰号保留时间峰面积苯甲酸钠 1 5.048 182998.3 山梨酸钾 2 6.982 297282.2
图三混标7.5ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的色谱图
表四混标10.0ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的数据
名称峰号保留时间峰面积苯甲酸钠 1 5.032 256916.1 山梨酸钾 2 6.965 417186.7
图四混标10.0ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的色谱图
表五混标15ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的数据
名称峰号保留时间峰面积苯甲酸钠 1 5.032 380525.5 山梨酸钾 2 6.948 618036.6
图五混标15ul中苯甲酸钠和山梨酸钾的色谱图
表六酱油中的苯甲酸钠和山梨酸钾数据
名称峰号保留时间峰面积苯甲酸钠13 4.982 236892.7 山梨酸钾17 6.873 1101346
图六酱油的色谱图
表七醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾数据
名称峰号保留时间峰面积
苯甲酸钠
山梨酸钾
图七醋的色谱图
2.1.2数据处理
表八混合样品中苯甲酸钠
进样体积保留时间峰面积
2.5 5.048 64942.6
5 5.048 125686.3
7.5 5.048 182998.3
10 5.032 256916.1
15 5.032 380525.5
图八混合样品中苯甲酸钠中的标准曲线
由图可知，标准品中苯甲酸钠的线性回归方程为y=3E+06x – 1182.4，R2=0.9989
表九混合样品中山梨酸钾
进样体积保留时间峰面积
2.5 6.982 105669.2
5 6.998 204252.2
7.5 6.982 297282.2
10 6.965 417186.7
15 6.948 618036.6
图九混合样品中山梨酸钾的标准曲线
由图可知，标准品中山梨酸钾的线性回归方程为y=4E+06x – 1724.5，R2=0.9989
由上述标准曲线可知酱油中的苯甲酸钠含浓度为0.0794ug/ul；山梨酸钾为0.2798ug/ul；醋中的山梨酸钾为0ug/ul苯甲酸钠为0ug/ul 名称苯甲酸钠山梨酸钾
酱油 0.0794ug/ul 0.2798ug/ul
食醋无无
3结果与分析
3.1通过测单标判断先出峰
实验取山梨酸钾标准液5ul进行进样，目的是由山梨酸钾的保留时间判断山梨酸钾、苯甲酸钠哪个先出峰以区分混合样以及样品中的山梨酸钾、苯甲酸钠。通过山梨酸钾标准溶液的流出曲线峰图知山梨酸钾的保留时间在6.5-7min之间，由此可以定性分析先出峰是山梨酸钾还是苯甲酸钠。
3.2判断混标中山梨酸钾与苯甲酸钠的峰
以5ul混合样所得的标准溶液所得的标准曲线和流出曲线为例，进行分析：由图2可知在测定10ul混合样标准溶液曲线时出现了2个峰，已知山梨酸钾标准溶液保留时间大概为6.5-7min之间，对应表2知第2个峰为苯甲酸钠，保留时间为6.998min，第1个峰为苯甲酸钠，保留时间为5.048min，山梨酸钾、苯甲酸钠的色谱峰型好，已完全分离。
3.3判断醋、酱油样品中是否含苯甲酸钠和山梨酸钾及计算其所含的量
由混标中苯甲酸钠峰的保留时间,对应酱油中的峰的保留时间，可推得13号峰为苯甲酸钠峰，峰面积为236892.7，然后将峰面积带入线性方程y=3E+06x –1182.4,得酱油实际含苯甲酸钠的浓度为0.06693ug/ul。同样可知第17号峰为酱油中的山梨酸钾，峰面积1101346 ，然后将峰面积的数值带入线性方程y=4E+06x – 1724.5,得酱油中山梨酸钾的实际含量为0.2798ug/ul。同理可算得醋中不含山
梨酸钾和苯甲酸钠。
3.4苯甲酸钠和山梨酸钾各自的理论塔板数选择因子以及它们的分离度
