多克隆抗体制备免疫小鼠
多克隆抗体制备免疫小鼠是一种常用的制备多克隆抗体的方法。下面是具体的步骤：
1. 选择抗原：首先需要确定所需要制备抗体的抗原。抗原可以是蛋白质、多肽、多糖等。
2. 免疫小鼠：将所选抗原注射到小鼠体内，以诱导其产生特异性抗体。通常，抗原会和佐剂（如完全弗氏佐剂）混合，以增强免疫响应。
3. 免疫程序：将抗原注射到小鼠体内，通常分为初次免疫和加强免疫两个阶段。初次免疫后，会进行一定的间隔时间（通常是2-4周）再次注射抗原，以增强免疫效果。
4. 细胞融合：在小鼠免疫后，从其脾脏中采集免疫细胞
（通常是脾细胞），与骨髓瘤细胞（如SP2/0或NS1等）进行细胞融合。
5. 筛选和培养：将融合细胞进行稀释后，接种到培养基中，以培养成杂交瘤细胞。培养基中通常会添加相应的选择剂，以选择出杂交瘤细胞。
6. 克隆筛选：将培养出的杂交瘤细胞进行单克隆化，即分
离成单个克隆细胞。这可以通过稀释法或细胞限 dilution
法来进行。
7. 抗体鉴定：对筛选出的单克隆细胞进行抗体鉴定，通常
采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫组化技术来检测抗体的特异性和亲和力。
8. 抗体生产：经过抗体鉴定后，将选出的单克隆细胞培养
扩大，并进行大规模的培养和抗体生产。
多克隆抗体制备免疫小鼠的主要优点是可以获得多种不同
的抗体，具有较高的灵敏性和多样性。然而，由于免疫小
鼠需要一定的时间来产生抗体，需要一定的动物资源和成
本支出，而且制备的抗体可能存在一定的批次变异。因此，每个实验室需要根据自己的需求和实际情况来选择适合自
己的抗体制备方法。
多克隆抗体制备免疫小鼠 简介 多克隆抗体制备是一种常用的实验技术，用于获得特定蛋白质及其表位的抗体。免疫小鼠是多克隆抗体制备的常见动物模型之一。本文将介绍多克隆抗体制备免疫小鼠的一般流程和关键步骤。 流程 多克隆抗体制备免疫小鼠的流程主要包括以下几个步骤： 1.抗原制备：准备目标蛋白质作为免疫小鼠的抗原， 可以是纯化的蛋白质、重组蛋白质或合成的多肽。 2.免疫小鼠：将抗原与适当的佐剂混合，注射到小鼠 体内，观察免疫反应情况。 3.收集抗体：采集小鼠的血液样本，离心分离血清， 获得抗体。 4.抗体筛选：使用各种筛选方法（如酶联免疫吸附试 验、免疫组织化学染色等）筛选出特异性较好的抗体。
5.抗体纯化：通过亲和层析、离子交换层析等技术， 对抗体进行纯化，得到高纯度的抗体。 关键步骤 抗原制备 抗原制备是多克隆抗体制备的关键步骤之一。抗原质量的好坏直接影响免疫小鼠及最终制备的抗体的质量。以下是一些常见的抗原制备方法： •纯化蛋白质：通过基于亲和层析、离子交换层析等技术，从含有目标蛋白质的来源中纯化目标蛋白质。 •重组蛋白质：利用基因工程技术在大肠杆菌或其他表达系统中表达目标蛋白质，然后通过亲和层析或其他纯化方法纯化目标蛋白质。 •合成多肽：合成目标蛋白质的特定片段或多肽，用于免疫小鼠。 适当的佐剂 适当的佐剂对于免疫小鼠产生良好的免疫响应非常重要。佐剂的作用是增强抗原的免疫原性和稳定性，促进免疫细胞的
活化。常用的佐剂包括完全佐剂（如完全弗氏佐剂）和不完全佐剂（如不完全弗氏佐剂）。 免疫小鼠免疫 将抗原与适当的佐剂混合后，通过皮下注射、腹腔注射等 方式将抗原注射到小鼠体内。注射后，可以观察小鼠的免疫反应情况，如产生抗原特异性抗体。 血液采集和抗体收集 一段时间后，如一般在免疫小鼠体内产生可检测到的抗体，可以采用静脉采血的方式采集小鼠的血液。血液离心后，就可以获得含有抗体的血清。 抗体筛选和纯化 获得含有抗体的血清后，可以使用各种筛选方法对抗体进 行筛选，如酶联免疫吸附试验（ELISA），免疫组织化学染色等。筛选出特异性较好的抗体后，可以通过亲和层析、离子交换层析等技术对抗体进行纯化，得到高纯度的抗体。
