常用农药乐果_敌百虫对大鼠的联合生殖毒性实验研究[1]

砷的生殖毒性研究现状综述 作者：刘化一来源：中国知网维普网学号：2012515146 【摘要】：本文综述了砷对生殖发育功能的影响, 其中包括砷对生殖细胞的影响、砷对胚胎发育的影响。总结了砷的胚胎毒性作用机制，以及对砷中毒拮抗作用的物质的总述。 【关键词】：砷生殖毒性拮抗 【引言】：砷是一种环境毒物, 其对人畜的健康是有损害的，对生殖毒性也是不可忽视的。最近几年学者们对砷的生殖毒性研究进行了广泛而深入的研究。对砷的胚胎毒性作用有了一定了解。最近几年更多关注的是对砷的拮抗物质的研究，本文对这种拮抗作用也做一定综述。 1、砷对生殖细胞的影响及机制 环境雌激素（ESS）广泛存在于自然界中其种类繁多，其种类繁多，表现出拟天然激素或抗天然激素的作用，，ESS对人类生殖健康的威胁备受关注，有研究认为砷化物是一类潜在的环境雌激素物质。[1] 1.1砷对雄性生殖细胞的影响及机制 早期，砷的生殖发育毒性大多关注于雌性。近年来，砷暴露引起雄性生殖毒性也引起了广泛关注.越来越多的研究表明，许多生产生活中接触到的化学物质(包括砷在内)均可以损害男性生殖健康.环境内分泌十扰物对雌激素、皇丸酮、甲状腺激素等有显著影响，可导致代谢紊乱、生殖障碍，婴儿出生缺陷和发育异常以及某些恶性肿瘤的发生。[2] 普通环境条件下,砷暴露和男性精子质量存在一定的相关性. 结果显示血液中总砷含量与精子运动能力呈显著负相关.[3]聂继盛等人调查了饮水型砷暴露对男性精液质量的影响.结果表明,接触组(暴露剂量0.05~0.20 mg/L)人群血砷和精液砷含量 增高,且二者具有很强的相关性,说明砷可通过血睾屏障对男性生殖细胞产生损害. 精液质量参数表明,接触组人群精子活率、A 级精子百分率及顶体完整率显著低于对照组,精子畸形率高于对照组;且精液中砷含量与以上参数均具有显著相关性.[4]砷对精子活率、活力及正常形态都有损害，但对精子密度未见影响。砷是一种细胞

农药毒性分级标准 如何测定农药药剂的药效好坏？中国农药网相关专家总结有：通过室内毒力测定和林间药效试验。 室内毒力测定室内毒力测定主要是测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果，除可作为药剂的初步筛选的根据外，还可为林间试验提供参考。有时在林间发现的问题必须拿回室内作比较精细的试验研究。 进行室内试验要注意：①供试生物应该是由同一环境下培养得来的，或采自林间同一环境的，在生理、发育上愈一致愈好。②供试药剂必须纯净（原油或原粉），至少要有确切的有效成分含量。③在控制的条件下进行试验，施药要均匀一致。④试验一般要求每种处理有3－5个重复，每个处理要有50－100头昆虫（菌类孢子一般为在显微镜10×10视野内有100个左右，每次计算必须移动玻片检查3次）。⑤各种试验必须设立对照。所设对照有：完全不处理的（在自然状况下的），即所谓“空白”对照；不含有效成分的制剂或清水对照，用标准药剂处理的对照。 在测定药剂毒力时，一般常用一系列的剂量（或浓度）对多组生物分别测定死亡百分率，再以不同剂量与相应的死亡率画成“剂量－死亡率毒力曲线”。在纵坐标从死亡率50%处引出一平行于横坐标的线与曲线相交。该处的剂量（或浓度）即为LD50（或为LC50）。但是由于这一曲线是S形的，不易精确地求得LD50或LC50的数值，同时用S形曲线也不易与其他曲线进行比较。因此，必须把这一呈S形曲线改成一条直线，常用统计方法是将剂量用对数值表示，将死亡率用机率值表示，就可以将S形曲线改为一根直线，这一根直线常称“剂量对数-机率值直线”。死亡率查机率（见附表2机率与死亡百分率换算表）。从这一直线的坡度，还可得知供试生物对该种药剂敏感性差异的程度，即坡度越大，表示供试生物个体间差异越小；坡度越小，表示差异越大。室内毒力测定时，在不施药的对照组中，出常出现少数自然死亡的个体，如果自然死亡率在5%以下，一般仅把处理组的死亡率减去自然死亡率即可得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%~20~时，就不能用直接相减的方法，应按照下列公式计算处理组的校正死亡率，如果自然死亡率超过20%时，则该批供试生物不宜作试验或试验应重做。 林间药效试验林间试验主要测定或比较药剂在林间条件下的药效，其结果比较接近实际情况，为1973年世界卫生组织（WHO）执行委员会制订了一个区分农药危害性的分类法，并于1975年在第二十八届世界卫生会议上通过（表1）。农药毒性分类主要是根据对大鼠的急性经口和经皮毒性进行的，这在毒理学上已成为决定毒性分类的标准方法。 表1世界卫生组织推荐的农药危害分级标准 级别（class) LD50大鼠（毫克/公斤体重） 经口经皮

