次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书
本试剂仅供研究使用标本：体液
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书试验原理：
BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书操作注意事项
1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，
有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书操作步骤
1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9．在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的BFGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的BFGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml
ST1 人基质裂解素规格：48T/96T
MAT 人基质裂解蛋白规格：48T/96T
TIMP-1 人基质金属蛋白酶组织抑制因子1 规格：48T/96T
TIMP-4 人基质金属蛋白酶抑制因子4 规格：48T/96T
TIMP-3 人基质金属蛋白酶抑制因子3 规格：48T/96T
TIMP-2 人基质金属蛋白酶抑制因子2 规格：48T/96T TIMP-1 人基质金属蛋白酶抑制因子1 规格：48T/96T MMP-9/Gelatinase B 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B 规格：48T/96T MMP-8 人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶规格：48T/96T MMP-7 人基质金属蛋白酶7 规格：48T/96T
MMP-5 人基质金属蛋白酶5 规格：48T/96T
MMP-4 人基质金属蛋白酶4 规格：48T/96T
MMP-3 人基质金属蛋白酶3 规格：48T/96T
MMP-2 人基质金属蛋白酶2/明胶酶A 规格：48T/96T MMP-13 人基质金属蛋白酶13 规格：48T/96T
MMP11 人基质金属蛋白酶11 规格：48T/96T
MMP-10 人基质金属蛋白酶10 规格：48T/96T
MMP-1 人基质金属蛋白酶1 规格：48T/96T
MGP 人基质γ羧基谷氨酸蛋白规格：48T/96T
lumican 人基膜聚糖规格：48T/96T
MSTN 人肌抑素规格：48T/96T
dystrophin 人肌养蛋白规格：48T/96T
MYOG 人肌细胞生成素规格：48T/96T
CK-MB 人肌酸激酶同工酶MB 规格：48T/96T
CK-MB 人肌酸激酶同工酶MB 规格：48T/96T
CK 人肌酸激酶规格：48T/96T
MHC 人肌球蛋白重链规格：48T/96T
MLCK 人肌球蛋白轻链激酶规格：48T/96T
MLC 人肌球蛋白轻链规格：48T/96T
Myosin 人肌球蛋白规格：48T/96T
TN-R 人肌腱蛋白R 规格：48T/96T
TN-R 人肌腱蛋白R 规格：48T/96T
MYO/MB 人肌红蛋白规格：48T/96T
MYO/MB 人肌红蛋白规格：48T/96T
Tn-Ⅰ人肌钙蛋白Ⅰ规格：48T/96T
FⅫa 人活化凝血因子Ⅻ规格：48T/96T
APCR 人活化蛋白C抵抗素规格：48T/96T
APC 人活化蛋白C 规格：48T/96T
LHRH 人黄体生成素释放激素规格：48T/96T cAMP 人环磷酸腺苷规格：48T/96T
cGMP 人环磷酸鸟苷规格：48T/96T
COX-2 人环加氧酶2 规格：48T/96T
CsA 人环孢素A 规格：48T/96T
talin 人踝蛋白规格：48T/96T
ALOX-5 人花生四烯酸5脂加氧酶规格：48T/96T AA 人花生四烯酸规格：48T/96T
EPOR 人红细胞生成素受体规格：48T/96T
EPO 人红细胞生成素规格：48T/96T
EMP 人红细胞膜蛋白规格：48T/96T
ESF 人红细胞刺激因子规格：48T/96T
sm Actinin-α人横纹肌辅肌动蛋白α规格：48T/96T MLZE 人黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子规格：48T/96T MC Ab 人黑色素细胞抗体规格：48T/96T
MSH 人黑色素细胞刺激素规格：48T/96T
MMSAM 人黑色素瘤转移表面黏附分子规格：48T/96T MAGE 人黑色素瘤相关抗原规格：48T/96T
MAGE 人黑色素瘤相关抗原规格：48T/96T
MART/Melan-A 人黑色素瘤标记物规格：48T/96T
NF-κB p65 人核因子-κB亚基p65亲和肽规格：48T/96T RANKL 人核因子κB受体活化因子配基规格：48T/96T RNASE 人核糖核酸酶规格：48T/96T
Ag-NORs 人核仁形成区嗜银蛋白规格：48T/96T
NMP-22 人核基质蛋白22 规格：48T/96T
LPO 人过氧化脂质/乳过氧化物酶规格：48T/96T
PPAR-γ人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ规格：48T/96T PPARs 人过氧化物酶体增殖因子活化受体规格：48T/96T PPAR-α人过氧化物酶体增殖物激活受体α规格：48T/96T C4a 人过敏毒素/补体片断4 规格：48T/96T
FDA 人果糖1,6二磷酸醛缩酶规格：48T/96T
P-CK 人广谱细胞角蛋白规格：48T/96T
Casp-9 人胱天蛋白酶9 规格：48T/96T
Casp-3 人胱天蛋白酶3 规格：48T/96T Casp-12 人胱天蛋白酶12 规格：48T/96T oligomeric 人寡聚蛋白规格：48T/96T
ON 人骨粘连蛋白规格：48T/96T
BMP-6 人骨形成蛋白6 规格：48T/96T BMPs 人骨形成蛋白规格：48T/96T
BSP 人骨涎蛋白规格：48T/96T
CTX-2 人骨退化特异标志物规格：48T/96T ALP-B 人骨特异性碱性磷酸酶B 规格：48T/96T MPIF-1/CCL23 人骨髓抑制因子1 规格：48T/96T OPN 人骨桥素规格：48T/96T
Cr 人骨胶原交联规格：48T/96T BALP 人骨碱性磷酸酶规格：48T/96T
OT/BGP 人骨钙素/骨谷氨酸蛋白规格：48T/96T BMPR-Ⅱ人骨成型蛋白受体Ⅱ规格：48T/96T BMPR-1A 人骨成型蛋白受体1A 规格：48T/96T BMP-7 人骨成型蛋白7 规格：48T/96T