小鼠抗绵羊红细胞抗体的制备及检测&豚鼠超敏实验实验报告 实验一：小鼠抗绵羊红细胞抗体的制备及检测 【实验原理】： 一、小鼠抗绵羊红细胞抗体（多克隆抗体）的制备： 特异性体液免疫应答中，抗原可刺激机体产生特异性抗体。每个抗原分子表面常带有多种不同的抗原决定簇（表位），可被机体内不同特异性的B细胞克隆识别并产生不同特异性的抗体。因此以抗原免疫动物所产生的免疫血清实际上是针对该抗原表面不同表位的多种抗体的混合物，又称为多克隆抗体。 用纯化抗原免疫动物是制备多克隆抗体的常用方法。免疫血清的效价和特异性主要取决于抗原和实验动物两方面的因素。欲获得高效价的免疫血清，需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性；并适时地加强免疫以诱导机体的再次应答。欲获得高特异性的免疫血清，则必须保证抗原的纯度，在条件许可的范围内应对抗原进行最大限度的纯化。此外，抗原的剂量、免疫途径、免疫时间以及动物和佐剂的选择等，都是影响免疫血清效价和特异性的重要因素。 二、小鼠抗绵羊红细胞抗体的检测（酶联免疫吸附实验） 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。具有灵敏度高、特异性强、快速方便等优点，是免疫学技术中应用最广的方法之一。它以酶作为标记物，与抗体或抗原联结，与相应的抗原或抗体作用后，通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量检测，即酶联免疫吸附实验（ELISA），亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶联免疫组织化学技术。酶与抗体或抗原后，既不改变抗体或抗原的免疫学反应的特异性，也不影响酶本身的酶学活性。 根据检测目的和操作步骤不同，ELISA有双抗体夹心法、间接法、竞争法三种类型的常用方法。本次实验使用间接法对小鼠抗绵羊红细胞抗体的检测。 【实验方法】： 一、抗绵羊红细胞抗体（多克隆抗体）的制备 1.C的制备：脱纤维防凝处理的绵羊血，加入适量生理盐水混匀，2000rpm离心 5min，弃上清，再加入适量生理盐水混匀，2000rpm离心5min，弃 上清，利用生理盐水分别配制成20%和40%体积浓度的SRBC悬液。 2.小鼠免疫：利用上述不同浓度的SRBC悬液（本组使用20%浓度SRBC悬液）给 小鼠免疫，腹股沟皮下注射，每周1次，连续3周，每次0.1ml。 注意做好标志。 二、鼠抗绵羊红细胞抗体的检测（酶联免疫吸附实验） ①取出包被好抗原的酶标板（4孔/组），甩干孔内液体，以洗涤液（200μ
小鼠LIGHT胞外段基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的 制备 【摘要】目的：pcr扩增小鼠light胞外段基因（lightecd），构建含lightecd的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，并免疫新西兰兔，制备多克隆抗体。方法：提取小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中的总mrna，rt-pcr技术扩增lightecd，克隆至原核表达质粒pgex-6p-2中，构建重组表达载体pgex-6p-2-lightecd。重组质粒进行pcr和基因测序鉴定后，转化大肠杆菌xl-1 blue，iptg 诱导表达。融合蛋白纯化后纯化后免疫新西兰兔，elisa 及western- blot 分析兔血清中抗lightecd抗体的效价和特异性。结果：rt-pcr扩增得到525 bp lightecd目的片段；经pcr和测序鉴定，证明构建的重组质粒中插入的片段为lightecd基因，测序结果经blast分析，与genbank上登录序列完全一致；经iptg诱导，重组质粒表达一相对分子量（mr）约为45kd的目的蛋白条带。elisa 检测免疫兔血清效价为1∶20 000。结论：成功地克隆了小鼠light胞外段基因，并表达了相应可溶性蛋白，准备了高效价的兔抗lightecd多克隆抗体，为进一步研究其功能奠定了基础。【关键词】light；原核表达；免疫原性；多克隆抗体 light （lymphotoxin-like inducible protein that competes with glycoprotein d for herpesvirus entry on t cells）最早是mauri等[1]在对单纯疱疹病毒入侵活化t细胞的研究中发现的，是肿瘤坏死因子超家族的第14个成员，又名hvem-l （herpesvirus