海尔福对铅致雄性小鼠生殖腺毒性的拮 抗作用 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：覃淑云，秦小云，张树球，方晓燕 【摘要】目的探讨海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性的拮抗作用。方法取健康昆明雄性小白鼠，随机分为对照组、染铅组、治疗组3个实验组，进行醋酸铅染毒亚慢性毒性实验，治疗组用海尔福进行治疗。结果醋酸铅染毒组雄性小鼠的生殖腺有不同程度的病理学改变，精子计数、直线运动精子数、活精子率下降，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率升高；海尔福治疗组小鼠的生殖腺病理学改变有不同程度的改善，精子计数、直线运动精子数、活精子率有所升高，而静止不动精子数、精子畸形率和初级精母细胞染色体畸变率有所降低。结论海尔福对铅所致的雄性小鼠生殖腺毒性有拮抗作用。 【关键词】海尔福；铅中毒；生殖毒性；诱变力试验；小鼠Abstract: Objective To explore Haierfu syrup in protection against lead poisoning on genital gland in male mice. Methods

Kunming male mice were randomly divided into control group, lead poisoning group and therapeutic group. Sub-chronic toxicity test was performed with lead acetate poisoning. The therapeutic group was given Haierfu syrup. Results In lead poisoning group, the pathological changes in genital glands of mice were obtained; sperm count, linear movement sperm and live sperm rate decreased; the elevated motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate were found. In Haierfu group, the pathological changes in genital glands of mice ameliated to different degree, sperm count, linear movement sperm and live sperm rate elevated, and motionless sperm, cacospermia and primary spermatocyte chromosome aberration rate decreased. Conclusion Haierfu syrup can prevent genital glands of male mice from lead poisoning. Key words: Haierfu syrup; lead poisoning; genital toxicity; mutagenicity tests; mice 铅是一种对人体有害的重金属元素，普遍存在于自然界中。环境中的生活性铅污染也很严重，铅对健康的影响已成为相当突出的社会问题。铅对健康的影响是多方面的，铅对雄性睾丸和附睾的毒性也得到了公认，人们对铅损害生殖腺的研究较多，但对用于干预铅损害生殖腺的研究报道较少，笔者通过观察海尔福对铅致小鼠性腺毒性的

有毒有害物质分类参考 一、化学药品、试剂毒性分类参考举例 （一）剧毒物质（＊为致癌） ＊六氯苯；羟基铁；氰化钠；氢氟酸；氢氰酸；氯化氰；氯化汞；砷酸汞；汞蒸气；砷化氢；光气；氟光气；磷化氢；＊三氧化二砷；有机磷化物；有机砷化物；有机氟化物；有机硼化物；＊铍及其化合物；蛇毒；＊羰基镍；砷酸盐；＊四甲基联苯胺（TMB）；四氯化饿；二甲砷酸盐；＊异硫氰酸苯脂；丙烯酰胺；马钱子碱；毒毛旋花素—G；＊二氨基联苯胺（DAB）；二甲亚砜；二甲砷酸钠；甲酚。 （二）致癌物质 黄曲霉素B13—4苯并芘；芘及苯并芘；苯及葸类；2—乙酰胺基芴；1—（或2—）萘胺；4—联苯胺类及其硫酸盐；4—氨基联苯；2，3—二甲基—4—氨基偶氮苯；磷甲苯胺；2，4—二氨基甲苯；乙酰胺N一芴基取代物；乙酰苯胺取代物；环磷酰胺；3，3—二氯联苯胺；4—二甲基胺基偶氮苯；4—硝基联苯；4—甲叉（双）—2氯苯胺；乙撑亚胺；间苯二酚；亚硝胺；二硝基萘；N—亚硝基二甲胺；甲基亚硝基脲；二甲（或乙、丙）基亚硝胺；N一甲基一N一亚硝基氨基甲酸乙酯；N—甲基一N—亚硝基丙烯胺；N—甲基—N一亚硝基—N’一硝基胍；N—甲基一4—亚硝基苯胺；B一丙内脂；甲烷磺酸甲酯（或乙酯）；丙磺内脂；重氮甲烷；1，4—二恶烷；二氯二甲硅烷；硫酸二甲脂；双氯甲基醚；氯甲甲醚；氯乙烯；溴乙烯；氟乙烯；砷；三氧化砷；砷酸钙（或铅、钾）；铍及其盐类；镉及其盐类；镍及其盐类；羰基镍；铬；氧化铬；铬盐类；石棉；氘代试剂。 （三）高毒物质 四氯化碳；三氯甲烷；溴甲烷；三氯乙烷；二溴氯丙烷；二氯乙烷；六氯乙烷；溴苯；氯苯；对二氯苯；氟乙酸；氯乙酸；氯乙酸乙酯；溴乙酸乙脂；氟乙酰胺；乙腈；丙烯腈；甲基丙烯腈；偶氮二异丁腈；丙酮氰醇；甲苯二异氰酸脂；二苯基甲烷二异氰酸脂；肼；甲基肼；苯肼；二苯肼；甲（或乙、丁）硫醇；二氯硅烷；三氯甲硅烷；硼烷；四乙基铅；四乙基锡；丙烯醛；乙烯酮；二乙烯酮；对苯二酚；苯胺及甲苯胺；三氯甲硅烷；碘乙酸乙脂；硫酸二甲脂；芳香胺；叠氮钠；三氯氧磷；五氯化磷；三氯化磷；五氧化二磷；黄磷；氧化亚氮；铊及其盐类；三氯化锑；二氧化锰；五氧化二钒；砷化钠；氟化钠；氯化氢；氯气；溴水；硫化氢；秋水仙碱。

国内外有关化学品急性毒性分级标准 以下为收集到的国内外有关化学品急性毒性分级的一些标准。从这些分级标准可以看出，各标准之间无论是分级还是界限值都有较大差别，这给化学品的国际贸易和化学品危险信息的传递带来了障碍和困难。为消除分级标准之间的差别，建立协调、统一的化学品分级标准，由国际劳工组织（ILO）、经济合作与发展组织（OECD）以及联合国危险货物运输专家委员会（TDG）三个国际组织共同提出框架草案，建立了全球化学品统一分类与标签制度（GHS）。2002年9月在约翰内斯堡召开的“联合国可持续发展世界首脑会议”提出：各国应在2008年全面实施GHS。为适应国际化学品分类统一的这种必然趋势，结合国内化学品管理的实际需要，《剧毒目录》在剧毒化学品判定标准上参照了GHS的急性毒性分级标准。 表1 GHS关于化学品急性毒性分级标准