BMP-4 人骨成型蛋白4 规格：48T/96T
BMP-2 人骨成型蛋白2 规格：48T/96T OPGL 人骨保护素配体规格：48T/96T
OPG 人骨保护素规格：48T/96T
GSTpi 人谷胱甘肽硫转移酶pi基因规格：48T/96T
GSH-Px 人谷胱甘肽过氧化酶规格：48T/96T GSH 人谷胱甘肽规格：48T/96T
GAD-Ab 人谷氨酸脱羧酶自身抗体规格：48T/96T GAD 人谷氨酸脱羧酶规格：48T/96T
GDH 人谷氨酸脱氢酶规格：48T/96T
OFQ/N 人孤腓肽规格：48T/96T Lebtospira 人钩端螺旋体IgM 规格：48T/96T Lebtospira 人钩端螺旋体IgG 规格：48T/96T
HGV-IgM 人庚型肝炎病毒IgM 规格：48T/96T HGV-IgG 人庚型肝炎病毒IgG 规格：48T/96T
T 人睾酮规格：48T/96T
HVA 人高香草酸规格：48T/96T
MHB 人高铁血红蛋白规格：48T/96T
u-T4 人高敏甲状腺素规格：48T/96T
HDL-C 人高密度脂蛋白胆固醇规格：48T/96T
HDL 人高密度脂蛋白规格：48T/96T
GP-73 人高尔基蛋白73 规格：48T/96T
HGF 人肝细胞生长因子规格：48T/96T
HB-EGF 人肝素结合性表皮生长因子规格：48T/96T HCⅡ人肝素辅因子Ⅱ规格：48T/96T
MR 人甘露糖受体规格：48T/96T
MBLR 人甘露糖凝集素受体规格：48T/96T
MBP/MBL 人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素规格：48T/96T Mannose 人甘露糖规格：48T/96T
CG 人甘胆酸规格：48T/96T
SCFR 人干细胞因子受体规格：48T/96T
SCF/MGF 人干细胞因子/肥大细胞生长因子规格：48T/96T
IP-10/CXCL10 人干扰素诱导蛋白10 规格：48T/96T
IRF 人干扰素调节因子规格：48T/96T
CNR-1 人钙粘蛋白相关的神经受体1 规格：48T/96T
CRT 人钙网蛋白规格：48T/96T
calnexin 人钙联蛋白规格：48T/96T
VGCC 人钙离子通道抗体规格：48T/96T
CR 人钙结合蛋白规格：48T/96T
CAM 人钙调素规格：48T/96T
CaN 人钙调磷酸酶规格：48T/96T
CaN 人钙调磷酸酶规格：48T/96T
CALD 人钙调结合蛋白规格：48T/96T
CALD 人钙调结合蛋白规格：48T/96T
histatin 5 人富组蛋白规格：48T/96T
PNP 人副肿瘤性天疱疮抗体规格：48T/96T
RPA-70 人复制蛋白A 规格：48T/96T
CPSA 人复合前列腺特异性抗原规格：48T/96T
BA 人封闭抗体规格：48T/96T
SLPI 人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子规格：48T/96T
SIgA 人分泌型免疫球蛋白A 规格：48T/96T
MP-Ab 人肺炎支原体抗体规格：48T/96T
Cpn-Ab 人肺炎衣原体抗体规格：48T/96T
PARC/CCL18 人肺部活化调节趋化因子规格：48T/96T
SP-D 人肺表面活性物质相关蛋白D 规格：48T/96T
SP-C 人肺表面活性物质相关蛋白C 规格：48T/96T
SP-B 人肺表面活性物质相关蛋白B 规格：48T/96T
SP-A 人肺表面活性物质相关蛋白A 规格：48T/96T
人肺癌标志物ELISA Kit，48T/96T 人肺癌标志物ELISA Kit，48T/96T 规格：48T/96T
DR-70TM 人肺癌标志物DR-70 规格：48T/96T
LTA 人非小细胞肺癌抗原规格：48T/96T
NNE 人非神经元性烯醇化酶规格：48T/96T
NON 人非甲基化寡核苷酸规格：48T/96T
AhR 人芳香烃受体规格：48T/96T
E1/UBAE 人泛素激活酶规格：48T/96T
Ub 人泛素蛋白规格：48T/96T
rT3 人反三碘甲状腺原氨酸规格：48T/96T
DNM2 人发动蛋白规格：48T/96T
DPPⅣ人二肽基肽酶Ⅳ规格：48T/96T
人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4 规格：48T/96T
SLC/CCL21 人二级淋巴组织趋化因子规格：48T/96T
DAO 人二胺氧化酶规格：48T/96T
CA 人儿茶酚胺规格：48T/96T
PMN Elastase 人多形核白细胞弹性蛋白酶规格：48T/96T
PMN Elastase 人多形核白细胞弹性蛋白酶规格：48T/96T
PTN 人多效生长因子规格：48T/96T
PTN 人多效生长因子规格：48T/96T
poly-IgR 人多免疫球蛋白受体规格：48T/96T
PHSA 人多聚血清蛋白规格：48T/96T
PARP 人多聚ADP核糖聚合酶规格：48T/96T
DDC 人多巴胺脱羧酶规格：48T/96T
DBH 人多巴胺-β羟化酶规格：48T/96T
D2R 人多巴胺D2受体规格：48T/96T
D1R 人多巴胺D1受体规格：48T/96T
D1R 人多巴胺D1受体规格：48T/96T
DA 人多巴胺规格：48T/96T
PON 人对氧磷酶规格：48T/96T
PABA 人对氨基苯甲酸规格：48T/96T
TE 人端粒酶规格：48T/96T
TSST-1 人毒性休克综合征毒素1 规格：48T/96T
HDV IgM 人丁型肝炎IgM 规格：48T/96T
HDV IgG 人丁型肝炎IgG 规格：48T/96T
AZT 人叠氮胸苷规格：48T/96T
ASK-1 人凋亡信号调节激酶I 规格：48T/96T
FASL 人凋亡相关因子配体规格：48T/96T
FAS/CD95 人凋亡相关因子规格：48T/96T
βAPP 人淀粉样前体蛋白规格：48T/96T
Amylase 人淀粉酶规格：48T/96T
ETFB 人电子转移黄素蛋白β肽规格：48T/96T
FⅧAg 人第八因子相关抗原规格：48T/96T
Resistin 人抵抗素规格：48T/96T
HIF-1α人低氧诱导因子1α规格：48T/96T
LRP-6 人低密度脂蛋白受体相关蛋白6 规格：48T/96T
LDLR 人低密度脂蛋白受体规格：48T/96T
LDL-IC 人低密度脂蛋白免疫复合物规格：48T/96T
LDL 人低密度脂蛋白规格：48T/96T
LMP7/PSMB9 人低分子质量蛋白7 规格：48T/96T
LMWH 人低分子肝素规格：48T/96T
NGF 人的神经生长因子规格：48T/96T