多克隆抗体技术及其制备技术 1.多克隆抗体的概念 抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B 淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD 等五类抗体。 2.免疫动物 供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。 免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。 抗原是多种多样的，而且千差万别。就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。为了获得较好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原，如要制备用于筛选细菌表达的cDNA文库或免疫印迹的抗血清，最好选用可降解的蛋白质抗原。不同的抗原，其免疫原性的强弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。 抗原的免疫剂量是依照给予动物的种类、免疫周期以及所要求的抗体特性等不
多克隆抗体的应用及现状 多克隆抗体是由多个B细胞克隆产生的抗体群体，与单克隆抗体相比具有更强的多样性和高度的特异性。多克隆抗体广泛应用于生物医学研究、临床诊断和治疗等领域，成为重要的实验和临床工具。本文将从多克隆抗体的制备、应用以及现状三个方面进行详细介绍。 首先，多克隆抗体的制备是实现其应用的基础。多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：首先，将目标抗原免疫动物（如兔、小鼠等）多次注射，刺激其产生特异性抗体。然后，从动物体内收集血清，分离抗体。接着，将抗体与大量不同的抗原冲突，筛选出特异性较高的抗体克隆。最后，对特异性较高的抗体进行扩增和提纯，得到多克隆抗体。 多克隆抗体的应用广泛涉及多个领域。在生物医学研究中，多克隆抗体常用于蛋白质表达与定位、蛋白质相互作用和信号转导的研究。例如，通过使用多克隆抗体可以检测特定蛋白在细胞内的定位和表达水平，进一步了解其功能及参与的生物过程。此外，多克隆抗体还可以用于免疫组织化学、免疫印迹和流式细胞术等实验技术，以便更全面地研究生物学问题。 在临床诊断中，多克隆抗体也有重要应用。多克隆抗体可以用于特定抗原的定量测定，如肿瘤标志物的测定、感染病原体的检测等。同时，多克隆抗体也可以用于免疫组织化学检测，辅助病理诊断。另外，多克隆抗体还广泛应用于临床病原体的荧光染色和免疫组化检测，用于快速定位和识别病原体，提高诊断效率。
在治疗领域，多克隆抗体已经取得了巨大的成功。多克隆抗体可以用于治疗多种疾病，如癌症、自身免疫疾病等。通过靶向特定抗原，多克隆抗体可以选择性地破坏癌细胞，抑制肿瘤生长和转移。此外，多克隆抗体还可以通过激活免疫系统来增强机体对疾病的免疫反应。近年来，许多多克隆抗体药物已经获得上市和临床使用，成为治疗疾病的重要手段。 然而，多克隆抗体也存在一些局限性和挑战。首先，多克隆抗体制备过程中存在批次差异，导致抗体的特异性和亲和力有一定的波动性。此外，多克隆抗体的批量生产和提纯成本较高，难以大规模应用。为了解决这些问题，近年来，单克隆抗体的发展和应用得到了快速发展。单克隆抗体是由单个B细胞克隆产生的抗体，具有更强的特异性和一致性。单克隆抗体已经成为当前生物医学研究和临床治疗的主流。 综上所述，多克隆抗体在生物医学研究、临床诊断和治疗等领域具有广泛的应用前景。随着单克隆抗体技术的不断发展和改进，预计多克隆抗体将逐渐被单克隆抗体所取代。然而，多克隆抗体作为一种重要的研究工具和药物，仍然存在一定的应用空间，并且在某些特定情况下可能仍然是更好的选择。因此，多克隆抗体的研究和应用仍然具有重要意义，在未来仍将继续发展。