注：1） 1h 数值气体和蒸气除2，粉尘和雾除4；2）某些受试化学品在试验染毒时呈气液相混合状态（有气溶胶），而有些则接近气相，如为后者按气体分级界限分级（ppm ） 表2 TDG 第14修订版关于危险货物急性毒性判定标准 * LC 50（4h ）×4＝LC 50（1h ） 表3 世界卫生组织关于化学品急性毒性分级标准

注：上述标准出处是WHO/IPCS. The User’s Manual for the IPCS Health and Safety Guides, 1996. 表4 世界卫生组织关于农药危险性分级标准

注：上述标准出处是The WHO Recommended Classification of Pesticides by Hazard and Guidelines to Classification 1990-1991. 表5 欧盟化学品急性毒性分级标准 注：上述标准出处是欧盟理事会《关于统一危险物质分类、包装与标志法律法规指令（2000/33/EEC）》.

农药的毒性、毒力、药效 在使用农药时，必然要遇到毒性、毒力、药效三个问题。三者的含义不同，但又是经常容易被混淆的问题。 (一)毒性是指药剂对人、畜等的毒害程度。我国现行对农药毒性测定是用纯药原药或制剂在大白鼠、小白鼠、兔、狗等试验动物身上测定，分急性毒性和慢性毒性两种。 1.急性毒性是指药剂经皮肤或经口、经呼吸道一次性进入动物体内较大剂量，在短时间内引起急性中毒。 农药毒性分级标准是以农药对大白鼠“致死量”表示，目前国内外通常用“致死中量”或叫半数致死量(LD50)表示。致死中量是指毒死半数受试动物剂量的对数平均数，即每千克(公斤)体重的动物所需药物的毫克数，记作“mg/kg(毫克/千克)”。LD50愈小，药物毒性愈大。根据我国《农药安全使用规定》，依致死中量分高毒、中等毒、低毒3种。高毒农药的使用范围有一定限制，国家有规定，使用时要遵守。 最小致死量(MLD)：即受试动物开始出现中毒症状而死亡的剂量； 全致死量(LD100)：指受试动物全部死亡所使用的最低剂量； 无作用剂量(NoEL)； 致死中浓度(LC50)：即在一定时间内受试动物死亡50%吸入剂量(毫克/立方米)； 耐药中量(TLM)：表示农药对鱼的毒性，一般用48小时内引起鱼半数死亡的浓度。标记为TLM48小时LC50(毫克/升)或用ppm(百分之一)； 致死中时间(LT50)：在一定条件下能杀死被试生物群体中一半数量所需的时间；

击倒中时间(KT50)：一定量药剂能击倒50%被试昆虫所需要的时间； 每日允许摄取量(ADI)：每天按人的体重(公斤)计算所能摄取的农药重量，在人的一生中不会造成对人体有害，单位mg/kg体重/天； 农药的半衰期：是指农药在某种条件下分解或消失一半所需的时间； 农药量最大容许残留量：供人类食用的农副产品中允许的农药最高限度的残留浓度。 2.慢性毒性是指供试动物在长期反复多次小剂量口服或接触一种农药后，经过一段时间累积到一定量所表现出的毒性。 无论急性或慢性中毒药剂均需要注意其是否有三致(致畸、致癌、致突变)作用。 致畸：引起动物畸形； 致癌：引起动物产生肿瘤； 致突变：引发遗传上的突然变异。 凡有三致作用的，均不能做农药使用。另外还有些农药对水生动物和鱼类、蜜蜂以及有益的天敌等有毒或二次中毒问题，使用时也要特别注意，或者忌用。 (二)毒力是指药剂本身对有害生物的毒害程度，多在室内人为控制条件下精密测定。 毒力的选择性亦很重要。所谓选择性，一般是指农药对虫、鼠的毒力强而对人、畜弱。选择性越强，毒力间差别越大，对人、畜威胁就越小，使用也越安全。但选择性也不宜过强，如果仅对几种病虫或几种鼠类有毒，则使用范围就会受到很大限制。