人的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit，48T/96T 人的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit，48T/96T 规格：48T/96T
ConA 人刀豆素A 规格：48T/96T
PLP 人蛋白脂质蛋白抗体规格：48T/96T
PR3-ANCA 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体规格：48T/96T PPP1R1A 人蛋白磷酸酶1调控/抑制因子亚基1A 规格：48T/96T PP 人蛋白磷酸酶规格：48T/96T
PTP/PTPase/CD148 人蛋白酪氨酸磷酸酶规格：48T/96T
PTP/PTPase/CD148 人蛋白酪氨酸磷酸酶规格：48T/96T
PTK/CD115 人蛋白酪氨酸激酶规格：48T/96T
PTK/CD115 人蛋白酪氨酸激酶规格：48T/96T
PKC 人蛋白激酶C 规格：48T/96T
PKB 人蛋白激酶B 规格：48T/96T
PKA 人蛋白激酶A 规格：48T/96T
PDI 人蛋白二硫化物异构酶前体规格：48T/96T
PDIA3 人蛋白二硫化物异构酶A3 规格：48T/96T
Protein Z 人蛋白Z 规格：48T/96T
Protein S 人蛋白S 规格：48T/96T
Protein C 人蛋白C 规格：48T/96T
肽酰脯氨酰顺/反异构酶人蛋白规格：48T/96T
Elastase 人弹性蛋白酶规格：48T/96T
Elastin 人弹性蛋白规格：48T/96T
Cholic acid 人胆酸规格：48T/96T
CCK-8 人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽规格：48T/96T
CCK 人胆囊收缩素/肠促胰酶肽规格：48T/96T
CHAc 人胆碱乙酰化酶规格：48T/96T
CETP 人胆固醇酯转移蛋白规格：48T/96T listeriolysin 人单核细胞增多性李斯特菌素规格：48T/96T MCP-4/CCL13 人单核细胞趋化蛋白4 规格：48T/96T MCP-3/CCL7 人单核细胞趋化蛋白3 规格：48T/96T MCP-2/CCL8 人单核细胞趋化蛋白2 规格：48T/96T HSV-Ag2 人单纯疱疹病毒抗原2 规格：48T/96T
HSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格：48T/96T
HSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格：48T/96T
HSVⅡ-Ab 人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体规格：48T/96T MAO 人单胺氧化酶规格：48T/96T
Big ET 人大内皮素规格：48T/96T
Big ET 人大内皮素规格：48T/96T
colicin 人大肠菌素规格：48T/96T
CCSA-4 人大肠癌专一抗原4 规格：48T/96T CCSA-3 人大肠癌专一抗原3 规格：48T/96T CCSA-2 人大肠癌专一抗原2 规格：48T/96T
PRL 人催乳素规格：48T/96T
MF/MPF 人促有丝分裂因子规格：48T/96T
GnRH 人促性腺激素释放激素规格：48T/96T
DSIP 人促睡眠肽规格：48T/96T
GHRH 人促生长激素释放激素规格：48T/96T
ACTH 人促肾上腺皮质激素规格：48T/96T
CRH 人促肾上皮质激素释放激素规格：48T/96T
FSH 人促卵泡素规格：48T/96T
TRH 人促甲状腺素释放激素规格：48T/96T
TSH 人促甲状腺素规格：48T/96T
TSHR 人促甲状腺激素受体抗体规格：48T/96T
LH 人促黄体激素规格：48T/96T
人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 规格：48T/96T
E3 人雌三醇规格：48T/96T
E 人雌激素规格：48T/96T
ER 人雌二醇受体规格：48T/96T
E2 人雌二醇规格：48T/96T
PACAP 人垂体腺苷酸环化酶激活肽规格：48T/96T
VMA 人垂草扁桃酸规格：48T/96T
PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白规格：48T/96T
PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白规格：48T/96T
VLA 人迟现抗原规格：48T/96T
VLA 人迟现抗原规格：48T/96T
MPF 人成熟促进因子规格：48T/96T
OGP 人成骨生长肽规格：48T/96T
SOD 人超氧化物歧化酶规格：48T/96T
hs-CRP 人超敏C反应蛋白规格：48T/96T Sag 人超抗原规格：48T/96T
iFABP 人肠脂肪酸结合蛋白规格：48T/96T Enterovirus 人肠病毒规格：48T/96T LATS 人长效甲状腺刺激素规格：48T/96T OPAs 人不透光相关蛋白规格：48T/96T
LTB 人不耐热肠毒素B亚单位规格：48T/96T LTB 人不耐热肠毒素B亚单位规格：48T/96T ADMA 人不对称二甲基精氨酸规格：48T/96T ADMA 人不对称二甲基精氨酸规格：48T/96T CFH 人补体因子H 规格：48T/96T
C5b 人补体片断5b 规格：48T/96T
C5b 人补体片断5b 规格：48T/96T
C5a 人补体片断5a 规格：48T/96T
C4b 人补体片断4b 规格：48T/96T
C4b 人补体片断4b 规格：48T/96T
C3b 人补体片断3b 规格：48T/96T
C3b 人补体片断3b 规格：48T/96T
C3a 人补体片断3a 规格：48T/96T
C3bR 人补体片段3b受体规格：48T/96T CCP 人补体调节蛋白规格：48T/96T
C4 人补体蛋白4 规格：48T/96T
C3 人补体蛋白3 规格：48T/96T
蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)ELISA检测试剂盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：体液 蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)ELISA检测试剂盒试验原理： BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。 蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)ELISA检测试剂盒自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