多克隆抗体名词解释 多克隆抗体是指由多个B细胞克隆所产生的抗体，能够针对 同一种抗原的多个不同的位点进行识别和结合。与单克隆抗体相比，多克隆抗体具有更高的亲和力和更广泛的抗原识别能力。多克隆抗体因其独特的特性被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程等领域。 多克隆抗体的制备过程通常包括以下几个步骤：首先，通过免疫动物（如小鼠、兔子等）免疫目标抗原，以激发其免疫系统产生抗体。接着，从免疫动物体内采集血清，其中包含了众多的B细胞克隆所产生的不同抗体。再经过一系列的加工和处理，如离心、加热灭活等，最终得到多克隆抗体产品。 多克隆抗体具有以下几个优点：首先，多克隆抗体能够识别和结合抗原的不同位点，从而提高抗原的检测敏感性和特异性。其次，多克隆抗体可用于大规模和复杂多样的抗原检测，覆盖范围广，适用性强。此外，多克隆抗体的制备工艺相对简单，成本较低。 然而，多克隆抗体也存在一些局限性。首先，多克隆抗体的制备过程中可能会产生一些非特异性的抗体，从而降低了其特异性和纯度。其次，多克隆抗体在不同免疫动物体内可能会产生批次差异，导致其品质和稳定性存在一定的波动。此外，多克隆抗体由于来源于免疫动物，可能存在个体差异和免疫相容性问题。 为了克服多克隆抗体的局限性，科学家们也不断努力进行研究
和改进。例如，通过筛选和优化制备过程，可以提高多克隆抗体的特异性和纯度。此外，还可以利用单克隆抗体技术将多克隆抗体中特异性较高的成分筛选出来，以获得更具特异性和统一性的抗体产品。 综上所述，多克隆抗体是一种能够针对同一种抗原的多个不同位点进行识别和结合的抗体。多克隆抗体具有广泛的应用价值，但也存在一些局限性。通过不断的研究和改进，科学家们正在努力提高多克隆抗体的质量和稳定性。
多克隆抗体的名词解释 多克隆抗体（Polyclonal Antibodies）指的是由多个免疫细胞分泌的抗体所组成 的混合群集。它们的产生源于免疫系统对外来抗原的免疫应答过程。多克隆抗体的形成包括多个B细胞克隆繁殖和分化，每个克隆细胞产生的抗体略有不同，因此 呈现多样性。 多克隆抗体的制备可通过动物免疫或体外方法获得。动物免疫法是最常用的制 备多克隆抗体的方法之一。在此方法中，动物（如小鼠、兔子等）被注射具有抗原性的物质，刺激免疫系统产生抗体。随着时间的推移，免疫系统会生成多个B细 胞克隆，每个克隆都会产生特定的抗体。继而，从动物体内采集血清以获得多克隆抗体。 体外方法也能制备多克隆抗体，它通过将抗原添加到体外培养的免疫细胞中， 例如淋巴细胞或骨髓细胞。这些免疫细胞与抗原接触后，会分泌出一系列具有不同特异性的抗体。 多克隆抗体在科学研究和诊断应用中具有广泛的用途。首先，多克隆抗体能够 同时识别多个抗原表位，因为通过免疫原处理产生的抗体是由多个克隆细胞所分泌，因此对目标抗原具有多个抗体的覆盖，增加了检测的灵敏性和特异性。此外，多克隆抗体还具有在不同实验条件下鲁棒的可重复性，使其成为许多实验室中常用的工具。 在疾病诊断中，多克隆抗体也发挥着重要的作用。通过制备针对特定疾病标记 物的多克隆抗体，可以进行准确、敏感的疾病检测。例如，在癌症早期筛查中，通过使用针对特定癌细胞标志物的多克隆抗体，可以帮助识别早期癌症病例。多克隆抗体还广泛应用于生物医药研究中，在药物研发、蛋白质识别和定量分析等领域发挥着重要角色。
然而，多克隆抗体也存在一些局限性。由于多克隆抗体是由免疫细胞分泌的抗 体混合物，其中可能存在非特异性抗体，这些抗体无法区分目标抗原。此外，多克隆抗体的制备涉及动物实验，存在动物福利和伦理问题，因此在科研界推动开发替代方法以避免或减少动物免疫的使用。 总的来说，多克隆抗体是一类由多个克隆B细胞分泌的抗体所组成的抗体混合物。多克隆抗体广泛应用于科学研究和诊断应用中，具有多样性和灵敏性优势，为疾病检测和药物研发提供了有力的工具。然而，进一步的研究和创新仍然需要努力，以克服多克隆抗体的局限性并完善其应用。
多克隆抗体 传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经不同途径免疫动物，由于抗原性物质具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇的抗体，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物，所以称这种免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体（polyclonal antibody ，PcAb）。多克隆抗体的亲和力较一般单克隆抗体高。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为制备高效价和高特异性的多克隆抗体，必须要有理想的免疫原、适宜的动物及切实可行的免疫方法。本章主要介绍多克隆抗体的制备及相关技术。 第一节动物选择实验动物是生物医学中的重要组成部分。