农药毒性的基本知识农药毒性的基本知识 常用农药的中毒及急救治疗 常用杀虫剂的中毒及急救治疗 1．有机磷类：有机磷农药杀虫效力高，对人畜的毒性也大。目前绝大多数的农药中毒是有机磷农药所引起的。如成人服用半滴对硫磷原液即可中毒，2～3滴就会引起死亡。 有机磷农药中毒作用是通过呼吸道、消化道及皮肤三种途径引起中毒。有机磷农药进入人体后通过血液、淋巴很快运送至全身各个器官，以肝脏含量最多，肾、肺、骨次之，肌肉及脑组织中含量少、其毒理作用是抑制人体内胆碱酯酶的活为，使胆碱酶失去分解乙酰胆碱的能力，使乙酰胆碱在体内积累过多。中毒原因主要是由于中枢性呼吸衰竭，呼吸肌瘫痪而窒息；支气管痉挛，支气管腔内积储粘液，肺水肿等加重呼吸衰竭，促进死亡。 （1）中毒症状：根据病情可分为轻、中、重三类。 ①轻度中毒症状：头痛、头昏、恶心、呕吐、多汗、无力、胸闷、视力模糊、胃口不佳等。 ②中度中毒症状：除上述轻度中毒症状外，还出现轻度呼吸困难、肌肉震颤、瞳孔缩小、精神恍惚、行走不稳、大汗、流涎、腹疼腹泻等。 ③重度中毒症状：除上述轻度和中度中毒症状外，还出现昏迷、抽搐、呼吸困难、口吐白沫、肺水肿、瞳孔缩小、大小便失禁、惊厥、呼吸麻痹等。早期或轻度中毒常被人忽视，并且其症状与感冒、中暑、肠炎等病相似，应引起足够的重视。有机磷农药引起的中毒症状可因品种不同而不同。乐果中毒症状的潜伏期较长，症状迁移时间也较长，还具多变的趋势，好转后也会出现反复，会突然再出现症状，易造成死亡。马拉硫磷误服中毒后病情严重，病程长，晚期也会有反复。敌敌畏口服中毒，很快出现昏迷，易发生呼吸麻痹，肺水肿和脑水肿；经皮中毒者出现头痛、头昏、腹痛、多汗、瞳孔缩小、面色苍白等，皮肤出现水疱和烧伤等症状。对硫磷、内吸磷经皮中毒，若头痛加剧表明中毒严重，中毒后对心肌损害明显，引起心肌收缩无力、低血压等循环衰竭。 （2）急救：将中毒者带离现场，到空气新鲜地方，清除毒物，脱掉污染的衣裤，立即冲洗皮肤或眼睛。对经口中毒者应立即采取引吐、洗胃、导泻等急救措施。 （3）治疗：及时正确地服用解毒药，用常用的有机磷解毒剂抗胆碱剂和胆碱酯酶复能剂。①用抗胆碱剂。阿托品是目前抢救有机磷农药中毒最有效的解毒剂之一，但对晚期呼吸麻痹无效。采用阿托品治疗必须早、足、快、复。对轻度中毒，用阿托品1～2毫克皮下注射，每4～6小时肌注或口服阿托品0．4～0．6毫克，直到症状消失。对中度中毒，用阿托品2～4毫克静脉注射，以后每15～30分钟重复注射1～2毫克，达到阿托品化后改用维持量，每4～6小时皮下注射0．5毫克。对经口中毒者，开始用阿托品2～4毫克静脉注射，以后每15～30分钟重复注射，达到阿托品化后每2～4小时静脉注射0．5～1毫克阿托品直到症状消失。对于重度中毒，经皮肤或呼吸道引起中毒者，开始用阿托品3～5毫克静脉注射，以后每10～30分钟重复注射，达阿托品化后用维持量每2～4小时静脉注射阿托品0.5～1毫克。对经消化道中毒者，开始用阿托品5～１０毫克静脉注射，以后每10～30分钟重复注射，达阿托品化后每1～2小时静脉注射阿托品0．5～2毫克直到中毒症状消失。 阿托品化的指标：瞳孔较前散大，心率增快至120次以上，嘴干燥，面色潮红，唾液分泌减少，肺部湿罗音减少消失，意识障碍减轻，昏迷者开始恢复，腹部膨胀，肠蠕动音减弱，膀要根据具体情况用不能只见某一指标达到即停药，以上指标必须综合判断，胱有尿潴留等。． 小剂量维持，以避免病情反复。注意事项：一是在诊断不明时不能盲目使用大剂量阿托品，以免造成阿托品中毒。二是严重缺氧者应立即给氧，保持呼吸畅通。同时以阿托品治疗。三是伴有

干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的应用实验结果分析 发表时间：2017-08-18T16:33:09.853Z 来源：《心理医生》2017年18期作者：裴斯彪王丹李林彭贤东[导读] 综上所述，干姜人参半夏汤在治疗脾胃虚寒型妊娠恶阻时，可采用小剂量进行治疗，不会产生妊娠毒性。 （南充市中心医院<川北医学院第二临床学院> 四川南充 637000）【摘要】目的：分析干姜人参半夏汤对妊娠小鼠生殖毒性的实验结果。方法：选取100只妊娠小鼠，将其随机分为4组，分别为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，所有小鼠均是在孕后第6～17天进行灌胃，第18天处死，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况及胎仔外观。结果：低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照 组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05）；四组活胎率、死胎率及吸收胎率进行两两组间对比，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察胎仔发现高剂量组出现头盖骨变大腹部裂开等情况。结论：小剂量的干姜人参半夏汤不会对妊娠小鼠产生妊娠毒性，随着剂量增加，逐渐增加胚胎畸形的发生率。【关键词】干姜人参半夏汤；妊娠小鼠；生殖毒性【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）18-0187-02 干姜人参半夏汤是由干姜、人参、半夏组成，其中半夏有“堕胎”的说法，现代药理证实，半夏有胚胎毒性，因此在治疗妊娠患者需慎用半夏[1]。但干姜人参半夏汤在发挥降逆功效时半夏发挥了重要作用。现笔者就干姜人参半夏汤对妊娠小鼠的生殖毒性进行实验研究，以便为孕期的安全用药提供理论依据。 1.资料与方法 1.1 实验材料 小鼠：选取性成熟清洁级小鼠150只，雌性小鼠100只，雄性小鼠50只，体质量平均（24.9±2.6）g，饲料为标准饲料。干姜人参半夏汤：依据金匮要略进行配置，干姜、生哂参各14g，生姜汁10滴，半夏28g，煎煮浓缩后保存于4℃的冰箱中备用。 1.2 实验方法 饲养条件：室温25℃，湿度40～70%，饲养标准鼠料，环境干燥清洁。确定妊娠：将2只雌性小鼠和1只雄性小鼠放置于一笼中，于每日9时检查雌性小鼠阴道口，如阴道口有阴栓，则将其取出，记录为受孕“0”天，分组饲养。 给药：随机将100只妊娠小鼠分为4组，空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组25只，均于孕后第6天（胚胎器官形成期）开始灌胃给药，至第17天（器官形成），空白对照组采用等体积蒸馏水进行灌胃，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给药量为原方剂量、3倍原方剂量、6倍原方剂量。 1.3 观察指标 所有小鼠均于妊娠第18天处死，剪开腹壁，取出子宫，称重子宫及胎，切开子宫，取出胎仔，观察妊娠小鼠的体质量增加、胚胎发育状况（死胎、活胎及吸收胎率）及胎仔外观。妊娠小鼠体质量增加=解剖体质量-受孕第“0”天体质量-子宫及胎质量。胎仔外观检查：检查头部是否器官完整、眼睛大小、是否有突眼等异常，是否露骨或脑膜膨出等；检查四肢是否多、并、少、无趾，有无足内外翻等畸形；检查躯干有无腹裂、脊髓膨出或裂开等；检查尾部是否短、卷、无尾或尾分叉等。 1.4 统计学分析 数据录入统计学软件SPSS 18.0，将计量资料（妊娠小鼠体质量及胎鼠体质量）、计数资料（死胎、活胎及吸收胎率）分别采用（x-±s）、（%）表示，并予以t检验、χ2检验，P≤0.05，差异有统计学意义。 2.结果 2.1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量 低剂量组与空白对照组体质量无明显差异（P＞0.05）；中剂量组、高剂量组体质量低于空白对照组，体质量增加低于空白对照组，子宫连胎鼠体质量低于空白对照组（P＜0.05），如表1所示。表1 妊娠小鼠及子宫连胎鼠体质量（x-±s）