第十二章嘌呤代谢系统 第一节概述 嘌呤代谢是指核酸碱基腺嘌呤及鸟嘌呤等的嘌呤衍生物的活体合成及分解。动物，其嘌呤化合物几乎全部氧化为尿酸，分别以不同形式而排出。人体尿酸主要由细胞代谢分解的核酸和其他嘌呤类化合物以及食物中的嘌呤，经酶的作用分解而来。为了了解尿酸的生成机制，首先要了解嘌呤代谢及其调节机制。 一、嘌呤代谢调节 嘌呤代谢速度受1-焦磷酸-5-磷酸核糖(PRPP)和谷氨酰胺的量以及鸟嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸和次黄嘌呤核苷酸对酶的负反馈控制来调节。次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和黄嘌呤氧化酶，为嘌呤磷酸核糖焦磷酸酰胺移换酶，是嘌呤代谢过程中的关键酶，它们的作用点见下图12-1。 注：E1：磷酸核糖焦磷酸酰胺移换酶；E2：次黄嘌呤脱氢酶；E3腺苷酸代琥珀酸合成酶；E4次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶；E5黄嘌呤氧化酶；→表示负反馈控制。 由核酸分解代谢为尿酸是一个十分复杂的过程，主要有以下三种生成途径：
(1)核酸→鸟嘌呤核苷酸→鸟嘌呤→黄嘌呤→尿酸。 (2)核酸→腺嘌呤核苷酸→腺嘌呤→黄嘌呤→尿酸。 (3)5-磷酸核糖+ATP→次黄嘌呤核苷酸→次黄嘌呤→黄嘌呤→尿酸。 此乃尿酸生成的一个总轮廓，中间有许多环节已被省略，在尿酸生成的过程中，有多种酶的参与和调节。但从上述尿酸生成的简要过程中可以看出，嘌呤是尿酸生成的主要来源。因此，嘌呤合成代谢增高及(或)尿酸排泄减少均可造成血清尿酸值增高。 生物化学研究表明，人体体内约有8种酶参与了尿酸的生成过程，其中有7种酶均促进尿酸生成，它们包括：①磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶；②磷酸核糖焦磷酸合成酶；③腺嘌呤磷酸糖核糖苷转移酶；④腺苷去胺基酶；⑤嘌呤核苷酸磷酸酶；⑥5-核苷酸酶；⑦黄嘌呤氧化酶。这些酶的活性增加时，尿酸生成即增加；在这些酶中，以黄嘌呤氧化酶最为重要。另一种次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，其作用和上述7种酶正好相反，当其活性增强时可抑制尿酸生成，活性减弱时则尿酸生成增加。酶缺陷包括某种酶的数量增多或活性增强和某种酶的完全性缺乏或部分缺乏，皆可导致嘌呤合成加速和尿酸生成增多。酶缺陷在痛风发病中占有十分重要的地位，但大多数很难得到证实，仅少数病人可以鉴定出酶缺陷。嘌呤排出物的多样性，可能与在进化过程中发生的酶缺失现象（eezymaphresis）有关[1、2]。对导致过量嘌呤生物合成的机制，有嘌呤代谢酶的数量增多或活性过高，或酶活性降低或缺乏。 二、尿酸代谢的平衡 血清中尿酸浓度，取决于尿酸生成和排泄速度之间的平衡。尿酸是嘌呤代谢的终末产物，体内尿酸的积聚，可见于如下的5种情况：①外源性吸收增多，即摄食富含嘌呤的食物增多； ②内源性生物合成增加，包括酶缺陷，如核酸分解加速和嘌呤基氧化产生尿酸增多；③排泄减少，即由肾脏经尿排出减少和由胆汁、胃肠分泌后，肠道细菌分解减少；④体内代谢减少，即尿酸内源性破坏减少；⑤上述综合因素或不同因素的组合。 拥有尿酸(氧化)酶的物种，能将尿酸转化为溶解性较高、更易排出的尿囊素(allantoin)，故血清尿酸水平低而无痛风存在，人和几种类人动物是在进化过程中发生尿酸氧化酶基因突变性灭活的，从这点来说，人类的高尿酸血症是由尿酸分解代谢的先天性缺陷造成[3]。高尿酸血症血清中尿酸浓度取决于尿酸生成和排泄速度之间的平衡，人体内尿酸有两个来源，一是从富含核蛋白的食物中核苷酸分解而来的，属外源性，约占体内尿酸的20%；二是从体内氨基酸、磷酸核糖及其他小分子化合物合成和核酸分解代谢而来的，属内源性，约占体内总尿酸的80%。对高尿酸血症的发生，显然内源性代谢紊乱较外源性因素更为重要。核素示踪研究，正常人体内尿酸池的尿酸平均为1200mg，每天产生约750mg，排出500～1000mg，约2/3经尿排泄，另1/3由肠道排出，或在肠道内被细菌尿酸氧化酶分解。
人转化生长因子β1（TGF—β1）ELISA试 剂盒说明书 产品名称：人转化生长因子β1（TGFβ1）ELISA试剂盒 英文名称:TGFβ1 ELISA Kit 检测原理： ELISA试剂盒采纳抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上，标本和标准品中的某蛋白与抗体结合，加入生物素化的抗某蛋白抗体，再加入SABC复合物与生物素抗体结合，形成免疫复合物，然后 加入TMB显色底物，显色剂显蓝色，最后加停止液变黄色，游离的 成分被洗去。在450 nm处测OD值，某蛋白浓度与OD值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。 试剂盒组分: （保管温度4℃） 名称 规格（48 T） 规格（96 T） 预包被酶标板 8×6条 8×12条
1支 1支 标准品/样品稀释液 10ml 15ml 生物素化检测抗体（100×）60ul 120ul 生物素化检测抗体稀释液 6ml 12ml SABC复合物 6ml 12ml TMB显色液（A/B） 各3ml
停止液 6ml 12ml 20×浓缩洗涤液 30ml 60ml 封板胶纸 2张 4张 产品说明书 1份 1份 本试剂盒用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培育上清液及其它生物体液。 标本收集与试剂准备: 1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管
（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆躲避使用溶血， 高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清亮透亮。待测样本 应尽早检测，28℃保管48小时；更长时间须冷冻（20℃或80℃） 保管，躲避反复冻融。 2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液 加入19ml的蒸馏水） 3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第一至七管中分别加入标 准品/样品稀释液200ul。在第一管中加入标准品溶液200ul，置于 漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复 作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对比。 4. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体 稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，依据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。 5. TMB显色液的配置：使用qian 非常钟，将TMB显色液A液 和B液1：1混合，避光放置备用。 6. 假如您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重 新检测，请依据实际情况，适当倍数稀释（建议做预试验，以确定 稀释倍数）。 检测程序:
RD TNF-αELISA检测试剂盒说明书（MTA00B） 技术提示 1.当混合或冲悬蛋白质溶液时，避免产生气泡。 2.为了避免交叉污染，每个标准品，样品以及相关试剂加完后要更换枪头。此外，每种试 剂要有单独的储液槽。 3.为了达到最佳效果，将试剂和样品等滴加到每个孔的中心位置。 4.为了保证准确的结果，在孵育步骤中，有必要对酶标板进行适当地密封。 5.底物溶液在加入到酶标板之前应为无色。要保持底物溶液避光。底物溶液应由无色渐渐 变为蓝色。 6.终止液应与底物溶液相同的加样顺序加到酶标板孔里。加入终止液后，酶标孔中的颜色 应由蓝色变为黄色。 其他配套物品 1.酶标仪能够在450 nm处测量吸光度，校正波长设为540 nm或570 nm。 2.移液枪和移液器 3.去离子水 4.试剂瓶
5.用于稀释标准品的EP管 注意事项 1.终止液为酸性溶液，注意防护。 2.本试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应。避免吸入。 3.显色剂B可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激。避免吸入。 4.佩戴好口罩和手套，实验服。实验完成后要仔细洗手。 5.关于样本，细胞培养上清收集后存放在-20℃以下。避免反复冻融。 试剂准备： 1.使用前将所有试剂放于室温。 2.小鼠TNF-αControl：使用1mL去离子水冲悬对照，充分混匀。 3.洗涤液：如果浓缩液中已形成晶体，加热至室温，轻轻搅拌，直到晶体完全溶解。可 配制满足一个酶标板的洗涤液。如：将20毫升洗涤液浓缩液加到480毫升去离子水或蒸馏水中，配制500毫升洗涤液。 4.底物溶液：底物显色试剂A和B应在使用15分钟内按等体积混合。避光放置。每个酶 标孔需要100 μL混匀后的AB混合物。 5.小鼠TNF-α标准品：参照瓶上的冲悬体积进行冲悬。用去离子水或蒸馏水冲悬小鼠TNF- α标准。原液浓度为7000 pg/mL。轻轻混匀，室温放置至少5分钟，然后再进行稀释。 先在1号管中加入900ul Calibrator稀释液（RD5K），2-7号加入200ul Calibrator稀释液。 准备一个8号管，加入适量Calibrator稀释液作为Blank（0 pg/ml）。随后，1号管中加入100ul standard原液。充分混匀后开始进行梯度稀释。吸取200ul到下一管。每个管子充分混匀后进行再下一步稀释。 实验步骤： 使用前将所有试剂和样品置于室温下。建议所有的标准品、对照品和样品都要重复检测 1.按照上文指示，准备试剂、样品和标准稀释物。 2.从板框中取出多余的微孔板条，将其放入含有干燥剂的箔袋中，并重新密封。 3.每孔加50 μL稀释剂RD1-63。 4.每孔加50 μL标准品、对照品或样品。用提供的密封膜覆盖。轻轻拍打板框搅拌1分钟 （微孔板振荡器震荡1min）。室温孵育2小时。记录好加样顺序。 5.拍掉孔中液体，洗涤，重复这个过程四次，总共洗涤五次。使用喷瓶、分配器或自动清 洗器将400 μL的洗涤液灌满每孔进行清洗。每一步都要完全去除孔内液体。在最后一次清洗后，通过抽吸或拍板除去任何剩余的洗涤液。把酶标板倒过来，用干净的纸巾吸
小鼠脂多糖（LPS）ELISA检测试剂盒说明书小鼠脂多糖（LPS）ELISA检测试剂盒使用说明 检测原理 试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被脂多糖（LPS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。颜色的深浅和样品中的脂多糖（LPS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10
分钟取上清。 5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完wan全溶解后再使用。 试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：体液 磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书试验原理： BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。 磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书操作注意事项 1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，
表1.本研究中所用的质粒和菌株 质粒或菌株描述和/或相关的特征来源或参考 质粒 pMU1647 克隆载体; 包含cpb p-tdk and gapDH p-cat-hpt 操纵子本研究pMU1657 cpbp-hpt 和 gapDH-cat外侧翼删除的HPT KO载体本研究pMU1758 乳酸脱氢酶缺失载体本研究pMU1777 无酵母机械乳酸脱氢酶缺失载体本研究pMU1817 磷酸转乙酰酶缺失载体本研究 菌株 嗜热纤维梭菌（C. thermocellum） M0003 野生型DSM 1313 DSMZ b M1354 DSM 1313 hpt 本研究 M1375 M1354 ldh 本研究 M1448 M1354 pta 本研究 M1434 M1375 pta 本研究 M1570 M1434 evolved 本研究 葡萄糖异构酶突变体（T. saccharolyticum） ALK2 ldh _pta-ack 24 a HPT，次黄嘌呤磷酸核糖转移酶；KO，敲除 氟脱氧尿嘧啶（FUDR）的细胞毒性是依赖于参与嘧啶代谢的两种酶：胸苷激酶（TDK）和胸苷酸合成酶（ThyA）。 TDK将FUDR转换成氟--DUMP（F-DUMP），这是一个ThyA的共价抑制剂和各种真核生物（5，9，12，26）反 选择的基础。 嗜热纤维梭菌（C. thermocellum）通过Embden-Myerhof途径把糖发酵成丙酮酸，同时最终产品的代 谢导致乙醇，乙酸和乳酸（13）的形成。从其它参考可知(17)，很多人长期致力于菌株分离、培养条件的 优化(14),和菌株发展通过变异和选择提高高温发酵的纤维素和/或木糖乙醇的高收益率。