理论塔板计算公式：n=16(t R/Y)2,其中t R是保留时间，Y为峰底宽度；选择因子计算公式：a=t R’/t0,其中t R1’为相对保留时间，t0为死时间；分离度计算公式：R=2(t R2-t R1)/(Y1+Y2)。代入数据可求出苯甲酸钠和山梨酸钾各自的理论塔板数、选择因子以及它们的分离度。数据统计如下表：
分析物峰宽(min) 理论塔板数选择因子分离度
苯甲酸钠0.35 3155.23 0.705
3.45
山梨酸钾0.75 761.55 1.365
4.结论
①根据色谱图可以看到有些峰有轻微的拖尾现象。可能由于系统内的死体积大，样品在色谱柱上有吸附。针对这一现象，我们可以尽量减少流动柱管线的死体积，使用洗脱更强的流动相。保留时间呈逐渐减小的趋势，可能是由于色谱柱老化、流动相或色谱柱被污染造成保留时间漂移现象。
②可以从标准曲线看出，样品进样量和峰面积呈线性关系，即呈正比。
③从实验中发现，醋中几乎不含苯甲酸钠和山梨酸钾。苯甲酸钠和山梨酸钾分离度为3.45，分离程度比较理想，从而说明选择性和柱效都比较好。
④从计算结果看，测量时样品的理论踏板普遍偏小，说明柱效不好。
可通过降低移动相的流速，减少固定相的量，减小固定相的颗粒度，选用低粘度的移动相，适当提高柱温, 尽量减小停滞移动相的体积等来提高，同时注意检查流动相是否被污染，其也可导致柱效不好。
⑤选择因子很小，说明柱的选择性不好，分离度不好。同理，可以通过改变固定相和流动相的性质和组成，降低柱温，改用四元高压梯度洗脱等方法进行增大选择性和分离度。
⑥平行测定的数据存在误差，主要原因是误差的主要来源：人员误差；操作误差；仪器误差。
参考文献：
【1】王新运，万新军，程乐华，吴凤义.高效液相色谱法同时测定酱油中的苯甲酸和山梨酸[J].《应用化工》.2012，39（9）
【2】张卫佳，蒋其斌，夏天兰.高效液相色谱法测定食醋中的苯甲酸和山梨酸[J].《食品工程》.2007，(4)
【3】林玲，杨春亮，黎珍莲，査玉兵，程盛华.高效液相色谱法测定牛奶中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠[J].《广东农业科学》.2008,(12) 【4】霍艳敏，王骏，张卉，祝建华，刘艳明，王艳丽，宿淑芳.高效液相色谱法同时测定冰淇淋中的10种合成色素[J].《分析测试学报》.2011，
【5】刘渭萍，李明，孙蕊.高效液相色谱法快速测定酱油、醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾.辽宁化工，2004,33(7):422
1绪论 1.1苯甲酸钠的作用 苯甲酸钠是一种常见的防腐剂，在食品中具有防腐的作用。苯甲酸钠的化学式为C6H5COONa，它的相对分子质量为144.00，俗称“安息香酸钠”，并且英文名为Sodium Benzoate。苯甲酸钠的防腐作用在在酸性和碱性的条件下有很大不同。因为在碱性条件下苯甲酸钠没有杀菌抑菌的功效。相反在酸性条件下，苯甲酸钠是防腐剂的最佳选择，实践证明苯甲酸钠在PH是2.5-4.0时防腐效果最强。 苯甲酸钠和苯甲酸都是较好的防腐剂，二者也有密切的关系。苯甲酸钠在酸性条件下能转化成苯甲酸。虽然如此，它们也不完全相同，苯甲酸钠的溶解度比苯甲酸的溶解度强。例如，苯甲酸是在1870年，由H. Fleck在试验中尝试用一种酸来代替以熟知的水杨酸时，意外地发现了一个新物质的存在，那就是苯甲酸并且发现了它的具有防腐的特殊作用。苯甲酸虽然是一种酸，但在当时那个时代并不能大量生产，所以还不能替代水杨酸。因此，直到近代才开始投入使用。一经使用得到了众人的认可，从此，苯甲酸作为防腐剂在食品中的使用居于前几位。苯甲酸具有很多优点，其中它有一个最大的优势:价格便宜、效果好。 由于水果在自然条件下储存时间短，不易运输。人们为了延长时间，用苯甲酸钠来做水果的保鲜剂。因为苯甲酸钠有杀菌作用，对细菌，霉菌和发酵菌都有较好的抑制作用。除了水果，在一些果汁，果酱，牛奶，果冻中苯甲酸钠也常被使用。善于观察的人会发现化妆品和护理用品的保质期都在两年到三年之间，这都是防腐剂的神奇功效。 1.2测定苯甲酸钠的方法 1.2.1高效液相色谱法 方法: 标准曲线制备:分别取不同量苯甲酸钠、山梨酸钾、糖精钠标准贮备液制成混合标准系列,样品制备:样品制备:吸取1.0mL样品于10mL比色管中,加入甲