生殖发育毒性试验设计和实施中应注意的问题 国家上海新药安全评价研究中心 常艳 2009年11月成都

汇报提纲 1 生育力和早期胚胎发育毒性试验 2 胚胎-胎仔发育毒性试验 3 围产期毒性试验 4 疫苗的生殖毒性评价 15 SD需要注意的共性问题

参考指导原则 -[ZH]GPT1-1：药物生殖毒性研究技术指导原则 [ZH]GPT11药物生殖毒性研究技术指导原则 -OECD414. Prenatal development toxicity study -OECD415.One generation reproduction toxicity study OECD 415. One generation reproduction toxicity study -OECD416. Two generation reproduction toxicity study -OECD421. Reproduction-developmental toxicity screening test -FDA-CFSAN-OPA Redbook 2000 IV_C_9_a_ Guidelines for Reproduction Studies -FDA-CFSAN-OPA Redbook 2000 IV_C_9_b_ Guidelines for FDA CFSAN OPA Redbook2000IV C9b Guidelines for Developmental Toxicity Studies -ICH S5A Reproduction toxicology __p gy -ICH_S5B_Male fertility

农药的毒性、毒力、药效在使用农药时，必然要遇到毒性、毒力、药效三个问题。三者的含义不同，但又是经常容易被混淆的问题。 (一)毒性是指药剂对人、畜等的毒害程度。我国现行对农药毒性测定是用纯药原药或制剂在大白鼠、小白鼠、兔、狗等试验动物身上测定，分急性毒性和慢性毒性两种。 1.急性毒性是指药剂经皮肤或经口、经呼吸道一次性进入动物体内较大剂量，在短时间内引起急性中毒。 农药毒性分级标准是以农药对大白鼠“致死量”表示，目前国内外通常用“致死中量”或叫半数致死量(LD50)表示。致死中量是指毒死半数受试动物剂量的对数平均数，即每千克(公斤)体重的动物所需药物的毫克数，记作“mg/kg(毫克/千克)”。LD50愈小，药物毒性愈大。根据我国《农药安全使用规定》，依致死中量分高毒、中等毒、低毒3种。高毒农药的使用范围有一定限制，国家有规定，使用时要遵守。 最小致死量(MLD)：即受试动物开始出现中毒症状而死亡的剂量； 全致死量(LD100)：指受试动物全部死亡所使用的最低剂量； 无作用剂量(NoEL)； 致死中浓度(LC50)：即在一定时间内受试动物死亡50%吸入剂量(毫克/立方米)； 耐药中量(TLM)：表示农药对鱼的毒性，一般用48小时内引起鱼半数死亡的浓度。标记为TLM48小时LC50(毫克/升)或用ppm(百分之一)； 致死中时间(LT50)：在一定条件下能杀死被试生物群体中一半数量所需的时间； 击倒中时间(KT50)：一定量药剂能击倒50%被试昆虫所需要的时间； 每日允许摄取量(ADI)：每天按人的体重(公斤)计算所能摄取的农药重量，在人的一生中不会造成对人体有害，单位mg/kg体重/天；

啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义 1.概述 生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。 生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示： 图1. 动物生命周期划分 A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。 B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。 C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。 D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。 E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。 F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。 各段试验研究阶段如下： 生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B 胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D 围产期毒性试验（III段）：C-F 1一般试验设计简介 1.1受试物 生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。 1.2实验动物 首选啮齿类动物为大鼠。在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。 1.3给药 1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。

国内外有关化学品急性毒 性分级标准 Prepared on 24 November 2020

国内外有关化学品急性毒性分级标准以下为收集到的国内外有关化学品急性毒性分级的一些标准。从这些分级标准可以看出，各标准之间无论是分级还是界限值都有较大差别，这给化学品的国际贸易和化学品危险信息的传递带来了障碍和困难。为消除分级标准之间的差别，建立协调、统一的化学品分级标准，由国际劳工组织（ILO）、经济合作与发展组织（OECD）以及联合国危险货物运输专家委员会（TDG）三个国际组织共同提出框架草案，建立了全球化学品统一分类与标签制度（GHS）。2002年9月在约翰内斯堡召开的“联合国可持续发展世界首脑会议”提出：各国应在2008年全面实施GHS。为适应国际化学品分类统一的这种必然趋势，结合国内化学品管理的实际需要，《剧毒目录》在剧毒化学品判定标准上参照了GHS的急性毒性分级标准。 表1 GHS关于化学品急性毒性分级标准