然而,这些努力并 没有生产出始终如一地在高收益率下，在一个广泛的条件下和不同的调查人员的手中生产乙醇的健壮的菌 株。采用分子生物学技术的代谢工程已被应用到改变终端产品代谢，提高非水解纤维素在嗜热细菌葡萄糖 异构酶突变体（T. saccharolyticum）（23，24）中产生乙醇的产率，，但不能提高高纤维素在嗜热纤维梭 菌（C. thermocellum）中的水解产率。葡萄糖异构酶突变体（T. saccharolyticum）的高乙醇产量，嗜热 纤维梭菌（C. thermocellum）使纤维素水解的广泛的糖利用率，二者的组合产生了独特的优势。沿着这些 方向，最近回顾(6)之前的努力,但直到现在，通过C.thermocellum生产有机酸仍然抑制增长和降低乙醇产 量。在本研究中，我们发现，通过C. thermocellum生产乙醇是有适合通过代谢工程的显着改善，证明这 两个生物乙醇版本之间的共存的潜力。 材料与方法 分子生物学技术. 在这项工作中的所有质粒使用酵母差距维修克隆构建。，用于质粒构建的特定技术和 酵母菌株在最后将给出的详细描述。（22）。在表1和表2中给出了菌株，质粒，在本研究中使用的引物以 产生淘汰的一个完整的列表。引物的设计基于 C.thermocellum27405基因组 （https://www.doczj.com/doc/0819456252.html,）。转化将由特里帕蒂等人描述。（28） 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶删除的载体（pMU1657）.序列包括65 bp的编码序列和1121 bp的上游hpt 基因,这些序列用引物X107384和X07385进行扩增，使用引物X07503和X07383扩增的序列包括编码序列 的10个碱基对和1025 bp的下游hpt。这些片段通过缺口修复克隆到的AatII-中消化pMU749（28），同时 伴随着一盘包含嗜热纤维梭菌（C. thermocellum）纤维二糖磷酸化酶启动子的次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基 因的表达和由氧化氢酶的基因pNW33N的抗生素抗性基因融合嗜热纤维梭菌的甘油 3 - 磷酸脱氢酶启动子。
Bioxl Diagnostic Systems,Inc 2814,Brigadoon Dr.#21 1、 概述 黄曲霉素是霉菌的产物，高毒性并致癌。黄曲霉素M 1不是微生物而是在动物体中由黄曲霉素B 1转化形成的。当奶牛食用有黄曲霉素B 1污染的饲料后，通过消化和分泌，黄曲霉素就会转化为羟基化的黄曲霉素M 1，绝大部分分泌到乳汁中。因此，黄曲霉素M 1浓度反映了饲料中黄曲霉素B 1的含量。欧盟对奶中的黄曲霉素M 1限量是0.05ppb （50ppt ）。 用竞争酶联免疫分析法检测生物样本中的黄曲霉素M 1。所有酶联免疫分析的试剂包括标准品都由试剂盒提供。 检测数量：96孔（含标准品孔） 检测时间：20分钟 2、 原理 分析在包被有黄曲霉素M 1抗体的聚苯乙烯微孔中进行。黄曲霉素M 1标准溶液和样品加入微孔，在温浴过程中，游离的黄曲霉素M 1分子与抗体结合，没有结合的物质在清洗步骤中被清洗，第二次温浴时已经加入HRP-黄曲霉素M 1酶标物，它将没有结合的抗体位点全部覆盖。通过加入基底物质可以确定酶活性，第三次温浴时酶将无色的显色剂转变成一种蓝色，加入终止液使蓝色变成黄色，用酶标仪在450nm 测定吸光度，通过颜色深浅不同换算成黄曲霉素M 1的浓度值。 3、 应用范围 黄曲霉素M 1ELISA 试剂盒用于定量检测牛奶和奶酪中的黄曲霉素M 1。 4、 提供的试剂 1、微孔板：96孔（12×8，可拆卸） 2、酶标物：冻干粉一瓶 3、酶标物稀释液：13ml 一瓶 4、样品稀释液：一瓶（使用时加入40mL 双蒸水充分溶解后使用） 5、清洗液（10×）：50ml 一瓶 6、显色剂：13ml 一瓶 7、终止液：13ml 一瓶 8、黄曲霉素M 1标准品溶液：6×1ml/瓶（0ng/mL ，0.005ng/mL ，0.03ng/mL ，0.15ng/mL ，0.5ng/mL ， 2ng/mL ） 5、 试剂盒未提供的材料 1、10-1000 ul 不同规格的微量移液器 2、50-300ul 多道移液器 3、酶标仪（有450nm 滤光片） 4、离心机（如果离心速度低最好使用低温离心机） 5、带盖试管 6、涡旋振荡器 7、正己烷 8、二氯甲烷 9、离心管 10、去离子蒸馏水 6、 试剂贮存 1、试剂盒贮存在2～8℃，切勿冰冻 2、未用完的微孔板反应该密封干燥2～8℃保存 7、 注意事项 1、终止液具有刺激性，显色剂具有毒性，切勿接触皮肤 2、试剂盒过期后不得使用 3、请勿混用不同批号的试剂 8、 工作溶液准备 1、酶标物工作液：使用时精确加入12mL 酶标物溶解液充分溶解，使用前恢复至室温，并且摇匀，切勿涡旋振荡。 2、样品稀释液工作液：使用时加入40ml 双蒸水充分溶解后使用。 3、清洗液：用蒸馏水1:10稀释（1＋9）。注意：如有结晶请在室温下摇动彻底溶解 4、显色剂：已备用，请避免光线直照 5、终止液：已备用 6、黄曲霉毒素M1标准品：已备用 9、 样品处理 一、牛奶 1、样品冷藏，2～8℃下3000g 离心10分钟 2、分离奶脂和奶清 3、奶清直接检测（稀释倍数：1倍） 二、奶粉 1、称取奶粉1g 加10ml 蒸馏水 2、振荡使奶粉彻底溶化后取50ul 用于检测 3、稀释倍数：10 黄曲霉素M 1 ELISA 检测试剂盒
嘌呤类药物作用及巯基嘌呤甲基转移酶遗传多态性的分析进展 关键字：嘌呤类药物 目前研究结果表明’治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)的抗嘌呤代谢药物―�D6-巯基嘌呤(6-MP)和6-巯代鸟嘌呤(6-TG)均是无内在生物活性的药物’必须通过体内一系列代谢后才能发挥抗白血病效应。而人体一种被称为巯基嘌呤甲基转移酶(TPMT)的代谢酶在此类药物代谢和抗白血病作用中起关键作用。此酶是存在于哺乳动物和禽类细胞中的一种细胞内酶’非金属依赖性’能利用S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)作为甲基的供体和底物结合’特异地催化杂环类和芳香类化合物苯环6-位硫原子的甲基化’其内在底物和主要的生物学功能仍然未完全清楚［1，2］，而其DNA编码顺序上某个核苷酸碱基点突变’是造成嘌呤类药物不同强度的细胞毒作用的基础［3］。所以’对于TPMT酶学特点、其遗传多态性的分子生物学机制以及 6-MP、6-TG临床关系的研究成为当前研究药代动力学的热点之一。 1 6-MP和6-TG的代谢［4，5］6-MP的代谢途径：①由次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)催化先形成硫基次黄嘌呤单磷酸盐(TIMP)’硫基黄嘌呤单磷酸盐(TXMP)’硫基鸟嘌呤单磷酸盐(TGMP)’后者经磷酸化后分别形成二磷酸盐和三磷酸盐。