高压液相色谱测雪碧中苯甲酸的含量 实验原理：高压液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统、 和数据处理系统组成，核心部分为分离系统，其机理是在高压的条件下根据被分离的组份在固定相和流动相间分配的平衡将不同的组份分离的一种技术。从分析原理上讲高效液相色普法和经典液相色谱法没有本质的区别,但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,使经典的液相色谱法焕发出新的活力。高压液相色谱的优点是明显的,如:分离效果好、选择性高、检测灵敏度高、分离速度快等。 实验步骤：（1）实验仪器的准备：高压液相色谱仪未使用时柱子内充满了纯 甲醇，需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成5%的甲醇和95%的乙酸铵水溶液，当看到基线稳定时，仪器待用。 （2）雪碧的前处理：超声脱气法脱去雪碧中存在的二氧化碳等气体，用0.45微米的滤膜抽滤雪碧，稀释样品待测。 （3）标准品的准备：把标准品稀释成不同的浓度，分别为5,10,20,50，100这五个浓度待用。 （4）样品的测定：样品测定前先测定标准品的浓度，确定保留时间（被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间）。测定不同浓度的标准品，进样针需要润洗三至四次。上样品：用样品润洗进样针5-6次，每次需完全润洗，但不能把样品针拔出，润洗完成后，缓慢吸取样品，达到最大刻度处，中间不能出现气泡；打开上样阀门，进样针缓慢插入进样孔指顶部，有阻力后继续前进，至不能前进，把进样针中的样品缓慢推入到样品孔中，拔出进样针，关闭上样阀门。待测定结果出现后，保存测定结果，测下一样品。直至测定结束。 （5）实验仪器的关闭：需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成纯甲醇溶液，关闭仪器，关闭计算机。 实验结果：
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量 发表时间：2019-11-27T13:34:26.213Z 来源：《中国西部科技》2019年第24期作者：雷学梅 [导读] 本文提供一种高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量的实验方法，通过实验分析：苯甲酸标准溶液在2.5mg/L～50mg/L内线性良好，其线性相关系数为0.9991，加标回收率为91.7%，测量结果的相对标准偏差（RSD）为2.77%，苯甲酸的检测限为0.90mg/kg。该法简单，快速，具有良好的准确度和灵敏度，可用于酱油中苯甲酸的快速定量检测。 【摘要】本文提供一种高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量的实验方法，通过实验分析：苯甲酸标准溶液在2.5mg/L～50mg/L内线性良好，其线性相关系数为0.9991，加标回收率为91.7%，测量结果的相对标准偏差（RSD）为2.77%，苯甲酸的检测限为0.90mg/kg。该法简单，快速，具有良好的准确度和灵敏度，可用于酱油中苯甲酸的快速定量检测。 1 概述 酱油是我国传统的、使用最广的调味品，它赋予食品以适当的色、香、味，具有调味之功用。由于酱油营养丰富，适于微生物生长繁殖，为了防止酱油腐败变质，保持酱油的鲜度和良好的品质，达到其对保质期的要求，酱油中一般都会添加防腐剂苯甲酸。因此在酱油的卫生检测中，苯甲酸是一个较为重要的指标。苯甲酸作为防腐剂，由于它们都是人工合成的，过量摄入会对人体造成一定损害。 食品添加剂卫生标准《GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准》作为现行中华人民共和国国标，批准并允许在我国使用的食品防腐剂中最常见的是苯甲酸，并且规定在酱油中苯甲酸最大允许使用量为1.0g/kg。因此，测定苯甲酸的含量，控制其生产使用量，把可能存在的任何风险降低到最低限度，科学保护消费者的利益和健康，是十分必要的，而且具有重要的现实意义。