注：1） 1h 数值气体和蒸气除2，粉尘和雾除4；2）某些受试化学品在试验染毒时呈气液相混合状态（有气溶胶），而有些则接近气相，如为后者按气体分级界限分级（ppm ） 表2 TDG 第14修订版关于危险货物急性毒性判定标准 * LC 50（4h ）×4＝LC 50（1h ） 表 3 世界卫生组织关于化学品急性毒性分级标准 注：上述标准出处是WHO/IPCS. The User ’s Manual for the IPCS Health and Safety Guides, 1996. 表4 世界卫生组织关于农药危险性分级标准

注：上述标准出处是The WHO Recommended Classification of Pesticides by Hazard and Guidelines to Classification 1990-1991. 表5 欧盟化学品急性毒性分级标准

第二节生殖毒性及其评定 一、生殖毒性表现 外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。 二、生殖毒性作用的评定 外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。 （一）试验方法原则 生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。 最高剂量组轻度中毒的概念是进食量显著减少，体重明显下降。要求最高剂量组出现轻度中毒的目的是表明在已能引起中毒剂量下，如仍不致影响正常生殖过程，则表示该受试物确实不具有生殖毒性作用。反之，如剂量过低，则难于确定受试物是否确实不具有生殖毒性，有可能因剂量不足，未达到最小有作用剂量。 剂量的确定可用少数动物进行预试，如已进行过亚慢性和急性毒性试验，则最高剂量也可略高于亚慢性毒性试验中最大无作用剂量，或相当于LD50的1/10左右。最低剂量可相当于最高剂量的1/30。如经多次试验确实证实1 000mg／kg体重剂量对生育力无损害作用，或最高剂量可引起亲代动物表现一般毒性作用，但对生育力无不利影响，则可不进行其它剂量试验。

鱼毒性 指农药对鱼类造成的不良影响及危害，包括急性毒性、慢性毒性、胚胎毒性及致畸性。在安全评价中，通常只做急性毒性，一般以耐药中浓度（TLm）或致死中浓度（LC50）作为衡量指标。 目前，把农药对鱼的毒性以48小时的LC50值的大小分为三级： 低毒级LC50 >10mg/l（毫克/升） 中毒级LC50 1.0-10.0mg/l 高毒级LC50 0.1<1.0mg/l 剧毒级LC50 0.1< mg/l * 水蚤毒性 水蚤是水生动物中重要的类群，是鱼类的食料，也是水生食物链的重要环节。由于它对农药十分敏感，故常常把农药对其毒性作为评价农药环境安全性的一个指标。 农药对水蚤毒性的分级标准同鱼毒性。 * 藻类毒性 即表明农药对藻类细胞造成损害的能力，表现为对藻类的灭杀和生长抑制作用。其以半数生物受影响的EC50表示。对此，也常常作为评价农药对环境安全性评价的一个重要指标。 其分级参考标准为在96小时中EC50的大小。 低毒性EC50>3.0mg/l 中毒性EC503.0-0.3mg/l 高毒性EC50<0.3mg/l * 鸟毒性 即指农药对鸟类生长、繁殖及生理生化功能的影响及危害。包括急性毒性和慢性毒性两类，急性毒性多以LD50表示。下表即为我国国家环保局在《农药环境安全评价试验准则》中所定对鸟类急性毒性和蓄积毒性的评价标准。 农药对鸟类毒性的分级与评价 LD50 mg/kg 急性毒性蓄积系数蓄积毒性 <15 高毒<1 高度蓄积 15-50 中毒1-3 明显蓄积 3-5 中等蓄积 >150 低毒>5 轻度蓄积 * 对蜜蜂毒性 指农药对蜜蜂机体造成损害的能力，其以LD50或LC50表示。通常把对蜜蜂毒性分为高毒、中毒和低毒三级：