后三种物质统称为TGNs’它整合到肿瘤细胞中影响DNA的复制及RNA的表达’发挥抗肿瘤作用。②6-MP’TIMP’TGMP均可由TPMT催化生成甲基化的衍生物6-meMP’6-meTGMP’6-meTIMP’这些甲基化的化合物属于“无活性”的物质’它们能够抑制磷酸核糖焦磷酸化氨基转移酶(PRPP-AT)的活性’后者是细胞重新合成嘌呤步骤中的关键酶’因此’抑制PRPP-AT的活性就阻断了肿瘤细胞遗传信息的表达’从而达到抗白血病的作用。③由黄嘌呤氧化酶催化形成6-硫基黄嘌呤后再形成尿酸也可生成尿酸排出。 6-TG的代谢途径：①由HPRT催化直接形成硫基鸟嘌呤磷酸化合物(TGNs)发挥抗白血病作用。②也可由TPMP催化生成甲基化的产物如6-meTG’或me-TGMP’达到抗肿瘤的作用。但组织中TPMP对6-TG的催化效力远比6-MP低(约为1/12)［4］，故此过程并非6-TG的主要代谢途径。③6-TG由鸟嘌呤脱氢酶催化生成6-硫基黄嘌呤再由黄嘌呤氧化酶催化生成尿酸排出。 2 TPMT的酶学特点 2.1 TPMT的组成结构：由两个具有相同的催化功能单体组成’说明TPMT的结构并非引起遗传多态性的原因。TPMT的分子量大约为30000。通过提取和分析人肾脏组织中的TPMT’发现它由245个氨基酸残基组成。另有人还发现几乎每个依赖SAM的甲基转移酶均含有3个结构保守的序列(motifⅠ，Ⅱ，Ⅲ)，分别含24-，12-，12-三个单体结构’估计这些序列为酶结合底物的结构域［6～8］。 2.2 TPMT的组织分布：人类TPMT首先在肝脏、肾脏中被发现’随后陆续地在胃肠道、肺、脑、血液、胎儿、胎盘等组织中发现。成年人肝细胞的TPMT浓度和血液组织中几乎呈直线相关。第3个月的胎儿即有TPMT的存在’其中第6个月的浓度及活性和新生儿类似’说明TPMT的浓度及活性在人体各组织内，甚至肿瘤
卡那霉素（Kanamycin）ELISA检测试剂盒说明书 一、简介 本试剂盒是应用ELISA研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点,操作时间仅需55分钟，能最大限度地减少操作误差和工作强度。 二、试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的卡那霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗卡那霉素抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与残留物卡那霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中卡那霉素的含量。 三、适用范围 可定性、定量检测动物组织（肌肉、肝脏等）卡那霉素的残留量。 四、交叉反应率 卡那霉素…………………………………………………100% 链霉素 (1) 双氢链霉素 (1) 新霉素 (1) 五、使用单位需自备的设备及试剂 设备： ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅均质器 ┅┅电热恒温水浴锅
┅┅振荡器 ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅洗耳球 ┅┅容量瓶：500ml ┅┅聚苯乙烯离心管：2ml、50ml ┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml 多道 250ml 试剂 ----十二水合磷酸氢二钠(分析纯) ----氯化钠(分析纯) ----氢氧化钠(分析纯) ----二水合磷酸二氢钾(分析纯) ----氯化钾(分析纯) ----去离子水 六、提供的材料与试剂 1、 96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原） 2、标准液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb，0.5ppb，1.5ppb，4.5ppb，13.5ppb，40.5ppb
小鼠淋巴细胞hprt基因突变检测的研究进展 杨录军;曹佳 【摘要】肿瘤的发生、发展与突变事件密切相关.人类在环境中接触的突变剂的检出依赖于致突变试验.以次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 (hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase, hprt)基因为报告基因的 hprt突变试验是几个重要的致突变试验之一,其优点在于不仅能检测出突变剂的致突变能力大小,还可以对突变体进行突变谱分析,并且能为多种与 hprt基因突变相关的人类疾病提供研究资料.以小鼠啮齿动物为试验模型的淋巴细胞 hprt基因突变试验近年来得到广泛应用,本文对其研究进展作一综述. 【期刊名称】《癌变·畸变·突变》 【年(卷),期】2006(018)005 【总页数】3页(P414-416) 【关键词】hprt;突变;突变谱;淋巴细胞 【作者】杨录军;曹佳 【作者单位】第三军医大学军事毒理学教研室,重庆,400038;第三军医大学军事毒理学教研室,重庆,400038 【正文语种】中文 【中图分类】Q754 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthineguanine phosphoribosy1transferase,hprt)基因突变试验是几个重要的致突变试验之一。
hprt基因编码次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶,催化次黄嘌呤和鸟嘌呤与磷酸核 糖焦磷酸反应,生成相应的核苷-5-单磷酸(NMP)。这是一条生成NMP的补充途径。如果存在6-硫代鸟嘌呤(6-TG)、6-巯基嘌呤(6-MP)、8-氮鸟嘌呤(8-AG)等碱基类似物,则以这些物质为底物可生成相应的NMP,参与DNA合成而导致细胞死亡。如果突变剂使hprt基因失活(hprt-）将导致细胞中的HPRT酶活性大幅度下降从而 使(hprt-）细胞能在一定的嘌呤类似物浓度下正常生长而这个浓度足以导致HPRT 酶水平正常的细胞(hprt+)发生死亡。 在hprt基因突变试验中,突变对象可直接选用CHO、V79等细胞株,也可选用人、动物(包括转基因动物)等,近年来的转基因、基因敲除等分子生物学技术更是推动了hprt基因突变检测的发展,以下就以动物小鼠hprt基因突变检测方法的研究进展 作一综述。 小鼠hprt基因同人类、大鼠一样位于X染色体的长臂远端,在雄性细胞中为半合子,而在雌性细胞中则表现出一条X染色体失活,所以它在功能上也是半合子[1，2]。