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 （1）仪器：美国Agilent公司1100型高效液相色谱仪；昆山市超声仪器厂KQ-100TDB超声波清洗器；Millipore公司Milli-Q超纯水机。 （2）试剂：色谱纯甲醇；超纯水；色谱纯乙酸铵；10.6%亚铁氰化钾；22%乙酸锌；1.0mg/mL苯甲酸。 2.2 色谱条件 色谱柱：Agillent C18柱（250mm×4.0mm×5μm）；柱温：30℃；紫外检测波长：230nm；流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵（7∶93）；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL。 2.3 样品处理 取样10g，于100mL容量瓶中，加入20mL-30mL纯水混匀，加入10.6%亚铁氰化钾、22%乙酸锌各5.0mL，加水至刻度混匀，静置30min 后用滤纸过滤，取滤液过0.45μm滤膜，待测。 2.4 标准曲线的制作 分别移取浓度为1.0mg/mL的苯甲酸标准储备液0.25mL，0.5mL，1mL，2mL，5mL，至100mL容量瓶中，用水稀释成浓度分别为 2.5μg/mL，5.0μg/mL，10.0μg/mL，20.0μg/mL，50.0μg/mL的混合标准使用溶液，按上面的色谱条件进样分析，以标准浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线。 3 结果与讨论 3.1 高效液相色谱条件的选择 乙酸铵缓冲液（0.02mol/mL）作为流动相体系，以抑制苯甲酸的电离效应。实验采用Agillent C18柱（250mm×4.0mm×5μm），通过调整甲醇与乙酸铵的比例，发现当甲醇：乙酸铵为7∶93时，苯甲酸可与干扰峰完全分离，且保留时间适当，分离度较好。 3.2 标准工作曲线 分别配制苯甲酸标准系列溶液，绘制标准工作曲线，结果表明：苯甲酸在2.5mg/L-50mg/L内线性良好，相关系数分别为0.9991，苯甲酸标准曲线如图1。若按本方法中的取样量和定容体积计算，按S/N=3确定检出限，则苯甲酸的检出限分别为0.90mg/L。
图-1标准物质色谱图 表-1标准物质色谱图积分结果 积分结果 序号峰名称保留时间峰面积峰高相对峰面积相对峰高样品量 min mAU*min mAU % % 1 2.780 1.436 8.774 0.87 3.99 n.a. 2 3.090 0.068 0.304 0.04 0.14 n.a. 3 3.893 0.069 0.267 0.0 4 0.12 n.a. 4 山梨酸钾11.583 59.573 94.722 36.17 43.02 0.1556 5 苯甲酸钠16.460 103.564 116.092 62.88 52.73 0.1553 总和: 164.710 220.159 100.00 100.00 表-2 标准溶液的测定 峰面积（单位:mAU*min） 0.02mg/ml 0.04mg/ml 0.08mg/ml 0.16mg/ml 0.32mg/ml 山梨酸钾 5.771 14.91 28.717 59.573 123.639 苯甲酸钠10.277 24.129 52.067 103.564 214.488
山梨酸钾 图-3 待测物质色谱图 表-4 待测物质积分结果分析 积分结果 序号峰名称保留时间峰面积峰高相对峰面积相对峰高样品量min mAU*min mAU % % 1 1.683 2.843 3.058 4.00 0.57 n.a. 2 2.24 3 5.267 93.777 7.41 17.38 n.a. 3 2.290 14.12 4 174.078 19.88 32.27 n.a. 4 2.360 13.416 115.601 18.89 21.43 n.a. 5 2.630 1.363 17.059 1.92 3.1 6 n.a. 6 2.69 7 0.562 11.160 0.79 2.07 n.a. 7 2.830 0.243 3.887 0.34 0.72 n.a. 8 2.933 1.076 10.714 1.51 1.99 n.a.