双酚A致雄性小鼠生殖毒性的研究 发表时间：2016-04-12T11:49:43.363Z 来源：《系统医学》2016年第2期作者：汤婷苏望宁王婷郭迅依范朝彪曾灿[导读] 长沙医学院双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。 长沙医学院湖南长沙 410219 【摘要】目的：探讨不同剂量双酚A(bisphend A，BPA)对雄性小鼠的生殖毒性的影响。方法：选取健康雄性小鼠，采用灌胃染毒，染毒4周后颈椎脱臼处死，观察精子形态，精子畸形率，精子活度，睾丸切片。结果：双酚A实验组，其中附睾脏器系数，精子畸形率，精子活度指标随着剂量的升高而呈正相关，具有一定的对比性。HE染色得出结果显示双酚A实验组小鼠附睾有损伤，生精小管出现坏死。结论：一定剂量的双酚A对雄性小鼠精子有生殖毒性。 【关键词】BPA；生殖毒性；雄性小鼠 【中图分类号】R114【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-067-02 双酚A(bisphend A，BPA)是一种酚类有机物，水中溶解度为120-300mg/L，具有难挥发性和疏水性，易溶于醇和酮。日常生活中人们可以通过饮食摄入、灰尘吸入和皮肤接触BPA[1-2]。在人的血液、尿液、胎盘、乳汁、羊水及其他体液等组织中能检测到BPA[3]。BPA是一种环境内分泌干扰物[4]，能够模拟雌激素的作用，与雌激素受体结合，干扰体内天然激素的正常活动，即使是极低剂量也能对生物体的生殖、神经、免疫等功能产生影响[5-6]。本实验旨在通过研究BPA对雄性小鼠的生殖毒性，试分析BPA致雄性小鼠生殖毒性的量-效关系，探讨BPA致雄性小鼠生殖毒性可能的作用机制。 1 材料与方法 1.1 仪器与设备 BPA，分析纯，中国上海化工试剂公司，生产编号B108652； 玉米油，药用级，中国上海化工试剂公司，生产编号C116025； 显微镜(Unican)HV2818，生产编号30108453； 电子分析天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）。 1.2 实验动物 选用湖南省疾控实验动物中心提供的普通级封闭群，KM群雄性小鼠，体重18g到22g，随机分成对照组，BPA低剂量组、BPA高剂量组。分别记为C组，B低剂量组、B高剂量组，每组3只动物，对照组采用玉米油做空白对照，BAF低组染毒剂量为50mg/kg BW, BAF高组剂量为200mg/kg BW。 1.3 实验方法 1.3.1形态学观察计算精子活动率、精子畸形率。 精子活动率：采用伊红染色法，将0.5g伊红Y染料溶于100mL等渗盐水中配成染色液。计数100条精子，计数的精子所占比例即为精子活动率。 精子活动率=活精子数/100 精子畸形率：取一侧附睾置于5 mL生理盐水中，剪碎，37 ℃孵育 15-20 min 后，制得精子悬液。每只动物检查1000 只精子，计算精子畸形率。 畸形率=畸形精子数/1000 1.3.2脏器系数迅速取出实验小鼠睾丸和附睾, 去除周围的脂肪组织和结缔组织，准确称量小鼠双侧睾丸和附睾的重量。脏器系数(%)=脏器体重(g)/小鼠体重(g)×100% 1.3.3形态学观察常规 HE 染色，石蜡切片，光学显微镜观察。 以上睾丸病理学染色、切片、拍照和读片将在长沙医学院病理学教研室老师指导下完成。 1.4 统计方法 所有实验数据均应用SPSS18.0统计软件录入分析，实验组和对照组数据采用方差分析和LSD法进行比较。 2 结果 2.1 一般情况 染毒后，低剂量小组实验小鼠体重有上升，高剂量组小鼠出现活动量减少，精神萎靡，进食量也有不同程度减少，停止染毒后逐渐好转；整个实验过程中高剂量组小鼠死亡 1 只。 2.2 BPA染毒对成年雄性小鼠精子畸形率，精子活度的影响 BPA染毒各组小鼠的精子活动率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，精子畸形率与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，附睾的脏器系数与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，结果见下表。 表BAF染毒对精子活动率, 精子畸形率,睾丸附睾脏器系数的影响(±s)

第八章农药的毒性 第一节概论 我国农药年生产能力约50-60万吨（按有效成分计），但年产量约35万吨，加工制剂80-100万吨。农药有效成分品种有400多个，产品约7000多个，我国农药品种以杀虫剂为主，约占72%，杀菌剂约占11%，除草剂约占15%，每年防治病虫草鼠害面积约44亿亩，可挽回15%左右的农产品损失，因此农药是必不可少的重要农业生产资料。自1990年起我国农药总产量已居世界第二位，每年有40多个品种出口到欧洲、东南亚、中远东、大洋洲及港台地区。同时约有100多个农药品种从国外进口。 ●定义 农药：指人们为杀灭或抑制对农业有害的生物而使用的各种化学药剂。 按作用对象分，包括杀虫剂、除草剂、杀细菌剂、杀真菌剂、杀螨剂、杀鼠剂。 按化学类群分： 无机农药 有机金属农药 有机农药：有机氯、有机磷、有机氮（氨基甲酸酯类、脒类-R1N=CH-R2、硫脲类-R1R3N-C=S-NR3R4、硫代氨基甲酰、取代脲）、植物性农药（拟除虫菊酯、鱼藤酮、木烟碱与烟碱） ●农药的发展 第一代农药：无机农药、天然植物及其产品 第二代农药：有机农药，1959年缪勒发明DDT开始1983年由国务院发文停止使用六六六和滴滴涕2004年1月1日，中国将开始撤销甲胺磷、久效磷、甲基对硫磷、对硫磷、磷胺5种高毒农药生产、销售、使用的有关证书；2007年1月1日，中国将全面禁止这5种高毒农药的使用。目前5种高毒农药的总产量约为10万吨/年，占农药总量的比例在20%-25%，产值则占总产值的15%左右，约为3亿第三代农药：保幼激素、蜕皮激素及几丁质合成酶抑制剂 第四代农药：行为改性药，如信息素、性诱激素及抗进食剂 第五代农药：新型天然产物和脑激素拮抗物 一、农药在环境中的迁移与分布 影响因素: 内因：农药的溶解度、挥发性、电荷分布、大小、 外因：吸附作用、水及空气流动、光、温度、pH、生物作用 （一）农药在土壤中的迁移与分布 进入途径：使用农药时黏附在农作物上的占30％，其余落入土壤，而使用除草剂及应用浸种、拌种等方式施药，直接将农药施入土中。此外雨水冲洗也可将农药带入土中。 迁移：大量流动与扩散两种作用。大量流动致翻耕、地表径流、土壤水渗滤、淋溶引起，扩散作用与土壤性质有关。 影响迁移因素中吸附作用最主要，包括： （1）物理吸附 （2）化学吸附（离子吸附、质子化、氢键结合） （3）配位作用 转化： 非生物降解：化学水解、光化学分解及氧化还原 生物降解：细菌、真菌、放线菌、酵母、单细胞藻类等可将农药分解为无机物 （二）农药在水体中的迁移与分布 污染途径： （1）直接施入水中：污染局限于局部