目前常用于生物医学科学研究的实验动物种类很多，主要包括有两栖纲的青蛙、蟾蜍，鸟纲的鸡、鸭、鸽等，哺乳纲啮齿目的小鼠、大鼠、豚鼠等，兔形目的家兔，食肉目的猫、狗，有蹄目的羊、猪和灵长目的恒河猴、猩猩、绒猴等。其中最常用和用量最大的是哺乳纲啮齿目动物，其次是兔形目和食肉目等。 一、实验动物的生物学特性 实验动物选择得当与否是实验研究成败关键之一。掌握实验动物的生物学特性，则能以最佳的设计选择实验动物，进行科学实验，从而获得预期的实验结果。 1. 小鼠小鼠是啮齿目中体型较小的动物。新生小鼠 1.5g 左右，21 天断乳时12～15g，至 2 月龄体重达20g 以上，可供实验使用。成年雌小鼠体重18~35g，成年雄鼠体重20~40g。小鼠性情温顺，易于捕捉，对外来刺激敏感，喜群居于阴暗环境。 2 ．兔草食性动物，性情温顺，胆小易惊，喜居安静、清洁、干燥、凉爽、空气新鲜的环境，耐冷不耐热，耐于不耐湿。兔耳大，表面分布有清晰的血管。有特殊的血清型和唾液型，血清型分为α ' 、β ' 、α'β'和O型四种。α ' 、α' β'型易产生人A型抗体，β ' 、O型易产生人B型抗体。唾液型分两种：排出型与非排出型。排出型易获得人血细胞 A 型物质，非排出型不易获得，这种A型物质与A型抗体产生
多克隆抗体的制备方法 多克隆抗体是由多个不同的免疫细胞（多克隆）产生的抗体混合物，可以识别并结合到目标生物标志物上。多克隆抗体在科学研究、临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。制备多克隆抗体需要经过一系列复杂的实验流程，下面将详细介绍多克隆抗体的制备方法。 一、抗原的选择 在制备多克隆抗体时，首先需要选择一个合适的抗原。抗原通常是目标生物标志物的蛋白质或多肽片段。选择抗原的关键因素包括其表达水平、稳定性和纯度。抗原的选择直接影响到最终多克隆抗体的亲和力和特异性。 二、免疫小动物 免疫小动物通常是用于制备多克隆抗体的主要实验动物，例如小鼠、兔子、大鼠等。在免疫前需要确保小动物健康，并对其进行相应的预处理，如注射驱虫药物、进行适当的接种。还需要根据具体实验要求决定预免疫、免疫计划以及免疫方案的制定。 三、免疫过程 免疫过程是制备多克隆抗体的核心环节。首先需将抗原与适当的佐剂混合，增强免疫原性，然后用于免疫小动物。在免疫过程中需要控制免疫剂量和免疫间隔时间，以及监测动物的免疫应答情况。免疫后还需要定期采集血清样本，监测抗体滴度的动态变化。 四、细胞融合与筛选 经过一段时间的免疫后，需要从免疫动物的脾脏或骨髓中收集免疫细胞，然后与肿瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。随后采用限稀稀释法将杂交瘤细胞进行单克隆化分，筛选出高亲和力的多克隆抗体细胞株。 五、生产与纯化 经过筛选的多克隆抗体细胞株需要进行扩大培养，生产足够数量的多克隆抗体。之后通过蛋白质纯化技术，如亲和层析、离子交换层析等手段，从细胞培养上清液中纯化出多克隆抗体。 六、性质鉴定与应用 纯化后的多克隆抗体需进行性质鉴定，包括亲和力、特异性、稳定性等方面的测试。最后经过滤菌毒处理后，多克隆抗体可应用于科学研究、临床诊断、生物药物研发等领域。
抗体的制备方法与原理 一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。 （二）免疫途径
免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。 （三）佐剂 由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。 佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。
常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。 配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。 免疫佐剂