实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含 量 一、实验目的 1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。 2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。 3.了解流动相的选择依据及配制方法。 4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。 二、实验原理 高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。 三、实验内容 （一）实验仪器与材料 1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。 2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。 （二）实验内容 1、色谱操作条件的制定： 色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL 2、标准溶液配制 精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。 3、标准曲线的建立 （1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤
不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响摘要：目的：采用RP-HPLC法对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠进行分离。研究不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响，建立较优的色谱流出曲线。方法：采用不同型号C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：分别采用0.8、1.0以及1.2 mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。检测波长：254nm、230 nm。结果：流速、流动相、波长对分离均有不同程度的影响。 关键词：高效液相色谱，色谱条件，色谱分离，影响 添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，它直接关系到人们的身体健康，这些添加剂的长期过量食用对人体有一定危害,在我国食品添加剂使用卫生标准[1](GB2760-1996)中对这些添加剂的使用范围和最大使用限量均有明确规定。目前，高效液相色谱（HPLC）作为化学分离分析的一种重要手段得到广泛应用。高效液相色谱分析实现了分析速度快、分离效率高、样品用样量少且灵敏度高和操作自动化。采用RP-HPLC法对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠进行分离。研究不同色谱条件对苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠色谱分离的影响，建立较优的色谱流出曲线具有重要意义。 1 仪器与试剂 1.1仪器：Shimadzu高效液相色谱仪（SPD-10A VP紫外-可见检测器、LC-6A 高压泵、CTO-10AS VP柱温箱〈含7725i型手动进样器〉），浙大智达N2000工作站；Sartorius CP225D型电子天平；Millipore Milli-Q型纯水仪；Sartorius BP-20型pH计。 1.2试剂：甲醇为色谱纯；苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠对照品（Dr. Ehrenstorfer 公司提供）；其余试剂均为分析纯。 2 材料与方法： 2.1色谱条件 色谱柱：不同型号C-18柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵∶甲醇（比例分别采用82∶18、85∶15以及88∶12）；流速：分别采用0.8、1.0以及1.2 mL/min，柱温：30℃；进样量：10μL。检测波长：254nm、230 nm。
高效液相色谱法的标准操作规程 1 定义及概述： 1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求： 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案 1、仪器与试药 1.1 仪器 1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国） 1.2 药品与试剂 16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。 脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。批号：2013、2013、2013. 乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。2、方法与结果 2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
时间 (min) 流速 (ml/min) % A % B 曲线 起始 1.0 100 0 * 0.5 1.0 98 2 6 15.0 1.0 93 7 6 19.0 1.0 90 10 6 32.0 1.0 65 35 6 33.0 1.0 65 35 6 34.0 1.0 0 100 6 37.0 1.0 0 100 6 38.0 1.0 100 0 6 42.0 1.0 100 0 6 2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表 所示的混合溶液。 名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）名称浓度（mg/ml）门冬氨酸 4.80 苏氨酸 1.20 异亮氨酸 1.10 丝氨酸 2.60 丙氨酸 2.50 亮氨酸 2.70 谷氨酸 6.20 脯氨酸 2.00 苯丙氨酸 1.20 甘氨酸 2.40 缬氨酸 1.60 色氨酸0.40 组氨酸0.90 甲硫氨酸 1.00 精氨酸 1.20 赖氨酸 3.45 取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。 衍生剂配制将水浴锅设置55℃，加热，待温度稳定, 取AccQFluor衍生剂2A，轻轻弹击,确保AccQFluor 衍生剂2A粉末全落在瓶底，吸取AccQFluor衍生稀释剂2B 1ml并放掉，清洗移液器管，再吸取AccQFluor 衍生稀释剂2B 1ml，加入AccQFluor衍生剂2A的瓶中，振荡10秒钟，在恒温水浴锅中溶解，保持10分钟。于干燥器中室温保存一周,于干燥器中4℃保存二周。 2.3测定方法分别取20ul对照品溶液和供试品溶液加入衍生专用管底部，加入60uLAccQFluor硼酸
题目：紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠 专业：化学 姓名：苏秀琴 指导老师： 地址：甘肃省陇西县德兴乡人民政府
毕业论文诚信声明 本人郑重声明：所呈交的毕业论文，是本人独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。 作者签名：苏秀琴 二O一五年九月二十日
紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠 苏秀琴 （甘肃省陇西县德兴乡人民政府，甘肃陇西 748104） 内容摘要：介绍了饮料中山梨酸钾和苯甲酸钠的紫外分光光度法同时测定方法。实验表明该方法可快速准确地测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠，样品中山梨酸钾最小检出限为0.00067g/L,回收率为92%-94%;苯甲酸钠最小检出限为0.0014g/L,回收率为94%-96%。 关键词：山梨酸钾；苯甲酸钠；同时测定；紫外分光光度法 Simultaneous determination of potassium sodium benzoate and sodium benzoate in beverages by Ultraviolet Spectrophotometry Su Xiuqin (Longxi County, Dexing County, Gansu Township People's government, Longxi Gansu 748104) Abstract: the simultaneous determination method of potassium sodium benzoate and sodium benzoate in beverage was introduced. The experimental results show that the method can quickly and accurately determine the potassium sodium benzoate and sodium benzoate in the beverage, the minimum detection limit of potassium sodium benzoate was 0.00067g/L, the recovery was 92%-94%, the minimum detection limit of sodium benzoate was 0.0014g/L, the recovery was 94%-96%. Key words: potassium sodium benzoate; sodium benzoate; simultaneous determination; UV Spectrophotometry 一﹑实验目的 (一)通过实验了解食品防腐剂的紫外光谱吸收特性,并利用这些特性对食品中所含的防腐剂进行定型鉴定. (二)掌握工作曲线的制作方法，并对食品中防腐剂的含量进行定量测定. 二﹑实验原理 食品添加剂对于改善食品色﹑香﹑味，延长食品保质期具有重要作用.山梨酸和苯甲酸及它们的盐在饮料中使用较为广泛，但都具有一定的毒性，其中苯甲酸还是防腐剂中使用量最大者.监测它们在饮料中的使用量，对于保障人们身体健康具有重要
验证性试验 实验十二 苯甲酸钠的含量测定 一、实验目的 1.掌握双相滴定法测定药物含量的原理。 2.掌握苯甲酸钠含量测定的方法与操作。 二、仪器与试药 1.仪器 Mettler AL204电子天平 分液漏斗 规格：250mL 塞锥形瓶 规格：250mL 酸式滴定管 规格：25mL 量筒 烧杯 2.试药 苯甲酸钠原料 乙醚 甲基橙指示液 盐酸滴定液 (0.5mol/L) 蒸馏水 三、实验原理 苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 COO Na + H C l COOH +N aC l 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pk b =9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。 四、实验内容 取本品1.5g ，精密称定，置分液漏斗中，加水约25mL ，乙醚50mL 与甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液 (0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5mL 洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20mL ，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1mL 的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg 的C 7H 5O 2Na 。 本品按干燥品计算，含C 7H 5O 2Na 不得少于99.0％ 计算：苯甲酸钠%= V:供试品消耗盐酸滴定液的体积（mL ）； F ：盐酸滴定液浓度校正因数； T ：滴定度； W: 供试品取样量（g ）； 五、注意事项 1.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。 2.在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，应用乙醚检查分液漏斗是否严密。 六、思考题 1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么? 2.分取水层后乙醚层用5mL 水洗涤的目的是什么? 七、参考文献 《中国药典》2010年版二部，321，化学工业出版社。 V T F 100%W ???
高效液相色谱（HPLC ）法测定邻苯二甲酸酯 一、实验目的： 1. 了解高效液相色谱仪原理； 2. 学习高效液相色谱仪的基本操作方法； 3. 利用高效液相色谱仪测定邻苯二甲酸酯、邻苯二乙酸酯、邻苯二丁酸酯的峰图和含量。 二、实验原理： ① 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC ）是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R ）的计算公式为： R ＝ 2[t (R2)-t (R1)] /1.7*(W 1＋W 2) //式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间；t (R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W 1 及W 2为此相邻两峰的半峰宽。 除另外有规定外，分离度应大于1.5。 ② 本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE ，常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。 但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。同时也有一定的致癌作用。 如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC 分离检测。 三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul 微量注射器。 2、试剂 甲醇（色谱专用） ，高纯水，样品。 出峰次序 样品组成 1 邻苯二甲酸二甲酯（DMP ） 2 邻苯二甲酸二乙酯(DEP) 3 邻苯二甲酸二丁酯(DBP)
苯甲酸钠 开放分类：化学品医学科学自然科学药品 ?新知社新浪微博腾讯微博人人网QQ空间网易微博开心001天涯飞信空间MSN移动说客 苯甲酸钠 苯甲酸钠又名安息香酸钠，无臭或微带安息香气味，易溶于水，为一种酸性防腐剂，是苯甲酸的钠盐。苯甲酸钠是很常用的食品防腐剂，有防止变质发酸、延长保质期的效果，在世界各国均被广泛使用。由于具有毒性，有些国家如日本已经停止生产苯甲酸钠，并对它的使用作出限制。 编辑摘要 苯甲酸钠- 简介