收稿日期：2011－11－07 基金项目：四川省教育厅基金项目（09ZB131） 作者简介：李祥（1976—），男，讲师，从事职业卫生与职业医学研究。 十溴联苯醚对雄性大鼠生殖系统的影响 Influence of brominated diphenyl ethers-209exposure on genital system of male rat 李祥1，汤艳1，李华2，尹漫3，尹燕3，蔡金桦3，黄雯钰 3 LI Xiang 1，TANG Yan 1，LI Hua 2，YIN Man 3，YIN Yan 3，CAI Jin-hua 3，HUANG Wen-yu 3 （1．泸州医学院公共卫生系环卫与劳卫教研室，四川泸州646000；2．泸州医学院药理教研室，四川泸州646000；3．泸州医学院预防医学专业2007级，四川泸州646000） 摘要：将60只SD 雄性大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组及BDE-209低、中、高（250mg /kg ，500mg /kg ，1000mg /kg ）剂量组，每天灌胃1次，持续30d ；显微镜下观察并计算大鼠精子的数量、活动度和畸形率；应用放射免疫法测定雄性大鼠血清中睾酮（testosterone ，T ）、黄体生成素（luteinizing hormone ，LH ）、卵泡刺激素（follicle stimula-ting hormone ，FSH ）的水平。与对照组比较，BDE-209染毒组大鼠睾丸和附睾脏器系数明显下降，大鼠睾丸和附睾脏器系数与染毒剂量存在效应关系（P ＜0.05）。BDE-209染毒组大鼠精子数量和精子活动度明显低于对照组，精子畸形率明显高于对照组，大鼠精子的数量、活动度和畸形率与染毒剂量存在效应关系（P ＜0.05）。BDE-209染毒组大鼠血清中T 、LH 和FSH 水平明显低于对照组，且呈剂量-效应关系。提示BDE-209亚急性染毒对雄性成年大鼠具有一定的生殖毒性。 关键词：十溴联苯醚；睾丸；附睾；精子；激素中图分类号：R994 文献标识码：B 文章编号：1002－221X （2012）03－0214－02 十溴联苯醚（brominated diphenyl ethers-209，BDE-209）是市场上需求量最大的一类多溴联苯醚，作为一种溴系阻燃剂，广泛用于耐冲击性聚苯乙烯、聚酯、聚酰胺、纺织品和电子产品的添加剂。BDE-209的挥发性低、水溶性低，在环境中比较稳定，主要存在于河流沉积物、底泥和生物性固体（城市污水厂污泥和部分生活垃圾）以及空气的悬浮颗粒中形成持续污染［1］ 。BDE-209主要是通过空气颗粒物吸入途径暴 露于电脑从业人员、橡胶工人、电子垃圾回收工人等职业人 群 ［2 4］ ；实验研究发现BDE-209具有一定的生殖发育及遗传毒性 ［5 8］ 。本研究拟通过观察BDE-209亚慢性染毒对成年雄 性大鼠精子数量、质量以及血清中激素水平的影响，探讨BDE-209的生殖毒性。1 材料与方法1.1 实验动物 SPF 级成年雄性Sprague Dawley 大鼠96只（第三军医大学动物实验中心），体重250 300g ，活动能力相近，大鼠合格证号为SCXK （渝）2007-0005。 1.2主要仪器与试剂 BDE-209（纯度100%，美国Accustandard 公司），T 、 LH 、FSH 放射免疫试剂盒（上海瑞生生物有限公司）。F-646A 型微机单头放射免疫仪（北京核仪器厂）。1.3 动物模型的建立 将60只SD 成年雄性大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、BDE-209低剂量（250mg /kg ）组、中剂量（500mg /kg ）组、高剂量（1000mg /kg ）组，每组12只。每天上午9：00 11：00，对BDE-209低、中、高剂量组分别按250、500、1000mg /kg 灌胃给予BDE-209，对照组按1000mg /kg 灌胃给予纯花生油，连续灌胃30d 。1.4 睾丸、附睾脏器系数 染毒结束后，称重麻醉，立即取双侧睾丸和附睾，用4?预冷的生理氯化钠洗尽血液，吸干水分称重并计算睾丸和附睾的脏器系数。 脏器系数（%）=（脏器系数湿重/体重） ?100% 1.5 精子数量及质量的检测1.5.1 精子数量计数 将称重后的附睾，置于盛有3ml PBS 缓冲液的培养皿内，用眼科剪剪成小块，吸管轻轻吹打悬液5 6次，静置3 5min ，制成悬液。取精子悬液1滴滴入红细胞计数板，在40倍光学显微镜下记数5个中方格的精子数，重复记数3次，取其平均值作为最后的结果。1.5.2 精子活动度的测定 取一滴悬液于清洁载玻片上，其 上覆盖玻片，在高倍镜下计数5个视野精子数，分别记录各级精子数，计算出精子活动度。标准如下： （0）不活动， （Ⅰ）不向前运动或原地打转，（Ⅱ）慢速向前或旋转向前，（Ⅲ）中速直线向前运动，（Ⅳ）快速直线向前运动。 活动度（%）=（Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ）/（0+Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ +Ⅳ）?100% 1.5.3 精子畸形率的测定 将制备好的精子悬液用4层擦镜 滤纸滤除组织碎片，吸取此悬液1滴于清洁载玻片上，均匀涂片，待玻片晾干后用甲醇固定5min ，干燥后用2%的伊红水溶液染色1h 。在高倍镜下观察精子形态，每只小鼠检查完整精子1000条。记录并计算精子畸形率。 精子畸形率（%）=畸形精子数/1000?100% 1.6 血清中T 、LH 、FSH 的测定 染毒结束后，称重麻醉，取静脉血，静止30min ，3000r /min ，离心5min ，取血清。用放射免疫法测定T 、LH 、FSH 的水平。1.7 统计分析