CHIKVNSP1蛋白鼠源多克隆抗体的制备 一：实验目的 制备针对CHIKVNSP1的鼠源多克隆抗体 二：实验材料 1.pET28a-CHIKV-NSP1的Rossata菌株 2．IPTG,超声裂解液，蛋白纯化试剂等 三：实验动物 小鼠 四：实验技术路线 1．诱导NSP1蛋白表达，并对目的蛋白进行纯化； 2．将纯化后的CHIKVC蛋白免疫小鼠； 3．免疫后收集血清，利用western-blot检测能否与天然病毒蛋白NSP1结合；五：实验方法 1.进行CHIKV- NSP1蛋白诱导表达 用5ml kan抗性LB培养基复苏Rossata菌株，37℃，220转分摇床培养至OD值为0.6-0.8时，转接入30mlkan抗性LB培养基中。37℃，220转分摇床培养至OD值为0.6-0.8时按终浓度为0.8mM的浓度加入IPTG进行诱导表达，16℃，220转分，诱导12小时。 配制：超声裂解液（1L） 50mM Tris（PH7.4）+150 mM NaCl+2 mM EDTA+0.1% Triton X-100 Tris-base: m=CMV=50×10-3×121.14×1=6.057g NaCl: m=CMV=150×10-3×58.44×1=8.766g EDTA: m=CMV=2×10-3×372.2×1=0.7444g Tris-base、NaCl和EDTA加入900ml ddH2O溶解后，用HCl调节PH为7.4，最后补足至1L。
将诱导后的细菌，4000转分，4℃离心15分钟，收集菌体。获得的菌体沉 淀用4℃预冷的PBS（PH 7.4）洗涤3次，每次4000转分，4℃离心15分钟。洗 涤后的菌体，按原始培养体积110的比例加入超声裂解液，冰浴超声破碎细胞（工 作时间2秒，暂停时间5秒，功率400W，工作次数198次）。超声裂解后的菌 体，12000转分，4℃离心15分钟，分别收集上清液和沉淀，加入SDS-PAGE上 样缓冲液处理后电泳，确定目的蛋白表达的形式（可溶性表达或者包涵体形式表 达），纯化目的蛋白。 六免疫动物制备多抗（参考动物房兔源多抗制备方案） 试验动物：小鼠，免疫前采血制备阴性血清 免疫次数：3次 免疫间隔时间：2周 免疫抗原量：每次50-100μg，体积100-200ul（不超150ul），等量加佐剂，每只小鼠每次注射总体积不超300ul 第3次免疫后两周，采血1ml分离血清，作为一抗，利用western-blot检测是否能与天然蛋白CHIKV 非结构蛋白结合。如果结合良好，即可剖杀收集血清。 七实验结果 （1）16℃,12h IPTG诱导质粒pET-28a(+)-CHIKV- nsp1的Rossata菌株，实验结果如下： M: Protein marker 1: Before induction by TPTG 2: After induction by IPTG 3 The supersonic lysate 4:Supernatant after supersonic lysate 5:Precipitationafter
小鼠TRIM59蛋白多克隆抗体的制备、鉴定与初步应用姜飞;刘小林;李喜莲;Jim W Xuan 【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 【年(卷),期】2009(037)012 【摘要】[目的]制备兔抗鼠三结构域蛋白59(Tripartite motif-containing 59,TRIM59)多克隆抗体.[方法]利用PCR方法得小鼠TRIM59基因片段,将其克隆至pGEX-2T原核表达载体中,转人大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达GST-TRIM59融合蛋白.GST-TRIM59融合蛋白经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,通过ELISA测定兔抗鼠TRIM59多克隆抗体效价,用Western blot测定其特异性.用免疫组织化学方法检测TRIM59在小鼠前列腺癌组织中的表达.[结果]成功构建了pGEX-2T-TRIM59原核表达重组质粒,并诱导表达出GST-TRIM59融合蛋白,免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体.ELISA测定结果表明.TRIM59多克隆抗体效价为1:10~6以上;Western blot分析表明,TRIM59多克隆抗体具有良好的特异性.免疫组织化学检测发现,TRIM59在小鼠前列腺痛组织细胞中高表达.[结论]成功地制备了特异性良好的兔抗鼠TRIM59多克隆抗体,其具有良好的免疫学活性,能够用于相关研究. 【总页数】7页(P11-16,21) 【作者】姜飞;刘小林;李喜莲;Jim W Xuan 【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西,杨凌,712100;西安大略大学生理与药学系,伦敦,安大略,N6A5C1,加拿大;西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西,杨凌,712100;