苯甲酸钠用作防腐剂 苯甲酸钠又称为安息香酸。苯甲酸钠在常温下难溶于水，在空气（特别是热空气）中微挥发，有吸湿性，大约常温下0.34g/100ml；但苯甲酸钠溶于热水；也溶于乙醇、氯仿和非挥发性油。在使用中多选用苯甲酸钠；苯甲酸和苯甲酸钠的性状和防腐性能都差不多。 苯甲酸钠亲油性较大，易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞膜的通透性，抑制细胞膜对氨基酸的吸收；苯甲酸钠进入细胞体内电离酸化细胞内的碱储，并抑制细胞的呼吸酶系的活性，阻止乙酰辅酶A缩合反应，从而起到食品防腐的目的。[1] 1870年，英国科学家H.Fleck在寻求一种酸来代替熟知的水杨酸时，第一次描述了苯甲酸的防腐作用，他确立了这种物质的防腐作用，由于当时对于苯甲酸钠的安全性研究并不深入，而且生产技术不够成熟，直到20世纪初才首次用于食品防腐，此后因为价格低廉成为全世界使用最多的防腐剂之一。[2] 苯甲酸钠- 理化性质
苯甲酸钠 苯甲酸钠大多为白色颗粒，无味或微带安息香气味，味微甜，有收敛性；PH在8左右；苯甲酸钠也是酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌、抑菌作用；其防腐最佳PH是2.5-4.0，在PH5.0时5%的溶液杀菌效果也不是很好。 苯甲酸钠易燃。相对密度1.2659。熔点122.4℃，沸点249℃，折射率1.504。蒸气易挥发。闪点（闭杯）121-123℃。易溶于水（常温）53.0g/100ml左右，溶于乙醇、甲醇、乙醚、氯仿、苯、甲苯、二硫化碳、四氯化碳和松节油。 在100℃时迅速升华，能随水蒸气同时挥发。苯甲酸常以游离酸、酯或其衍生物的形式广泛存在于自然界。例如，在安息香胶内以游离酸和苄酯的形式存在；在一些植物的叶和茎皮中以游离的形式存在；在香精中以甲酯或苄酯的形式存在；在马尿中以其衍生物马尿酸的形式存在。[3] 警惕饮料中含有苯甲酸钠
实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。 液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。 反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置 待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作 （1）样品与流动相的处理 配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。 水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。 （2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液 流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。 如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液 洗液一般为：50%的甲醇。
标准操作规程 STANDARD OPERATION PROCEDURE 1 目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。 2 适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。 3 责任：QC人员对本SOP实施负责。 4容 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1. 对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据 处理系统组成。色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μ m。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 4.1.1. 色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合 物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分 离物质的性质来选择合适的色谱柱。温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。 残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2? 8 之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2 或大于8 的流动相。
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量 一、实验目的 1. 了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。 2. 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 3. 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 二、实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和 用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之 一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。 苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸(钠)在225nm 处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求岀样品中苯甲酸钠的含量。 三、仪器和试剂 1. 紫外可见分光光度计UV-2501 (日本岛津)，1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。 2. NaOH 溶液(0.1mol/L ) 3. 苯甲酸钠标准溶液的配制 (1) 苯甲酸钠标准贮备液(1.000g/L ):准确称量经过干燥的苯甲酸钠 1.000g (105 C干燥处理2h)于1000mL 容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。 (2) 苯甲酸钠标准溶液(100.0mg/L ):准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水 稀释定容。 (3) 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL 于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为 2. 0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L 和10.0mg/L 的苯甲酸钠系列标准溶液。 4. 雪碧(500mL ) 5. 蒸馏水 四、实验步骤 1.吸收曲线的绘制 (2)吸收曲线的测定 用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收 曲线。 (3)由吸收曲线上找岀最大吸收波长X nax。 2. 工作(标准或校正)曲线的绘制 按溶液由稀到浓的顺序分别测定他们的吸光度A，然后以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，求岀 线性方程和相关系数。