David等[3]1984年报道了小鼠hprt基因的结构、表达和突变实验结果。小鼠hprt基因长度大于33kb,被称之为小基因(minigene),是一个看家基因,像其它看家基因一样,缺乏与RNA多聚酶II-转录基因(RNApo1ymeraseII transcribedgenes)的启动子有关的许多特性,hprt的转录有多个起始位点,并且在培养细胞中只有5'端侧翼序列(5'-f1anking sequences)对正常表达来说是必需的[4]。在hprt基因的 必需区含有重复串联序列并与其它看家基因的上游序列同源。当这个序列缺失时, 隐藏的上游序列便显露出来[4]。小鼠hprt基因含9个外显子和8个内含子,外显 子之间含有很长的内含子,这9个外显子的长度按从1到9的顺序分别为132bp、107bp、184bp、66bp、18bp、83bp、47bp、77bp和593bp,cDNA全长为1307bp[3]。 小鼠hprt基因突变检测多用脾淋巴细胞进行试验。由于小鼠淋巴细胞与大鼠、人
酶促反应 1 α-淀粉酶淀粉——麦芽糖+麦芽三糖+异麦芽糖（含分支）+α-糊精+葡萄糖 2 α-糊精酶α-糊精——葡萄糖 3 麦芽糖酶麦芽糖、麦芽三糖——葡萄糖 4 蔗糖酶蔗糖——葡萄糖+果糖 5 乳糖酶乳糖——葡萄糖+半乳糖（注：4和5均在肠粘膜中） 6 糖原磷酸化酶糖原+H3PO4——1-磷酸葡萄糖 该酶作用于糖原非还原性末端葡萄糖之间的α-1,4-糖苷键，依次磷酸解成生成G-1-P。 7 脱支酶和转移酶 脱支酶：α-1,6-葡萄糖苷酶作用：水解分支处的α-1,6-糖苷键，分出一单位的葡萄糖。 转移酶：又作α-1,4-转寡糖基酶，作用：将分支链上的4个葡萄糖单位转移出3个单位到临近的4单位分支上，形成一新的α-1,4-糖苷键和7个葡萄糖单位的较 长支链。 8 己糖激酶葡萄糖+ATP——6-磷酸葡萄糖+ADP （Mg2+） PS：该酶有三种同工酶；分布广泛，葡萄糖磷酸化的主要作用酶；其他己糖或其衍生物如果糖、氨基葡萄糖的磷酸化也依靠此酶；为EMP的第一个限速酶；肌肉此酶 是一个别构酶，被其产物G-6-P强烈地别构抑制。 9 葡萄糖激酶葡萄糖+ATP——6-磷酸葡萄糖+ADP （Mg2+） 该酶仅存在于肝组织中；单一催化D-葡萄糖磷酸化；不被产物G-6-P抑制。 10 磷酸葡萄糖变位酶1-磷酸葡萄糖——6-磷酸葡萄糖（Mg2+、1,6-二磷酸葡萄糖） G-1,6-DP为该酶的辅助因子，该酶有一个催化活性必须的Ser羟基（－CH2OH） 11 磷酸葡萄糖异构酶6-磷酸葡萄糖——6-磷酸果糖（Mg2+）12 6-磷酸果糖激酶-16-磷酸果糖+A TP——1,6-二磷酸果糖+ADP （Mg2+） 此步为EMP中的关键反应步骤，此酶是一限速酶。此酶是分子量为3400的四聚体，为一别构酶。A TP对其有抑制反应，柠檬酸、脂肪酸存在时加强抑制效应；AMP、ADP或Pi可消除抑制。 13 醛缩酶1,6-二磷酸果糖——3-磷酸甘油醛+磷酸二羟丙酮 该酶可催化可逆反应的双方向，该酶是四4个亚基组成的四聚体，分子量160000，其分子中巯基为催化活性所必需；有三种同工酶：肌肉型、脑型、及肝型。 14 磷酸丙糖异构酶3-磷酸甘油醛——磷酸二羟丙酮 磷酸与缩水甘油形成的磷酸缩水甘油对此酶有强烈的抑制作用。 153-磷酸甘油醛脱氢酶 3-磷酸甘油醛+NAD++ H3PO4——1,3-二磷酸甘油酸+NADH+H+ 此反应即是氧化反应又是磷酸化反应。 该酶是由四个亚基组成的四聚体；碘乙酸可强烈抑制此酶的活性，－SH是酶活性所必须的；砷酸可使这一步的氧化作用和磷酸化作用解偶联。 16 磷酸甘油酸激酶1,3-二磷酸甘油酸+ADP——3-磷酸甘油酸+ATP （Mg2+）
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：体液 次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书试验原理： BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。 次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书操作注意事项 1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，
磺胺类总量ELISA检测试剂盒说明书 一、概要 本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点，操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少工作强度和操作误差。 二、试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三者的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含磺胺类药物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中磺胺类药物的残留量。 三、适用范围 可定性、定量检测动物组织（肌肉/肝脏/鱼/虾）、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清等样品中磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺嘧啶（SD或SDZ）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺噻唑（ST）药物的残留量。 四、交叉反应率 磺胺嘧啶（SD或SDZ）…………………………… 100.0% 磺胺间甲氧嘧啶/磺胺六甲氧嘧啶（SMM）…… 98% 磺胺甲噁唑（SMZ）………………………………… 120.0% 磺胺噻唑（ST）……………………………………… 98.0%
酞酰磺噻唑（PST）………………………………… 62.8% 磺胺甲噻二唑…………………………………… 103% 磺胺吡啶…………………………………………… 51.9% 磺胺对甲氧嘧啶…………………………… 35% 五、使用单位需自备的设备及试剂 设备： ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置 ┅┅均质器振荡器、洗耳球、容量瓶：500ml ┅┅涡旋仪、离心机 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅玻璃试管：15ml ┅┅聚苯乙烯离心管：50ml ┅┅玻璃离心管：10ml ┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml 多道 250ml 试剂： ----乙腈(分析纯)（动物组织专用） ----乙酸乙酯(分析纯) ----正己烷(分析纯)