小鼠Foxp3蛋白的原核表达及多克隆 抗体的制备 【摘要】目的：体外原核表达小鼠Foxp3蛋白，并以其免疫家兔，制备多 克隆抗体。方法：从质粒Foxp3��pMD��18T扩增小鼠Foxp3 全长基因，亚克 隆至原核表达载体pET��32a，转化E.coli BL��21； IPTG诱导表达目的蛋 白，Ni2+��NTA柱纯化及蛋白质印迹鉴定蛋白；纯化蛋白免疫家兔，制备多克隆 抗体，ELISA法检测抗体效价，蛋白质印迹检测抗体特异性。结果：成功构建了Foxp3��pET��32a原核表达载体，表达和纯化了目的蛋白；ELISA法检测抗体 效价为1∶20 000，蛋白质印迹检测结果显示抗体特异性与小鼠Foxp3蛋白结合。 结论：成功表达小鼠Foxp3蛋白并制备了多克隆抗体。 【关键词】 Foxp3；原核表达；多克隆抗体；小鼠 ［Abstract］ Objective: To prepare rabbit polyclonal antibody against mouse Foxp3 protein by prokaryotic expression of mouse Foxp3 protein in vitro. Methods： Foxp3 gene was amplified by PCR from the full length plasmid Foxp3��pMD��18T and subcloned into the pET��32a vector; the recombinant plasmid was transformed into E.coli BL��21 and the expression of recombinant protein was induced by IPTG. after purified with Ni2+��NTA column， identification of the recombinant protein by Western blot was performed; the purified protein was used as antigen to immunize rabbits， the titer and the specificity of the rabbit anti��Foxp3 antibody were detected by ELISA and Western blot， respectively. Results： The prokaryotic expression vector for Foxp3��pET��32a was constructed successfully; mouse Foxp3 protein had been expressed and purified; rabbit polyclonal antibody against mouse Foxp3 protein was prepared， the tit er of the antibody was 1∶20 000 by ELISA and Western blot analysis showed that the polyclonal antibody could specifically recognize mouse Foxp3 protein. Conclusion：Mouse Foxp3 protein had been expressed and rabbit anti��Foxp3 antibody had been prepared successfully. ［Key words］ Foxp3; prokaryotic expression; polyclonal antibody; mouse