标准操作规程 1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。 2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。 3责任：QC人员对本SOP实施负责。 4容 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1.对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 4.1.1.色谱柱 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分
离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。 残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2?8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。 4.1.2.检测器 最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。 紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应。结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。 紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定围呈线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。 不同的检测器，对流动相的要求不同。紫外-可见分光检测器所用流动相应符合紫外-可见分光光度法（通则0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 4.1.3.流动相 反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5％，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。 正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。 品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变围为0.7X?1.3X；当X大于33%时，允许改变围为X—10%?X+10% 。
高效液相色谱法测定维生素C的含量 【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。 【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量 1、引言 维生素 C（Vitamin C, Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。Vc 在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。同时，由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc 在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。 溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代 HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型 HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。 2、HPLC测定维生素C的含量 2.1、仪器试剂 2.1.1、仪器 高效液相色谱仪（Agilent1260），色谱柱：C18 柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 μm)；平头进样器。 2.1.2、试剂 乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素 C，磷酸二氢钾等均为分析纯，实验用水为超纯水。
山梨酸钾和苯甲酸钠，山梨酸及其盐类开发 山梨酸类 山梨酸类有山梨酸、山梨酸钾和山梨酸钙三类品种。山梨酸不溶于水外，使用时须先将其溶于乙醇或硫酸氢钾中，使用时不方便且有刺激性，故一般不常用；山梨酸钙FAO/WHO 规定其使用范围小，所以也不常使用；山梨酸钾则没有它们的缺点，易溶于水、使用范围广，我们经常可以在一些饮料、果脯、罐头等食品看到它的身影；在这里我重点介绍一下山梨酸钾：它为不饱和六碳酸；一般市场上出售的山梨酸钾呈白色或浅黄色颗粒，含量在98%--102%；无臭味、或微有臭味，易吸潮、易氧化而变褐色，对光、热稳定，相对密度1.363，熔点在270℃分解，其1%溶液的PH：7—8。山梨酸钾为酸性防腐剂，具有较高的抗菌性能，抑制霉菌的生长繁殖；其主要是通过抑制微生物体内的脱氢酶系统，从而达到抑制微生物的生长和起防腐作用，对细菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用；其效果随pH的升高而减弱，PH达到3时抑菌达到顶峰，PH达到6时仍有抑菌能力，但最底浓度（MIC）不能底于0.2%，实验证明PH：3.2比PH2.4的山梨酸钾溶液浸渍，未经杀菌处理的食品的保存期短2—4倍。 山梨酸、山梨酸钾和山梨酸钙它们三种的作用机理相同，毒性比苯甲酸类和尼泊金酯要小，日允许量为25mg/Kg ，苯甲酸5倍，尼泊金酯的2.5倍是一种相对安全的食品防腐剂；在我国可用于酱油、醋、面酱类、果酱类、酱菜类、罐头类和一些酒类等等食品。 山梨酸钾CAS No.：590-00-1 山梨酸CAS No：110-44-1 HS No：2916190090 虽然国家对儿童食品饮料等规定不能使用苯甲酸钠，只能用山梨酸或者山梨酸钾。但因我国目前食品安全意识淡薄，一些厂家为了节约成本，使用具有毒性的苯甲酸钠，希望为了自己和家人的健康，在购买各类食品及饮料时注意所含成分，不要大意，这点毒性不会使我们立即致死，或立即出现较大的疾病，但是它是我们身体的一种隐患，给我们带来很大染上癌症等各类疾病的可能性。 山梨酸钾和苯甲酸钠 以碳酸钾冒充山梨酸钾，一是碳酸钾不具备防腐作用，起不到山梨酸钾应有的抑菌效果，因为，起抑菌作用的是山梨酸钾，而不是钾离子。这种伪劣产品流入市场，会损害经销商、用户和消费者的利益。二是产品会变色，影响感官指标。按照规定，正常的山梨酸钾的外观呈白色。而掺入了碳酸钾的山梨酸钾产品，在存放了大约3个月之后，会发生变色反应，由白色变为黄色或棕色，影响销售。 以苯甲酸钾冒充山梨酸钾，苯甲酸钾虽有防腐作用，但对人体也有一定的毒副作用，而山梨酸钾是世界公认的安全型食品添加剂，在食品生产过程中，以山梨酸钾代替苯甲酸钾和苯甲酸钠，有利于提高食品的安全性，符合健康消费的潮流。 掺有碳酸钾的山梨酸钾产品，在存放3个月之后，颜色会变成黄色或棕色。一些不法企业，便在伪劣产品中添加化工原料增白剂，以增加产品的白度、掩盖劣变后产生的黄色。据卫生专家介绍，这些化工增白剂会对人体的健康产生严重的危害。 一些小型企业生产的伪劣山梨酸钾，刚出车间时，色泽仍为白色。质次价低的山梨酸钾会发生变色、防腐效果差，价钱特低的山梨酸钾，肯定是质量不好. 据业内人士介绍，产品标准不完善，是伪劣山梨酸钾充斥市场的一个根本原因。我国现行的山梨酸钾国家标准是在参考美国FCC标准的基础上而制定的。在我国的国家标准和美国的FCC标准之中，对山梨酸钾纯度（含量）的判定是以“钾离子的含量”来衡量的。 山梨酸钾是以山梨酸和碳酸钾为原料，在经过化学反应后制作而成，其中的山梨酸根和钾离子结合成山梨酸钾。由于碳酸钾和苯甲酸钾的价格比山梨酸低，而在产品中违规添加碳